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Resumen La displasia tanatofórica es un defecto congènito inusual y esporádico cuyo desenlace es la muerte intrauterina o pocos días después del nacimiento. Su aparición se ha descrito en 0,2-0,5 casos de cada 10.000 nacidos vivos, y depende de la mutación del receptor del factor de crecimiento fibroblasto-3. Cuenta con dos presentaciones clínicas: tipo I y tipo II; esta última es menos frecuente y se caracteriza por el hallazgo de cráneo en hoja de trébol y micromelia con fémures rectos. A continuación, se presenta el caso de una joven multípara con hallazgo en la primera ecografía del embarazo de feto con acortamiento general de las extremidades y disminución de la osificación general, sugestiva de displasia tanatofórica tipo II, que resultó en la interrupción voluntaria del embarazo. El diagnóstico temprano en la gestación es importante para orientar la práctica médica con base en el mal pronóstico del padecimiento de esta patología. Abstract Thanatophoric dysplasia is an unusual and sporadic congenital defect whose outcome is intrauterine death or a few days after birth. Its appearance has been described in 0.2-0.5 cases of every 10,000 live births and depends on the mutation of the fibroblast growth factor receptor-3. It exhibits two clinical presentations, of these, the so-called type II is less frequent and is characterized by the finding of a cloverleaf skull and micromelia with straight femurs. The following is the case of a young multiparous pregnant woman with a finding in her first ultrasound of fetus pregnancy with general shortening of the limbs and decreased general ossification, suggestive of thanatophoric dysplasia type II, which resulted in the voluntary termination of pregnancy. Early diagnosis in pregnancy is important in order to guide medical practice based on the poor prognosis of suffering from this pathology.

Background Morquio B disease (MBD) is a distinct GLB1‐related dysostosis multiplex presenting a mild phenocopy of GALNS‐related Morquio A disease. Previously reported cases from European countries carry the W273L variant on at least one GLB1 allele and exhibit a pure skeletal phenotype (pure MBD). Only a minority of MBD cases have been described with additional neuronopathic findings (MBD plus). Objectives and Methods With the aim to further describe patterns of MBD‐related dysostosis multiplex, we analyzed clinical, biochemical, and genetic features in 17 cases with GLB1‐related dysostosis multiplex living and diagnosed in Brazil. Results About 14 of the 17 individuals had three or more skeletal findings characteristic of Morquio syndrome. Two had no additional neuronopathic features (pure MBD) and 12 exhibited additional neuronopathic features (MBD plus). Three of the 17 cases had mild dysostosis without distinct features of MBD. Seven of the 12 MBD plus patients had signs of spinal cord compression (SCC), as a result of progressive spinal vertebral dysostosis. There was an age‐dependent increase in the number of skeletal findings and in the severity of growth impairment. GLB1 mutation analysis was completed in 10 of the 14 MBD patients. T500A occurred in compound heterozygosity in 8 of the 19 alleles. Conclusion Our study extends the phenotypic spectrum of GLB1‐related conditions by describing a cohort of patients with MBD and GM1‐gangliosidosis (MBD plus). Targeting the progressive nature of the skeletal manifestations in the development of new therapies for GLB1‐related conditions is warranted.

Achondroplasia is a rare disease of autosomal dominant inheritance, caused by the replacement of the amino acid glycine by arginine at position 380, affecting the fibroblast growth factor 3 receptor (FGRF-3). Its characteristics are evident since intrauterine life, and are detectable by ultrasound. The aim of this study is to determine the main clinical changes in patients with achondroplasia. A review of the medical records of patients diagnosed with Achondroplasia was carried out from 2002 to 2018, followed up at the medical genetics service of a tertiary hospital in the state of Ceará - Brazil. Twenty-eight patients were included in the study. The average age of the patients, at first evaluation, was 26 months (0,5-140). 3 patients (10.7%) were born preterm, however 100% of the patients had a 5-minute APGAR above 7. The patients' main delays concerned to sitting (18%), walking (11%) and talking (11%). The most prevalent abnormalities were macrocrania, short limbs, hyperlordosis, trident fingers and breathing problems. In this study, a slight predominance of males was observed and, despite the delay in neurological development milestones, there were no changes in neurological and cognitive functions in most cases. The clinical changes observed correspond to those already known in the literature and should be recognized by the general practitioner, as well as by other professionals involved in the care of patients with achondroplasia, aiming at an early diagnosis of this condition for adequate treatment and genetic counseling. La Acondroplasia es una rara enfermedad de herencia autosómica dominante, causada por la sustitución del aminoácido glicina por el aminoácido arginina en la posición 380, afectando al receptor 3 del factor de crecimiento de fibroblastos (FGRF- 3). Sus características son evidentes desde la vida intrauterina, siendo detectada por ecografía. El objetivo de este estudio es determinar los principales cambios clínicos en pacientes con Acondroplasia. Se realizó una revisión de las historias clínicas de pacientes diagnosticados con Acondroplasia entre 2002 y 2018, seguidos en el servicio de genética médica de un hospital público de tercer nivel, en el estado de Ceará - Brasil. Veintiocho pacientes fueron incluidos en el estudio. La edad media de los pacientes el día de la primera valoración fue de 26 meses (0,5-140). 3 pacientes (10,7%) nacieron prematuros, sin embargo el 100% de los pacientes tenían un APGAR de 5 minutos por encima de 7. Los principales retrasos de los pacientes fueron sentarse (18%), caminar (11%) y hablar (11%). Las anomalías más prevalentes fueron macrocráneo, extremidades cortas, hiperlordosis, dedos en tridente y problemas respiratorios. En este estudio se observó un ligero predominio del sexo masculino y, a pesar del retraso en los hitos del desarrollo neurológico, no hubo cambios en las funciones neurológicas y cognitivas en la mayoría de los casos. Los cambios clínicos observados corresponden a los que ya son conocidos en la literatura y deben ser reconocidos por el médico general, así como por otros profesionales que intervienen en el cuidado de pacientes con acondroplasia, visando un diagnóstico precoz de esta patología para una adecuada tratamiento y debido asesoramiento genético. A Acondroplasia é uma doença rara de herança autossômica dominante, causada pela substituição do aminoácido glicina pelo aminoácido arginina na posição 380, acometendo o receptor do fator de crescimento de fibroblastos 3 (FGRF-3). Suas características são evidentes desde a vida intrauterina, sendo detectadas pelo ultrassom. O objetivo deste estudo é determinar as principais alterações clínicas dos pacientes com Acondroplasia. Foi realizada revisão dos prontuários médicos dos pacientes com diagnóstico de Acondroplasia de 2002 a 2018, acompanhados no serviço de genética médica de um hospital público terciário, no estado do Ceará - Brasil. Foram incluídos no estudo 28 pacientes. A idade média dos pacientes, no dia da primeira avaliação, era de 26 meses (0,5-140). 3 pacientes (10,7%) nasceram pré-termo, contudo 100% dos pacientes obtiveram APGAR de 5 minutos acima de 7. Os principais atrasos dos pacientes foram para sentar (18%), andar (11%) e falar (11%). As anormalidades mais prevalentes foram macrocrania, membros curtos, hiperlordose, dedos em tridente e problemas respiratórios. Nesse estudo foi observado leve predomínio do sexo masculino e, apesar do atraso nos marcos de desenvolvimento neurológico, não houve alterações das funções neurológicas e cognitivas na maioria dos casos. As alterações clínicas observadas correspondem às que já são conhecidas na literatura e devem ser reconhecidas pelo médico generalista, como também pelos demais profissionais que estão envolvidos nos cuidados ao paciente com acondroplasia, visando um diagnóstico precoce dessa patologia para tratamento adequado e o devido aconselhamento genético.

