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Programa de Doctorado en Biotecnología, Ingeniería y Tecnología Química, Línea de Investigación: Tratamiento de Efluentes Líquidos y Sólidos, Clave Programa: DBI, Código Línea: 32, En las Estaciones Depuradoras de Aguas Residuales (EDARs) se lleva a cabo el proceso de depuración para obtener un efluente cuyas características permitan su vertido a cauces públicos, como ríos o mares, sin que ello constituya un impacto ambiental apreciable. Normalmente, este proceso está constituido por dos líneas: la línea de agua y la línea de fango o sólidos. En la línea de fango, durante el proceso, se generan toneladas del mismo. Una parte de éste se trata mediante una digestión anaerobia para su estabilización, donde se elimina parcialmente la materia orgánica. Los fangos no estabilizados generan malos olores y pueden provocar riesgo contra la salud pública. Actualmente, los procesos de gestión y evacuación de los fangos, además de conllevar elevados costes ambientales y económicos, no son capaces de eliminar la totalidad de dicho residuo por lo que la reducción de su volumen es de gran importancia para las EDARs y el medio ambiente. En este trabajo de investigación, se propone un novedoso proceso basado en el cultivo del nematodo Caenorhabditis elegans, que permite digerir a compuestos más simples y reducir las cantidades de fango generado. A su vez, la biomasa resultante (fango + nematodo) contiene materia grasa como un subproducto de gran interés económico. Cabe destacar que C. elegans es un organismo modelo muy utilizado como herramienta de estudio en el campo de la biomedicina; sin embargo, esta sería la primera aplicación industrial descrita para este nematodo de vida libre. Por tanto, se ha estudiado la viabilidad técnica del proceso propuesto y la influencia de diversos parámetros de operación en la cinética del crecimiento del nematodo y de la degradación del fango. Para ello, se ha cultivado el nematodo en placas de agar, matraces en orbital rotatorio y biorreactores de 1 L de capacidad útil. Los resultados obtenidos muestran que C. elegans es capaz de crecer alimentándose, exclusivamente, de fango como fuente de carbono. Además, se han realizado tres series experimentales en biorreactores manteniendo constantes todos los parámetros de operación excepto el correspondiente a cada serie: concentración inicial de fango, velocidad de suministro de aire y velocidad de agitación mecánica. Desde el punto de vista de la cinética del crecimiento, estas series han permitido determinar parámetros característicos como son la velocidad específica máxima de crecimiento (µm), la productividad en biomasa (P) y la velocidad específica máxima de muerte (µd) cuyos valores máximos obtenidos han sido 0,0827 h-1, 1.924 nem¿ml-1¿h-1 y -0,0397 h-1, respectivamente. A partir de los resultados experimentales obtenidos se han aplicado diferentes modelos matemáticos que han establecido la relación entre los parámetros cinéticos calculados y las variables de operación estudiadas en el biorreactor. ¿ En las series experimentales desarrolladas en los biorreactores también se ha abordado la cinética de degradación del fango durante el cultivo de C. elegans, pudiendo distinguir tres fracciones: efluente global, agua tratada y biomasa (fango + nematodos). El estudio del comportamiento del fango durante los cultivos de C. elegans, se ha llevado a cabo mediante la determinación de los siguientes parámetros: carbono total, carbono orgánico total, carbono inorgánico, nitrógeno total y nitratos y nitritos (CT, COT, CI, NT y NN). Este estudio ha permitido calcular constantes de degradación, porcentajes de eliminación y rendimientos en las tres fracciones mencionadas. Los porcentajes máximos de reducción de materia orgánica, obtenidos en base al COT, han sido del 40,2% y el 73,1% para el efluente global y el agua tratada, respectivamente. También, se ha descrito la actividad nitrificante/desnitrificante del sistema. En consecuencia, se ha realizado una