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Perinotto W.M.S., Camargo M.G., Golo P.S., Angelo I.C., Quinelato S., Monteiro C.M.O., Sá F.A., Coutinho-Rodrigues C.J.B., Marciano A.F., Fiorotti J. P. & Bittencourt V.R.E.P. [Control of Dermacentor nitens using a commercial formulation of Metarhizium anisopliae.] Controle de Dermacentor nitens utilizando uma formulação comercial à base de Metarhizium anisopliae. Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 35(Supl. 2):35-42, 2013. Departamento de Parasitologia Animal, Instituto de Veterinária, Anexo 1, Universidade Federal Rural do Rio de Janeiro, Campus Seropédica, BR 465, Km 7, Seropédica, RJ 23890-000, Brasil. E-mail: vaniabit@ufrrj.br Dermacentor nitens ticks are commonly found in the equine auditory canal. This ectoparasite causes substantial economic losses due to its direct damage caused by the parasitism, transmission of pathogens, and embargoes during marketing and transport of horses. Metarhizium anisopliae senso latu (s.l.) is a cosmopolitan entomopathogenic fungus, which has been used to control ticks, in vitro. Studies have shown that when formulated these entomopathogenic fungi reach an improved percent of control against ticks and insects, what is essential to drive in vivo studies and obtain good results in the field. This scenario has aroused the interest of industries that have developed different formulations of entomopathogenic fungi. Metarril WP® is a commercial product based on M. anisopliae spores used in agricultural pest control, but little is known about their effect against ticks. Accordingly, this study aimed to evaluate the effects of this product on partially engorged females, eggs and larvae of D. nitens. The formulations were prepared following manufacturer’s recommendations and adjusted to 107 and 108 conidia mL-1, increased by 10 or 0.5 % mineral oil. The biological parameters of engorged females (posture weight, egg production index and nutritional index) were significantly reduced by 10% oily formulations at 107 and 108 conidia mL1 . Different treatments using Metarril WP® product yielded control percent of partially engorged females ranging from 10.57 % to 82.48 %. Formulations containing mineraloil also demonstrated high efficacy against eggs and larvae of D. nitens. Metarril WP® formulated in mineral oil showed to be effective against D. nitens in different developmental stages. This is the first report of the effect of this commercial product againstD. nitens ticks., Dermacentor nitens, carrapato encontrado comumente no conduto auditivo de equideos, é um ectoparasito que causa grandes perdas econô- micas devido aos danos diretos causados pelo seu parasitismo, transmissão de patógenos e embargos durante a comercialização e transporte de equinos. Metarhizium anisopliae é um fungo entomopatogê- nico cosmopolita, que vem sendo utilizado no controle in vitro de carrapatos. Com intuito de potencializar e viabilizar a utilização destes microrganismos in vivo, estudos tem demonstrado que quando formulados, os fungos entomopatogênicos alcançam melhores percentuais de controle sobre as pragas alvo. Isso tem despertado o interesse de indústrias que tem investido na formulação de fungos entomopatogênicos. Metarril WP® é um produto comercial a base de M. anisopliae, utilizado no controle de pragas agrícolas, porém existem poucos estudos sobre carrapatos. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito de Metarril WP® sobre fê- meas parcialmente ingurgitadas, ovos e larvas de D. nitens. As formulações foram preparadas seguindo as recomendações do fabricante e ajustadas para 107 e 108 conídios/mL, acrescidas de 0,5 e 10% de óleo mineral. Como resultados pode se observar que os parâmetros biológicos: peso da postura, índice de produção de ovos e índice nutricional das fêmeas semi ingurgitadas, foram significativamente reduzidos pelas formulações oleosas a 10% com 107 e 108 conídios/mL, proporcionando percentuais de controle variando de 10,57 a 82,48%. Além disso, também demonstraram eficácia para ovos e larvas de D. nitens. Desta forma, pode se concluir que Metarril WP® formulado em óleo mineral foi eficaz no controle in vitro dos diferentes estágios de desenvolvimento de D. nitens. Este é o primeiro relato da eficácia deste produto comercial para esta espécie de carrapato.