Orientador: Denise Pontes Cavalcanti Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: As osteocondrodisplasias (OCD) são doenças genéticas que afetam o crescimento e o desenvolvimento do tecido condro-ósseo, comprometem a estatura, e muitas vezes as proporções corporais, e contribuem para a morbimortalidade infantil. Cerca de um terço das OCD são letais no período perinatal, destacando-se entre estas a displasia tanatofórica (DT) e a osteogênese imperfeita (OI) letal. Algumas OCD letais são extremamente raras e apresentam grande variabilidade clínico-radiológica e heterogeneidade etiológica. Dados epidemiológicos desse grupo de OCD além de limitados são muitos antigos. O objetivo desse trabalho foi avaliar descritivamente as características clínico-radiológicas e epidemiológicas de uma casuística local de OCD letais reunida ao longo de 26 anos e investigar por meio do estudo do exoma, as bases moleculares de dois fetos identificados entre os casos, cujo fenótipo idêntico ainda é inédito. As variáveis clínicas referentes a dados de nascimento, de pré-natal, familiares, além dos diagnósticos clínico-radiológico e molecular foram computados numa planilha e analisados descritivamente. Amostras de DNA dos dois fetos com o fenótipo inédito foram submetidas à análise do exoma a partir da abordagem do trio das duas famílias. No período 1990 - 2016, um total de 131 fetos com OCD letais foram incluídos no presente estudo. Entre os nascidos localmente, a alta prevalência [9,4 (IC=7,40-11,79) por 10.000 nascimentos] encontrada pode ser atribuída a um viés decorrente do hospital ser de referência. Em 80 casos (61,1%) foi levantada uma hipótese diagnóstica no pré-natal. No entanto, a identificação do tipo de OCD no pré-natal ainda é muito imprecisa. A alta taxa de consanguinidade parental (9,2%) é explicada em grande parte pela origem das famílias, maioria oriunda do Nordeste. Os grupos mais frequentes encontrados e os fenótipos letais mais comuns entre esses grupos foram: o grupo FGFR3 [43 (32,8%)] sendo a DT-I a mais comum [36 (83,7%)]; o grupo das OI [33 (25,2%)] com a OI-IIA a mais prevalente [22 (66,7%)]; e o grupo das colagenopatias do tipo 2 [17 (13%)], destacando-se aqui o fenótipo da acondrogênese tipo II (ACG-II) [10 (58,8%)]. Esses três grupos juntos representaram 71% de toda a casuística. Os 38 casos restantes (29%) estão distribuídos em outros nove grupos. Do total de 131 casos, 75 (57,3%) possuem investigação molecular com confirmação do diagnóstico radiológico em 63 casos (84%). A análise do exoma dos dois casos com o fenótipo inédito se mostrou inconclusiva. Em conclusão, a avaliação epidemiológica da presente série de casos mostra uma alta prevalência de OCD letais, porém relacionada a um viés por se tratar de um hospital de referência na região. As principais OCD encontradas são a DT-I (grupo FGFR3), a OI-IIA (grupo OI) e a ACG-II (grupo colagenopatias tipo 2). Apesar da maioria dos casos de OCD letais serem suspeitadas durante a gestação, o diagnóstico pré-natal específico é ainda muito impreciso. A alta taxa de consanguinidade encontrada na casuística parece ser decorrente da origem das famílias, a maioria oriunda do Nordeste brasileiro Abstract: The osteochondrodysplasias (OCD) are genetic diseases that affect the growth and development of the chondro-osseous tissue leading to short stature, and body disproportion in several individuals, and contribute to the infant morbimortality. Around one-third of these conditions are lethal in the perinatal period, being thanatophoric dysplasia (TD) and lethal osteogenesis imperfecta (OI) the most frequent lethal-OCD. Some OCD in this group are extremely rare, present great clinical-radiological variability and used to be etiologically heterogeneous. Epidemiological information regarding the lethal-OCD is limited and outdated. The aim of this study was to perform a descriptive clinical-epidemiological study based on a local series of cases collected over 26 years. In addition, this study aimed to investigate the molecular bases of two fetuses with a novel phenotype by the whole exome sequencing (WES). The clinical data related to birth, prenatal, family, and clinical-radiological and molecular diagnoses were computed in a spreadsheet and analyzed descriptively. DNA samples from the two fetuses with the novel phenotype were submitted to the exome analysis with the trio approach for both families. In the period 1990 - 2016, a total of 131 fetuses with lethal-OCD evaluated and included in the present study. Among the patients born locally, the high prevalence [9.4 (CI = 7.40-11.79) per 10,000 births] found can be attributed to the bias of reference hospital. Prenatal diagnosis of skeletal dysplasia was performed in 80 cases (61.1%), however, this examination is still very imprecise regarding to reach the specific type of OCD. The high parental consanguinity rate (9.2%) found in this series of cases is, at least partially explained, by the origin of the families from the Brazilian Northeast. The most common groups and lethal phenotypes found were: the FGFR3 group [43 (32.8%)] mainly represented by DT-I [36 (83.7%)]; the OI group [33 (25.2%)] with OI-IIA [22 (66.7%)] as the most common; and the collagenopathies type 2 group [17 (13%)], being the achondrogenesis type II (ACG-II) [10 (58.8%)] the most frequent condition. Together these three groups represent 71% of the total patients. The remaining 38 cases (29%) are distributed in nine other groups. Of the total of 131 cases, 75 (57.3%) had molecular investigation, confirming the radiological diagnosis in 63 cases (84%). The analysis of the exome of the two cases with the novel phenotype was inconclusive. In conclusion, the epidemiological evaluation of the present case series shows a high prevalence of lethal OCD, but related to a bias because it is a reference hospital in the region. The main OCD found are DT-I (FGFR3 group), OI-IIA (OI group) and ACG-II (type 2 collagenopathies group). Although most cases of lethal OCD are suspected during pregnancy, prenatal diagnosis is too imprecise to identify the specific type of the OCD. The high rate of consanguinity found in the sample seems to be due to the origins of the families, most coming from the Brazilian Northeast Doutorado Genética Médica Doutora em Ciências CAPES 01-P-3368/2017

Orientador: Denise Pontes Cavalcanti Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: As displasias esqueléticas ou osteocondrodisplasias (OCDs) são doenças genéticas que afetam o crescimento e o desenvolvimento do tecido ósseo e cartilaginoso produzindo, em geral, baixa estatura e contribuindo para morbi-mortalidade infantil. Algumas displasias esqueléticas apresentam um acometimento particular das articulações seja com luxações seja com frouxidão ligamentar. Na atual nosologia e classificação das displasias esqueléticas, o grupo de OCD associadas a luxações múltiplas inclui a displasia de Desbuquois e seus subtipos (todos associados aos genes CANT1, XYLT1), a displasia pseudodiastrófica (ainda sem gene conhecido), e as displasias espôndilo-epi-metafisária tipo leptodactílico (KIF22) e a tipo Beighton (B3GALT6). Além dessas, outras OCD também apresentam um comprometimento articular importante ¿ a displasia diastrófica (DTDST), a síndrome de Larsen (FLNB) e um novo fenótipo associado ao gene IMPAD1. Visto que a correlação genótipo-fenótipo dessas OCDs não está bem estabelecida, o objetivo do presente estudo foi investigar os genes FLNB, CANT1, XYLT1, KIF22, B3GALT6, DTDST, IMPAD1 e CHST3 em uma coorte de pacientes com fenótipos sugestivos das OCD supracitadas. Foram estudados 17 pacientes com fenótipo de displasia esquelética associada ao comprometimento articular seguindo um fluxograma direcionado pelo diagnóstico clínico inicial. A análise molecular foi feita pelo sequenciamento automático bidirecional de Sanger. Foram identificadas 13 alterações em 11 pacientes com os seguintes diagnósticos: Síndrome de Larsen (FLNB, p.[G363V]), DBQDII (XYLT1, p.[R551C]), SEMD-JL tipo leptodactílico (KIF22, p.[P148L], p.[R149Q], p.[E222Q]), SEMD-JL tipo Beighton (B3GALT6, p.[R197Afs*442];[V61A]), SED tipo CHST3 (CHST3, IVS2-1G>C), AO2 (DTDST p.[T627Lfs*23];[R279W]) e DTD (DTDST p.[K575Sfs*10];[R279W], c.[727-1G>C];[R279W] e p.[G115A];[R279W]). Foram encontradas: oito variantes do tipo missense (cinco inéditas), três frameshifts (2 inéditas), duas em sítio de splicing. Das variantes do tipo missense, apenas uma, p.R279W no gene DTDST, foi recorrente em quatro pacientes:. Em seis pacientes nenhuma mutação foi encontrada no painel de genes estudado. Concluindo, os resultados deste estudo permitiram a definição diagnóstica em 11 pacientes (Síndrome de Larsen [1], DBQDII [1], SEMD-JL tipo leptodactílico [3], SEMD-JL tipo Beighton [1], SED tipo CHST3 [1], AO2 [1] e DTD [3]) confirmando a correlação gene-fenótipo inicialmente suspeitada, com exceção do KIF22, no qual foi identificada uma variante fora da região de hot spot. Em seis casos as bases moleculares permanecem desconhecidas, favorecendo a continuidade dessa investigação com a introdução de novas tecnologias como o sequenciamento de nova geração Abstract: The skeletal dysplasias are part of a group of genetic development disorders that affect the growth and development of bones and cartilage tissue, producing in general growth alterations, such as short stature, which contributes to child morbi-mortality. Some skeletal dysplasias have a particular joint involvement with dislocations and joint laxity. The current nosology and classification of genetic skeletal disorders, the group of dysplasias with multiple joint dislocations includes Desbuquois Dysplasias and its subgroup (related to CANT1 and XYLT1 genes), pseudodiastrophic dysplasia (without gene related), and the Spondyloepimetaphyseal dysplasia with Leptodactylic-type joint laxity (KIF22) and Beighton type (B3GALT6). There are others Skeletal Dysplasias which also exhibit an important joint involvement ¿ Diastrophic dysplasia (DTDST), Larsen syndrome (FLNB) and a new phenotype related to IMPAD1 gene. Been aware that the genotype phenotype correlation of these conditions are not well established, the purpose of the present project was to investigate the genes FLNB, CANT1, XYLT1, KIF22, B3GALT6, DTDST, IMPAD1 and CHST3 in a cohort of 17 patients with the suggestive phenotypes mentioned above, with dislocations and joint laxity following a flowchart directed by the initial clinical diagnosis. The molecular analyses were performed by automated Sanger bidirectional sequencing. Thirteen variants were identified in 11 patients with the diagnosis: Larsen Syndrome (FLNB, p.[G363V]), DBQDII (XYLT1, p.[R551C]), SEMD-JL leptodactylic-type (KIF22, p.[P148L], p.[R149Q], p.[E222Q]), SEMD-JL Beighton-type (B3GALT6, p.[R197Afs*442];[V61A]), SED CHST3-type (CHST3, IVS2-1G>C), AO2 (DTDST p.[T627Lfs*23];[R279W]), and DTD (DTDST p.[K575Sfs*10];[R279W], c.[727-1G>C];[R279W] and p.[G115A];[R279W]). The identified variants were: eight missense (five news), three frameshifts (two news) and two splicing site. Among the missense variants, only one was recurrent p.R279W in the DTDST gene in four patients. In six patients, no pathogenic variants were identified in the gene panel. In conclusion, the results of this study allowed the diagnostic confirmation in 11 patients (Larsen Syndrome [1], DBQDII [1], SEMD-JL leptodactylic-type [3], SEMD-JL Beighton-type [1], SED CHST3-type [1], AO2 [1] e DTD [3]) establishing the gene-phenotype association initially suspected, with the exception of KIF22 gene which was identified a mutation outside of the hotspot region. In six cases the molecular bases remains unknown, reinforcing the continuation of this study with the introduction of new technologies as next-generation sequencing Mestrado Ciências Biomédicas Mestra em Ciências Médicas CAPES 01-P-3484/2014, 01-P-4353/2015, 01-P-1743/2014 CNPQ FAPESP

