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In Vitro Embryo Production (IVP) is widely used to improve the reproductive efficiency of livestock animals, however increasing the embryo development rates and pregnancy outcomes is still a challenge for some species. Thus, the lack of biological knowledge hinders developing specie-specific IVP protocols. Therefore, the contributions of RNA-seq to generate relevant biological knowledge and improve the efficiency of IVP in livestock animals are reviewed herein.

PURPOSE: To evaluate the Adipose Stem Cells (ACS) therapy efficacy on the time and quality of wound healing process in rats. METHODS: Nine male Wistar rats were randomly distributed into three groups I) 7 days of healing; II) 14 days of healing; III) 21 days of healing. Four incisions were made on the dorsal surface of each rat and then treated with intralesional ACS, meloxicam, and no treatment and ACS+meloxicam. Macroscopic evaluation was measured by percentage of healing and histopathological by hematoxylin-eosin was performed. RESULTS: All groups have the wound reduced during the three weeks (p

O entendimento funcional do epidídimo possibilita o aumento da fertilidade de uma espécie, pois torna possível a preservação de gametas para o uso em técnicas de reprodução assistida. Este trabalho estudou os aspectos histológicos das diferentes regiões do epidídimo de Pecari tajacu, bem como as patologias associadas encontradas nos espermatozoides presentes nesse órgão. Após procedimento cirúrgico de orquiectomia, para remoção dos testículos e epidídimos, obtidos de oito animais adultos nascidos em cativeiro, realizou-se a fixação e o processamento histológico das amostras. Constatou-se em todas as regiões do epidídimo (cabeça, corpo e cauda) a presença de epitélio pseudoestratificado colunar com estereocílios. Foram observadas semelhanças entre a altura média do epitélio do corpo e da cauda, a qual era diferente da encontrada na cabeça (1- proximal: região associada aos ductos eferentes; 2- distal: região associada ao corpo do epidídimo). Foi verificado que a cabeça proximal apresenta a média de diâmetro dos túbulos menor em relação às demais porções do epidídimo. Em relação às patologias dos espermatozoides, constataram-se treze tipos diferentes de alterações morfológicas. Os espermatozoides subdesenvolvidos e cabeças soltas foram as mais frequentes ao longo do epidídimo de catitus. Os dados deste trabalho são pioneiros, e servirão como base para pesquisas comparativas sobre a biologia reprodutiva dos artiodátilos, contribuindo para a sua conservação e produção. A functional understanding of the epididymis makes it possible to increase a species’ fertility, since it facilitates the preservation of gametes for use in assisted reproduction techniques. This study analyzed the histological features of the different regions of the epididymis of the Pecari tajacu and the associated pathologies found in the spermatozoa present in this organ. After an orchiectomy surgery to remove the testicles and epididymis obtained from eight adult animals bred in captivity, fixation and histological processing of samples were carried out. The presence of pseudostratified columnar epithelium with stereocilia was observed in all regions of the epididymis (caput, corpus and caudal). Similarities were noted between the average height of the corpus and caudal epithelium, which differed from that found at the caput (1- proximal: region associated with the efferent ducts; 2- distal: region associated with corpus epididymis). It was also observed that the proximal caput presents a smaller average of the tubules diameter compared to other portions of the epididymis. Regarding pathologies of the spermatozoa, thirteen different types of morphological modifications were observed. Underdeveloped spermatozoa and detached heads were most frequently encountered along the epididymis of the collared peccaries. This study is a pioneer in the area and its data will serve as a basis for comparative research on the reproductive biology of artiodactyls, thus contributing to their conservation and reproduction.

O objetivo do presente trabalho foi obter dados quantitativos e qualitativos da população folicular ovariana de fêmeas de Cebus apella. Foram obtidos 7 ovários de 4 fêmeas adultas de C. apella através de ovariectomia. Os ovários foram submetidos à preparação para histologia ótica de rotina. O número de folículos pré-antrais e antrais por ovário foi estimado utilizando o Método Fracionador. Os folículos pré-antrais foram classificados em primordial, transição, primário e secundário. Foram considerados folículos antrais todos aqueles que apresentavam uma cavidade antral. Todos os folículos contados foram classificados em normais ou degenerados. Com o intuito de acompanhar o desenvolvimento folicular, os diâmetros médios folicular, oocitário e do núcleo do oócito foram determinados. Todos os resultados foram apresentados em Média ± Erro Padrão. A população média de folículos pré-antrais foi de 56.938 ± 21.888 e 49.133 ± 26.896 para os ovários direito e esquerdo, respectivamente. A percentagem de folículos pré-antrais estimados normais foi de 80,00 ± 4,95 %. O diâmetro médio folicular variou de 22,0 ± 0,5 µm a 61,2 ± 4,0 µm. No tocante aos folículos antrais, a população média de folículos normais e degenerados por ovário foi de 60,0 ± 19,0 e 3 ± 1,8 folículos, respectivamente. O diâmetro médio folicular foi de 514,4 ± 56,6 µm. Para concluir, as informações obtidas neste trabalho poderão servir como parâmetro para posteriores estudos in vivo ou in vitro da foliculogênese de primatas não-humanos neotropicais da espécie C. apella. The present study aimed to obtain quanti-qualitative data about the follicular ovarian population in Cebus apella females. Seven ovaries