O estudo teve como objetivo avaliar a viabilidade de Heterorhabditis amazonensis isolado RSC-5 após exposição a diferentes carrapaticidas utilizados no controle de Rhipicephalus microplus. Foram constituídos seis tratamentos, cada um composto por um produto, sendo cada grupo com 75.000 nematoides (NEPs) em suspensão de 20 mL de solução de diferentes carrapaticidas, em concentração comercial. O controle foi formado por 75.000 NEPs e 20 mL de água destilada, e todos os grupos foram mantidos em câmara climatizada a 25°C. A avaliação do percentual de sobrevivência e infectividade em lagartas Galleria mellonella foi realizada 24 e 72 horas após o início do experimento. A mortalidade de lagartas no teste de infectividade foi analisada após 72 e 120 horas. Com 24 horas de exposição, o percentual de sobrevivência de H. amazonensis RSC-5 não foi significativamente reduzido (p > 0,05) somente na exposição ao princípio ativo deltametrina. O mesmo foi observado no período de 72 horas em relação à associação clorpirifós + cipermetrina + butóxido de piperonila + citronelal. Não foi constatada sobrevivência de nenhum juvenil infectivo nos grupos expostos à associação clorfenvinfós + diclorvós. A exposição ao clorfenvinfós resultou em percentual de sobrevivência inferior a 50% após 72 horas. O potencial de infectar lagartas de G. mellonella foi reduzido apenas no grupo tratado com o princípio ativo clorfenvinfós. Dessa forma, é possível concluir que o princípio ativo clorfenvinfós e a associação clorfenvinfós + diclorvós não foram compatíveis com H. Amazonenses RSC-5, causando redução no percentual de sobrevivência e infectividade dos juvenis desse nematoide. Os outros produtos foram compatíveis, não causando redução na infectividade do isolado testado. The aim of this study was to assess the viability of Heterorhabditis amazonensis strain RSC-5 after exposure to different acaricides used for Rhipicephalus microplus control. Six treatment groups were formed, one for each product. Each group was composed of 75,000 nematodes in a 20 mL solution of different acaricides, at commercial concentration. The control group was formed by the same number of nematodes in 20 mL of distilled water. All the groups were kept in a climate-controlled chamber at 25°C. The percentage of survival and infectivity in Galleria mellonella caterpillars were determined 24 and 72 hours after the beginning of the experiment. The mortality of the caterpillars in the infectivity test was assessed 72 and 120 hours. After 24 hours of exposure, only the active ingredient deltamethrin did not significantly reduce the survival percentage of H. amazonensis RSC-5 (p > 0.05). The same was observed after 72 hours of exposure to the combination of chlorpyriphos + cypermethrin + piperonyl butoxide + citronellal. There was no survival of infective juveniles in the groups exposed to the combination of chlorphenvinphos + dichlorvos. The exposure to chlorphenvinphos for 72 hours resulted in 50% of mortality. The potential to infect G. mellonella caterpillars was only reduced in the group treated with the active ingredient chlorphenvinphos. Chlorphenvinphos and the combination of chlorphenvinphos + dichlorvos were not compatible with H. amazonensis RSC-5, causing a reduction in the survival and infectivity of juveniles of this nematode, while the other products were compatible, causing no reduction in the infectivity of this isolate.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Em vista do atual quadro de resistência do carrapato dos bovinos aos carrapaticidas comerciais, somando-se ainda a necessidade de preservação ambiental e de alimentos livres de resíduos, novas alternativas no controle deste artrópode vem ganhando maior atenção. Entre estas podemos destacar a utilização de nematóides entomopatogênicos como promissores agentes de controle biológico de ixodídeos e, desta forma, a Embrapa Gado de Leite vem desenvolvendo uma linha de pesquisa que investiga interações entre este ixodídeo e estes nematóides. Com objetivo de avaliar a eficiência de duas espécies de nematóides no controle do carrapato dos bovinos, o presente trabalho foi dividido em três experimentos que avaliaram o potencial “in vitro” de Heterorhabditis bacteriophora HP88 e Heterorhabditis amazonensis RSC-5 como controladores biológicos de Rhipicephalus (Boophilus) microplus. O estudo foi desenvolvido no Laboratório de Parasitologia da Embrapa Gado de Leite, Juiz de Fora, Minas Gerais. No primeiro experimento foi avaliada a eficiência de diferentes dosagens de juvenis infectantes de H. bacteriophora HP88 no controle do carrapato dos bovinos. A eficácia dos tratamentos foi superior a 90% em todas as concentrações utilizadas, demonstrando que este isolado foi altamente eficaz na redução da prole de R. (B.) microplus em condições de laboratório. No segundo experimento, foi feita a mesma avaliação, xiv entretanto foi empregado o nematóide H. amazonensis RSC-5. Os resultados alcançados com H. amazonensis RSC-5 foram inferiores aos obtidos com H. bacteriophora HP88, sendo que a melhor eficácia foi de 67% no tratamento com 300 NEPs/fêmea. Por ter sido mais eficiente, H. bacteriophora HP88 foi à espécie selecionada para o desenvolvimento do terceiro experimento, que buscou avaliar o efeito de diferentes tempos de exposição de fêmeas ingurgitadas de R. (B.) microplus a juvenis infectantes deste nematóide. Os resultados alcançados mostram que tempos de exposição inferiores a 24h não são suficientes para que o nematóide exerça controle eficiente sobre este ixodídeo. Entretanto, a partir de 24h de exposição o percentual de controle foi de 82%, e com 48 e 72h esta eficácia chegou a 100%. Os resultados alcançados no presente estudo demonstram que “in vitro” estes nematóides são eficientes no controle do carrapato dos bovinos, entretanto, ainda é necessária a realização de estudos futuros para investigar o potencial destes agentes de controle biológico em condições de campo e os possíveis impactos que esta utilização possa causar. Because of the widespread resistance of cattle ticks to commercial carrapaticides and the need to protect the environment and food supply from chemical residues, there is increasing interest in finding new control alternatives. Among these is the use of entomopathogenic nematodes as biological control agents. In this effort, the Embrapa Dairy Cattle Research Center (Embrapa Gado de Leite) has been conducting a line of research investigating the interactions between cattle ticks and these nematodes. The present work examines the efficiency of two nematode species in the control of cattle ticks. We conducted three experiments to evaluate the in vitro potential of Heterorhabditis bacteriophora HP88 and Heterorhabditis amazonensis RSC-5 as biological controls of Rhipicephalus (Boophilus) microplus. The study was conducted in the Parasitology Laboratory of Embrapa Gado de Leite in Juiz de Fora, Minas Gerais, Brazil. In the first experiment the efficiency was evaluated of different concentrations of infective juveniles of H. bacteriophora HP88 to control the ticks. The efficiency of the treatment was greater than 90% at all the concentrations tested, demonstrating this isolate is highly effective in reducing the reproductive capacity of R. (B.) microplus in laboratory conditions. In the second experiment, the same evaluation was carried out employing different concentrations of the nematode H. amazonensis RSC-5. The results were inferior to those obtained with H. bacteriophora HP88. The best efficacy xvi was 67% in the treatment with 300 EPNs/female. Because it was more efficient, we chose H. bacteriophora HP88 for the third experiment, which evaluated the effect of different exposure times of engorged females of R. (B.) microplus to infective juveniles of this nematode. The results obtained show that exposure times shorter than 24 hours are not sufficient for the nematode to have a significant control effect on this tick. However, with exposure for longer than 24 h the control percentage rose to 82%, and at 48 and 72h it reached 100%. The results obtained in this study show that in vitro these nematodes are efficient in controlling cattle ticks, but further studies are necessary to investigate the of these biological control agents under field conditions and the possible impacts this can cause.

