Search

Siekiant ištirti galvijų ovocitų jautrumą atvėsinimui, buvo tiriamas ovocitų paruošimo subrandinimui bei ekvilibracijos temperatūrų poveikis jų gyvybingumui. Kai ovocitai subrandinimui buvo ruošiami 18-25°С arba 12-15°С temperatūroje, subrendo atitinkamai 86 ir 50%, o apsivaisino - 72 ir 42% ovocitų. Aukštesnė aplinkos temperatūra, kurioje buvo atliekamos manipuliacijos su ovocitais, sąlygojo geresnius subrendimo ir apsivaisinimo rezultatus. Įvertintas skirtingų ekvilibracijos temperatūrų (4, 18-25, 39-41°С) ir skirtingos trukmės (1, 5, 10 min.) poveikis ovocitų gyvybingumui. Po 1 min. ekvilibracijos 18-25°С ir 39-41°С temperatūrose apsivaisino daugiausiai – 71% - ovocitų, tuo tarpu mažiausiai – 20% - pasidalinusių ovocitų gauta po 10 min. ekvilibracijos 40C temperatūroje. Nustatyta tendencija, kad trumpėjant ekvilibracijos laikui ir didėjant ekvilibracijos terpės temperatūrai, gerėja ovocitų apsivaisinimo rezultatai. Buvo tiriamas skirtingų koncentracijų (10, 20, 30%) krioprotektorių – glicerolio, dimetilsulfoksido, etilenglikolio - poveikis ovocitų apsivaisinimui in vitro. Nustatyta, kad mažiausiai toksiški buvo 10% glicerolio bei etilenglikolio krioprotektorių tirpalai: atitinkamai pasidalino 59 ir 56% ovocitų. Po 20% glicerolio, etilenglikolio ir dimetilsulfoksido poveikio atitinkamai vystėsi 47, 37 ir 17% embrionų. Dimetilsulfoksidas pasižymėjo didžiausiu toksiškumu: po 10, 20, 30% šio kriopritektoriaus tirpalo poveikio atitinkamai pasidalino 42, 17, 9% ovocitų. A study was conducted to determine the sensitivity of bovine oocytes to chilling. Therefore, the effects of oocyte preparation for maturation temperature and equilibration temperatures on oocyte vitality have been investigated. Oocyte preparation for maturation in temperatures 18-25 or 12-15°С resulted in 86 and 50% mature and 72 and 42% fertilized oocytes, respectively. There was a tendency towards higher oocyte maturation and fertilization results when manipulations with oocytes were performed in higher ambi-ent temperatures (18-25°С) than in lower (12-15°С) temperatures. The study of the effects of different equilibration medium temperatures (4°С, 18-25°С, 39-41°С) and different length of equilibration on oocyte vitality indicated that oocyte fertilization results tended to improve when the length of equilibration was shorter and the temperature of equilibration medium was higher. The highest number – 71% of oocytes were fertilized after one minute of equili-bration at 18-25 and 39-41°С temperatures. Meanwhile, the lowest number – 20% of fertilized oocytes were produced after 10 minutes of equilibration at 4°С. The toxicity of cryoprotection agents (glycerol, dimethyl sulphoxide and ethylene glycol) of different concentrations (10, 20, 30%) has been studied according to oocyte fertilization in vitro. It has been determined 10% glycerol and ethylene glycol solutions were least toxic, i.e. 59 and 56% of oocytes were fertilized, recpectively. The use of 20% glycerol, ethylene... [to full text] Проведено исследование чувствительности ооцитов к охлаждению и изучено влияние температур при подготовке к созреванию и во время эквилибрации. Когда подготовка ооцитов к созреванию проводилась при 18-250С или 12-150С температуре, созрело соответственно 86 и 50%, а оплодотворилось 72 и 42% ооцитов. Повышение температуры окружающей среды, при которой проводятся манипуляции с ооцитами, способствует повышению созревания и оплодотворения ооцитов. Исследовано влияние разных температур (4, 18-25, 39-410С) и продолжительности (1, 5, 10 мин.) эквилибрации на жизнеспособность ооцитов. При эквилибрации в 1 минуту при температурах 18-25 и 39-410С оплодотворилось больше всех (71%) ооцитов. Меньше всех (20%) оплодотворившихся ооцитов получено при эквилибрации в 10 минут при температуре 40С. При сокращении продолжительности эквилибрации и повышении температуры среды эквилибрации, установлена тенденция улучшения результатов оплодотворения ��оцитов. Изучалось влияние разных концентраций (10, 20, 30%) криопротекторов (глицерола, диметилсульфоксида и этиленгликоля) на оплодотворение ооцитов. Установлено, что наименее токсичными были растворы глицерола и этиленгликоля: оплодотворилось соответственно 59 и 56% ооцитов. После воздействия 20% растворов глицерола, этиленгликоля и диметилсульфоксида развивалось 47, 37 и 17% эмбрионов. Диметилсульфоксид оказал наибольшее негативное влияние: после воздействия 10, 20 и 30% раствора криопротектора оплодотворилось 42, 17 и 9% ооцитов.

