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La leishmaniosis visceral canina (LVC) es una enfermedad parasitaria, causada por Leishmania infatum transmisible por vectores, que afecta principalmente al perro, al que puede producir una enfermedad mortal, y que se presenta de forma endémica en España. El objetivo de este trabajo ha sido validar y comparar una técnica de diagnóstico molecular (RT-PCR o qPCR) frente a tres técnicas serológicas (IFI y AD “in house” y una ELISA comercial) en un estudio epidemiológico de la LVC en una población canina (n=29) mediante muestras de conjuntiva obtenidas con hisopo. Se demostró, por un lado, que la técnica ELISA fue la más sensible presentando una concordancia moderada y débil con IFI y DAT respectivamente y, por otro lado, PCR en tiempo real detectó ADN del kinetoplasto de L.infantum en todos los animales incluso en los que todavía no pudieron desarrollar anticuerpos.