O presente trabalho comparou a eficiência de três diferentes equipamentos de aplicação de acaricidas no controle de Rhipicephalus microplus. Dois experimentos comparativos foram realizados. Para comparar os equipamentos, foi utilizado um acaricida contendo três princípios ativos (um piretróide e dois organofosforados). No experimento 1 foram testados três equipamentos: pulverizador costal (BS), pulverizador de alta pressão (HPS) e pulverizador automátizado (AS). No experimento 2, dois dispositivos foram testados: BS e HPS. Em ambos os experimentos, foram utilizados 10 bovinos por grupo amostral com carga de carrapatos semelhante. No dia 0, em ambos os experimentos, os animais foram tratados com o acaricida, exceto o grupo controle. Nos dias +1 (somente experimento 1), +3, +7, +14, +21, +28 e +35 (somente experimento 2), foi realizada contagem de carrapatos para determinar a eficácia do controle. O tempo de aplicação, pressão (KPa) e volume aplicado (L) em cada sistema de pulverização também foram avaliados. O teste de imersão em adultos (AIT) utilizando três diferentes acaricidas à base de piretróide e organofosforado foi realizado para comparar a suscetibilidade das cepas de cada fazenda. No experimento 1, todos os tratamentos reduziram significativamente (p < 0,05) o número de carrapatos nos animais, porém, o HPS proporcionou melhor eficácia do acaricida desde o dia +1. No experimento 2, ambos os tratamentos reduziram (p < 0,05) a carga de carrapatos, porém o HPS resultou em redução mais acentuada. O tempo de aplicação foi de 4,5, 150 e 330 segundos, enquanto a pressão foi de 306,8, 4.826,3 e 172,4 – 220,6 KPa para AS, HPS e BS, respectivamente. No AIT as eficácias observadas ficaram entre 99,8 - 100% para a cepa da fazenda do experimento 1, enquanto ficaram entre 67,2 - 80,9% para a cepa da fazenda do experimento 2. Concluímos que o dispositivo de aplicação influencia na eficácia do acaricida. Todos os três pulverizadores foram eficientes para aplicação de acaricida; a melhor eficácia foi obtida com o HPS, enquanto o AS apresentou eficácia satisfatória, mas com menor tempo de aplicação, e a linhagem da fazenda do experimento 1 foi mais suscetível para todos os acaricidas testados. The present work compared the efficiency of three different equipment for acaricides application to control Rhipicephalus microplus. Two comparative experiments were performed. To compare the equipment, an acaricide containing three active ingredients (one pyrethroid and two organophosphate) was used. In experiment 1, three devices were tested: backpack sprayer (BS), high pressure sprayer (HPS) and automated sprayer (AS). In experiment 2, two devices were tested: BS and HPS. In both experiments, 10 bovines with similar tick burden were used. In day 0, both experiments, the animals were treated with the acaricide. On days +1 (only experiment 1), +3, +7, +14, +21, +28 and +35 (only experiment 2), ticks count was performed to determine the efficiency of control. The application time, pressure (KPa) and volume applied (L) in each spraying system were also evaluated. Adult immersion test (AIT) using three different acaricides based on pyrethroid and organophosphate was performed to compare the susceptibility of strains from each farm. In experiment 1, all treatments reduced significantly (p < 0.05) the number of ticks on animals, however, the HPS showed better efficacy of the acaricide since day +1. In experiment 2, both treatments reduced (p < 0.05) the tick burden, however the HPS resulted in more accentuated reduction. The application period was of 4.5, 150 e 330 seconds, while pressure was of 306.8, 4,826.3 and 172.4 – 220.6 KPa for AS, HPS and BS, respectively. In the AIT the observed efficacies were between 99.8 - 100% for the strain of the farm of the experiment 1, while were between 67.2 - 80.9% for the strain from the farm of experiment 2. We conclude the application device influences the efficiency of the acaricide. All three sprayers were efficient for acaricide application; the best efficiency was obtained using the HPS while the AS showed a reliable efficiency with lower application period and the strain of the farm of the experiment 1 was more susceptible for all acaricides tested.