Tyrimams buvo naudojama bulių sperma, kurioje spermatozoidų judrumas ne mažesnis kaip 7 balai, o koncentracija – ne mažesnė kaip 0,8 mlrd. / cm3. Įšaldymo metu buvo palaikoma stabili -150±50C temperatūra, barbotuojant skysto azoto garus, kontroliuojama elektroniniais termometrais TE-200M ir ST-200. Po paėmimo ir įvertinimo viena spermos dalis buvo skiedžiama 32±10C skiedikliu taip, kad po įšaldymo-atšildymo vienoje spermos dozėje būtų ne mažiau kaip 15 mln. judrių spermatozoidų, antra dalis buvo skiedžiama santykiu 1:1 32±10C, po to iš karto buvo praskiesta 19±10C skiedikliu iki galutinės spermatozoidų koncentracijos. Sperma santykiu 1:1 taip pat buvo skiedžiama ir 27±10C, 25±10C bei 20±10C skiedikliais, bei antrą kartą – 19±10C skiedikliu. Po įšaldymo-atšildymo, esant dukartiniam spermos praskiedimui, spermatozoidų judrumas 45,5% (P < 0,001), judrumas po 5 val. išlaikymo 38±0,50C temperatūroje – 2,5 karto, absoliutus gyvybingumas – 81,2% (P < 0,001), gyvybingumas – 18,9% (P < 0,001) didesni, lyginant su vienkartiniu spermos praskiedimu. Spermoje, pirmąkart praskiestoje 32±10C skiedikliu, o antrąkart – 19±10C skiedikliu, nustatėme 70,6±1,1% spermatozoidų su pažeistomis membranomis, 27±10C – 77,6±0,5%, 25±10C skiedikliu – 69,8±2,5%, 20±10C – 64,8±0,9%. Nuo spermos paėmimo, atlikus spermos atvėsinimą ir ekvilibraciją 4 val. laikotarpyje, spermatozoidų su nepažeistomis membranomis, skiedžiant spermą 32±10C skiedikliu, padidėjo 20%, 27±10C – 12,6%, 25±10C – 14,4%, 20±10C – 27... [toliau žr. visą tekstą] Bovine semen with the spermatozoa motility not lower than 7 points and concentration no less than 0.8 milliards / cm3 was used in the study. Stable temperature of -150±50C was maintained at freezing and controlled by electronic thermometers TE-200M and ST-200. After semen collecting and evaluat-ing, one part of it was diluted with 32±10C extender to have no less than 15 milliard motile spermato-zoa after freezing-thawing. Another part was diluted at a rate of 1:1 at 32±10C and, right afterwards it was diluted with 19±10C extender to the final sperm concentration. Extenders of 27±10C, 25±10C and 20±10C were also used for semen dilution at a rate of 1:1 and for the second dilution 19±10C extender were used. Repeated semen dilution resulted in by 45.5% (P < 0.001) higher post-thaw motility of spermatozoa, 2.5 times higher motility after 5 h exposure at 32±10C, 81.2% (P < 0.001) higher abso-lute survival rate, and 18.9% (P < 0.001) higher survival in comparison with single dilution. It has been found that the first semen dilution with 32±10C extender and the second with 19±10C extender had 70.6±1.1% spermatozoa with damaged membranes. When dilution was carried out with 27±10C, 25±10C and 20±10C extenders, the corresponding figures were, respectively, 77.6±0.5, 69.8±2.5 and 64.8±0.9%. Starting from semen collection, cooling and equilibrium for 4 hours, the percentage of spermatozoa with intact membranes has increased by 20, 12.6, 14.4 and 27.4% when semen was di-luted with... [to full text] С целью упрощения технологических процессов разбавления и улучшения физиологических показателей семени после замораживания-оттаивания, применяли однократное или двукратное разбавление. При разбавлении семени в один прием средой 32±10С, качественные показатели сперматозоидов ниже, чем при первичном разбавлении средой 32±10С, и вторичном разбавлении средой 19±10С. Подвижность сперматозоидов после оттаивания при двукратном разбавлении на 45,4% (Р < 0,001) после 5-часовой выдержки при 38±0,50С – 2,5 раза, абсолютный показатель выживаемости на 81,2% (Р < 0,001) выше, чем при однократном разбавлении. Наилучшая температура для первичного разбавления семени - 27±10С, подвижность сперматозоидов после оттаивания в среднем 5,3±0,1 балла, что на 6,0% выше (Р < 0,01) контроля (32±10С), а также наибольшее количество неповрежденных акросом после оттаивания (60,6±0,6%), и после 5-часовой выдержки при 38±0,50С – 32,3±0,7%, при вторичном разбавлении средой 19±10С.