evaluación económica para estudiar la viabilidad del proceso a nivel industrial, basada en la materia grasa generada a partir del nematodo y el fango, cuya extracción podría proporcionar un subproducto de interés industrial para la producción de biodiésel, lubricantes o bioplásticos. Se ha determinado que entre el 5 y el 11% del peso seco del nematodo es materia grasa. Además, la biomasa extractada se puede transferir a posteriori al proceso de digestión anaerobia con el objetivo de generar gas metano y estabilizar el fango final. En conclusión, este trabajo ha permitido describir el funcionamiento del sistema ¿fango + nematodo¿ así como determinar las condiciones óptimas para el cultivo de C. elegans en biorreactores, desde el punto de vista de la cinética del crecimiento, la degradación del fango y el contenido en materia grasa. Finalmente, el bioproceso propuesto en este trabajo de investigación constituye un nuevo subproceso que podría ser integrado en el tratamiento de las aguas residuales urbanas en las EDARS del futuro., Universidad Pablo de Olavide de Sevilla. Departamento de Biología Molecular e Ingeniería Bioquímica, Postprint

Programa de Doctorado en Biotecnología y Tecnología Química, La comprensión de los mecanismos que regulan el almacenamiento de los excedentes calóricos en forma de grasa es esencial a la vista de los preocupantes problemas de salud pública causados por el incesante aumento de la obesidad y patologías asociadas como la diabetes. Estudios realizados durante esta última década en organismos simples como Drosophila han aportado importantes avances al campo. Recientemente, en nuestro laboratorio hemos descubierto que las células de los discos imaginales y los folículos del ovario de Drosophila requieren los genes lipophorin receptor 1 (lpr1) y lpr2, pertenecientes a la familia de los LDLR, para la adquisición de lípidos neutros a partir de las lipoproteínas circulantes, que en insectos llamamos lipoforinas, y que se encargan de distribuir y transportar lípidos entre los distintos tejidos. Hemos visto que la toma de lípidos mediada por Lpr1 y Lpr2 está relacionada con el procesamiento lipolítico de las lipoproteínas ricas en triglicéridos que ocurre en los microcapilares del tejido muscular, cardiaco y adiposo de los mamíferos. Esta inesperada similitud aconseja profundizar en el estudio de la toma de lípidos en Drosophila con el fin de descubrir nuevas proteínas implicadas y niveles de regulación adicionales que puedan también ser relevantes en humanos. A ello nos va a ayudar el hecho de que existen múltiples isoformas, en particular sólo un subgrupo de isoformas es capaz de mediar la toma de lípidos neutros, ayudandonos a caracterizar los mecanismos moleculares que median la toma de lípidos neutros en los sistemas modelo del disco imaginal de ala y el oocito de Drosophila mediante la identificación y caracterización de nuevas proteínas involucradas, ya sea por la Identificación de proteínas que forman complejos multiproteicos con los receptores de lipoforinas por la metodología bioquímica del Tandem Affinity Immunoprecipitation (TAP), ya que las proteínas que interaccionen con las isoformas que median la toma de lípidos pero no con las que no median esta toma de lípidos serán los candidatos más prometedores, otra aproximación será el análisis de genes candidatos como lipasas y transportadores de ácidos grasos, ya que en mamíferos, la toma de lípidos neutros en los tejidos periféricos implica la hidrólisis del TAG contenido en quilomicrones y VLDL por parte de la Lipasa de lipoproteínas y los ácidos grasos liberados son transportados desde el lumen de los capilares hacia los tejidos subyacentes (músculo y tejido adiposo principalmente) gracias a trasportadores de ácidos grasos como las FATPs (fatty acid transport protein) y el scavenger receptor CD36. Es muy probable que proteínas con funciones análogas también se encuentren en Drosophila. con el objetivo de identificarlas se examinarán los posibles genes candidatos en Drosophila mediante su silenciamiento por RNA interferentes y se examinará si ello afecta a la acumulación de lípidos neutros en los discos imaginales y se caracterizará la función en la toma de lípidos de las proteínas identificadas., Universidad Pablo de Olavide. Departamento de Biología Molecular e Ingeniería Bioquímica