were obtained from 4 C. apella adult females. The ovaries were subjected to light microscopy. The number of preantral and antral follicles for each ovary was estimated using the Fractionator method. The preantral follicles were classified into primordial, transitional, primary and secondary follicles. Antral follicles were those that presented an antral cavity. All counted follicles were classified as normal or degenerated. The diameter of the follicles, oocytes and their nuclei were determined to accompany the follicular development. All results were represented as mean ± SE. The number of preantral follicles was 56,938 ± 21,888 and 49,133 ± 26,896 for the right and left ovaries, respectively. The percentage of normal follicles was 80 ± 4.95%. The follicular diameter ranged from 22 ± 0.5 µm to 61.2 ± 4.0 µm. Regarding the antral follicles, the number of normal and degenerate follicles per ovary were 60.0 ± 19.0 and 3 ± 1.8 follicles, respectively. The antral follicular diameter was 514.4 + 56.6 µm. In conclusion, the information obtained in this study can be used as a parameter for subsequent in vivo or in vitro studies about folliculogenesis in non-human neotropical primates of the C. apella species. DOMINGUES, S. F. S. Universidade Federal do Pará

O presente trabalho objetivou adaptar um procedimento mecânico para o isolamento de folículos pré-antrais a partir de ovários de Cebus apella. Para isso, foi testado o efeito do intervalo de cortes seriados do tissue chopper sobre o número de folículos pré-antrais isolados a partir de ovários (n=6) de três fêmeas de C. apella, duas pré-púberes e uma adulta. Os ovários foram divididos em quatro partes iguais e fragmentados com auxílio de um tissue chopper, ajustado para a realização de secções seriadas a intervalos de 250, 500, 750 e 1000µm, respectivamente. Os folículos isolados foram contados em câmara de Neubauer e classificados em primordiais, primários e secundários. O número (média ± EP) de folículos pré-antrais isolados de 1/4 de ovário variou de 68.330+17.590, no intervalo de corte de 1.000µm, a 300.830+111.460, no intervalo de corte de 500µm, o de melhores resultados. O diâmetro médio dos folículos pré-antrais isolados variou de 11,6µm a 27, 8µm. The aim of this study was to adapt a mechanical procedure for the isolation of intact preantral follicles from Cebus apella ovaries. The interval effect of serial sections of the tissue chopper was tested on a number of preantral follicles isolated from ovaries (n=6) of three C. apella females, two prepubertal and one adult. Ovaries were divided into four equal parts and fragmented with a tissue chopper, adjusted for serial sections at intervals of 250, 500, 750 and 1,000µm, respectively. Isolated follicles were counted in a Neubauer's chamber and classified as primordial, primary or secondary. The number (mean±SE) of preantral follicles isolated from 1/4 ovary varied from 68,330+17,590 (at the 1,000µm cut interval) to 300,830+111,460 (at the 500µm cut interval. The mean diameter of the isolated preantral follicles varied from 11.6µm to 27.8µm.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O objetivo desta tese foi o estudo da variabilidade espacial e temporal da comunidade de rotíferos da Usina Hidrelétrica de Tucuruí-PA e o estado da arte da biodiversidade de rotíferos em reservatórios brasileiros. Para o estudo da variação espacial e temporal, foram filtrados 560 l de água, em uma rede de plâncton (60 μm), retirados do estrato 1 (superfície) e do 2 (oito metros), por meio de uma motobomba, em doze pontos distribuídos a montante (Zona Próxima a Barragem-ZPB e Zona de Transição-ZTR) e a jusante (Zona a Jusante), do reservatório, durante os períodos de maior (dez/11 e mar/12) e menor (set/11, jul/12 e set/12) precipitação de chuva. No primeiro período, foram realizadas coletas interanual e quadrimestrais, por meio de rede de plâncton (60 μm) na superfície da coluna d’água, em um total de 10 pontos amostrais, localizadas na zona limnética. No segundo, a coleta foi interanual e trimestrais, sendo realizada em diferentes estratos da coluna d’água (superfície-E1 e oito metros de profundidade-E2). As famílias Brachionidae, Lecanidae e Trichocercidae foram as mais representativas, em termos de frequência e abundância, nos dois períodos. As espécies Keratella americana e Rotariasp. foram consideradas espécies mais abundantes, principalmente na Zona Próxima a Barragem (ZPB) e na de Transição (ZTR), respectivamente, com um padrão de distribuição, provavelmente mais afetada pela pluviosidade. Variações sazonais foram observadas entre na abundância das espécies, destas a K. Americanae Rotaria sp. foram as que apresentaram maiores valores no período menos chuvoso e menores no mais chuvoso e outras ocorreram apenas em um dos períodos. No entanto, a correlação entre as abundâncias de espécies de rotíferos e variáveis limnológicas, durante o períodomais chuvoso, não foi significativa, mas foi no período mais chuvoso. Os altos valores dos eixos canônicos (Abundância de espécies de rotíferos vs variáveis limnológicas) foram influenciados pela transparência, condutividade e OD no E1, e pelo OD e pH no E2. Os maiores valores de diversidade foram apresentados na ZPB, no período mais chuvoso (mar/12) e na ZTR durante no menos chuvoso (set/12). A equitabilidade, entre as profundidades e entre as zonas, sugere menor variabilidade na abundância das espécies e maior riqueza. A composição, a abundância e a diversidade específica da comunidade de rotíferos da Usina Hidrelétrica de Tucuruí podem ser afetadas pelas variações morfométricas e limnológicas do local de coleta e pela pluviosidade. Para o Estado da Arte foram realizados levantamentos bibliográficos, artigos indexados, sobre a biodiversidade de rotíferos planctônicos, em reservatórios brasileiros. A