Tam, kad kriokonservuotoje eržilų spermoje atšildymo metu spermatozoidai nepatirtų pakartotinio neigiamo hipertoninės terpės poveikio, dabar taikomi spartaus spermos atšildymo režimai. Galutinė spermos atšildymo temperatūra neturi viršyti 40°C. Naudojant spermą, atšildytą iki 5°C, kumelių sėklinimas tampa paprastesnis ir efektyvesnis vėsioje aplinkoje ir neapšildomose patalpose. Didžiausias spermatozoidų judrumas buvo, spermą atšildžius 38 (kontrolė) – 40°C temperatūroje, atitinkamai 3,0±0,9 ir 3,0±0,0 balo, o po 1 valandos inkubavimo 38±0,5°C temperatūroje didžiausias judrumas buvo kontrolinėje grupėje – 0,8±0,24 balo. Spermos, atšildytos iki aukštesnės kaip 5°C temperatūros, spermatozoidų judrumas buvo didesnis, todėl ekspoziciją atšildymo vonioje tikslinga pasirinkti pagal aplinkos temperatūrą. Rapid semen thawing regimes are currently applied in order to avoid the repeated negative effect of hypertonic medium on the quality of frozen stallion spermatozoa. The final semen thawing temperature should not exceed 40°С. The use of semen thawed up to 5°С results in more simple and efficient mare insemination in cool environment and uninsulated buildings. The highest sperm motility was 3.0±0.9 and 3.0±0.0 points after semen thawing at 38 (control) - 40°С, respectively. After 1 h incubation at 38±0.5°С, the highest sperm motility – 0.8±0.24 points – was registered in the control group. The sperm motility was higher for the semen thawed up to temperature higher than 5°С, and therefore the exposure in the thawing bath should be chosen taking into consideration the ambient temperature. В настоящее время, чтобы сперматозоиды в криоконсервированном семени жеребцов не подвергались повторному отрицательному воздействию гипертонной среды, применяются скоротечные режимы оттаивания. Конечная температура оттаивания семени не должна превышать 40 °С. При использовании семени, оттаянной до 5 °С, осеменение кобыл становится проще и эффективнее при прохладе и в неотопляемых помещениях. Наибольшее подвижность сперматозоидов было после оттаивания семени при температурах 38 (контроль) … 40°С, соответственно 3,0±0,9 и 3,0±0,0 баллов, а после инкубации в течении 1 часа при температуре 38±0,5°С – наибольшее в контрольной группе, – 0,8±0,24 балла. Подвижность сперматозоидов в семени, оттаянной до температур выше 5°С, было большее, поэтому экспозицию в водяной бане целесообразно подбирать в соответствии с температурой окружающей среды.

Buvo tiriamas subrandinimo sąlygų poveikis galvijų ovocitų gyvybingumui po užšaldymo vitrifikacijos būdu. Nustatyta, kad kumuliuso ląstelės teigiamai veikė ovocitų subrendimą ir apsivaisinimą: su-brendo 3,4%, o apsivaisino 25,1% daugiau tų ovocitų, kurie buvo kultivuoti su kumuliusu. Kumuliuso ląstelės pagerino ovocitų išgyvenimą po vitrifikacijos: subrendo 35 iš 68 (51,5%), o apsivaisino 20 iš 35 (29,4%) ovocitų, užšaldytų su kumuliusu. Kumuliuso ląstelių pašalinimas ovocitų subrandinimą sumažino 22,9%, o apsivaisinimą – 12,3%. Įvertinus ovocitų subrandinimo trukmės įtaką jų užšaldymui vitrifikacijos būdu, nustatyta, kad 12 ir 24 val. subrandinimas prieš kriokonservavimą sąlygoja atitinkamai 37,3 ir 40% ovocitų apsivaisinimą. Nustatyta, kad ekvilibracijos terpės, kurios buvo paruoštos panaudojant Diulbeko tirpalą arba TCM-199, neturėjo esminės įtakos galvijų ovocitų gyvybingumui: po atšildymo atitinkamai vystėsi 34 iš 82 (41,5%) ir 27 iš 68 (39,7%) ovocitų. A study was conducted to determine the effect of maturation conditions on the post thaw viability of bovine oocytes frozen by the method of vitrification. The study indicated that there was a positive effect of cumulus cells on oocyte maturation and fertilization. The numbers of mature and fertilized oocytes were, respectively, 3.4 and 25.1% higher for the cumulus cultured oocytes. Cumulus cells also positively affected the postthaw viability of the oocytes after vitrification: 35 oocytes out of 68 frozen with cumulus matured successfully (51.5%) and 20 oocytes out of 35 fecundated (29.4%). Removal of cumulus cells has resulted in 22.9% lower maturation and 12.3% lower fertilization of the oocytes. The study of the influence of the oocyte maturation length on the oocyte freezing by vitrification indicated that 12 and 24 hour maturation prior to freezing resulted in, respectively, 37.3 and 40% fertilization of the oocytes. The study indicated that equilibrium media that were prepared using Dulbeco's solution or TCM-199 had no significant influence on oocyte viability: respectively 34 oocytes out 82 (41.5%) and 27 oocytes out of 68 (39.7%) had developed successfully after thawing. Исследовалось влияние условий созревания на жизнеспособность ооцитов крупного рогатого скота после их витрификации. Установлено положительное влияние клеток кумулюса на созревание и оплодотворение ооцитов: созрело 3,4%, а оплодотворилось 25,1% больше из тех ооцитов, которые культивировались с кумулюсом. Клетки кумулюса улучшили выживание ооцитов после витрификации: созрело 35 из 68 (51,5%), а оплодотворилось 20 из 35 (29,4%) ооцитов, замороженных с кумулюсом, в то время как удаление клеток кумулюса снизило их созревание на 22,9, а оплодотворение – на 12,3%. Исследована продолжительность созревания ооцитов на их выживание после витрификации и установлено, что 12- и 24-часовое созревание перед криоконсервированием обуславливает 37,3 и 40% оплодотворение ооцитов. Установлено, что среды эквилибрации, на основе которых использовали фосфатно-буферный раствор Дюльбеко или среду ТСМ-199 не имели существенного влияния на жизнеспособность ооцитов крупного рогатого скота: после оттаивания развивалось 34 из 82 (41,5%) и 27 из 68 (39,1%) ооцитов.