Rhipicephalus microplus (Canestrini, 1888) é um importante ectoparasito na criação de bovinos em regiões tropicais, subtropicais e temperadas no mundo. Esse carrapato atua na transmissão de patógenos, levando a quadros patológico em bovinos, e diminuindo a produtividade na bovinocultura de corte e de leite. Como o carrapato R. microplus possui importância médico veterinária, elevando os custos de produção de bovinos, torna-se importante a realização de controle, que é atualmente realizado quase que exclusivamente com a utilização de carrapaticidas organossintéticos. Atualmente, existem formulações comerciais disponíveis para controle de R. microplus com base na associação dos princípios ativos, fipronil e fluazuron, que tem sido amplamente utilizada. Contudo, não existem informações a respeito das alterações histológicas dessas moléculas sobre esse carrapato, e tais estudos permitirão melhor compreensão do mecanismo de ação e toxicidade desses ingredientes ativos em diferentes órgãos. Assim, o objetivo desse estudo foi avaliar o potencial efeito na biologia reprodutiva e histológico de uma formulação comercial, contendo fipronil e fluazuron em ovários de fêmeas ingurgitadas de R. microplus. Para a realização do estudo, três bezerros foram infestados com aproximadamente 5.000 larvas nos dias -24, -21, -19, -17, -14, -12, -10, -7, -5 e -3, considerando o dia 0, o dia do tratamento. O tratamento consistiu na aplicação da formulação carrapaticida comercial contendo fipronil (1,25 %) e fluazuron (2,5%) (Tick Gard®- MSD Saúde Animal). Antes da aplicação da formulação carrapaticida, foram recuperadas 20 fêmeas ingurgitadas, naturalmente desprendidas dos bovinos, para formação do grupo controle. Após a aplicação da formulação comercial, foram coletadas fêmeas ingurgitadas naturalmente desprendidas dos animais nos dias +5, +10 e +20 para acompanhamento da biologia reprodutiva e +4, +12 e +20 para avaliação da histologia dos ovários. As fêmeas coletadas para acompanhamento da biologia reprodutiva foram mantidas em câmara climatizada para oviposição, posteriormente, incubação desses ovos, enquanto as fêmeas utilizadas para as análises histológicas foram mantidas em câmara climatizada por 4 dias e após esse período, foram dissecadas. Na avaliação da biologia reprodutiva, foi observado que as fêmeas provenientes dos grupos tratados produziram uma menor quantidade de ovos (p

Amblyomma sculptum pode parasitar diversos mamíferos, incluindo humanos, e é o principal vetor da bactéria Rickettsia rickettsii no Brasil, agente etiológico da febre maculosa brasileira. Diversos estudos vêm sendo realizados com produtos de origem vegetal para controle de carrapatos. Além disso, o uso de repelentes é uma importante ferramenta para evitar infestações. O presente estudo teve como objetivo avaliar a repelência de ninfas não alimentadas de A. sculptum frente a substâncias derivadas de óleo de coco (éster metílico de ácido dodecanóico- C12; éster metílico de ácido decanóico- C10; e ácido graxo livre de coco em formulação de óleo de lavanda) e óleo de catnip (Nepeta cataria); por meio de bioensaios de placa de Petri modificado e, avaliar a atividade carrapaticida dessas substâncias por meio do teste de pacote de larvas. Para o teste de placa de Petri, um semicírculo de papel filtro contendo a substância a ser testada na concentração de 10% diluída em etanol e outro semicírculo contendo o solvente (etanol), foram posicionadas dentro da placa; seis ninfas não alimentadas foram colocadas no centro de cada placa e sua localização foi avaliada aos 1, 3, 5, 10, 15 e 30 minutos e às 24, 48, 72, 96 e 168 horas após o início do teste. Para o teste de pacote de larvas as substâncias foram utilizadas em cinco concentrações (2,5; 5; 10; 15 e 20 mg/mL) sobre larvas não alimentadas de A. sculptum para avaliação de mortalidade após 24 horas do tratamento. Como resultado, todas as substâncias apresentaram repelência, sendo que o ácido graxo livre de óleo de coco conferiu repelência por 7 dias, enquanto o óleo de N. cataria e o éster metílico de C10 apresentaram repelência por 4 e 3 dias, respectivamente. A concentração do éster metílico de C12, efetiva contra mais de 93% das larvas testadas, foi de 15 mg/mL e a concentração, dessa mesma substância, de 20mg/mL conferiu 100% de mortalidade. Assim, nossos resultados indicam que compostos derivados do óleo de coco possuem efeito repelente e carrapaticida sobre fases imaturas de A. sculptum e podem ser formulados para proteger humanos e outros animais de infestação, bem como contra patógenos transmitidos por essa espécie de carrapato. Amblyomma sculptum can parasitize several mammals, including humans, and is the main vector of the Rickettsia rickettsii bacterium in Brazil, the etiological agent of Brazilian spotted fever. Several studies have been carried out with products of plant origin to control ticks. In addition, the use of repellents is an important tool to prevent infestations. The present study aimed to evaluate the repellency of unfed nymphs of A. sculptum against substances derived from coconut oil (C12 dodecanoic acid methyl ester; C10 decanoic acid methyl ester; and coconut free fatty acid in lavender oil formulation) and catnip oil (Nepeta cataria); through modified Petri dish bioassays and, to evaluate the tick activity of these substances by means of the larval packet test. For the Petri dish test, a semicircle of