maioria dos trabalhos aborda, principalmente, os temas: distribuição horizontal, composição e riqueza, seguidas de distribuição vertical, de densidade, de aspecto sazonal e temporal, de abundância relativa e de diversidade e equitabilidade. A maior parte dos reservatórios está localizada na região Sudeste, com a maior riqueza, contando o número total de espécies (incluindo as repetidas nos diferentes artigos) e na Nordeste, com menor número de reservatório e com a menor riqueza. A região Centro- Oeste apresentou a maior riqueza e a Nordeste a menor (apenas espécies e subespécies não repetidas). Percebe-se, portanto, que há um esforço cada vez maior dos autores das regiões Sudeste e Centro-Oeste na identificação ao menor nível taxonômico possível. As espécies Keratella americana e Conochilus unicornis foram as mais comuns em todas as regiões brasileiras, seguidas de K. lenzi, Polyarthra vulgaris, Brachionus falcatus e Filinia longiseta, consideradas cosmopolitas. Portanto, as espécies da comunidade de rotíferos se distribuem heterogeneamente e apresentam diferenças consideráveis em sua distribuição vertical e horizontal, nos ambiente do reservatório da UHE Tucuruí, podendo ser afetadas pelas variações morfométricas e limnológicas do local de coleta e pela pluviosidade. Portanto, os rotíferos possuem ampla distribuição em todas as regiões brasileiras, devendo-se à capacidade de habitarem variados cursos hídricos e de se dispersarem, por meio de ovos de resistência presos a diferentes organismos ou embarcações.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas O objetivo dessa tese foi avaliar o efeito do cortisol, na maturação oocitária e cultivo de embriões bovinos. No ARTIGO 1 foi analisada a distribuição e localização de receptor de glicocorticóide (GR) por imunocitoquímica em oócitos, células do cumulus, embrião de 2-4 células, 8-16 células, mórula e blastocisto, e foi verificado também a presença de RNAm (rtPCR qualitativa) para GR nos referidos estádios. Os resultados apontam que o GR está presente em todas as células analisadas. A fim de verificar a funcionalidade de GR no desenvolvimento embrionário préimplantacional, a tradução do RNAm para GR foi silenciada em zigotos pela técnica de RNAi, e o desenvolvimento embrionário subsequente foi analisado. A diminuição de transcrito e proteínas de GR pela técnica de RNAi prejudicou o desenvolvimento embrionário (p0,05). Em relação à expressão gênica embrionária, apenas as quantificações relativas de RNAm para FASN, GLUT1 e HSP70 estavam aumentadas nos blastocistos tratados com 0,1μg/mL durante a MIV quando comparados aos embriões do grupo Controle (p0,05). No ARTIGO 3 foi analisado o uso do cortisol durante o cultivo in vitro (CIV) de embriões bovinos. Visto que no Capítulo 1 foi identificado GR em todos os estádios de desenvolvimento embrionário e quando a expressão de GR foi silenciada o desenvolvimento embrionário foi prejudicado. Sendo assim, no experimento 3 foram adicionadas diferentes concentrações (0,01; 0,1 e 1 μg/mL) de cortisol na CIV e o desenvolvimento embrionário foi avaliado, mesmos parâmetros do Capítulo 2. Não houve diferença estatística nos embriões tratados com Cortisol em diferentes concentrações quando comparados com o Controle para nenhum dos parâmetros analisados (p>0.05). A concentração de 0,1 μg/mL foi escolhida para avaliar outros parâmetros de qualidade embrionária. Sendo assim, embriões CIV Com ou Sem 0,1 μg/mL de Cortisol, foram analisados quanto à taxa de apoptose e expressão gênica, não sendo observada diferença estatística em nenhuma das análises (p>0,05). Após estes estudos concluímos que oócitos e embriões são responsivos a GC, que a adição de cortisol na MIV melhora a competência oocitária, porém a suplementação com cortisol na CIV não influenciou o desenvolvimento embrionário. The aim of this thesis was to evaluate the effect of cortisol in oocyte maturation and bovine embryo culture. In Chapter 1 we analyzed the distribution and location of glucocorticoid receptor (GR) by immunocytochemistry in oocytes, cumulus cells, embryonic cells 2-4, 8-16 cell, morula and blastocyst, and was also verified the presence of mRNA (qualitative RT-PCR) for GR in the stages. The results showed that the GR is present in all cells analyzed. In order to verify the functionality GR in preimplantation embryo development, translation of mRNA for GR zygotes was silenced in the RNAi technique, and subsequent embryo development was analyzed. The embryonic development decreased (P 0, 05). Regarding embryonic gene expression, only the measurements relative mRNA FASN, GLUT1 and HSP70 were increased in blastocysts treated with 0.1 g/ml during IVM when compared to embryos of the Control group (p 0.05). In Chapter 3, we investigated the use of cortisol during in vitro culture (IVC) of bovine embryos. As in Chapter 1 was identified GR in all embryonic stages and when the GR expression was silenced and embryonic development was impaired. Thus, in the experiment three different concentrations (0.01, 0.1 and 1 mg / mL) of cortisol in IVC and embryonic development was evaluated same parameters of Chapter 2. There was no statistical difference in the embryos treated with cortisol in different concentrations when compared to the control for the parameters analyzed (p> 0.05). The concentration of 0.1 mg/ml was chosen to evaluate other parameters of embryo quality. Thus, IVC embryos with or without 0.1 mg/mL of cortisol, were analyzed for apoptosis rate and gene expression, not being statistically significant difference in any of the analyzes (p> 0.05). After these studies conclude that oocytes and embryos are responsive to GC, and the addition of cortisol in IVM improves oocyte competence, but the supplementation of IVC with cortisol may not have influence on embryo development.

FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas UNOPAR - Universidade Norte do Paraná O capítulo 1 inclui a revisão da literatura da produção in vitro de embriões bovinos e da água de coco como meio de preservação e cultivo celular em biotecnologias reprodutiva. O capítulo 2 inclui a avaliação de uma solução de água de coco a 75% suplementada com mio-inositol, tri-citrato de sódio e aminoácidos durante a maturação oocitária e/ou cultivo de embriões bovinos in vitro. Os capítulos 3 e 4 tratam a avaliação química da água de coco in natura em comparação com o meio 199 e a avaliação de uma solução de água de coco a 20% no cultivo de células do cumulus oophorus bovino. O capítulo 5 inclui a avaliação de uma solução de água de coco a 20% suplementada com mio-inositol, tri-citrato de sódio e aminoácidos na maturação oocitária, fecundação e cultivo de embriões bovinos in vitro.

FAPESPA - Fundação Amazônia de Amparo a Estudos e Pesquisas Células-tronco adultas são conhecidas por seu potencial e plasticidade para se diferenciar em vários tipos celulares diferentes (multipotência), tendo assim, implicações para a terapia celular, bem como biotecnologias reprodutivas. No presente trabalho relatamos o isolamento e caracterização de células-tronco mesenquimais (CTM) derivadas de tecido adiposo de bovinos e bubalinos. As células foram isoladas por digestão enzimática da biópsia do tecido adiposo e cultivadas por pelo menos dez passagens in vitro,dando apoio a sua capacidade proliferativa. Estas células também foram submetidas à caracterização imunofenotípica para visualizar a presença de marcadores de CTM, CD90, CD105 e CD79, e ausência de marcadores de Células-Tronco Hematopoiéticas, CD45, CD34 e CD73, A fim de provar a sua multipotência, as células foram induzidas a diferenciação em três tipos de células diferentes e coradas com corantes tecidos-específicos (condrogênico-Alcian Blue, osteogênica-Alizarina Red e adipogênica-Oil-Red O) para confirmar a sua diferenciação em condrócitos, ostoblastos e adipócitos. Nossos resultados indicam que o tecido adiposo de bovinos e bubalinos podem ser usados como fonte de células-tronco mesenquimais (CTM), transformando-as em uma opção interessante de modelos animais para terapia celular e medicina regenerativa. Além disso, essas células podem ser relevantes para a biotecnologia reprodutiva desde o uso de CTM de doadoras nucleares, pois têm sido associadas com um aumento nas taxas de desenvolvimento de embriões clonados. Adult stem cells are known for their potential and plasticity to differentiate into several different cell types (multipotency), which has implications for cell therapy as well as reproductive biotechnologies. In the present work we report isolation and characterization of mesenchymal stem cells (MSCs) derived from adipose tissue of cattle and buffaloes. Cells isolated by enzymatic digestion of adipose-tissue biopsy were grown for at least ten passages in vitro giving support to of their proliferative capacity. These cells were also subjected to immunophenotypic characterization to visualize the presence, of CD90, CD105 and CD79, and absence, of CD45, CD34 and CD73, wich are positive and negative markers of MSCs, respectively. In order to determine their multipotency, the cells were induced to differentiate into three different cell types and stained with tissue-specific dyes (Chondrogenic-Alcian Blue, Osteogenic- Alizarin Red and Adipogenic-Oil-Red O) to ensure their differentiation into chondrocytes, ostoblasts and adipocytes. Our results indicate that adipose tissue of cattle and buffaloes can be used as a source of mesenchymal stem cells (MSCs), turning them into an interesting option of animal models for cell therapy and regenerative medicine. Additionally, these cells may be relevant for reproductive biotechnology since the use of MSCs as nuclear donors has been linked to an increase in the developmental rates of cloned embryos.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O objetivo deste trabalho foi avaliar o uso da L-arginina nos processos de capacitação espermática e fecundação in vitro (FIV), analisando sua influência no desenvolvimento embrionário, utilizando o sêmen de dois touros (Bos taurus e Bos indicus). No experimento 1, os espermatozóides foram incubados, sem a presença de oócitos, durante 0, 1, 2 e 3 h em meio de FIV adicionado de 0, 1, 10 e 50 mM de L-arginina, sendo analisada a taxa de reação acrossômica. No experimento 2, espermatozóides e oócitos foram incubados em meio de FIV acrescido com as concentrações de L-arginina citadas anteriormente, durante aproximadamente 30 h. Os oócitos bovinos foram maturados in vitro (MIV) e o subsequente cultivo embrionário (CIV) foi realizado sobre monocamada de células da granulosa, em meio SOF, sendo avaliadas as taxas de fecundação (18 hpi), clivagem e blastocisto (2º e 7º dia de cultivo, respectivamente). A dosagem de NO3-/NO2- produzido durante a FIV foi realizada através do método colorimétrico de Griess. Para análise estatística dos dados, foi utilizado