Orientadores: Denise Pontes Cavalcanti, Luciana Cardoso Bonadia Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: As displasias esqueléticas ou osteocondrodisplasias são doenças genéticas que afetam o crescimento e o desenvolvimento do tecido ósseo e cartilaginoso produzindo, em geral, baixa estatura. Mutações em heterozigose no gene COL2A1 são responsáveis por uma série de displasias esqueléticas conhecidas como colagenopatias do tipo II que geralmente apresentam um padrão espondiloepifisário típico. Apesar das mutações no COL2A1 serem, em geral, "privadas", o estudo molecular desse gene em pacientes com fenótipos sugestivos de colagenopatia do tipo II pode contribuir seja para um melhor entendimento das colagenopatias do tipo II seja para refinar, quando possível, a correlação genótipo-fenótipo. O objetivo desse estudo foi investigar o gene COL2A1 numa coorte de pacientes com fenótipo de colagenopatia do tipo II de modo a melhorar o conhecimento sobre essas colagenopatias. Foram estudados 33 pacientes com fenótipo de colagenopatia do tipo II. A análise molecular foi feita por sequenciamento automático bidirecional direto do gene COL2A1, começando pelos domínios relacionados a cada fenótipo seguido de sequenciamento completo das regiões codificantes do gene quando as primeiras foram negativas. Foram identificadas alterações potencialmente deletérias em heterozigose em 23 dos 33 pacientes (69,7%): 18 alterações do tipo missense (11 inéditas, 7 descritas), 4 alterações que alteram sítio de splice (2 inéditas, 2 descritas) e uma deleção inédita. Das mutações do tipo missense encontradas, duas foram recorrentes em 5 pacientes: p.G594E e p.R989C. Ambas as mutações recorrentes foram associadas a fenótipos graves: a p.R989C foi observada em displasia espondiloepifisária congênita (SEDC) grave enquanto que a p.G594E foi associadaa 2 recém-nascidos com fenótipo de SEDC-letal. Para todas as mutações novas, a análise in silico, estudo em controles e/ou dos pais confirmaram a patogenicidade de todas elas. Concluindo, os resultados deste estudo permitiram a identificação de 14 mutações novas no gene COL2A1 e um melhor refinamento da correlação genótipo-fenótipo Abstract: Skeletal dysplasias are genetic disorders that affect the growth and development of the bone and cartilage tissues producing, in general, short stature. Heterozygous mutations in the COL2A1 gene are responsible for a number of skeletal dysplasias that usually exhibit a pattern spondyloepiphyseal and are called type II collagenopathies. Although the mutations in COL2A1 are usually privates, molecular studies of this gene in patients with suggestive phenotypes can contribute to a better understanding of the type II collagenopathies. The aim of this study was to sequence the COL2A1 in a cohort of patients with type II collagenopathy phenotypes in order to refine the knowledge regarding the genotype-phenotype correlation. Thus, 33 patients with suggestive phenotype were studied. The molecular analysis was performed by automated Sanger bidirectional sequencing of the COL2A1 gene, starting with the domains related to each phenotype followed by whole sequencing of the gene coding regions when the first ones were negative. Potentially deleterious changes in heterozygosity were identified in 23 of 33 patients (69.7 %): 18 missense changes (11 undescribed), 4 changes that modify the splice site (2 undescribed) and a new deletion. The pathogenicity of the undescribed changes were confirmed by in silico analysis, study of control individuals and/or of the respective parents. Among the found missense mutations, two were recurrent and associated with severe phenotypes. These mutations, p.G594E and p.R989C, were found in five patients. The R989C change was observed in three children presenting a phenotype of spondyloepiphyseal dysplasia congenita (SEDC), which follow up showed a pattern of severe SEDC featured by severe disproportioned short stature with coxa vara and kyphoscoliosis. The G594E change was associated with two newborns presenting also a SEDC phenotype, however with lethal evolution. In conclusion, the results of this study allowed the identification of 14 new mutations in COL2A1 gene and a better refinement of the genotype-phenotype correlation Mestrado Ciências Biomédicas Mestra em Ciências Médicas