filter paper containing the substance to be tested at a concentration of 10% diluted in ethanol and another semicircle containing the solvent (ethanol), were placed inside the dish; six non-fed nymphs were placed in the center of each plate and their location was assessed at 1, 3, 5, 10, 15 and 30 minutes and at 24, 48, 72, 96 and 168 hours after the start of the test. For the larval packet test, the substances were used in five concentrations (2.5; 5; 10; 15 and 20 mg / mL) on non-fed larvae of A. sculptum to assess mortality after 24 hours of treatment. As a result, all substances showed repellency, with the fatty acid free of coconut oil conferring repellency for 7 days, while N. cataria oil and C10 methyl ester showed repellency for 4 and 3 days, respectively. The concentration of the C12 methyl ester, effective against more than 93% of the tested larvae, was 15 mg / mL and the concentration, of that same substance, of 20mg / mL conferred 100% mortality. Thus, our results indicate that compounds derived from coconut oil have a repellent and tick effect on immature stages of A. sculptum and can be formulated to protect humans and other animals from infestation, as well as against pathogens transmitted by this species of tick. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Este estudo teve como objetivo avaliar se as associações binárias entre timol, carvacrol e eugenol possuem efeito sinérgico sobre os estágios de vida imatura de Amblyomma sculptum. Para isso realizou-se teste in vitro para avaliação da mortalidade de larvas e ninfas e também teste de semi-campo para avaliar a eficácia dessas. Também foi realizada análise custo para produção de uma formulação que cause 95% de mortalidade. As substâncias foram testadas in vitro de forma isolada e associadas nas concentrações de 0,3125; 0,625; 1,25; 2,5; 5,0 e 10,0 mg/mL, sobre larvas não alimentadas; e nas concentrações de 2,5; 3,75; 5,0; 7,5; 10,0; 15,0 e 20 mg/mL, sobre ninfas não alimentadas. Para realização do teste em condições de semi-campo foram selecionadas as duas associações que obtiveram melhor eficácia nos testes in vitro para aplicação em parcelas de Panicum maximum, infestadas artificialmente com larvas de A. sculptum. Nos testes in vitro, com larvas, a associação entre timol e eugenol, demonstrou efeito sinérgico em todas as concentrações testadas; os tratamentos associando timol + carvacrol e eugenol + carvacrol resultou em efeito sinérgico a partir da concentração de 5,0 mg/mL. Nos testes in vitro com ninfas, a associação entre timol + eugenol apresentou efeito sinérgico a partir da concentração de 5,0 mg/mL; a associação entre timol + carvacrol resultou em efeito sinérgico na concentração de 10,0 mg/mL, enquanto nos tratamentos com a associação de carvacrol + eugenol, foi observado sinergismo moderado nas concentrações de 5,0; 7,5 e 10,0 mg/mL. A associação das substâncias possibilitou menor uso para alcançar mortalidade superior a 95% nos testes in vitro, resultando em redução custo. Em condições de semi-campo a eficácia das associações foi de 63,2% para associação timol + eugenol e 42,6% na associação de carvacrol + eugenol. Assim, concluímos que dependendo da concentração, as associações binárias entre timol, carvacrol e eugenol apresentam efeito sinérgico sobre estágios imaturos de A. sculptum, propiciando redução de concentrações e de custo. As associações timol + eugenol e carvacrol + eugenol também foram capazes de reduzir o número de larvas na vegetação. His study aimed to evaluate whether the associations between thymol, carvacrol and eugenol on the immature life stages of Amblyomma sculptum have a synergistic effect, by means of in vitro test and under semi field conditions, as well as to evaluate the cost-benefit ratio of formulations. To assess the synergism, the substances were tested in vitro in isolation and associated at concentrations of 0.3125; 0.625; 1.25; 2.5; 5.0 and 10.0 mg/mL on non-fed larvae; and 2.5; 3.75; 5.0; 7.5; 10.0; 15.0 and 20 mg/mL on non-fed nymphs. For the test in semi field conditions, the two associations that obtained the best efficacy in in vitro tests were selected for application on plots of Panicum maximum artificially infested with A. sculptum larvae. In in vitro tests with larvae, the association between thymol and eugenol demonstrated synergistic effect at all tested concentrations; treatments associating thymol + carvacrol and eugenol + carvacrol demonstrated synergistic effect at a concentration of 5.0 mg/mL. In in vitro tests with nymphs, the association between thymol + eugenol showed synergistic effect at a concentration of 5.0 mg/mL; the association between thymol + carvacrol resulted in a synergistic effect at a concentration of 10.0 mg/mL while treatments with the association of carvacrol + eugenol showed moderate synergism at concentrations of 5.0; 7.5 and 10.0 mg/mL. The association of the substances allowed lower use to achieve mortality rates higher than 95% in in vitro tests, resulting in cost reduction. In semi field conditions the efficacy of the associations was 63.2% for thymol + eugenol association and 42.6% for carvacrol + eugenol association. Thus, depending on concentration, synergistic effects of binary associations between thymol, carvacrol and eugenol were observed for immature stages of A. sculptum, in addition to allowing cost reduction with the active principle for formulation development.