Šviežia eržilų sperma, kurioje spermatozoidų judrumas ne mažesnis kaip 6 balai, o koncentracija – ne mažesnė kaip 0,15 mlrd./cm3, buvo skiedžiama naudojant 27±10C temperatūros skiediklį, susidedantį iš 11 g laktozės, 0,008 g natrio hidrokarbonato, 0,089 g natrio citrato pentahidrato, 0,1 g etilendiamintetraacto rūgšties natrio druskos, 100 cm3 bidistiliuoto vandens santykiu 1:1. Praskiesta sperma 15 min. buvo vėsinama 18±10C temperatūroje, 15 min. centrifuguojama 3500 aps./min. greičiu. Spermatozoidų koncentratas antrą kartą buvo skiedžiamas tos pačios sudėties 19±10C skiedikliu su 10 cm3 kiaušinio trynio ir 3 cm3 glicerolio ir išfasuotas į 0,21, 0,25, 0,5 cm3 šiaudelius bei 2 ir 5 cm3 švirkštus. Išfasuota sperma buvo 2,5 h vėsinama 4±10C temperatūroje bei įšaldyta. Spermatozoidų judrumas tuo atveju, kai sperma buvo išfasuota į 0,25 cm3 šiaudelius, buvo 40,6% (P < 0,001) didesnis, lyginant su sperma, išfasuota į 2 ir 5 cm3 išfasavimo formas. Didėjant šiaudelio tūriui, o tuo pačiu ir diametrui, pastebima spermatozoidų judrumo po įšaldymo-atšildymo mažėjimo tendencija. Esant šiaudelio tūriui 0,21 cm3, spermatozoidų judrumas vidutiniškai siekė 3,2±0,25 balo, 0,25 cm3 – 2,8±0,24 balo ir 0,5 cm3 – 2,2±0,22 balo. Fresh stallion semen with the sperm motility not lower than 6 points and concentration not lower than 0.15 milliard/cm3 was diluted at a rate of 1:1 using the extender consisting of 11 g lactose, 0.008 g sodium hydrocarbonate, 0.089 g sodium citrate (with 5H2O), 0.1 g ethylendiamintetraacetate acid sodium salt and 100 cm3 of bidistilled water. Diluted semen was cooled at 18±10C temperature for 15 minutes and centrifuged at 3500 revol./min for 15 minutes. The sperm concentrate was diluted for the second time with the 19±10C extender of the same composition with 10 cm3 of egg yolk and 3 cm3 of glycerol and packaged into 0.21, 0.25 and 0.5 cm3 straws and 2 and 5 cm3 syringes. The packaged semen was cooled at 4±10C temperature for 2.5 hours and afterwards frozen. Semen packaging into 0.25 cm3 straws resulted in 40.6% (P < 0.001) higher sperm motility in comparison with semen packaging into 2 and 5 cm3 syringes. Post-thaw motility of spermatozoa tended to be higher when the straw volume and diameter were lower. With the straw volumes of 0.21, 0.25 and 0.5 cm3, the sperm motility amounted on the average to 3.2±0.25, 2.8±0.24 and 2.2±0.22 points, respectively. Сперму жеребцов с подвижностью не менее 6 баллов (60%) и концентрацией не ниже 0,15 млрд./см3 разбавляли средой при температуре 27 ± 10С в соотношении 1:1. Разбавленную сперму 15 минут выдерживали при температуре 18 ± 10С и центрифугировали в течение 15 минут при 3500 об./мин. Концентрат сперматозоидов разбавляли средой при температуре 19 ± 10С до окончательной концентрации и расфасовывали в соломинки объемом 0,21, 0,25 и 0,5 см3. Разбавленную сперму охлаждали в течение 2,5 часа при температуре 4 ± 10С. С увеличением диаметра соломинок отмечалась тенденция понижения подвижности сперматозоидов после замораживания и оттаивания. При объеме соломинок в 0,21 см3 подвижность сперматозоидов после оттаивания достигала 3,2 ± 0,25, 0,25 см3 – 2,8 ± 0,24 и при объеме 0,5 см3 – 2,2 ± 0,22 балла.