Orientador: Denise Pontes Cavalcanti Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: A investigação molecular das displasias esqueléticas, também conhecidas pelo nome de osteocondrodisplasias (OCD), tem se mostrado fundamental para a precisão do diagnóstico bem como para o aconselhamento genético. Embora as técnicas personalizadas de NGS (sequenciamento de alto desempenho) sejam atualmente os métodos preferenciais para analisar essas condições na prática médica, os resultados publicados até o momento não mostram um alto rendimento com emprego das mesmas. Tampouco uma especulação sobre os custos adicionais relacionados ao sequenciamento por Sanger (SS), necessário seja para confirmação das variantes patogênicas encontradas, seja para cobrir regiões pouco cobertas pelo NGS, foi realizada até o momento. Desse modo, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a utilização de NGS com um painel personalizado de genes no estudo das OCD utilizando uma coorte de pacientes avaliados pelo grupo local de Displasias Esqueléticas. A coorte investigada incluiu 88 pacientes com OCD previamente diagnosticados por critérios clínico-radiológicos, os quais foram analisados por diferentes painéis de NGS. O sequenciamento foi realizado utilizando-se três painéis NGS personalizados (TSCA - TruSeq Custom Amplicon e Nextera da Illumina e IT-Amp - Ion AmpliSeq da Life Technologies ¿ Ion Torrent) com genes previamente selecionados a partir da seleção dos pacientes ou por critério como frequência das OCD, no caso do IT-Amp. Todas as variantes patogênicas encontradas pelas técnicas TSCA e IT-Amp foram confirmadas pelo SS. Da mesma forma, o SS foi utilizado para completar a investigação de regiões insuficientemente cobertas pelo NGS. Setenta e quatro mutações diferentes, das quais 52 variantes inéditas, foram encontradas em 61 (69,3%) pacientes. No entanto, as mutações encontradas em dois pacientes (nos genes PCYT1A e LIFR respectivamente) foram detectadas apenas por SS ao investigar regiões de baixa cobertura com o NGS. Não foi possível encontrar variante(s) patogênica(s) em 27 (30,7%) pacientes. No entanto, em pelo menos 11 pacientes a heterogeneidade genética de condições ainda não completamente elucidadas provavelmente foi a causa da negatividade. Considerando apenas os insumos, a estimativa de custo adicional para a concluir a investigação de 36 pacientes avaliados pelo TSCA foi de 83%. Em conclusão, a alta taxa de positividade deste estudo certamente está relacionada seja ao diagnóstico radiológico prévio dos pacientes, bem como pela utilização do SS para as regiões de cobertura insuficiente. A quantidade de regiões gênicas com baixa cobertura sugere que as técnicas de NGS personalizadas ainda carecem de aprimoramento. Finalmente, estimamos um aumento de 83% para o valor inicial de NGS, e mesmo com o aditivo, alguns casos ainda permaneceram sem diagnóstico Abstract: The molecular investigation of the skeletal dysplasias, also known as osteochondrodysplasias (OCD), is critical for both the accuracy of diagnosis and genetic counseling. Although NGS (next-generation sequencing) techniques are currently the preferred methods for analyzing these conditions in clinical practice, the published results have not reported high diagnostic yield to date, nor a speculation regarding additional costs due to the Sanger sequencing (SS), required to the confirmation of the found pathogenic variants as well as to analyse regions insufficient covered, has been performed. Thus, the goals of the present study were to evaluate the use of NGS with a customized panel of genes in the OCD study using a cohort of patients evaluated by the local group of Skeletal Dysplasias. The cohort investigated included 88 patients with OCD previously diagnosed by clinical-radiological criteria, which were analyzed by different NGS panels. The sequencing was performed using three custom NGS (TSCA - TruSeq Custom Amplicon and Nextera by Illumina, and IT-Amp - Ion AmpliSeq by Life Technologies) with selected genes according to the patient's diagnosis or by frequency criterion in the case of IT-Amp. All the pathogenic variants found by both, the TSCA and IT-Amp techniques, were confirmed by SS. Likewise, the SS was used to complete the investigation of regions insufficiently covered by NGS. Seventy-four different mutations, of which 52 novel variants, were found in 61 (69.3%) patients. However, mutations found in two patients (in the PCYT1A and LIFR genes respectively), were only detected when the regions of low coverage were under investigation by SS. The pathogenic variant(s) could not be found in 27 (30.7%) patients. However, in at least 11 patients, the negative results can be explained by the genetic heterogeneity of the respective conditions. Considering only the main reagents, the estimated additional costs to complete the investigation of 36 patients evaluated by TSCA was 83%. In conclusion, the high positivity rate of this study is certainly related to the previous radiological diagnosis of the patients, as well as the use of SS for regions with insufficient coverage. The number of gene regions with low coverage suggests that the custom NGS techniques still need improvement. Finally, we estimate an increase of 83% for the initial value of NGS, and even with the additive, some cases remained without the diagnosis Doutorado Genética Médica Doutora em Ciências CAPES 01-P-3368/2017

Schimke syndrome corresponds to dysplasia of bone and immunity, associated with progressive renal disease secondary to nephrotic syndrome cortico-resistant, with possible other abnormalities such as hypothyroidism and blond marrow aplasia. It is a rare genetic disorder, with few reports in the literature. The most frequent renal involvement is nephrotic syndrome with focal segmental glomerulosclerosis and progressive renal failure. The objective of this study was to report a case of Schimke syndrome, diagnostic investigation and management of the case. Resumo A síndrome Schimke corresponde à displasia imuno-óssea, associada à doença renal progressiva secundária à síndrome nefrótica córtico-resistente, podendo haver outras anormalidades como hipotireoidismo e aplasia de medula óssea. Trata-se de uma patologia genética rara, com poucos relatos na literatura. O acometimento renal mais frequente é uma síndrome nefrótica por glomeruloesclerose segmentar e focal e falência renal progressiva. O objetivo deste estudo foi relatar um caso de síndrome de Schimke, investigação diagnóstica e condução do caso.

Campomelic dysplasia (CD) is an autosomal, dominantly inherited, skeletal abnormality belonging to the subgroup of bent bone dysplasias. In addition to bowed lower limbs, CD typically includes the following: disproportionate short stature, flat face, micrognathia, cleft palate, bell-shaped thorax, and club feet. Up to three quarters of 46, XY individuals may be sex-reversed. Radiological signs include scapular and pubic hypoplasia, narrow iliac wings, spaced ischia, and bowed femora and tibiae. Lethal CD is usually due to heterozygous mutations in SOX9, a major regulator of chondrocytic development. We present a detailed clinical and molecular characterization of nine Brazilian CD patients. Infants were either stillborn (n = 2) or died shortly after birth and presented similar phenotypes. Sex-reversal was observed in one of three chromosomally male patients. Sequencing of SOX9 revealed new heterozygous mutations in seven individuals. Six patients had mutations that resulted in premature transcriptional termination, while one infant had a single-nucleotide substitution at the conserved splice-site acceptor of intron 1. No clear genotype-phenotype correlations were observed. This study highlights the diversity of SOX9 mutations leading to lethal CD, and expands the group of known genetic alterations associated with this skeletal dysplasia.

OBJECTIVE: Literature review of new genes related to osteogenesis imperfecta (OI) and update of its classification. SOURCES: Literature review in the PubMed and OMIM databases, followed by selection of relevant references. SUMMARY OF THE FINDINGS: In 1979, Sillence et al. developed a classification of OI subtypes based on clinical features and disease severity: OI type I, mild, common, with blue sclera; OI type II, perinatal lethal form; OI type III, severe and progressively deforming, with normal sclera; and OI type IV, moderate severity with normal sclera. Approximately 90% of individuals with OI are heterozygous for mutations in the COL1A1 and COL1A2 genes, with dominant pattern of inheritance or sporadic mutations. After 2006, mutations were identified in the CRTAP, FKBP10, LEPRE1, PLOD2, PPIB, SERPINF1, SERPINH1, SP7, WNT1, BMP1, and TMEM38B genes, associated with recessive OI and mutation in the IFITM5 gene associated with dominant OI. Mutations in PLS3 were recently identified in families with osteoporosis and fractures, with X-linked inheritance pattern. In addition to the genetic complexity of the molecular basis of OI, extensive phenotypic variability resulting from individual loci has also been documented. CONCLUSIONS: Considering the discovery of new genes and limited genotype-phenotype correlation, the use of next-generation sequencing tools has become useful in molecular studies of OI cases. The recommendation of the Nosology Group of the International Society of Skeletal Dysplasias is to maintain the classification of Sillence as the prototypical form, universally accepted to classify the degree of severity in OI, while maintaining it free from direct molecular reference. OBJETIVO: Revisão da literatura sobre novos genes relacionados à osteogênese imperfeita (OI) e atualização da sua classificação. FONTE DOS DADOS : Revisão nas bases de dados do PUBMED e OMIM com seleção de referências relevantes. SÍNTESE DOS DADOS: Sillence et al., em 1979, desenvolveram uma classificação dos subtipos de OI baseada em características clínicas e gravidade da doença: OI tipo I, forma leve, comum, com escleras azuladas; OI tipo II, forma perinatal letal; OI tipo III, forma grave e progressivamente deformante com esclera normal; e OI tipo IV, forma de gravidade moderada com esclera normal. Cerca de 90% dos indivíduos com OI são heterozigotos para mutações em COL1A1 e COL1A2, com padrão de herança dominante ou esporádico. A partir de 2006 foram identificadas mutações nos genes CRTAP, FKBP10, LEPRE1, PLOD2, PPIB, SERPINF1, SERPINH1, SP7, WNT1, BMP1 e TMEM38B associadas à OI recessiva e mutação em IFITM5 associada à OI dominante. Mutações em PLS3 foram identificadas recentemente em famílias com osteoporose e fraturas, com padrão de herança ligado ao X. Além da complexidade genética das bases moleculares das OI, extensa variabilidade fenotípica resultante de loci individuais também tem sido documentada. CONCLUSÕES: Face à descoberta de novos genes e à correlação genótipo-fenótipo limitada, o uso de ferramentas de sequenciamento de nova geração torna-se útil no estudo molecular de casos de OI. A recomendação do Grupo de Nosologia da Sociedade Internacional de Displasias Esqueléticas é manter a classificação de Sillence como a forma prototípica e universalmente aceita para classificar o grau de gravidade na OI, e libertá-la de referência molecular direta.