A nanotecnologia tem sido aplicada no controle de parasitos e hospedeiros intermediários de agentes etiológicos de doenças globais e tropicais negligenciadas, tal como a esquistossomose. O parasito Schistosoma mansoni é o agente etiológico desta doença no Brasil, e caramujos Biomphalaria spp. atuam como hospedeiro intermediário. O uso de nanomateriais (NMs) como agentes moluscicidas é promissor devido às suas propriedades específicas que permitem a internalização, maior reatividade e especificidade ao caramujo, além da facilidade de produção, e possibilidade de retirada do ambiente. Neste sentido, o objetivo deste trabalho foi avaliar a potencial atividade moluscicida das nanopartículas de óxido de ferro (NOFs) funcionalizadas com ácido glucônico no caramujo Biomphalaria glabrata. Inicialmente, uma análise bibliométrica associada à uma revisão sistemática da literatura identificou que diferentes NMs foram capazes de induzir estresse oxidativo, genotoxicidade, mutagenicidade, embriotoxicidade, toxicidade reprodutiva e transgeracional, imunotoxicidade, mortalidade e alterações comportamentais em diferentes espécies de gastrópodes. Em relação aos bioensaios, após exposição crônica (28 dias) de B. glabrata a diferentes concentrações de NOFs e FeCl3 (1,0; 2,5; 6,2 e 15,6 mg L-1), foi evidenciado alta bioacumulação de ferro das NOFs na massa visceral do caramujo em comparação com os íons de ferro e o grupo controle. Da mesma forma, observou-se alta frequência de alterações de comportamento dos caramujos expostos as NOFs quando comparados a sua contrapartida iônica e ao grupo controle. Ambas as formas de Fe reduziram a fecundidade dos caramujos, enquanto a mortalidade e a fertilidade reduzida foram observadas somente após a exposição as NOFs a 15,6 mg L-1. Os resultados gerais indicaram alterações comportamentais e toxicidade reprodutiva associados à bioacumulação das NOFs em B. glabrata. Este estudo enfatiza que as nanopartículas à base de metal são potenciais agentes moluscicidas. Nanotechnology has been applied to control parasites and intermediate hosts of etiologic agents of neglected global and tropical diseases, such as schistosomiasis. The parasite Schistosoma mansoni is the etiological agent of this disease in Brazil, and snails Biomphalaria spp. act as intermediate host. The use of nanomaterials (NMs) as molluscicidal agents is promising due to their specific properties that allow internalization, greater reactivity and specificity to the snail, in addition to the ease of production, and the possibility of removal from the environment. In this sense, the aim of this work was to evaluate the potential molluscicidal activity of gluconic acid - functionalized iron oxide nanoparticles (IONPs) in the snail Biomphalaria glabrata. Initially, a bibliometric analysis associated with a systematic review of the literature identified that different NMs were able to induce oxidative stress, genotoxicity, mutagenicity, embryotoxicity, reproductive and transgenerational toxicity, immunotoxicity, mortality and behavioural changes in different species of gastropods. Regarding bioassays, after chronic exposure (28 days) of B. glabrata to different concentrations of IONPs and FeCl3 (1.0; 2.5; 6.2 and 15.6 mg L-1), a high bioaccumulation of iron by IONPs in visceral mass of the snail compared to the iron ions and the control group was observed. Likewise, there was a high frequency of behavioural changes in snails exposed to IONPs when compared to their ionic counterpart and to the control group. Both forms of Fe reduced fertility, while mortality and reduced snail’s fertility were observed only after exposure to IONPs at 15.6 mg L-1. The general results indicated behavioural impairments and reproductive toxicity, associated with the bioaccumulation of IONPs in B. glabrata. This study emphasizes that metal-based nanoparticles are potential molluscicidal agents. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Goiás

Rhipicephalus microplus é um dos principais ectoparasitos de importância econômica de bovinos nas regiões tropicais e subtropicais, causando queda da produção leiteira e transmissão de agentes patogênicos da Tristeza Parasitária Bovina (TPB). Por isso, constantes estudos sobre esquemas de tratamentos para controle do parasito são necessários para minimizar os prejuízos que acompanham as infestações por este artrópode. Desta maneira, o presente estudo teve como objetivo a comparação entre dois métodos de controle de R. microplus, o método estratégico e o método seletivo, em rebanhos de bovino leiteiro, visando fornecer sustentação às orientações técnicas sobre o método de controle mais eficiente sobre a carga parasitária. No método estratégico foram realizados sete tratamentos com acaricidas de pulverização, a cada 21 dias, iniciados em novembro. No método seletivo foram realizados tratamentos com acaricidas apenas nos animais que apresentavam uma infestação igual ou superior a 40 fêmeas ingurgitadas. Somente 5% dos animais submetidos ao método seletivo receberam tratamento em novembro. As médias de contagens de carrapatos foram menores no método estratégico em relação ao método seletivo, em dezembro. O pico máximo de infestação ocorreu em janeiro, em ambos os métodos de controle, persistindo até fevereiro. Nenhum animal do método estratégico apresentou infestação superior a 40 fêmeas ingurgitadas em março. No entanto, a carga parasitária em ambos os métodos de controle foi similar em uma segunda avaliação no mês de março. As médias de contagens no método estratégico foram menores nos meses de abril (10,9) e maio (16,9) em comparação às médias observadas no método seletivo de 56,3 e 48,4. Foi necessária a realização de tratamentos táticos no método estratégico, após o esquema de tratamentos, em até 16,7% dos animais em abril e até 50,0% em maio, enquanto no método seletivo, os tratamentos variaram de 42,8 a 88,8% em abril e em maio variou de 28,6 a 75,0%. A contagem total de R. microplus foi de 5.036 fêmeas ingurgitadas no método estratégico, enquanto o método seletivo apresentou contagem de 13.829 fêmeas ingurgitadas, no período de estudo. Portanto conclui-se que o esquema de tratamentos para controle de R microplus interferiu significativamente na carga parasitária das vacas em lactação, favorecendo a manutenção de níveis aceitáveis de parasitismo quando implementado o método estratégico de controle do carrapato em comparação à adoção do método seletivo. Rhipicephalus microplus is one of the main ectoparasites of economic importance for cattle in tropical and subtropical regions, causing drop in milk production and transmitting pathogenic agents such as Anaplasma and Babesia. Therefore, constant studies on treatment schemes for parasite control are necessary to minimize the damage and losses that follow infestations by this arthropod. In this way, the present study aimed to compare two methods for R. microplus control, the strategic method and the selective method, in dairy cattle herds, aiming to provide support to the technical guidelines on the most efficient control method of the parasitic load. In the strategic method, seven treatments with spray acaricides were carried out every 21 days, starting in November. In the selective method, treatments with acaricides were performed only on animals that had an infestation equal to or greater than 40 engorged females. Only 5% of animals submitted to the selective method received treatment in November. The average of tick counts was lower in the strategic method compared to the selective method, in December. The maximum peak of infestation occurred in January, in both control methods, with no significant difference, persisting until February. No animal of the strategic method had an infestation greater than 40 engorged females in March. However, the parasitic load in both control methods was similar in the second evaluation in March. The averages of counts in the strategic method were lower in the months of April (10.9) and May (16.9) compared to the averages observed in the selective method (56.3 and 48.4). Yet, it was necessary to carry out tactical treatments in the strategic method, after the treatment scheme, in up to 16.7% of the animals in April and up to 50.0% in May, while in the selective method, the treatments varied from 42.8 to 88.8% in April and in May it varied from 28.6 to 75.0%. The total count of R. microplus was 5,036 engorged females in the strategic method, while in the selective method there were 13,829 engorged females in the study period. Therefore, it is concluded that the treatment scheme for control of R. microplus significantly interfered in the parasitic load of dairy cows, favouring the maintenance of acceptable levels of parasitism when the strategic method of tick control was implemented compared to the adoption of the selective method.