Spermai kriokonservuoti buvo panaudotas laktozinis skiediklis, atliekant pirminį spermos praskiedimą 27±10C skiedikliu santykiu 1:1 su glicerinu ir be jo, antrą kartą skiedžiant spermą skiedikliu su 5 cm3 glicerino. Pirminis spermos praskiedimas skiedikliu be glicerino 6,8% (P < 0,05) padidina spermatozoidų judrumą po įšaldymo–atšildymo, 18,2% (P < 0,025) – judrumą po 5 val. išlaikymo 38±0,50C temperatūroje, gyvybingumą 1,2% (P > 0,5), palyginus su sperma, skiesta skiedikliu su glicerinu. Glicerinas skiediklyje slopina penicilino aktyvumą ir jo, kaip krioprotektoriaus, apsauginis poveikis skiediklyje visiškai pasireiškia tuo atveju, kai jis sąveikauja su spermatozoidais ne trumpiau kaip keturias minutes ligi spermos įšaldymo. Glicerino kiekio padidinimas ar sumažinimas, palyginus su kontrole (5 cm3 glicerino / 100 cm3 skiediklio), spermos kokybinių rodiklių nepagerino ir darė skirtingą poveikį atskiriems fiziologiniams rodikliams. A lactose-based diluent was used for semen cryopreservation. Initially semen was diluted at 27 ± 1 0C at the ratio 1:1 with glycerol and without it and 5 cm3/100 сm3 glycerol was used for semen dilution for the second time. Postthaw motility of spermatozoa, motility after 5 h of incubation at 38 ± 0.5 0C and the survival of semen were, respectively, by 6.8% (P < 0.05), 18.2% (P < 0.025) and 1.2% (P > 0.5) higher at semen dilution without glycerol than at semen dilution with glycerol. The presence of glycerol in the diluent has an inhibitory effect on penicillin activity, and its protective effect is only manifested when it has been in contact with spermatozoa no shorter than 4 minutes till semen freezing. A higher or lower content of glycerol in the diluent had no significant effect on semen quality, but it had a different effect on individual physiological responses of semen in comparison with the control content of glycerol (5 cm3/100 cm3 diluent). Семя разбавляли лактозной средой с глицерином (5 см3 / 100 см3 среды) и без глицерина при температуре 27±10С в соотношении 1:1. Окончательное разбавление проводили средой с глицерином. Первичное разбавление семени средой без глицерина на 6,8% (P < 0,05) повысило подвижность сперматозоидов после замораживания–оттаивания, на 18,2% (P < 0,025) после пятичасовой выдержки при температуре 38±0,50С, выживаемость на 1,2% (P < 0,5). Глицерин в разбавителе снижает активность пенициллина, и его защитный эффект полностью выявляется после 4 минут экспозиции со сперматозоидами до замораживания.

Įvertintas galvijų ovocitų gyvybingumas modifikuojant jų subrandinimo sąlygas ir užšaldant kontroliuojamu šaldymo režimu. Nustatyta, kad kumuliuso ląstelės teigiamai veikė ovocitų subrendimą: iš 66 ovocitų su kumuliusu subrendo 44 (66,7%), o iš 60 ovocitų be kumuliuso – 31 (51,7%). Kumuliuso ląstelės sąlygojo ir geresnį ovocitų gyvybingumą po užšaldymo ir atšildymo: sėkmingai subrendo 21 iš 58 (36,2%), o apsivaisino 7 iš 58 (12,1%) ovocitų su kumuliusu. Pašalinus kumuliuso ląsteles ovocitų subrendimas po atšildymo sumažėjo 11,2%, o apsivaisinimas – 8,5%. Ištyrus ovocitų subrandinimo trukmės įtaką užšaldymui ir gyvybingumui, nustatyta, kad daugiausiai – 18 iš 62 (29%) ovocitų apsivaisino, kai brandinimas truko 24 valandas. Brandinimo laiką sutrumpinus iki 12 valandų, toliau vystėsi 7 ovocitai iš 54 (12,9%) likusių intaktinių po atšildymo ovocitų. Užšaldžius nesubrandintus ovocitus, apsivaisino tik 5 iš 50 (10%). Kontroliuojamo šaldymo režimo greičio modifikavimas nuo 0,1 iki 0,60C/min. temperatūrų intervale nuo –7 iki –350C nepagerino ovocitų užšaldymo ir gyvybingumo po apvaisinimo: po užšaldymo 0,1, 0,6 ir 0,30C/min. greičiu apsivaisino atitinkamai 21,7, 25 ir 25,7% ovocitų. A study was carried out to evaluate bovine oocyte viability under modified maturation conditions and a controlled freezing regime. The study indicated that there was a positive effect of cumulus cells on oocyte maturation: out of 66 oocytes with cumulus and 60 oocytes without cumulus matured, respectively, 44 (66.7%) and only 31 (51.7%). Cumulus cells also positively affected the postthaw viability of the oocytes: 21 oocytes with cumulus out of 58 (36.2%) matured successfully and 7 oocytes out of 58 (12.1%) fecundated. Removal of cumulus cells lowered the postthaw maturation rate of oocytes by 11.2% and fertilization rate by 8.5%. The study on the influence of oocyte maturation length on the postthaw viability of oocytes showed that the highest oocyte fertilization (18 out of 62; 29%) was reached when maturation lasted 24 hours. Changes in the speed of controlled freezing regime from 0.10C/min to 0.60C/min in the temperature interval from –7 to –350C had no positive effect on oocyte freezing and their viability after fertilization. The fertilization rate of oocytes after freezing at 0.10C/min., 0.60C/min, 0.30C/min was, respectively, 21.7, 25 and 25.7%. Оценена жизнеспособность ооцитов крупного рогатого скота при модификации условий их созревания и в режиме контролируемого замораживания. Установлено, что клетки кумулюса на созревание ооцитов влияли положительно: из 66 ооцитов с кумулюсом созрело 44 (66,7%), а без кумулюса – 31 (51,7%) из 60. Клетки кумулюса способствовали и лучшей жизнеспособности ооцитов после замораживания–оттаивания: успешно созрел 21 (36,2%) и оплодотворилось 7 (12,1%) из 58 ооцитов с кумулюсом. Удаление клеток кумулюса снизило созреваемость ооцитов после оттаивания на 11,2%, а оплодотворяемость – на 8,5%. При исследовании влияния продолжительности созревания ооцитов на их замораживание и жизнеспособность установлено, что больше всего ооцитов – 18 (29%) из 62 – оплодотворилось после 24-часового их созревания, а после 12-часового – развивалось 7 (12,9%) из 54 оставшихся интактными после оттаивания. После замораживания несозревших ооцитов оплодотворилось только 5 (10%) из 50. Модификация скорости режима контролируемого замораживания с 0,10С/мин до 0,60С/мин в температурном интервале от –7 до –350С не оказала положительного влияния на процесс замораживания и не повысила жизнеспособность ооцитов после оплодотворения. При замораживании со скоростью 0,10С/мин, 0,60С/мин и 0,30С/мин оплодотворилось соответственно 21,7, 25 и 25,7% ооцитов.

