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Tesis-Universidad de Murcia., Consulte la tesis en: BCA. GENERAL. DEPOSITO. T.M-2156., Consulte la tesis en: BCA. GENERAL. Fac. Veterinaria. Departamentos. E002B TESIS 106., Consulte la tesis en: BCA. GENERAL. Fac. Veterinaria. Sala de estudio. Tesis-V 137.

El objetivo del presente trabajo fue obtener y caracterizar las proteínas recombinantes PLD y CP40 de C. pseudotuberculosis de un aislado mexicano (2J-L), antígenos con potencial inmunogénico. La Linfadenitis caseosa es una enfermedad causada por Corynebacterium pseudotuberculosis biovar ovis, bacteria intracelular que provoca la formación de abscesos cutáneos y/o viscerales, y ocasiona importantes pérdidas económica en la producción de pequeños rumiantes. Existen vacunas comerciales; sin embargo, la protección conferida no ha sido eficaz para el control de la enfermedad. Actualmente el empleo de la tecnología del ADN recombinante ha permitido obtener proteínas con potencialidades inmunogénicas que podrían ser una alternativa para el desarrollo de nuevas vacunas, debido a esto el objetivo del presente trabajo fue obtener y caracterizar las proteínas recombinantes PLD y CP40 de C. pseudotuberculosis de un aislado mexicano (2J-L), antígenos con potencial inmunogénico. Los genes pld y cp40 se amplificaron mediante PCR, se clonaron en el plásmido pGEM-T Easy y se secuenciaron, para el análisis bioinformático. Las proteínas PLDr 2J-L y CP40r 2J-L se expresaron en cepas de E. coli BL21 (DE3) transformadas con los plásmidos pET28a-pld y pET28a-cp40. El análisis filogenético en base a la secuencia de los genes pld y cp40 permitió agrupar el aislado 2J-L junto a cepas del biovar ovis, presentando una mayor relación con la cepa de origen mexicano MEX29. La proteína PLDr 2J-L presentó un 100% de identidad con respecto a la secuencia de las proteínas de las cepas de origen mexicano incluidas en el estudio. La proteína CP40r 2J-L presentó un 100% de identidad con respecto a MEX1, MEX2, MEX9 y MEX29, mientras que un 99% con respecto a CP40 de MEX25 debido a una variación de (V/L) en la posición 247. La caracterización de ambas proteínas se realizó in silico con la determinación de las propiedades físico-químicas, composición y predicción de las estructuras secundarias y modelado en 3D. El potencial inmunogénico de las proteínas se determinó mediante la predicción de epítopos lineales y discontinuos de células B y epítopos de células T presentados en el contexto del MHC I. Por primera vez se presenta un mapeo in silico de epítopos de células B y T para PLD y CP40 a partir de un aislado mexicano. Todos los epítopos identificados fueron conservados en un 100%, por las proteínas PLD y CP40 de las cepas de origen mexicano MEX1, MEX2, MEX9, MEX25 y MEX29. El programa Vaxign identificó ambas proteínas como antigénicas con función de adhesión y VaxiJen clasificó ambas proteínas como antígenos inmunogénicos probables para un valor de corte de 0.4. Las proteínas PLD y CP40 de C. pseudotuberculosis aislado mexicano 2J-L, obtenidas por vía recombinante, constituyen una fuente de antígenos potencialmente inmunogénicos para el desarrollo de una vacuna o medios diagnósticos.

La enfermedad de Chagas es causada por el parasito protozoario Trypanosoma cruzi. Diversos autores han evidenciado la presencia de la enfermedad en distintos países del mundo, así como las Unidades Discretas de Tipificación (DTU´s), la mayoría de los casos reportados se encuentran en América donde es endémica la enfermedad y la DTU mencionada para México es TcI. El presente trabajo reporta la presencia de las Unidades Discretas de tipificación (DTU´s) circulantes de Trypanosoma cruzi (T. cruzi) en vectores pertenecientes al género y especie Meccus pallidipennis en municipios del sur del Estado de México, México. La técnica molecular empleada fue reacción en cadena de la polimerasa (PCR) el cual se amplificando la región intergénica del gen mini exón. Se colectaron muestras de triatominos intradomicilio y peridomicilio correspondientes a municipios del sur del Estado de México, México. En total se recolectaron 162 muestras de triatominos, 119 (73.45%) de ellos correspondían al género y especie Meccus pallidipennis, 2 (1.23%) a Triatoma dimidiata y 41 (25.30%) a ejemplares de ninfas no caracterizadas por su estadio ninfal uno o dos pero que posiblemente pertenecen en su mayoría a Meccus pallidipennis. Se recolectaron un total de 39.50% de adultos y un 60.49% de ninfas en estadios del 1 al 4. Los resultados de PCR mostraron una banda de 350 pb en 30.24% (49/162). Posteriormente a la amplificación por PCR, se seleccionaron 19 muestras positivas a TcI y se mandaron a secuenciar teniendo como resultado final 15 muestras TcIa, 3 muestras portadoras de dos haplotipos (TcIa + TcId) y una muestra como propuesta a dos nuevos haplotipo TcIf y TcIg. Estos haplotipos coinciden en la mutación en la posición número 48 de la secuencia (T/A) pero son diferentes en la posición 27 (T/C y T/A, respectivamente). Los triatominos de donde se obtuvieron estas secuencias de T. cruzi proceden de los municipios de Malinalco y Sultepec, y podrían provenir de una clona de la que evolucionaron otras dos de manera independiente. En el país, hasta este estudio no se tenían datos que hagan referencia a portadores de haplotipos mixtos.

La Linfadenitis caseosa (LC) o pseudotuberculosis es una enfermedad infectocontagiosa, de evolución crónica, causada por Corynebacterium pseudotuberculosis. Debido a su curso crónico y poca respuesta al tratamiento es difícil erradicar la infección una vez que se establece. Por ello, las estrategias para establecer los programas de prevención, control y erradicación de la enfermedad deben ser integrales. Algunos de los aspectos limitantes para el control de LC es que no existen pruebas de diagnóstico suficientemente sensibles y específicas para establecer el diagnóstico en la fase precoz y fase clínica visceral; además, las vacunas y bacterinas no han arrojado resultados satisfactorios en modelos de animales experimentales. En investigaciones previas se han aislado cepas de diferentes lesiones que afectan a cabras y ovinos, estas han sido secuenciadas totalmente o parte de sus genes. Sin embargo, hasta ahora en México no existe un estudio establecido donde se identifique mediante técnicas moleculares y filogenéticas las cepas circulantes en nuestras explotaciones y por tanto no se sabe si la enfermedad es sub-diagnosticada. En el presente estudio se partió de 69 aislamientos de C. pseudotuberculosis para realizar la identificación bacteriológica, bioquímica y molecular, se utilizaron pruebas bacteriológicas y bioquímicas convencionales, un Kit comercial Api Coryne, PCR Multiplex con los genes 16s, rpoB y pld e identificación por PCR punto final genes involucrados en la virulencia y patogenicidad Fag A, Fag B, Fag C y Fag D además de un análisis filogenético basado en la secuencia parcial del gen rpoB. Se logró caracterizar fenotípica y genotípicamente el 86.95% (60/69) de los aislados de campo de Corynebacterium pseudotuberculosis, además de identificar en el 98.3 % (59/60) de los aislados los genes involucrados en la virulencia y patogenicidad. Se logró identificar el 100% (60/60) de los aislamientos mediante el análisis filogenético la especie y subespecie a la que pertenecen. Además se logró identificar por primera vez un asilado de C. xerosis en un absceso cutáneo de ovino.