The aim of this study was to describe surgical features of resection of hemimelic epiphyseal dysplasia of the patella. We already described the clinical and imaging features in another article. The patient was a six-year-old boy with a tumor in his right knee measuring 12 cm longitudinally and 6 cm transversally, which was adhering to the patella and had been slowly growing for two years. Biopsy findings were suggestive of a benign osteochondromatous lesion, without a defined diagnosis. Imaging examinations such as radiography and tomography showed areas of bone formation and radiotransparent areas, while magnetic resonance imaging showed areas of hypo and hypersignal in T1 and T2, of estimated size 8.5 cm longitudinally and 6 cm transversally. The tumor growth was surgically resected and curettage was performed on the epiphyseal nucleus of ossification of the upper and medial centers of the patella, with good patellar remodeling and normal development. The patient did not present any recurrence of the lesion up to the time of reaching skeletal maturity. Descrever aspectos cirúrgicos da ressecção de displasia epifisária hemimélica da patela. Os aspectos clínicos e de imagem já foram descritos em outro artigo. Paciente masculino, seis anos, com tumor de crescimento lento em joelho direito, por dois anos, com dimensões de 12 cm no eixo longitudinal e 6 cm no transversal, aderido à patela. Biópsia sugeriu lesão osteocondromatosa benigna, sem diagnóstico definido. Exames de imagem, como radiografias e tomografias, com áreas de formação óssea e áreas radiotransparentes e na ressonância magnética áreas de hipo e hiperssinal em T1 e T2, de tamanho estimado em 8,5 cm no eixo longitudinal e 6 cm no transversal. Foram feitas ressecção cirúrgica da tumoração e curetagem do núcleo de ossificação epifisário do polo superior e medial da patela, com boa remodelação patelar e desenvolvimento normal. Paciente não apresentou recidiva da lesão até o término da maturidade esquelética.

Introdução: Acondroplasia é a displasia esquelética não letal mais comum na qual há uma desproporção entre o desenvolvimento das estruturas ósseas e neurais. O forame magno e canal vertebral apresentam menor taxa de crescimento comparado com o SNC. Isto se associa a complicações neurológicas. Objetivos: estudar o esqueleto axial e as complicações neurológicas na acondroplasia atendidos em hospital de reabilitação entre Janeiro de 1998 e Junho de 2013. Método: O projeto foi aprovado pelos Comitês de Ética e Pesquisa da UFMG e da Rede SARAH (registro na Plataforma Brasil CAAE 03970712.5.3001.0022). Trata-se de estudo observacional, clínico e radiológico, transversal e retrospectivo. Foi realizada a revisão de 41 prontuários dos pacientes com diagnóstico definitivo ou diferencial de acondroplasia e eles foram convocados para entrevista. Os pacientes ou seus responsáveis legais que concordaram em participar, leram e assinaram o termo de consentimento livre e esclarecido. Os pacientes foram divididos em dois grupos: um com crianças menores que oito anos de idade, outro com indivíduos de idade maior. Somente foram incluídos no estudo os pacientes com diagnóstico molecular confirmado. Todos pacientes foram examinados pela mesma médica geneticista. O desenvolvimento, peso, estatura, perímetro cefálico, heredograma, história obstétrica e sintomas neurológicos foram avaliados. Tomografias computadorizadas de encéfalo e da TCV por método dinâmico, em flexão e extensão, foram realizadas. Um aparelho helicoidal foi usado para aquisição volumétrica por cortes axiais com 2,5 mm de espessura e intervalo, reconstruções com 0,625 mm para reformatações nos demais planos. Foram utilizadas técnicas com menor quilovoltagem e tempo de exposição para redução da exposição à radiação (princípio ALARA). Para craniometria a média aritmética de três medidas que foram feitas por dois radiologistas foi utilizada. Os seguintes parâmetros foram avaliados: ângulo Welcher, posição do dente do áxis acima da linha de McGregor, distância de Redlund-Johnell, intervalo atlanto-odontoideo, largura do canal espinhal em C2, intervalo básio-odontoideo, intervalo basioaxial, intervalo atlanto-occipital e proporção de Powers. Para medir os ventrículos foram utilizados: relação de Evans, índice cerebroventricular dos cornos anteriores e largura máxima do terceiro ventrículo. Quando havia sinais e/ou sintomas de lesão neurológica, foram realizados radiografias, tomografia e ressonância, se necessário. Para grupo controle das dimensões dos ventrículos encefálicos e forame magno, foram sorteadas 96 tomografias normais de crânio realizadas no mesmo hospital, em proporção de quatro para um, segundo critérios de idade e sexo. Análise estatística utilizou o teste-t (para comparar médias), Kruskal-Wallis (para confirmar diferenças) e teste de Fisher (para comparar grupos). O valor de p

Immuno-osseous dysplasia is characterised by spondyloepiphyseal dysplasia, lymphopenia with defective cellular immunity, and progressive renal disease. We describe a patient with a severe form of the disease, review the features of another 24 patients, and discuss the previous classification. The differences between the two groups are not striking, and although similarities are greater between affected sibs, the same diagnosis of Schimke immuno-osseous dysplasia should apply to them all. The aetiology and physiopathology of this rare osteochondrodysplasia of presumed autosomal recessive inheritance remain unknown. Keywords: osteochondrodysplasia; immuno-osseous dysplasia; spondyloepiphyseal dysplasia; defective cellular immunity

Orientadores: Denise Pontes Cavalcanti, Luciana Cardoso Bonadia Texto em português e inglês Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Entre as osteocondrodisplasias (OCD) destacam-se as displasias esqueléticas do grupo 1 (FGFR3) devido à sua alta frequência. Nesse grupo, além das displasias com fenótipo característico e considerável correlação genótipo-fenótipo, como a acondroplasia (Ach) e a displasia tanatofórica (DT), está a hipocondroplasia (Hch), cujo fenótipo em geral é mais leve, apresenta grande variabilidade clínico-radiológica e heterogeneidade etiológica. O objetivo desse estudo foi sequenciar o gene FGFR3 numa coorte de pacientes com fenótipo típico ou sugestivo. A análise molecular foi feita por sequenciamento direto, começando pelos hot spots e, seguindo com o sequenciamento completo do gene quando os primeiros foram negativos. Foram incluídos 63 pacientes na casuística: 30 Ach, 7 Hch, 10 Hch?, 13 DT-I e 3 DT-II. Dentre os casos de Ach, todos apresentaram a mutação mais comumente associada à Ach (p.G380R), inclusive um paciente com fenótipo atípico e suspeita de mosaicismo somático, não comprovado, devido à assimetria corporal. Dentre os casos de Hch, todos os sete apresentaram a mutação mais comum para este fenótipo (p.N540K) inclusive dois pacientes com uma Hch grave com manifestações clínicas e radiológicas no período neonatal e dez pacientes, diagnosticados como uma Hch duvidosa (Hch?) por apresentarem baixa estatura com alguns sinais radiológicos, não foi encontrada mutação, sendo que em cinco casos, o sequenciamento não foi concluído. Três mutações diferentes, que ocorrem com maior frequência, foram identificadas entre os casos de DT-I, a p.R248C em sete pacientes, entre eles um paciente atípico por apresentar maior sobrevida, p.S249C em três e a p.Y373C em dois. Em todos os casos de DT-II, como esperado, foi encontrada a única mutação até então descrita para este fenótipo (p.K650E). Os resultados deste estudo permitiram a identificação de casos interessantes, ressaltaram a ótima correlação genótipo-fenótipo do grupo FGFR3 e reforçaram a importância da investigação molecular do gene FGFR3 nos casos com fenótipos duvidosos ou atípicos Abstract: Among osteochondrodysplasias (OCD) stand out the skeletal dysplasias group 1 (FGFR3) due to its high frequency. In this group, besides the conditions with considerable characteristic phenotype and genotype-phenotype correlation, such as achondroplasia (Ach) and thanatophoric dysplasia (TD), there is hypochondroplasia (HCH), whose phenotype is generally milder, with a large clinical and radiological variability and etiological heterogeneity. The aim of this study was to sequence the FGFR3 gene in a cohort of patients with typical or suggestive phenotype. Molecular analysis was performed by direct sequencing, starting with the hot spots, and following with the complete sequencing of the gene when the first were negative. In this sample, 63 patients were included: 30 Ach, 7 Hch, 10 Hch?, 13 DT-I and 3 DT-II. Among the Ach cases, all exhibit the most common mutation associated with Ach (p.G380R), including one patient with an atypical phenotype, with suspicious of somatic mosaicism, not confirmed, due to body asymmetry. Among the Hch cases, all the seven patients showed the most common mutation for this phenotype (p.N540K) including two patients with severe Hch with clinical and radiological manifestations in the neonatal period and ten patients, diagnosed as a doubtful Hch (Hch?), because of their low stature with some radiological signs, no mutation was found, and in five cases, sequencing was not completed. Three different mutations, which occur more frequently, were identified among the DT-I cases, p.R248C in seven patients, including an atypical patient with a long-term survival, p.S249C in three and p.Y373C in two. In all DT-II cases, as expected, the only mutation described so far for this phenotype (p.K650E) was found. The results of this study allowed the identification of interesting cases, emphasized the great genotype-phenotype correlation of FGFR3 group and reinforced the importance of molecular investigation of the FGFR3 gene in cases with doubtful or atypical phenotypes Mestrado Ciências Biomédicas Mestra em Ciências Médicas