Atliekant bandymą, buvo nustatytas prailginto veikimo sintetinio gonadotropinio rilyzing hormono surfagono (PVS) poveikis kiaulių reprodukcinėms savybėms. Bandymo rezultatai parodė, kad suleidus kiaulėms prailginto veikimo surfagono, 18,4 h pailgėjo rujos ir 12,8 h stovėjimo reflekso laikas. Kiaulaitėms suleidus prailginto veikimo surfagono, aukštas estradiolio lygis buvo abiejose bandomosiose grupėse ir atitinkamai siekė nuo 85,7±1,32 iki 87,7±2,33 pmol/l kraujo plazmos. Minėti rodikliai buvo vidutiniškai 2,1 karto didesni nei kontrolinėje grupėje (P

Atsižvelgiant į folikulų, iš kurių gauti ovocitai, dydį, atliktas ovocitų subrandinimo, apsivaisinimo ir tolesnio embrionų vystymosi in vitro tyrimas. Ištirta 147 karvių 280 kiaušidžių, įvertintas 2621 folikulas. Nustatyta, kad daugiau nei pusę folikulų populiacijos (57,1%) sudarė mažo diametro (< 3 mm) folikulai. Vidutinio dydžio (> 3-6 mm) buvo 28,7%, didelių (> 6 mm) – 14,2% folikulų. Folikulų diametras turėjo įtakos ovocitų kokybei: iš didelių folikulų gauta 55,2%, iš vidutinių – 50,7%, iš mažų – 33,2% kokybiškų ovocitų. Nustatyta, kad ovocitų subrendimas, apsivaisinimas ir tolesnis vystymasis priklausė nuo folikulų dydžio. Mažėjant folikulų diametrui (> 6, 3-6, < 3 mm), atitinkamai mažėjo ovocitų subrendimas (81,5; 77,7; 26,4%), apsivaisinimas (60,9; 55,4; 21,1%) ir embrionų vystymasis (0,0; 13,8; 10,4%). Ovocitai, gauti iš mažų folikulų, sudaro ženklią kiaušidėje esančių ovocitų dalį. Jie yra papildomas ovocitų rezervas, kurį galima, nors ir su ribota sėkme, naudoti embrionų gavimui in vitro. A study was conducted to determine the influence of the size of follicles on oocyte maturation, fertilization and further embryonic development 280 ovaries from 147 cows and 2621 follicles were examined. The study indicated that low diameter follicles (< 3 mm) made up more than a half of the follicle population (57.1%). Follicles of medium size (> 3-6 mm) and large ones (> 6 mm) accounted for, respectively, 28.7 and 4.2%. The quality of oocytes diameter of follicles, i. e. good quality oocytes produced by large, medium and small follicles accounted for, respectively, 55.2, 50.7 and 33.2%. Oocyte maturation, fertilization and further development of embryos were also dependent on the size of follicles. The lower was the diameter of follicles (> 6, 3-6, < 3 mm), the lower per cent of oocyte maturation (81.5; 77.7; 26.4%), fertilization (60.9; 55.4; 21.1) and embryonic development (0.0; 13.8; 10.4%) was determined. Oocytes produced by small follicles make up a significant part of ovarian oocytes. Such oocytes may be considered as a supplementary reserve of oocytes to be used with limited success for the production of embryos in vitro. В соответствии с размером фолликулов из которых получены ооциты изучено их созревание, оплодотворение и дальнейшее развитие эмбрионов in vitro. Исследован 2621 фолликул, 280 яичников из 147 коров. Установлено, что больше чем половину популяции фолликулов (57,1%) составили фолликулы малого диаметра (< 3 мм), среднего размера (> 3-6 мм) было 28,7%, больших (> 6 мм) – 14,2%). Диаметр фолликулов влиял на качество ооцитов: из больших фолликулов получено 55,2%, из среднего размера – 50,7%, из малых – 33,2% качественных ооцитов. Установлено, что на созревание, оплодотворение ооцитов и дальнейшее развитие эмбрионов имел влияние размер фолликулов. При уменьшении диаметра фолликулов (> 6, 3-6,< 3 мм) соответственно уменьшалось созревание (81,5; 77,7; 26,4%) и оплодотворение (60,9; 55,4; 21,1%) ооцитов, а также и развитие эмбрионов (0,0; 13,8; 10,4%). Ооциты, полученные из маленьких фолликулов, составляют сравнительно большую часть всех ооцитов в яичниках коров. Это дополнительный резерв ооцитов, которых можно использовать, хотя и с ограниченным успехом, при получении эмбрионов in vitro.