Tesis Doctoral presentada por la licenciada Agnieszka Dobrzynska para optar al grado de Doctor por la Universidad Pablo de Olavide y realizada en el Centro Andaluz de Biología del Desarrollo (CABD), centro mixto del CSIC.-- Excepto si se señala otra cosa, la licencia del ítem se describe como Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España., Caenorhabditis elegans es un nematodo pequeño que se alimenta de microorganismos, es transparente y fácil y barato para cultivar en el laboratorio. Además, su naturaleza hermafrodita, un ciclo de vida rápido, posibilidad de congelación y recuperación de los nematodos viables facilitan muchas manipulaciones genéticas. Por estas ventajas se utiliza como un sistema modelo en casi todas las áreas de la biología célullar, neurobiología y desarrollo. La elucidación de la organogénesis es importante para la comprensión del desarrollo de los organismos multicelulares. La vulva de un adulto hermafrodita sirve como un pasillo que conecta el útero con el ambiente externo y su desarrollo es un excelente modelo para estudiar los mecanismos que subyacen a la especificación del destino celular y las vías de señalización intercelular (Sternberg,2005). Durante el estadio larvario L3 una célula especializada de la gónada llamada célula ancla (AC), induce el desarrollo de la vulva mediante la secreción de la proteína LIN-3, un ligando del factor de crecimiento epidérmico (EGF) a los precursores celulares de la vulva (VPC) subyacentes, llamados P3.p-P8.p para adoptar los destinos vulvares (Hill and Sternberg, 1992). El nivel mas alto de LIN-31o recibe P6.p para adoptar 1º destino celular y activar el LIN-12 (Notch) en PS.p y P7.p y adoptar el 2º destino celular (Sternberg, 1988). Los tres restantes VPCs (P3.p , P4.p y P8.p) que no reciben el señal inductiva ni las señales laterales adoptan el 3º destino celular, se dividen una vez y se fusionan con la hipodermis (hyp7). Después de tres rondas de divisiones celulares durante los estadios larvarios L3 y L4 se generan 22 células de la vulva de siete tipos diferentes que se invaginan y fusionan para formar siete anillos toroidales diferentes, se conectan al útero y emergen durante la última muda para formar la vulva madura del hermafrodita. La AC desempeña un papel crucial no sólo durante el desarrollo de la vulva, sino también en la morfogénesis uterina. Después de la inducción de tres VPCs para adoptar sus destinos vulvares, la AC señala, a través de LAG-2 y su receptor LIN-12, a seis de los doce descendientes de las células ventrales del útero (VU) a adoptar el destino celular π . Durante el estadio larvario L4, ocho células π fusionan con la AC y forman el sinsitio llamado utse. La fosforilación de proteínas por parte de quinasas es una modificación postraduccional que juega un papel importante en procesos biológicos numerosos. Se estima que aproximadamente el 30% de las proteínas intracelulares se fosforila de forma reversible (Cohen, 2000), lo que hace que las proteínas quinasas sean reguladores clave de procesos biológicos incluyendo la transducción de la señal, la transcripción, la progresión del ciclo celular, el crecimiento, la diferenciación y la apoptosis. La familia de quinasas humanas Vaccinia Related Kinases, VRKs, está constituida por tres miembros proteínas, VRK1 - 3, de los cuales sólo VRK1 y VRK2 son cataliticamente activos (Nichols and Traktman, 2004). En Caenorhabditis elegans y Drosophila melanogaster hay sólo un ortólogo (VRK-1 y NHK-1, respectivamente). No hay ortólogos de las VRKs identificados en la levadura. VRK1 humana es el miembro más estudiado de la familia de VRK. Experimentos en diferentes organismos han demostrado que VRK1 fosforila varios