O presente trabalho aborda como questão central o estudo do conjunto de doenças genéticas conhecido como displasias esqueléticas. Apesar de individualmente raras, coletivamente as displasias esqueléticas representam uma importante causa de mortalidade perinatal. A maioria das anormalidades nesse grupo é de origem monogênica, podendo ser herdada de forma dominante, recessiva ou ligada ao X. Atualmente, são reconhecidas mais de 450 displasias esqueléticas distintas, com quase metade apresentando manifestações antes do nascimento. Esse é o caso da displasia campomélica, uma doença autossômica dominante grave e geralmente letal do sistema esquelético que ocorre devido a mutações no gene SOX9, um importante regulador do desenvolvimento embrionário. Para esse grupo de displasias de identificação pré-natal, o diagnóstico precoce e acurado é fundamental para o correto manejo da gravidez e planejamento clínico pós-natal, além de ser imprescindível para o aconselhamento genético. O presente estudo relata a caracterização clínica e molecular de uma coorte brasileira de doze pacientes com displasia campomélica. Além de apresentar dados clínicos sobre os pacientes estudados, esse trabalho identificou sete novas mutações no gene SOX9, nunca antes descritas, associadas à displasia campomélica. São apresentados ainda dados referentes à caracterização clínica dos casos de displasia esquelética com detecção pré-natal identificados no Hospital de Clínicas de Porto Alegre em um período de 20 anos. Foram identificados 33 casos, com frequências de condições específicas de acordo com a literatura médica. Entretanto, não foram detectadas melhorias no diagnóstico pré-natal das displasias esqueléticas em anos mais recentes, como observado em diversas coortes de outros países. Somam-se a esse trabalho dois relatos de casos de pacientes incluídos no estudo que abordam a utilização do diagnóstico genético pré-implantacional e da tomografia computadorizada com reconstrução tridimensional em casos de displasia esquelética. Por fim, esse estudo é concluído com a apresentação de uma proposta para o melhoramento do diagnóstico de displasias esqueléticas no Brasil. Fundamentado por uma vasta literatura especializada, esse manuscrito final apresenta algoritmos diagnósticos simples que podem ser incorporados na prática clínica de instituições e serviços de medicina fetal visando à identificação prénatal mais precisa de condições do espectro das displasias esqueléticas. Em conclusão, espera-se que o presente trabalho possa contribuir para um maior entendimento a respeito do imenso e heterogêneo grupo das displasias esqueléticas. Estudos futuros serão decisivos no estabelecimento de melhores práticas clínicas e laboratoriais no que diz respeito a pacientes diagnosticados com displasias esqueléticas e seus familiares. The present work aims at studying the group of genetic diseases known as skeletal dysplasias. Although individually rare, collectively the skeletal dysplasias represent an important cause of perinatal death. The majority of abnormalities in this group is of monogenic origin, and may be inherited as dominant, recessive, or X-linked conditions. Currently, over 450 skeletal dysplasias are recognized, with almost half of them manifesting antenatally. This is the case for campomelic dysplasia, a severe, usually lethal autosomal dominant skeletal disease that arises from mutations in SOX9, a major regulator of embryonic development. For this group of dysplasias with prenatal identification, the early and accurate diagnosis is pivotal for proper management of pregnancy and postnatal clinical planning, besides being invaluable for genetic counseling. This study reports the clinical and molecular characterization of a Brazilian cohort of 12 campomelic dysplasia patients. Besides the presentation of clinical data, this work has identified seven new SOX9 mutations, never reported before, and associated to campomelic dysplasia. Data are also presented here regarding the clinical characterization of skeletal dysplasia cases with prenatal detection identified at Hospital de Clínicas de Porto Alegre during the last 20 years, in order to better understand the local singularities and frequencies of this congenital malformation group. Thirty-three skeletal dysplasia cases with prenatal identification and postnatal radiological confirmation were identified, with frequencies of specific conditions being in agreement with the medical literature. However, improvements in the prenatal diagnosis of skeletal dyspalsias in recent years were not observed, as is reported for several cohorts in other countries. Two case-reports of patients included in this study add up to this work, which relate the use of pre-implantation genetic diagnosis and computed tomography with tridimensional reconstruction in cases of skeletal dysplasias. Finally, this work is concluded with the presentation of a proposal for the improvement of the diagnosis of skeletal dysplasias in Brazil. Based on a vast specialized literature, this final manuscript presents diagnostic algorithms that could be incorporated in the clinical practice of fetal medicine institutions and services, aiming to a more accurate prenatal identification of conditions from the skeletal dysplasia spectrum. In conclusion, it is expected that this work will contribute to a better understanding towards the vast and heterogeneous group of skeletal dysplasias. Future studies will be decisive to the establishment of better clinical and laboratorial practices regarding patients diagnosed with a skeletal dysplasia and their relatives.

Summary Background. Diastrophic dysplasia is an osteochondrodysplasia belonging to the group of dysplasias caused by mutations in the diastrophic dysplasia sulfate transporter. This sindrome is a micromelic dysplasia with multiple bone deformities of the hands, feet, knees and spine. Objective. Describe the first report of diastrophic displasia in Colombia Materials and methods. In this paper a Colombian adult patient with diastrophic dysplasia whose clinical diagnosis was confirmed at the molecular level is reported. Results. In this first report of diastrophic dysplasia in Colombia we found that the patient was compound heterozygote for the already reported Arg279Trp substitution and an unpublished mutation, a Ser157Thr substitution in the SLC26A2 gene. Conclusion. Bioinformatic analysis on the latter mutation suggested that it could correspond to a deleterious mutation because it is in a highly conserved domain of the sulfate transporter. Resumen Antecedentes. La displasia diastrófica es una osteocondrodisplasia que pertenece al grupo de las enfermedades genéticas del esqueleto causadas por mutaciones en los transportadores de sulfato. Se presenta como una displasia micromélica con afectación de múltiples huesos y deformidades en manos, pies, rodillas y columna vertebral. Objetivo. Describir el primer reporte de displasia diastrófica en Colombia. Materiales y métodos. Se reporta un adulto colombiano con esta displasia, con confirmación clínica, radiológica y molecular. Resultados. En este primer reporte colombiano, se encontró que la paciente presentó una mutación heterocigota compuesta, de Arg279Trp y Ser157Thr, esta última no reportada previamente, en el gen SLC26A2. Conclusión. El análisis bioinformático de la mutación nueva sugiere que podría corresponder a una mutación deletérea dado que el dominio afectado en el transportador de sulfatos es altamente conservado.