a ANOVA, com nível de significância de 5%. A Larginina (1 mM), quando adicionada ao meio de capacitação espermática, durante duas horas, aumentou a taxa de reação acrossômica em relação ao controle (31,1±2,78 vs 23,4±2,65) em Bos taurus. A adição de L-arginina (50 mM) ao meio de FIV (experimento 2), tanto em Bos taurus quanto em Bos indicus, diminuiu as taxas de clivagem (78,7±2,17 vs 65,7±9,32; 72,7±3,36 vs 45±7,12; respectivamente) e blastocisto (39,4±3,78 vs 15,2±6,12; 39,4±4,39 vs 16±8,54; respectivamente) em relação ao controle. Sendo assim, observou-se que a L-arginina aumentou a taxa de reação acrossômica em Bos taurus, porém reduziu as taxas de clivagem e blastocistos em ambos os touros, sem influenciar na qualidade do embrião. The aim of this work was to evaluate the use of the L-arginine in sperm capacitation and in vitro fertilization (IVF), analyzing its influence on the embryonic development, using semen from two bulls (Bos taurus and Bos indicus). In experiment 1, the spermatozoa had been incubated without oocytes, during 0, 1, 2 and 3 hour in IVF medium added of 0, 1, 10 and 50 mM L-arginine. In experiment 2, spermatozoa and oocytes had been incubated in IVF medium added with the L-arginine concentrations previously cited, during approximately 30 hour. The bovine oocytes had been matured in vitro (IVM) and embryonic culture (IVC) was supported by a monolayer of granulosa cells in SOF medium. It was evaluated fertilization (18 hpi), clivage and blastocyst rates (2º and 7º culture day, respectively). The Griess colorimetric method was applied to mensurement of the NO3 -/NO2 - produced during the IVF. For statistics analysis, values were considered significantly different if P

O objetivo deste trabalho foi verificar o efeito da glutationa (GSH – 0,3mg/mL), no processo de separação, lavagem e capacitação espermática sobre a taxa de produção in vitro de embriões bovinos. O sêmen de um touro foi separado através de gradientes de Percoll e centrifugados duas vezes em meio de fecundação in vitro (lavagem). Espermatozóides foram capacitados in meio de FIV durante 1 h em estufa úmida a 38,5°C e 5% de CO2. Os grupos experimentais foram: Controle (não possui a etapa de lavagem; Grupo 1: sem GSH nas três etapas; Grupo2: GSH somente na capacitação; Grupo3: GSH somente na separação e na lavagem (primeira lavagem); Grupo 4: GSH em todas as etapas. Oócitos provenientes de abatedouro foram maturados in vitro e fertilizados após as preparações feitas no sêmen. Os embriões foram cultivados durante 7 dias com análise da clivagem no 2º dia, taxa de blastocisto e número total de células embrionárias no 7º dia. As taxas de desenvolvimento embrionário foram analisadas pelo qui-quadrado (χ2) e a qualidade embrionária pela ANOVA através do programa Bio Estat 3.0 (AYRES, et al., 2003) com nível de significância de 5%. Não houve diferença estatística efeito do uso da GSH nas diferentes etapas do processo de preparação espermática sobre as taxas de clivagem, blastocisto e eclosão (Grupo Controle: 52, 35 e 50%; Grupo 1: 60, 37 e 44%; Grupo 2: 57, 40 e 50; Grupo 3: 56, 37 e 51%; Grupo 4: 47, 30 e 48%, respectivamente, p>0,05). Também não foi observado diferença estatística quanto ao número de células embrionárias (Grupo Controle: 30,9±21,87, Grupo 1: 57,8±18,26; Grupo 2: 66,2±20,14; Grupo 3: 62,1±22,48; Grupo 4: 76,7±29,28; p>0,05). The aim of this work was evaluated the effect of Glutathione addition (GSH – 0.3mg/mL) in the semen separation, washing and capacitation steps on the bovine in vitro embryo production. Semen from one only bull was separated with Percoll and centrifugated twice with in vitro fertilization (IVF) medium (washing). Spermatozoa were capacitated in IVF medium during 1 h in 5% CO2 incubator at 38,5ºC. Experimental groups were: Control – it was not supplemented with GSH in separation and washing and capacitation was excluded; Group 1: without GSH in all steps; Group 2: GSH supplementation just in the capacitation; Group 3: GSH supplementation in the separation and washing steps (first washing only); Group 4: GSH supplementation in all steps. Bovine oocytes collected at slaughterhouse were in vitro matured and fertilized after semen preparations. Embryos were cultured during seven days with cleavage being analysed at day 2 and blastocyst rates and total embryo cell number (quality) at day7. Embryo rates were evaluated with chi-square test (χ2) and embryo quality with ANOVA in the software Bio Estat 3.0 (AYRES, et al., 2003) at significance level of 5%. There was not effect of the GSH supplementation in different steps of semen preparation (p>0,05) on cleavage, blastocysts and hatching rates (Control Group: 52%, 35% and 50%, respectively; G1: 60%, 37% and 44%, respectively; G2: 57%, 40% and 50%, respectively; G3: 56%, 37% and 51%, respectively; G4: 47%, 30% and 48%, respectively). Moreover, it was not observed effect on mean (±SD) of embryo total cell number (Control: 30,9±21,87, Group 1:57,8 ±18,26; Group 2:66,2 ±20,14; Group 3:62,1 ±22,48; Group 4:76,7 ±29,28; p> 0,05).