factores de transcripción (p53, c-Jun y ATF2) y proteínas asociadas a la cromatina (histonas H2A y H3, BAF1) (Kierkx et al., 2009b). VRK1 regula la progresión del ciclo celular y juega un papel importante en la dinámica de la envoltura nuclear (Gorjanacz et al., 2007;Nichols et al., 2006). En los mamíferos, la pérdida de VRK1 conduce a la esterilidad y puede causar trastornos neurológicos (Renbaum et al., 2009; Wiebe et al., 2010). Además, la expresión de VRK1 se correlaciona con la progresión de ciertos tipos de cáncer (Santos et al., 2006). Los estudios realizados en nuestro laboratorio utilizando los nematodos C. elegans como organismo modelo han demostrado que VRK1 juega un papel critico en el desarrollo de órganos, así como en la proliferación de células germinales y divisiones mitóticas durante la embriogénesis temprana (Gorjanacz et al.,2007; Klerkx et al., 2009a). Sin embargo, poco se sabe acerca de la dinámica de VRK1, su regulación y sus sustratos durante el desarrollo. Los objetivos de mi tesis doctoral han sido situar a VRK-1 dentro del contexto del desarrollo de órganos de C. elegans, caracterizar la dinámica de la localización de VRK-1 tanto en C. elegans como en las células humanas e identificar nuevos sustratos de esta quinasa., La primera parte de mi tesis se concentra en la caracterización de la localización y la movilidad de VRK1 tanto en se centra C. elegans como en las células humanas. Con el fin de caracterizar la dinámica de VRK1 y garantizar los niveles de expresión uniformes hemos utilizado los sistemas MosSCI y Flp-ln para generar nuevas cepas transgénicas de C. elegans y líneas celulares humanas, que expresan solo una copia de los transgenes. Hemos observado que las nuevas cepas muestran la expresión de VRK-1 no sólo en las células previamente reportadas (neuronas, células hipodérmica y células precursoras de la vulva), sino también en las celulas del utero y la célula ancla. Ademas, hemos observado que VRK1 humano es nuclear durante la interfase y en mitosis se asocia con los cromosomas condensados, igual a lo descrito para los embriones de C. elegans (Gorjanacz et al., 2007). Por otra parte, una mutagénesis dirigida a tres argininas conservadas en la región carboxyl terminal identificó un nuevo motivo conservado, responsable de la localización de VRK1 en cromatina durante la mitosis. La recuperación de fluorescencia posterior al foto-blanqueamiento (FRAP) sugiere una asociación transitoria de VRK1 con la cromatina. Se observaron cinéticas idénticas en interfase y en la mitosis, lo que sugiere que VRK1 puede interactuar con las mismas proteínas de la cromatina durante todo el ciclo celular. La segunda parte de mi tesis se concentra en la relación entre VRK1 y las vías de señalización implicadas en el desarrollo de C. elegans. Durante el desarrollo de la vulva la AC se fusiona con células uterinas para formar el utse. Los defectos en la formación de utse producen un fenotipo conocido como vulva protuberante (Pvl). Hemos demostrado que la AC no se fusiona en los mutantes de vrk-1, muy probablemente debido a la pérdida de VRK-1 en el tejido uterino,lo cúal, esta perdida se caracteriza por defectos en la proliferación y la diferenciación en las células uterinas. La tercera parte de esta tesis, en la identificación de las proteínas que interaccionan con VRK1. Hemos expresado y purificado VRK1 de células humanas asincrónicas y mitóticas, seguido por espectrometría de masas de alta resolución. Algunos de los principales candidatos identificados fueron miembros del complejo de pasajeros cromosómica (CPC) - Aurora B, Borealin y survivin. Experimentos en curso servirán para confirmar la interacción de VRK1 con el CPC. En conclusión, en esta tesis hemos destapado nuevos dominios reguladores de la proteína quinasa VRK1 y proteínas que interaccionan con VRK1. Estos resultados son importantes para comprender las actividades moleculares de esta quinasa, que está vinculada a la organogénesis, así como a los cánceres humanos y a trastornos neurológicos.