CONTEXTO A displasia diastrófica é uma osteocondrodisplasia causada por mutação homozigótica no gene DTDST (diastrophic dysplasia sulfate transporter gene). As alterações, principalmente nos sistemas esquelético e cartilaginoso, são típicas dessa doença, que tem uma incidência de 1 em 100.000 nascidos vivos. RELATO DO CASO Descreve-se o caso de uma mulher gestante, sem relação consanguínea com o seu marido, cujo feto foi diagnosticado com displasia esquelética baseado na ultrassonografia e em testes de DNA. A ultrassonografia obstétrica, realizada na 16a semana, revelou características que guiaram o diagnóstico clínico. Entre elas, se destacam os membros inferiores e superiores com rizomelia (encurtamento das porções proximais) e mesomelia (encurtamento das porções intermediárias), ambos os membros superiores mostraram acentuada flexão, o primeiro dedo em abdução nas extremidades superiores e clinodactilia do quinto dedo. A análise molecular pela reação em cadeia da polimerase (PCR) e o sequenciamento gênico detectou mutações já descritas na literatura para o gene DTDST, chamado c.862C > T e c.2147_2148insCT. Portanto, o feto é um heterozigoto composto, carreando duas mutações diferentes. CONCLUSÕES O diagnóstico pré-natal dessa condição permite uma interpretação mais realista do prognóstico e do futuro reprodutivo do casal. Este relato de caso mostra a contribuição da genética molecular no diagnóstico pré-natal, com poucas descrições na literatura. CONTEXT Diastrophic dysplasia is a type of osteochondrodysplasia caused by homozygous mutation in the gene DTDST (diastrophic dysplasia sulfate transporter gene). Abnormalities occurring particularly in the skeletal and cartilaginous system are typical of the disease, which has an incidence of 1 in 100,000 live births. CASE REPORT The case of a pregnant woman, without any consanguineous relationship with her husband, whose fetus was diagnosed with skeletal dysplasia based on ultrasound findings and DNA tests, is described. An obstetric ultrasound scan produced in the 16th week of gestation revealed characteristics that guided the clinical diagnosis. Prominent among these characteristics were rhizomelia of the lower and upper limbs (shortening of the proximal portions) and mesomelia (shortening of the intermediate portions). Both upper limbs showed marked curvature, with the first finger of the upper limbs in abduction and clinodactyly of the fifth finger. Molecular analysis using the polymerase chain reaction (PCR) and gene sequencing detected mutations that had already been described in the literature for the gene DTDST, named c.862C > T and c.2147_2148insCT. Therefore, the fetus was a compound heterozygote, carrying two different mutations. CONCLUSIONS Prenatal diagnosis of this condition allowed a more realistic interpretation of the prognosis, and of the couple's reproductive future. This case report shows the contribution of molecular genetics towards the prenatal diagnosis, for which there are few descriptions in the literature. Faculdades Integradas do Brasil (UniBrasil) Universidade Federal do Paraná (UFPR) Department of Gynecology and Obstetrics Centro de Diagnósticos (CEDUS) Pontifícia Universidade Católica do Paraná (PUCPR) Health and Biosciences School (ESB) Graduate Program in Health Science (PPGCS) Faculdades Integradas do Brasil (UniBrasil) Biomedicine Course Universidade Federal de São Paulo (UNIFESP) Department of Obstetrics UNIFESP, Department of Obstetrics SciELO

A baixa estatura afecta cerca de 2% das crianças e representa um dos motivos mais frequentes da consulta de Endocrinologia Pediátrica. A heterogeneidade genética responsável pela baixa estatura sofreu um grande avanço com a descrição do gene SHOX ('short stature homeobox containing gene'). A proteína codificada localiza-se exclusivamente no núcleo de algumas células, e está envolvida na regulação do desenvolvimento, diferenciação e organogénese, com uma expressão limitada no espaço e no tempo. A expressão fenotípica é variável, com mais de 50 mutações do gene descritas. Mutações heterozigóticas do gene SHOX foram relatadas em casos de síndrome de Léri-Weill (SLW). Descreve-se o caso clínico de um adolescente enviado à consulta por baixa estatura. O estudo hormonal efectuado e a pesquisa de mutações para o gene FGFR3 foram negativos. O aparecimento da deformidade de Madelung em radiografia dos membros superiores levou ao pedido do estudo molecular do gene SHOX. Foi detectado um padrão anómalo na região PAR1, com delecção dos exões 1-5 do gene, confirmando-se a hipótese clínica de SLW. O estudo do gene SHOX deve ser considerado em alguns casos no estudo da baixa estatura. (Comentários) O diagnóstico de SLW é fundamentalmente clínico e radiológico. Está confirmado que o gene SHOX é a principal causa do SLW, mas não se pode excluir a influência de outros genes. Assim, a presença de alterações específicas do gene SHOX confirma o diagnóstico, mas a sua ausência não o exclui. A baixa estatura ocorre nos primeiros anos de vida e geralmente o crescimento pubertário é pouco ou nada afectado. Em geral deve suspeitar-se de uma alteração no gene SHOX nos doentes com: a) baixa estatura 'idiopática', especialmente se estatura inferior à estatura-alvo familiar, b) 'baixa estatura familiar', especialmente se predominante no sexo feminino, c) crescimento desproporcional dos antebraços e pernas. A mutação do gene SHOX pode, como já descrito, dar origem a múltiplos fenótipos, mesmo dentro da mesma família. O fenótipo está dependente da deficiência do produto génico funcional e não do tipo de mutação génica. A deformidade de Madelung pode não ser evidente até à adolescência, sobretudo no sexo masculino, e é geralmente precedida por sinais radiológicos, com aconteceu no caso clínico descrito. Foram utilizados para o cálculo dos percentis os gráficos de crescimento (altura, peso, perímetro cefálico e velocidade de crescimento) de Tanner e Whitehouse, porque são estes os utilizados na consulta de Endocrinologia Pediátrica do hospital. Estes gráficos têm a vantagem de contemplar as variações ocorridas no crescimento durante a puberdade e incluírem o P3, que corresponde a 2 desvios-padrão. A altura alcançada pelo adolescente está ligeiramente abaixo da estatura-alvo prevista (166,5cm, com variação de mais ou menos 6,5cm), mas de acordo com a estatura média alcançada pelos doentes com SLW (155cm no sexo masculino). Apesar de ainda não ter sido feito o estudo genético dos progenitores, o facto de o pai e avô paterno apresentarem baixa estatura e membros curtos aponta para uma possível transmissão paterna do gene mutado. Dados recentes demonstram que a maioria dos alelos SHOX mutados nos casos esporádicos são transmitidos pelo pai, fenómeno que também foi observado em estudo anterior sobre mutações SHOX em doentes com baixa estatura inexplicada. O efeito da hormona de crescimento neste síndrome é variável e são necessários mais estudos para apoiar ou revogar a sua utilização. Outras actuações possíveis são a cirurgia com correcção da angulação rádio-cárpica, alargamento ósseo em caso de dor, transtorno funcional ou hipocrescimento patológicos. Neste caso não se preconizou qualquer tipo de tratamento. Por ser um síndrome de transmissão dominante, o aconselhamento genético é importante. O estudo dos pais deve ser efectuado para avaliar se esta variação é herdada ou 'de novo'.