Buliaus spermos optimalus įšaldymo režimas nustatomas pagal absoliutaus išgyvenimo rodiklių kreivės maksimumą, t. y. optimaliu laikomas toks įšaldymo režimas, kurio parametras atitinka kreivės maksimumą, o abipus šio taško atidėtų absoliutaus išgyvenimo rodiklių reikšmės yra mažesnės daugiau kaip 10%. Šiuo atveju daugumos kitų to paties buliaus spermos rodiklių maksimumai taip pat yra arti nuo rastojo optimalaus režimo parametro. Jeigu absoliutaus gyvybingumo rodiklio kreivė neturi ryškaus maksimumo, bandymas kartojamas. Jeigu ir po to negalima nustatyti maksimumo, o dviejų bandymų kreivės skiriasi ne daugiau kaip 10%, tai optimalus režimas parenkamas analizuojant kitų rodiklių kreives: optimaliu laikomas toks režimas, ties kurio parametru yra daugiausia atskirų rodiklių kreivių maksimumų. Esant dideliam rodiklių kreivių išsibarstymui, orientuojamasi į tą rodiklį, kurį labiausiai reikia pagerinti. The most suitable freezing regime for bovine semen is determined by the curve maximum of absolute survival parameters, i. e. the freezing regime is considered to be optimum if its parameter corresponds to the curve maximum and the values of absolute survival parameters on both sides of this point are lower more than 10%. In this case, the maxima of other semen parameters of the same bull are also close to the optimum freezing parameter found. If the absolute survival curve has no distinct maximum, the trial should be repeated. If it is not possible to determine the maximum after repetition and the curves of the two trials differ in no more than 10%, the optimum regime is determined by analysing the curves of other semen parameters. Consequently, the optimum regime is the one the parameter of which has the highest number of maxima of individual semen parameters. In this case, each parameter should correspond to the instruction, and if the curves of individual semen parameters are highly scattered, then the emphasis should be laid on the parameter to be mostly improved. Для обеспечения поддерживания стабильной температуры на щите замораживающего устройства и необходимой скорости замораживания, быстрого восстановления температуры после загрузки рамок применяли транспортные цистерны ЦТК-0,5/0,25. С вентиля газосброса через шланг подавали газообразный азот. Такая подача газообразного азота обеспечила равномерную температуру замораживания на щите замораживающего устройства. Эякуляты делили на 6 частей. После разбавления и охлаждения семя замораживали при следующих температурах: при начальной (в момент расположения рамок -150 ± 50С) и при постоянных -140 ± 50С, -150 ± 50С, -160 ± 50С, -170 ± 50С, -180 ± 50С. Установили, что нет прямой связи между отдельными показателями семени. Установили, что целесообразно применять индивидуальную температуру для замораживания семени отдельных быков. Опираясь на один показатель, например, на абсолютный показатель выживаемости, можно легко провести группировку быков по оптимальной температуре замораживания.

Bandyme su Lietuvos baltųjų veislės kiaulaitėmis buvo tirta folitropino (FSH) ir surfagono įtaka kiaušidžių išsivystymui, apsivaisinimui, vislumui, gimusių paršelių svoriui ir gyvybingumui. Bandymo metu buvo nustatyta, kad kiaulių rujai skatinti panaudojus dukartinę FSH injekciją, vidutiniškai vienos kiaulės kiaušidėse subrendo vidutiniškai 17,33 ± 1,45 folikulų. Šis rodiklis buvo 8,8% (P > 0,5) mažesnis, palyginti su kontroline grupe, kuriai panaudojome KKKS. Kiaulaičių rujai skatinti KKKS pakeitus vienkartine FSH injekcija, apsivaisinimas sumažėja 33,4, o vislumas – 27,1 (P < 0,001), palyginus su kontrole. Tačiau rujai skatinti panaudojus dukartinę FSH injekciją po 300 v.v. su 12 h pertrauka, ovuliacijos efektyvumas, apsivaisinimas ir vislumas prilygsta KKKS. Kiaulių rujos ir ovuliacijos sinchronizacijos schemoje 500 v.v. choriogonino pakeitimas 2 ml (10 µg) surfagono neturėjo įtakos folikulų augimui, ovuliacijai, apsivaisinimui, vislumui. Kiaulaičių rujai skatinti KKKS pakeitus vienkartine FSH injekcija, atvestų paršelių svoris buvo 9,6% (P < 0,025) didesnis, palyginus su kontroline kiaulaičių grupe. Palyginus negyvų paršelių skaičių po vienkartinės ir dukartinės FSH injekcijos, statistiškai patikimo skirtumo nenustatyta. Gilts of the Lithuanian White pig breed were used in a trial to determine the effects of follitropin (FSH) and surfagon on the development of ovaries, conception rate, fertility of pigs, weight of newborn piglets and their livability. The trial indicated that the average number of ovarian follicles maturing per pig was 17.33 ± 1.45 after a double FSH injection for pig oestrus stimulation. This index was by 8.8% (P > 0.5) lower (P > 0.5) compared with the control group, in which pigs were treated with pregnant mare blood serum (PMBS). Replacement of PMBS with single FSH injection for stimulation of oestrus reduced the conception rate and fertility by, respectively, 