O conhecimento da dinâmica populacional nos permite estudar as variações na abundância das populações de seres vivos. O conhecimento da abundância de carrapatos que parasitam os bovinos em lactação em uma determinada região é importante quando se considera os danos diretos que estes ectoparasitos causam e suas capacidades de transmitir agentes patogênicos para os animais. Assim, o objetivo do presente estudo foi caracterizar a dinâmica populacional de Rhipicephalus microplus em bovinos leiteiros mestiços naturalmente infestados, mantidos em sistema de pastejo rotacionado, durante 12 meses, em uma propriedade com climatologia regional tropical semiúmido no estado de Goiás. Para isso, semanalmente os bovinos selecionados tiveram os carrapatos fêmeas contado (4,5 a 8,0 mm). Também foi realizado quinzenalmente a técnica de arraste com flanela na pastagem para captura e posterior contagem das larvas de R. microplus. Os dados meteorológicos foram coletados durante o estudo para serem utilizados em análises de regressões e variância. Com base no delineamento experimental utilizado, foi possível observar o aumento no número de gerações do carrapato durante o experimento, para cinco gerações durante o ano. Observou-se, ainda, que as variáveis climáticas como umidade, temperatura e pluviometria teve relação direta com a quantidade de larvas presentes na pastagem (P>0,05). O número de larvas presente nas pastagens apresentou correlação negativa significativa (P≤0,05) com a precipitação pluviométrica (P=0,0001), temperatura ambiente (P=0,0005) e umidade relativa do ar (P=0,0120). Por outro lado, as contagens médias de partenógenas presentes no corpo dos animais, não apresentaram correlação significativa (P>0,05) com os parâmetros climatológicos. Em síntese, foi possível constatar a presença de cinco gerações/ano de R. microplus na região tropical semiúmido, além de influência das variáveis climáticas sobre a fase não parasitária do carrapato bovino. Tais resultados relacionam-se com os aspectos biológicos, ecológicos, populacionais e comportamentais de R. microplus, permitindo nos auxiliar a traçar um perfil epidemiológico na região e definir estratégias futuras de manejo e controle deste ectoparasito de bovinos. The knowledge of population dynamics allows us to study the variations in the abundance of populations of living beings. Knowledge of the abundance of ticks that parasitize lactating cattle in a given region is important when considering the direct damage that these ectoparasites cause and their ability to transmit pathogens to animals. The aim of the present study was to characterize the population dynamics of Rhipicephalus microplus in naturally infested mestizo dairy cattle maintained in a rotational grazing system for 12 months in a semi - humid tropical region in the state of Goiás. the selected cattle had the female ticks counted (4.5 to 8.0 mm). A flannel-dragging technique was also carried out in the pasture for the capture and subsequent counting of R. microplus larvae. The meteorological data were collected during the study to be used in regression and variance analyzes. Based on the experimental design used, it was possible to observe the increase in the number of tick generations during the experiment, for five generations during the year. It was also observed that the climatic variables such as humidity, temperature and rainfall had a direct relation with the amount of larvae present in the pasture (P> 0.05). The number of larvae present in pastures presented significant negative correlation (P≤0.05) with rainfall (P = 0.0001), ambient temperature (P = 0.0005) and relative humidity (P = 0.0120). On the other hand, the average parthenogenic counts in the animals' body did not show a significant correlation (P> 0.05) with the climatological parameters. In summary, it was possible to verify the presence of five generations / year of R. microplus in the tropical semi-humid region, besides the influence of the climatic variables on the non-parasitic phase of the bovine tick. These results are related to the biological, ecological, population and behavioral aspects of R. microplus, allowing us to help map an epidemiological profile in the region and to define future strategies for the management and control of this ectoparasite of cattle. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Rhipicephalus sanguineus sensu lato, também conhecido como “carrapato marrom do cão”, parasita preferencialmente o cão doméstico, no entanto pode parasitar inúmeras outras espécies mamíferas inclusive seres humanos. Este carrapato demonstra um comportamento de busca ativa por seu hospedeiro, sendo amplamente atraído pelo latido e pelo CO2 e outros sinais relacionados a presença de seus hospedeiros. Apesar de parasitar preferencialmente cães sabe-se que algumas raças como o beagle são menos parasitadas que outras raças como Cocker spaniel inglês que podem apresentar uma carga parasitaria cerca de até 11,5 vezes maior que cães mestiços. É notável a capacidade de carrapatos e demais artrópodes tem em selecionar seus hospedeiros em relação a características desejáveis ou indesejáveis que conseguem perceber destes, por meio da quimiorrecepção de compostos voláteis emanados pelos hospedeiros. A esta ferramenta adaptativa damos o nome aposematismo olfativo que é capacidade de um de parasito em evitar seus hospedeiros mediante a percepção de um químico emanado por este que sinalize uma resposta adaptava negativa ao artrópode. Geralmente esta resposta pode estar ligada a fatores imunes, excesso de grooming ou inacessibilidade ou demais fatores. Um dos grandes problemas na atualidade sem dúvida e o controle de carrapatos e doenças que são transmitem