A baixa estatura afecta cerca de 2% das crianças e representa um dos motivos mais frequentes da consulta de Endocrinologia Pediátrica. A heterogeneidade genética responsável pela baixa estatura sofreu um grande avanço com a descrição do gene SHOX ('short stature homeobox containing gene'). A proteína codificada localiza-se exclusivamente no núcleo de algumas células, e está envolvida na regulação do desenvolvimento, diferenciação e organogénese, com uma expressão limitada no espaço e no tempo. A expressão fenotípica é variável, com mais de 50 mutações do gene descritas. Mutações heterozigóticas do gene SHOX foram relatadas em casos de síndrome de Léri-Weill (SLW). Descreve-se o caso clínico de um adolescente enviado à consulta por baixa estatura. O estudo hormonal efectuado e a pesquisa de mutações para o gene FGFR3 foram negativos. O aparecimento da deformidade de Madelung em radiografia dos membros superiores levou ao pedido do estudo molecular do gene SHOX. Foi detectado um padrão anómalo na região PAR1, com delecção dos exões 1-5 do gene, confirmando-se a hipótese clínica de SLW. O estudo do gene SHOX deve ser considerado em alguns casos no estudo da baixa estatura. (Comentários) O diagnóstico de SLW é fundamentalmente clínico e radiológico. Está confirmado que o gene SHOX é a principal causa do SLW, mas não se pode excluir a influência de outros genes. Assim, a presença de alterações específicas do gene SHOX confirma o diagnóstico, mas a sua ausência não o exclui. A baixa estatura ocorre nos primeiros anos de vida e geralmente o crescimento pubertário é pouco ou nada afectado. Em geral deve suspeitar-se de uma alteração no gene SHOX nos doentes com: a) baixa estatura 'idiopática', especialmente se estatura inferior à estatura-alvo familiar, b) 'baixa estatura familiar', especialmente se predominante no sexo feminino, c) crescimento desproporcional dos antebraços e pernas. A mutação do gene SHOX pode, como já descrito, dar origem a múltiplos fenótipos, mesmo dentro da mesma família. O fenótipo está dependente da deficiência do produto génico funcional e não do tipo de mutação génica. A deformidade de Madelung pode não ser evidente até à adolescência, sobretudo no sexo masculino, e é geralmente precedida por sinais radiológicos, com aconteceu no caso clínico descrito. Foram utilizados para o cálculo dos percentis os gráficos de crescimento (altura, peso, perímetro cefálico e velocidade de crescimento) de Tanner e Whitehouse, porque são estes os utilizados na consulta de Endocrinologia Pediátrica do hospital. Estes gráficos têm a vantagem de contemplar as variações ocorridas no crescimento durante a puberdade e incluírem o P3, que corresponde a 2 desvios-padrão. A altura alcançada pelo adolescente está ligeiramente abaixo da estatura-alvo prevista (166,5cm, com variação de mais ou menos 6,5cm), mas de acordo com a estatura média alcançada pelos doentes com SLW (155cm no sexo masculino). Apesar de ainda não ter sido feito o estudo genético dos progenitores, o facto de o pai e avô paterno apresentarem baixa estatura e membros curtos aponta para uma possível transmissão paterna do gene mutado. Dados recentes demonstram que a maioria dos alelos SHOX mutados nos casos esporádicos são transmitidos pelo pai, fenómeno que também foi observado em estudo anterior sobre mutações SHOX em doentes com baixa estatura inexplicada. O efeito da hormona de crescimento neste síndrome é variável e são necessários mais estudos para apoiar ou revogar a sua utilização. Outras actuações possíveis são a cirurgia com correcção da angulação rádio-cárpica, alargamento ósseo em caso de dor, transtorno funcional ou hipocrescimento patológicos. Neste caso não se preconizou qualquer tipo de tratamento. Por ser um síndrome de transmissão dominante, o aconselhamento genético é importante. O estudo dos pais deve ser efectuado para avaliar se esta variação é herdada ou 'de novo'.

A traqueobroncopatia osteocondroplásica (TO) é uma doença benigna rara, de causa desconhecida, caracterizada por numerosos nódulos submucosos sésseis, cartilaginosos e/ou ósseos, distribuídos pelas paredes ântero-laterais, projetando-se no lúmen laringotraqueobrônquico. Existem aproximadamente 400 casos relatados na literatura mundial. OBJETIVOS: Relatar e discutir 2 casos de TO com a revisão bibliográfica. MATERIAL E MÉTODO: Apresentação de 2 casos, com revisão bibliográfica realizada através dos bancos de dados do MEDLINE, LILACS, PUBMED. DESENHO DO ESTUDO: Estudo observacional, descritivo, relato de casos. CONCLUSÃO: Os sintomas são resultados de obstrução da via aérea, causando tosse seca, dispneia e infecções recorrentes do trato respiratório. A suspeita diagnóstica é feita pela endoscopia de vias aéreas (laringotraqueobroncoscopia), sendo a tomografia computadorizada do tórax/traqueia útil para documentar as características de lesões nodulares. O diagnóstico diferencial inclui a papilomatose, amiloidose e sarcoidose endobronquial, condrossarcoma, hamartoma e linfonodos paratraqueais calcificados. Não existe tratamento específico, porém o prognóstico é bom. A remoção cirúrgica é restrita aos quadros obstrutivos moderados e severos. Os otorrinolaringologistas devem estar atentos e incluírem a traqueobroncopatia osteocondroplástica na lista de diagnósticos diferenciais, quando frente aos sintomas sugestivos de doenças da via aérea superior e árvore traqueobrônquica. Osteochondroplastic tracheobronchopathy (OT) is a rare benign disorder of the lower part of the trachea and the upper part of the main bronchus characterized by numerous submucosal calcified nodules, sessile, cartilaginous and/or osseous with laryngotracheobronchial lumen projection. There are less than 400 cases reported in the word literature. AIM: to report and discuss 02 cases of OT with a bibliography review. MATERIALS AND METHODS: we report on 02 cases with bibliography revision from MEDLINE, LILACS and PUBMED data. STUDY DESIGN: observational, descriptive, case reports. CONCLUSION: the symptoms result from airway obstruction, causing dry cough, dyspnea and recurrent respiratory tract infections. The diagnostic hypothesis is established by endoscopy of the upper airway (laryngo-tracheo-bronchoscopy), and the trachea/chest computed tomography is the best image exam to define tracheal nodule alterations. The differential diagnoses are papillomatosis, amyloidosis and sarcoidosis chondrosarcoma hamartoma and calcified paratracheal lymph nodes. There is no specific treatment and the prognosis is good. Surgery is restricted to moderate or severe airway obstructions. Otorhinolaryngologists must include OT in the differential diagnosis of cases of upper airway and tracheobronchial tree suggestive symptoms.

A displasia camptomélica pertence a um grupo heterogêneo e raro de displasias esqueléticas letais, que se caracterizam pelo desenvolvimento anormal dos ossos e das cartilagens. É causada por uma mutação no gene Sox9 (SRY-like HMG [high-mobility group] BOX 9) do cromossomo 17 e transmitida pela via autossômica dominante. Apresenta como principais características o encurtamento e o encurvamento dos ossos longos, principalmente nos membros inferiores. Também está associada a outras graves malformações esqueléticas e extra-esqueléticas. O estudo do cariótipo pode revelar incompatibilidade entre o genótipo e o fenótipo genital. A maioria dos portadores morre nos períodos fetal e neonatal precoce. A ultra-sonografia é essencial para a elucidação diagnóstica pré-natal. Camptomelic dysplasia belongs to a heterogeneous and rare group of lethal skeletal dysplasias, characterized by abnormal development of bones and cartilages. It is caused by a mutation in gene Sox9 (SRY-like HMG [high-mobility group] BOX 9) of chromosome 17 and it is transmitted as an autosomal dominant trait. Its main characteristics are the shortening and bowing of the long bones, principally the lower limbs. It is also associated with other severe skeletal and extraskeletal malformations. Karyotype study may reveal sex reversal. The majority of carriers die during the fetal and early neonatal periods. Ultrasound is essential to elucidate a prenatal diagnosis.

ResumoDescrever aspectos cirúrgicos da ressecção de displasia epifisária hemimélica da patela. Os aspectos clínicos e de imagem já foram descritos em outro artigo. Paciente masculino, seis anos, com tumor de crescimento lento em joelho direito, por dois anos, com dimensões de 12cm no eixo longitudinal e 6cm no transversal, aderido à patela. Biópsia sugeriu lesão osteocondromatosa benigna, sem diagnóstico definido. Exames de imagem, como radiografias e tomografias, com áreas de formação óssea e áreas radiotransparentes e na ressonância magnética áreas de hipo e hiperssinal em T1 e T2, de tamanho estimado em 8,5 cm no eixo longitudinal e 6cm no transversal. Foram feitas ressecção cirúrgica da tumoração e curetagem do núcleo de ossificação epifisário do polo superior e medial da patela, com boa remodelação patelar e desenvolvimento normal. Paciente não apresentou recidiva da lesão até o término da maturidade esquelética.AbstractThe aim of this study was to describe surgical features of resection of hemimelic epiphyseal dysplasia of the patella. We already described the clinical and imaging features in another article. The patient was a six‐year‐old boy with a tumor in his right knee measuring 12cm longitudinally and 6cm transversally, which was adhering to the patella and had been slowly growing for two years. Biopsy findings were suggestive of a benign osteochondromatous lesion, without a defined diagnosis. Imaging examinations such as radiography and tomography showed areas of bone formation and radiotransparent areas, while magnetic resonance imaging showed areas of hypo and hypersignal in T1 and T2, of estimated size 8.5 cm longitudinally and 6cm transversally. The tumor growth was surgically resected and curettage was performed on the epiphyseal nucleus of ossification of the upper and medial centers of the patella, with good patellar remodeling and normal development. The patient did not present any recurrence of the lesion up to the time of reaching skeletal maturity.