Fêmeas e machos adultos de P. squamosissimus (Pisces, Teleostei, Sciaenidae) foram coletados mensalmente no Rio Pará, que banha a ilha do Capim (PA) (S 010 34. 971`; W 0480 52.932`), durante o período de fevereiro de 2004 a fevereiro de 2005, correspondendo ao total de 234 espécimes. As gônadas foram coletadas, fixadas e processadas de acordo com os métodos usuais utilizados para processamento em parafina e análise em microscopia de luz. A espécie em estudo é uma das principais fontes de proteína animal para a população local, sendo capturada de forma intensa e ininterrupta ao longo do ano. Com base em informações dos pescadores locais, essa captura parece estar determinando uma aparente diminuição quantitativa e qualitativa em seus estoques locais. A espécie apresenta desova parcelada e o desenvolvimento gonadal foi caracterizado nos estádios de repouso, maturação, maduro e esvaziado ou semi-esvaziado. Gônadas maduras foram encontradas nos meses de dezembro, janeiro e julho. A análise de correlação entre o estádio gonadal maduro e a variação temporal da relação gonadossomática (ΔRGS) indica também a ocorrência de desova nos respectivos meses. Não obstante, as informações obtidas da correlação entre a ΔRGS e a média de oócitos maduros e percentual de espermatozóides por túbulo seminífero, respectivamente, também indicaram haver desova nos respectivos meses, sendo que aparentemente a espécie apresenta uma desova mais intensa ou desova principal entre os meses de dezembro e janeiro (inverno), e outra desova menos intensa ou secundária no mês de julho (verão). Com base no método da morfologia tubular, foram determinados oito estádios do ciclo do epitélio seminífero (CES), sendo que no estádio 1 os túbulos seminíferos são compostos por espermatogônias primárias e cistos de spermatogônias secundárias; o estádio 2 é composto por espermatogônias primárias e secundárias e cistos de espermatócitos; estádio 3 é caracterizado por espermatogônias primárias, secundárias, cistos de espermatócitos e de espermátides jovens ou recém-formadas; estádio 4 com túbulos seminíferos caracterizados pela presença de espermatogônias primárias e secundárias, espermatócitos e por cistos de espermátides jovens e tardias; estádio 5 apresenta todas as células anteriores e é marcado pelo surgimento de espermatozóides no lúmen tubular; estádio 6 tem como características a diminuição dos cistos de células germinativas e considerável aumento do número de espermatozóides no lúmen tubular; os túbulos seminíferos no estádio 7 contêm poucos cistos de células germinativas e se inicia o esvaziamento da massa de espermatozóides do lúmen tubular; estádio 8 é o último do CES e é caracterizado pela aparente desorganização dos cistos remanescentes de células germinativas no túbulo seminífero. Male and female adults of P. squamosissimus (Pisces, Teleostei, Sciaenidae) were collected monthly in the Para River that surrounds Capim insland, state of Para (S 010 34. 971` ; W 0480 52.932`), during the month of february 2004 to february 2005, having 234 specimes. The gonads were collected, mounted and processed in accordance with the standard methods of paraffin and analysis using a light microscope. The species under analysis is one of the principal sources of animal protein for the local population, fishing being uninterrupted and intensive throughout the year based on information given by local fisherman, the collection process appears to be determined by an apparent qualiquantitative reduction in local stock. The species represents spawn divisions, the gonad development was characterized in state of repose, maturation, mature and empty or half-empty. Mature gonads were found on the months of december, january and july. Correlation analysis between the maturing state of gonads, seasonal variations in relation to gonadosomatic indexes (GSI) and also the occurrence of spawn in the respective months. Nevertheless, the information obtained in correlation to GSI and mature oocyte mediums and between spermatozoa percentages by seminiferous tubule, respectively, also indicate spawning in the respective months, and apparently that the species represents a more intensive spawning period or a primary spawning period between the months of december and january, and a second or less intensive spawning period in the months of july. Based on the tubular morphology method, eight of the seminiferous epithelium cycle stages (SEC) were determined, stage 1 being seminiferous tubule that are comprised of primary spermatogonia and cysts of the secondary spermatogonia; stage 2 is comprised of primary and seconday spermatogonia and spermatocytes cysts; stage 3 is characterized by primary and secondary spermatogonias, spermatocyte cysts and young spermatids; stage 4 with seminiferous tubule characterized by presence of spermatogonias primary and secondary, spermatocyte and by presence of young and later spermatids cysts; stage 5 represents all of the previously mentioned cells and is highlighted by presence of spermatozoa in the tubule lumen; stage 6 is characterized by reduction of cysts of germinative cells and a considerable increase in number of spermatozoa in the tubular lumen; stage 7 is characterized by seminiferous tubule that contain few cysts of germinative cells and is marked by the begining of a mass emptying of spermatozoa of the tubule lume; stage 8 is the last of the SEC and is characterized by the apparent disorganization of the remaining germinative cellular cysts in the seminiferous tubule.