33.4 and 27.1% in comparison with the control group (P < 0.001). However, if FSH (300 a.u.) was injected twice at an interval of 12 h, the efficiency of ovulation, conception rate and fertility were similar to those at PMBS treatment (P > 0.5). In synchronization of pig oestrus and ovulation, replacement of choriogonin (500 a.u.) with 2 ml (10 µg) of surfagon had no significant effect on follicle growth, ovulation, conception rate and litter size. Replacement of PMBS treatment of pigs with single FSH injection resulted in the weight on newborn piglets by 9.6% higher compared with the control group (P < 0.025). There was no statistically significant difference between the numbers of stillborn piglets after single and double FSH injection. To sum it up, the trial results indicated that two FSH injections at an... [to full text] В результате опытов со свиньями литовской белой породы было установлено влияние фоллитропина (ФСГ) и сурфагона на развитие яичников, оплодотворение и плодовитость свиней. Установлено, что после двухкратной инъекции ФСГ у одной свинки созрело в среднем 17,33 ± 1,4 фолликула, т. е. на 8,8% (Р > 0,5) меньше по сравнению со свинками контрольной группы, которым был применен серум жеребых кобыл (СЖК). После применения однократной инъекции ФСГ оплодотворяемость была на 33,4% и плодовитость – на 27,1% меньше по сравнению со свинками контрольной группы (Р < 0,001). В схеме гормональной обработки после замены СЖК двухкратной инъекцией ФСГ влияния на овуляцию, оплодотворение, плодовитость и число мертвых поросят в гнезде не установлено. Синхронизация овуляции 2 мл (10 µг) сурфагона влияния на репродуктивн��е качества свиней не оказала.

Darbo tikslas – atlikti Baltijos šalių vietinių avių veislių: Estijos baltagalvių, Estijos juodgalvių, Estijos Ruhnu, Latvijos tamsiagalvių, Lietuvos vietinių šiurkščiavilnių, Lietuvos juodgalvių prioninio baltymo genetinės įvairovės tyrimus. Darbo uždaviniai: 1. Ištirti prioninio baltymo geno polimorfizmą 134, 157 ir 171 kodonuose, nustatyti šio geno alelius bei jų paplitimą Baltijos šalių vietinėse avių veislėse; 2. Nustatyti prioninio baltymo genotipų dažnius Baltijos šalių vietinių avių veislėse; 3. Identifikuoti prioninio baltymo genotipus pagal rizikos susirgti skrepi liga grupes, Baltijos šalių vietinių avių veislėse; 4. Sumodeliuoti atsparių skrepi ligai bandų formavimą pagal nustatytus prioninio baltymo genotipus bei jų paplitimo dažnį Baltijos šalių vietinėse avių veislėse. Pirmą kartą Baltijos šalių avių vietinėse veislėse: Estijos baltagalvių, Estijos juodgalvių, Estijos Ruhnu, Latvijos tamsiagalvių, Lietuvos vietinių šiurkščiavilnių, Lietuvos juodgalvių – buvo genotipuotas prioninio baltymo genas, identifikuoti šio geno aleliai, nustatytas jų paplitimas bei identifikuoti genotipai, pagal rizikos susirgti skrepi liga grupes. Atlikti prognoziniai skaičiavimai, siekiant suformuoti atsparių skrepi ligai avių bandas. The aim of the work - to research prion protein gene(PrP) genetic diversity of local Baltic sheep in such breeds as Estonian whitehead, blackhead, and Ruhnu, Latvian darkhead, and Lithuanian coarsewool native, and Lithuanian blackface. Tasks of the research: 1. To investigate Prion protein gene polymorphism in 134, 157 and 171 codons, identify the gene alleles and their prevalence in the Baltic countries of the local native breeds of sheep; 2. To determine Prion protein genotype frequencies in the Baltic local native breeds of sheep; 3. To identify Prion protein genotypes according to the risk to contract scrapie disease in the native Baltic breeds of sheep; 4. To simulate scrapie resistant flocks according to the Prion protein genotypes and their prevalence rate in the native Baltic breeds of sheep. It is first time in the Baltics that the local sheep breed (Estonian whitehead, Estonian blackhead, Estonian Ruhnu, Latvian darkhead, Lithuanian coarsewool native, Lithuanian blackface) Prion protein gene was genotiped, gene alleles identified in their prevalence and genotypes classified into groups according to the risk to contract scrapie. The calculations were carried out in order to distinguish the groups of sheep resistant to scrapie.

It is the first time in Lithuania that practical application of semen filtration by Sephadex G-15 for the needs of artificial insemination industry was assessed. The efficacy of semen filtration was assessed applying a battery of sperm quality assays to study bovine spermatozoa quality before and after filtration, as well as after cryopreservation. The estimation of effect of different concentrations of progesterone, oestradiol, heparin separately or in combination, on different functional parameters of bull spermatozoa after thawing was performed. These are the first published studies applying integrated approach to study the effects of sperm challenge with several biologically active substances.