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Anopheles punctimacula s.l. is a locally important malaria vector in Colombia. Despite its epidemiological importance, little is known about its genetic variability in the malaria endemic areas where it is present. Amongthese, El Bajo Cauca - Alto Sinú regions report the highest number of malaria cases in the country. Therefore, the aim of this work was to evaluate genetic variability of An. punctimacula s.l. in two localities of each region, Nechí and Montería. This information will guide the design of targeted and effective vector control measures. Materials and methods Starting with the DNA of 20 An. punctimacula s.l., females, fragments of the mitochondrial gene COI and nuclear CPS-CAD were amplified. Nucleotide diversity, haplotype diversity, genetic structure and gene flow parameters were estimated for the populations. Results Eighteen nucleotide sequences were obtained for each marker with a size of 719 bp for CPS-CAD and 1,158 bp for COI. In the CPS-CAD sequences four polymorphic sites were detected and in COI, six. The genetic structure analyses for CPS-CAD (FST= 0.00054) and COI (FST= 0.00049) indicated lack of genetic differentiation and the Nm values (CPS-CAD= 7,78562; COI= 780,5199), evidenced high gene flow between the An. punctimacula s.l. populations of both municipalities. Conclusions Because of the low population structure detected and the high gene flow between the An. Punctimacula s.l. populations from Nechí and Montería suggest that they are genetically similar. RESUMEN: Anopheles punctimacula s.l. es un vector de la malaria de importancia local en Colombia. A pesar de su importancia epidemiológica, se conoce poco sobre su variabilidad genética en las áreas endémicas para la malaria donde se encuentra presente. Entre estas, las regiones de El Bajo Cauca y Alto Sinú son las que reportan el mayor número de casos anuales de malaria en el país. Por ello, el objetivo de este trabajo fue evaluar la variabilidad genética de An. punctimacula s.l. en dos localidades de cada región, Nechí y Montería. El conocimiento obtenido permitirá orientar el diseño de medidas de control vectorial dirigidas y efectivas. Materiales y métodos A partir del ADN de 20 hembras de Anopheles punctimacula s.l., se amplificaron los fragmentos del gen mitocondrial COI y el nuclear CPS-CAD. Se estimaron parámetros de diversidad nucleotídica, diversidad haplotípica, estructura genética y flujo de genes para las poblaciones. Resultados Se obtuvieron 18 secuencias de cada marcador; de un tamaño de 719 pb para el gen CPS-CAD y de 1.158 pb para COI. En las secuencias CPS-CAD se detectaron cuatro sitios polimórficos y en las de COI, seis. Los análisis de estructura genética para CPS-CAD (FST= 0,00054) y COI (FST= 0,00049;), indicaron ausencia de diferenciación genética y los valores de Nm (CPS-CAD= 7.78562; COI= 780.5199), evidencian un alto flujo de genes entre las poblaciones de An. punctimacula s.l. de ambos municipios. Conclusiones Dada la baja estructuración detectada y el alto flujo de genes entre las poblaciones de An. punctimacula s.l. de Nechí y Montería sugieren que ellas son genéticamente similares. COL0013746

Difficulty in the morphological identification of females of various species on the Nyssorhynchus subgenus has been documented; it is due to interspecies morphological similarity, intraspecific variation and the existence of cryptic species. For this reason, molecular techniques such as PCR-RFLPITS2 has been used, they allow confirming species assignation in endemic areas. Objective To confirm the species assignation of mosquitoes Anopheles collected in Juan Jose locality, municipality of Puerto Libertador, Cordoba, as a contribution to a species inventory in the locality. Materials and methods Of 2.070 specimens identified by morphological characters, 513 (24.8%) were molecularly confirmed by PCR-RFLP-ITS2. Results The species defined by morphology as present in Juan José were: Anopheles (Nyssorhynchus) nuneztovari s.l. Gabaldon (97.44%), A. (Nys.) darlingi Root (0.77%) y A. (Nys.) oswaldoi s.l. Peryassu (0.10%). The rest of specimens (1.69%) were defined as belonging to one of the species of the Oswaldoi group. Molecular confirmation helped to determine the presence of only two species among the analyzed specimens, 99.23% A. (Nys.) nuneztovari and 0.77% A. (Nys.) darlingi. Conclusions The two species of Anopheles found in Juan Jose, during the sampling period are considered primary vectors in Colombia; this information is important to guide vector control efforts. Additionally, the results reaffirm previous reports on the difficulty of identifying A. nuneztovari s.l. by morphology and the importance of using molecular tests for species confirmation. RESUMEN: La dificultad en la identificación morfológica de las hembras de varias especies del subgénero Nyssorhynchus ha sido documentada y se debe a la similitud morfológica interespecie, variación intraespecífica y la existencia de especies crípticas. Por ello, se han utilizado pruebas moleculares como la PCR-RFLP-ITS2, que permiten confirmar la identidad de las especies presentes en regiones endémicas. Objetivo Confirmar la identificación de mosquitos del género Anopheles recolectados en Juan José, Puerto Libertador, Córdoba, como aporte a un inventario de especies en la localidad. Materiales y métodos De 2.070 hembras de Anopheles identificados por caracteres morfológicos, 513 (24,8%) se confirmaron molecularmente mediante una PCR-RFLP-ITS2. Resultados Las especies identificadas por morfología presentes en Juan José fueron: Anopheles (Nyssorhynchus) nuneztovari s.l. Gabaldon (97,44%), Anopheles (Nys.) darlingi Root (0,77%) y Anopheles (Nys.) oswaldoi s.l. Peryassu (0,10%); el resto de especímenes (1,69%) se definieron como pertenecientes a una de las especies del grupo Oswaldoi. La confirmación molecular permitió determinar la presencia de sólo dos especies entre los especímenes analizados, 99,23% A. (Nys.) nuneztovari s.l. y 0,77% A. (Nys.) darlingi. Conclusión Las dos especies de Anopheles encontradas en Juan José, durante el muestreo, son consideradas vectores primarios en Colombia; esta información es importante para dirigir los esfuerzos de control vectorial. Adicionalmente, los resultados reiteran previos reportes sobre la dificultad en la identificación morfológica de A. nuneztovari s.l. y la importancia de utilizar pruebas moleculares en su confirmación de especie. COL0013746