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico The objective of this experiment was evaluate the possibility of the use of zebu cattle females with raised genetic quality presenting problems of fertility, acquired after a program of conventional transference of embryos, as oocyte donors in a program of Ovum Pick Up and In Vitro embryo production. Sixteen females of Nelore breed (Bos taurus indicus) with average age of 11 years and 7 months, had been submitted to the same conditions of enviroment, feeding and management. These animals were removed of the program of embryo transfer due fertility problems (ovarian cysts, genital infections and some cases of repeat breedings). The animals had been divided in two groups in agreement the type of pathology: Group I (n=08) formed by animals that had presented ovarians patologies (cysts) and GROUP II (n=08) formed by animals with extra-ovarians patologies, both groups had been submitted to aspiration follicular (OPU) using two types of needles (21G ; 19G ) and pressures (55 e 70mmHg). The two groups were divided in four treatments (T1 =55/21G; T2 = 55/19G; T3 = 70/21G e T4 = 70/19G) and after oocites collection they were submitted to IVP. In this work, 149 aspirations were realised and 879 oocytes were collected (5,9 4,88) GRADE I = 16%; GRADE II = 43%; GRADE III = 21% e GRADE IV = 20%. The averages of oocytes collected in Group I were (T1 = 7,06 5,10; T2= 7,00 3,64; T3 = 10,60 6,51 and T4 = 2,78 2,59) and the second group (GROUP II) (T1 = 4,90 4,47; T2= 2,93 3,05; T3 = 6,11 4,11 and T4 = 2,70 2,00). For the averages of viable oocytes, the results had been the following ones (T1 = 4,35 3,01; T2 = 4,88 2,96; T3 = 6,87 3,91 and T4 = 1,89 1,90) for GROUP I and (T1 = 2,70 2,22; T2 = 1,92 1,98; T3 = 3,47 2,27 and T4 = 2,00 1,05) for GROUP II. In this experiment, 538 oocytes had been taken to the IVP, 161 (32,85%) of these oocytes had clived and 65 (13,26%) had resulted in Morula or Blastocysts. The statistcs analysis of the results did not demonstrate significant difference in the oocyte number of the diferent groups, caused for the suction pressure. It was observed that the type of needle is related of pressure of the vacuum bomb, the best results were finding with T3 treatment, moreover It can be observed through these findings that the best averages of oocytes collected had been gotten in the group of animals that had presented ovarians cysts (GROUP I), We concluded in this experiment that the use of OPU/IVF technique is an great option in the prolongation of the reproductive life in problems zebu cattle. Este experimento teve como objetivo avaliar a possibilidade da utilização de fêmeas zebuínas de elevada qualidade genética, com problemas de fertilidade, adquiridos após um programa de transferência convencional de embriões, como doadoras de ovócitos em um programa de Ovum Pick Up e Produção In Vitro de embriões. Fêmeas da raça Nelore (n=16) (Bos taurus indicus), com idade média de 11 anos e 7 meses, foram submetidas às mesmas condições de ambiente, alimentação e manejo. Estes animais foram retirados do programa de T.E. por apresentarem problemas de fertilidade (cistos ovarianos, infecções genitais, mucometra e alguns casos de repetições de cio sem causa aparente). Os animais foram divididos em dois grupos conforme o tipo de patologia: GRUPO I (n=08) composto por animais que apresentaram patologias ovarianas (cistos) e GRUPO II (n=08) formado por animais com patologias extra ovarianas, ambos os grupos foram submetidos à aspiração folicular (OPU) utilizando dois tipos de agulhas (21G ; 19G ) e pressões (55 e 70mmHg) divididos em quatro tratamentos (T1 = 55/21G; T2 = 55/19G; T3 = 70/21G e T4 = 70/19G), posteriormente os ovócitos submeteramse a PIV. Foram realizadas 149 aspirações e colhidos 879 ovócitos (5,9 4,88) onde GRAU I = 16%; GRAU II = 43%; GRAU III = 21% e GRAU IV = 20%. As médias de ovócitos colhidos no GRUPO I foram (T1 = 7,06 5,10; T2= 7,00 3,64; T3 = 10,60 6,51 e T4 = 2,78 2,59) para os animais pertencentes ao GRUPO II obteve-se (T1= 4,90 4,47; T2= 2,93 3,05; T3 = 6,11 4,11 e T4 = 2,70 2,00). Para as médiasde ovócitos viáveis os resultados foram os seguintes: (T1 = 4,35 3,01; T2 = 4,88 2,96; T3 = 6,87 3,91 e T4 = 1,89 1,90) para o GRUPO I e (T1 = 2,70 2,22; T2 =1,92 1,98; T3 = 3,47 2,27 e T4 = 2,00 1,05) para o GRUPO II. Neste experimento foram levados à PIV 538 ovócitos dos quais 161 (32,85%) clivaram e 65 (13,26%) resultaram em Mórula ou Blastocistos. A análise estatística dos resultados não demonstrou diferença significativa entre os grupos quanto a colheita ovocitária. Quando analisada somente a pressão de sucção, foi observado que o tipo de agulha está diretamente relacionado a pressão da bomba de vácuo. Os melhores resultados foram obtidos com o tratamento T3 = 70/21G, além disso pode-se observar que as melhores médias de ovócitos colhidos foram as obtidas no grupo de animais que apresentaram cistos ovarianos (GRUPO I). Desta forma, concluímos neste experimento que a utilização da técnica de OPU/PIV é uma alternativa de grande utilidade no prolongamento da vida reprodutiva de animais zebuínos com alterações na fertilidade.