Excepto si se señala otra cosa, la licencia del ítem se describe como Atribución-NoComercial-SinDerivadas 3.0 España., Esta tesis doctoral, se centra en el trabajo con el organismo modelo Caenorhabditis elegans, nemátodo de la familia Rhabditidae que, debido a su transparencia, fácil mantenimiento en el laboratorio y simplicidad, pese a poseer órganos y sistemas totalmente formados, es cada vez más usado en estudios e investigaciones de distintas áreas de la Biología. Concretamente este proyecto se centra en una de las estructuras más características de las células eucariotas:la envoltura nuclear. Se trata de una bicapa lipídica que delimita al núcleo permitiendo la separación de los espacios nuclear y citoplasmático dentro de la célula. Esto es vital, entre otras cosas, para la maduración de las moléculas de ARN mensajero (resultado de la traducción del AON) eliminando los intrones, de manera que, una vez maduras, estas moléculas salen al citoplasma, donde, gracias a los ribosomas, se produce la traducción para obtener las proteínas. La envoltura nuclear está constituida por una membrana interna y otra externa y a lo largo de esta ellas encontramos distintas proteínas integrales y unos complejos proteínicos llamados Poros Nucleares, que regulan el transporte de moléculas entre el núcleo y el citoplasma. Pero la envoltura nuclear tiene, además otras funciones muy relevantes relacionadas con el control de la expresión génica mediante el anclaje de la cromatina a la misma. Actualmente se sabe que hay diversas enfermedades relacionadas con defectos en los componentes de la envoltura nuclear. Éstas son llamadas laminopatías y en algunos casos las células se ven claramente afectadas mostrando una forma nuclear distinta. Esta tesis está centrada en la descripción y caracterización de dos proteínas de la envoltura nuclear: la proteína integral de membrana LEM-2 y la nucleoporina NPP-16. A lo largo de este estudio se describen diversos aspectos y funciones de ambas así como su relevancia para el funcionamiento de la célula. Al mismo tiempo se han buscado e identificado otras proteínas que muestren algún tipo de interacción con LEM-2 o NPP-16, para lo cual hemos realizado un Screening en todo el genoma de gusano utilizando para ello la técnica conocida como ARN de interferencia (ARNi). Este método, ampliamente usado en los estudios de genética funcional, consiste en reducir casi completamente (la eficiencia puede variar según el caso) la expresión de un gen, mediante la introducción de ARN de doble cadena, homólogo al gen que se quiere desregular, en el animal. Estas moléculas son procesadas hasta obtener pequeños fragmentos de ARN interferente que se unen al ARN mensajero del gen y bloquean su traducción, dejándose de producir por tanto la proteína correspondiente. Tras este proceso se puede observar y estudiar el efecto que tienen en el animalia falta de dicho gen, ayudando por tanto a determinar su función. Para el Screening se ha utilizado la librería de ARNi del laboratorio de Julie Ahringer, la cual cubre el 86% del genoma de C. elegans, analizando el fenotipo producido por la pérdida de cada uno de los genes en una línea silvestre y comprando el resultado de la misma pérdida en el mutante lem-2 y el mutante npp-16. Tras analizar unos 17.000 genes en las tres líneas y tras varios pasos de confirmación, se obtuvieron 42 genes cuya deleción en el mutante lem-2 producía un fenotipo ausente en la línea silvestre, y 13 genes cuya deleción en el mutante npp-16 producía un efecto ausente en la línea silvestre. Esto indica la existencia de una posible interacción entre cada uno de los genes encontrados y NPP-16 o LEM-2 según el caso. El análisis de los 55 candidatos se ha realizado manteniendo la técnica de ARNi, utilizando diversos mutantes y líneas transgénicas que mediante microscopía nos permiten visualizar el efecto, en el desarrollo de los embriones, de la pérdida de los diferentes genes. Finalmente nos centramos en dos genes: NPP-2 que muestra letalidad sintética con NPP-16 (la ausencia de cada uno individualmente no produce fenotipos severos mientras que la ausencia de los dos resulta una elevada letalidad embrionaria) y UBC-12 , que muestra letalidad sintética con LEM-2. A lo largo de todo el documento se describen los materiales y métodos que se han utilizado, así como los resultados obtenidos que finalmente se tratan en la discusión y se concretan en las conclusiones.