The main objective of this work is to determine the period when puberty and sexual maturity occurs, thus classify the stages of seminiferous epithelium cycles (SEC), the relative frequency of the stages and compute the spermatogenesis efficiency. 7 groups with ages ranging from 4 to 17 months old were used, divided in the following way: G1 (4 and 5 months, n= 4), G2 (6 and 7 months, n= 4), G3 (8 and 9 months, n= 4), G4 (10 and 11 months, n= 3), G5 (12 and 13 months, n= 4), G6 (14 and 15 months, n= 3) and G7 (16 and 17 months, n= 2). The Testis samples were obtained by castration under anesthesia and their Testis samples, after biometrics, were fixed in ALFAC during 24 hours; after that, the samples were submitted to routine histological processing, the tissues obtained then stained in HE. The phases of reproductive development were determined by qualification of spermatogenic cells from 10 cross sections of the seminiferous circular boundary tubular/animal, which were in the stage 1 of SEC, previously characterized by the tubule morphology method, and which presented eight SEC stages. From 20 cross sections of the seminiferous circular tubules/animal that did not present complete spermatogenesis. To determine the relative frequency, 100 cross sections of the seminiferous tubules per animal, that had attained puberty were analyzed. The body and testis weights presented a high significative correlation with age and correlated significantly between themselves. The body and weights testis biometrics increases significantly (P

O presente estudo teve o propósito de determinar as características reprodutivas básicas de pacas criadas em cativeiro, tais como: duração do ciclo estral, duração do período gestacional, intervalo do parto ao primeiro cio pós-parto, duração do intervalo entre partos, além do número de produtos por parto e da proporção sexual. Foram utilizados treze animais, todos criados em cativeiro no Biotério da Universidade Federal do Pará sendo que os dados foram obtidos através de técnicas colpocitológicas, exceto aqueles relacionados à determinação do produto por parto e à proporção sexual, os quais foram observados diretamente após o parto. O período médio encontrado para o ciclo estral foi de 32,5 ± 3,69 (n = 20) dias sendo classificado em quatro fases: proestro, estro, metaestro e diestro. Estes resultados indicam que esta espécie tem poliestxo com reprodução contínua. Quanto ao período gestacional, dois resultados foram obtidos: a) 147,5 ± 2,83 (n = 2) dias para fêmeas cujo último cio foi confirmado com a presença de espermatozóides na lâmina e b) 146,7 ± 6,43 (n = 3) dias para fêmeas que tiveram a confirmação do início da gestação apenas pelas características clínicas do último cio antes do parto, confirmado através da caracterização da lâmina. Os filhotes apresentaram, ao nascer, olhos abertos, corpo completamente coberto de pêlos, movimentos ativos e capacidade de comer alimentos sólidos dentro de dois dias. O peso médio foi de 605,9 ± 87,47 g (n = 12) para as fêmeas e de 736,7 ± 108,41 g (n = 14) para os machos. Dos 38 nascimentos ocorridos no Biotério, nenhum foi gemelar, embora a paca seja capaz de produzir gêmeos. O intervalo entre partos foi de 187,3 ± 8,48 (n = 15) dias e dentro de 35,6 ± 5,22 (n = 5) dias ocorreu o primeiro cio pós-parto. Estes resultados podem servir de base para futuros trabalhos que tenham como objetivo o estudo de parâmetros reprodutivos de animais silvestres através da biotecnologia. Além disso, criatórios bem manejados de pacas podem tornar-se, no futuro, fonte de alimentação com qualidade e fonte de renda acarretando, desta maneira, a garantia da preservação da espécie. This work had the objective of estimating basics reproductive characteristics of Agouti paca reared in captivity, the determination of the oestrous cycle period, gestational period, parturition interval, first postparturition oestrous, number of offsprings and sexual proportion. The observations were done using a colony of 13 caged animais in the Biotério of Universidade Federal do Pará, and the data were obtained with colpocitological techniques. These results indicate that this specie is polyestrous with continous reproduction. The oestrous cycle was categorized in four phases: proestrous, oestrous, metaestrous and diestrous, and its period was 32,5 ± 3,69 days (n = 20). As for the gestation period, two results were obtained: a) 147, 5 ± 2,83 days (n = 2) for females that had its last oestrous registered with sperm presence and, b) 146,7 ± 6,43 days (n = 3) for females that had just the last oestrous before the parturition. New borns were observed and weights and sexes were registered. Their weight was 605,9 ± 87,47 g (n = 12) for females and 736,7 ± 108,41 g (n = 14) for males. At birth the youngs are quite developed and soon show active movements, opened eyes, body completely covered by hair, and a capacity to eat solids within two days. From 38 births occurred at Biotério, all of them are single, although the A paca is been able to produce more than one offsprings per parturition. The parturition interval was 187,3 ± 8,48 days (n = 15) and within 35,6 ± 5,22 days (n = 5) occurred the first oestrous postparturition. These results can be used as basic orientation to future works with proposes to study reproductive parameters from selvage animals using biothecnology. In addition to, the application of an appropiate management in A. Paca creation, can become in the future, aliment qualified source and lucrative source too. Furthermore, it can give guaranty of species conservation yet.