Programa de doctorado en Biotecnología y Tecnología Química, La migración celular es un proceso fundamental tanto en el desarrollo embrionario como a lo largo de la vida del organismo. En organismos adultos, tiene gran importancia en los procesos homeostáticos como la respuesta inmune y la reparación de tejidos. La migración celular también puede contribuir a algunos procesos patológicos, incluyendo enfermedades vasculares, enfermedades inflamatorias crónicas y procesos metastáticos (Friedl et al., 2004). Durante el desarrollo, existen dos modos principales de movimiento celular, la migración individual y la migración colectiva. Las células que migran de forma individual son células procedentes de epitelios que mediante una transición epitelio-mesénquima (EMT), en el que tiene lugar cambios en la polaridad y adhesión celular, se delaminan y se convierten en células mesenquimales con capacidad de migrar. La migración colectiva se entiende como el movimiento de varias células, bien formando parte de un grupo, de una fila o de una capa, que mantienen características similares a las células epiteliales. Este tipo de migración no se rige por una EMT como tal ya que no pierde totalmente la identidad epitelial. Existen varios ejemplos de migración colectiva durante el desarrollo como es la gastrulación y de procesos patológicos como la metástasis. En general, la migración celular se considera un proceso cíclico. Este ciclo comienza con la adquisición de una polaridad celular que genera una asimetría espacial entre la parte frontal y la trasera de la célula. Esta polarización se debe a la recepción de señales externas, estímulos quimiotácticos, factores de decrecimiento o proteínas de la matriz extracelular, las cuales determinan la dirección de la migración. Estas señales activan a receptores de membrana situados en el frente celular como son los receptores tirosina kinasas EGFR y PDGF (Forsberg-Nilsson et al., 1998; Simpson and Armstrong, 1999). Estos receptores se activan gracias a la fosforilación de su dominio intracelular por la unión de sus ligandos al dominio extracelular. Otra proteína implicada en el establecimiento de la polaridad celular y en la adhesión y mantenimiento de epitelios es la proteína E-cadherina. Esta proteína ejerce un papel importante en la migración colectiva durante el desarrollo, donde si bien la disminución de los niveles de E-cadherina en el frente de células pertenecientes a un epitelio promueve la migración, el aumento de expresión de esta proteína la inhibe (revisado en Shapiro and Weis, 2009 y en Peinado et al., 2004; Acloque et al., 2009). Esto ocurre en el cierre del tubo neural o durante la gastrulación en el desarrollo embrionario. Esta polarización y la consecuente activación de las rutas de señalización de los receptores EGFR y PDGF, implica la emisión de proyecciones transitorias en el frente celular (Sarmiento et al., 2008). Estas prolongaciones o extensiones, conocidas como filopodios y lamelipodios, son responsables del movimiento celular. Una molécula importante implicada en la formación de estas extensiones es la actina, un componente del citoesqueleto celular. La polimerización y despolimerización de actina para la formación de proyecciones celulares depende de reorganizaciones del citoesqueleto. En este proceso están involucradas las proteínas pertenecientes a las Rho GTPasas, Rac1 y Cdc42 (Sander et al., 1999). Varios estudios han mostrado que la activación de Rac1 o Cdc42 resulta en un incremento de la formación de lamelipodios y filopodios, respectivamente (Ridley et al., 1992; Machesky and Hall, 1997). Una vez formados estos lamelipodios y filopodios, deben anclarse al sustrato, ya sea a la matriz extracelular o a otras células adyacentes. Estos anclajes se denominan adhesiones focales o fibras de estrés. El proceso de unión de las proyecciones al sustrato se lleva a cabo por otro miembro de la familia de las Rho GTPasas denominado Rho, a través de su interacción con actina. Al mismo tiempo que se generan las adhesiones focales en las proyecciones del frente celular, la parte trasera de la célula debe retraerse para permitir el movimiento celular. En este proceso también se encuentra implicada la proteína Rho, la cual debe ser inhibida en la parte trasera para desestabilizar las uniones de la célula al sustrato a la vez que ejerce su papel en la contracción del cuerpo celular mediante su interacción con la miosina (Ridley and Hall, 1992; Ridley and Hall, 1994; Chrzanowska-Wodnicka and Burridge, 1996). Las Rho GTPasas deben estar bien reguladas para poder ejercer de forma correcta su papel de reorganización del citoesqueleto de actina durante la migración celular. Las Rho GTPasas presentan dos estados conformacionales que dependen de su unión a GTP (activa) o a GDP (inactiva). La regulación de este ciclo de activación/inactivación va a depender de tres tipos de proteínas distintas: unas proteínas activadoras denominadas GEF del inglés Guanine Nucleotide Exchange Factor, las cuales catalizan la unión de las proteínas a GTP; unas proteínas inactivadoras GAP, que procede del inglés GTPase Activating Proteins, implicadas en la hidrólisis del GTP y la posterior unión de las Rho GTPasas a GDP; y unas proteínas inhibidoras de la disociación de nucleótidos de guanina, GDI del inglés Guanine Nucleotide Disociation Inhibitor, las cuales se mantienen unidas a las Rho GTPasas inhibiendo la asociación con el nucleótido de guanina previniendo así su activación (Kjoller and Hall, 1999). Los factores GEFs son los más estudiados respecto a la activación de las GTPasas. Los miembros pertenecientes a la familia de las RhoGEF se caracterizan por poseer el complejo DH-PH, que interviene tanto en la localización de las RhoGEFs en la membrana plasmática como en la regulación la actividad catalítica (revisado en Rossman et al., 2005). Cabe destacar el GEF Vav por ser una proteína que contiene un bucle de autoinhibición situado en el extremo amino-terminal que regula negativamente al dominio catalítico DH, bloqueando así la accesibilidad a las Rho GTPasas (Schmidt and Hall, 2002). Además, esta proteína contiene los dominios SH2-SH3-SH2 en su extremo carboxi-terminal, por el cual se activa mediante fosforilación (Bishop and Hall, 2000). Vav ha sido situado corriente abajo de algunos receptores tirosina kinasas. Tras la estimulación de estos receptores, Vav es fosforilado, lo que produce la estimulación del dominio catalítico DH, pudiendo así interaccionar con las Rho GTPasas (Garrett et al., 2007). Concretamente, se ha implicado en la regulación de la proteína Rac1 y se ha establecido su papel en migración celular principalmente en células en cultivo, donde se ha mostrado que mutaciones de vav pueden generar una disminución de la activación de Rac1 impidiendo así la migración en células en cultivo (Citterio et al., 2012; Lin et al., 2012). En resumen, los receptores tirosina kinasas juegan un papel fundamental en la migración celular dirigida, ya que su activación por señales externas, activan una cascada de señalización que a través de GEFs y Rho GTPasas controlan la reorganización del citoesqueleto y por tanto la migración celular. Los mecanismos moleculares por los cuales las Rho GTPasas y sus activadores, los GEFs, regulan la migración celular han sido mayormente descritos in vitro o in vivo mediante experimentos en cultivos celulares. Por ello, poco se sabe de su función en situaciones fisiológicas en el contexto de un organismo vivo. En esta tesis utilizaremos como modelo de migración las células del borde del ovario de Drosophila melanogaster para tratar de descifrar in vivo el papel de estas proteínas reguladoras del citoesqueleto de actina durante procesos de migración celular que tienen lugar durante el desarrollo. El sistema reproductivo de la hembra adulta de Drosophila melanogaster está compuesto por dos ovarios situados en el abdomen. Cada ovario tiene aproximadamente entre 16 y 20 ovariolas, conteniendo cada una de ellas una hilera de 14 cámaras huevo en distintos estadios del desarrollo. Las cámaras huevo están formadas por 15 células nutricias y un oocito que proceden de la línea germinal. Rodeando a la cámara huevo se encuentran las células foliculares, las cuales proceden de la línea somática. (...), Universidad Pablo de Olavide. Centro de Estudios de Postgrado, Centro Andaluz de Biología del Desarrollo