a seus hospedeiros durante o repasto sanguíneo. Uma das alternativas para o controle de parasitismo afim de dissuadir os carrapatos da busca por seus hospedeiros é uma utilização de compostos encontrados em hospedeiros resistentes que são interpretados por estes artrópodes como não hospedeiros. Estes compostos demonstram atividade mais especifica entre artrópode parasitos e seus hospedeiros, pois foram selecionados durante uma adaptação entre espécies envolvidas nesta relação parasitohospedeiro forjando bases da seleção de parasitos por hospedeiros suscetíveis e resistentes. Rhipicephalus sanguineus sensu lato, the "brown dog tick", preferentially parasite the domestic dog, in the latter can parasite others mammals species including humans. This tick demonstrates a hunting behavior by its host, being widely attracted by the bark and the CO2 among other signs related to the presence of its hosts. Despite being commonly found parasite on dogs, it is known that some breeds such as beagles are less parasitic than other breeds like English Cocker Spaniel which can present a parasitic load about up to 11.5 times higher than mongrel dogs. It is notable a capacity of ticks and other arthropods in their hosts in relation to desirable or undesirable characteristics that can perceive these by means of chemoreception of volatile compounds emanated by these hosts. This adaptive tool is called olfactory aposematism. Olfactory apostotism is capable of an ectoparasite in avoiding its hosts through a perception of a volatile chemical emanated by it that signals a negative adaptive response to the arthropod. Usually this response may be linked to immune factors, excessive grooming, inaccessibility or other factors. One of the big problems nowadays undoubtedly is the control of ticks and diseases that are transmitted to their hosts during the blood repast. One of the alternatives for control of parasitism in order to deter ticks from the search for their hosts is a use of compounds found in resistant hosts that are interpreted by these arthropods as non-hosts. These compounds demonstrate a more specific activity between arthropod parasites and their hosts, since they were selected during an adaptation between species involved in this parasite-host relationship forging bases of parasite selection by susceptible and resistant hosts. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

As doenças parasitárias associadas aos bovinos são responsáveis por grandes prejuízos às pecuárias de corte e leiteira. Dentre estas doenças destaca-se a eimeriose, cujos agentes são protozoários pertencentes ao filo Apicomplexa, classe Coccidia e gênero Eimeria. Esta impacta os sistemas de produção principalmente na forma subclínica, responsável por reduções consideráveis no desempenho zootécnico dos animais. A presente pesquisa visou determinar a frequência do parasitismo das espécies de Eimeria spp. em diferentes categorias pertencentes aos rebanhos bovinos de corte e leiteiro no estado de Goiás e também avaliar a eficácia do uso da lasalocida sódica contra espécies de Eimeria spp. parasitando bezerros, aliada à análise do desenvolvimento ponderal dos animais submetidos ao tratamento e ainda analisar alguns fatores epidemiológicos capazes de interferir na infecção. Com o intuito de analisar a variação dos níveis de infecção, foram avaliados animais naturalmente infectados. A quantidade de oocistos do parasito presentes nas amostras fecais foi expressa em oocistos por grama (OoPG) de fezes e a diferenciação das espécies conduzida com auxílio de um microscópio de luz com sistema computadorizado LAS Leica®, considerando-se as características fenotípicas dos agentes. Parasitic diseases associated with cattle are responsible for losses in beef and dairy livestock. Among those diseases eimeriosis stands out, whose agents are protozoans from the phylum Apicomplexa, class Coccidia and genus Eimeria. It impacts the production systems mostly in its subclinical form, responsible for considerable reductions in the zootechnical performance of the animals. This research aimed to determinate the frequency of the parasitism of Eimeria species in different categories in the beef and dairy livestock in the state of Goiás and evaluate the efficacy of sodic lasalocid against Eimeria spp. in calves, allied to the analysis of the ponderal development of treated animals and the analysis of some epidemiological factors able to interfere in the infection. To analyze the levels of the infection, naturally infected animals were evaluated. The amount of oocysts from the parasite in fecal samples were expressed in oocyst per gram of feces (OoPG) and the species differentiation were conducted by microscope with computerized system LAS LEICA®, considering the agents phenotypical characteristics. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

O presente estudo investigou a virulência de Metarhizium spp., Beauveria bassiana e Isaria javanica contra larvas de Musca domestica; comparou também a virulência de diferentes propágulos fúngicos, e avaliou a eficácia de matrine, um alcaloide vegetal, e sua associação com fungos entomopatogênicos contra larvas de M. domestica. Além disso, o estudo relata a viabilidade conidial e o crescimento radial de diferentes isolados fúngicos em meio de cultura suplementado ou não com matrine. Nesse sentido, conídios produzidos em meio BDAL foram suspensos em Tween 80 a 0,01% e ajustados a 1 × 108 conídios/mL e espalhados em papel filtro para o tratamento indireto de larvas de terceiro ínstar de M. domestica. A eficácia do tratamento dos isolados de Metarhizium spp. variou entre 77,44% (IP 119) e 87,35% (IP 146). A eficácia do tratamento variou de 39,37%(ARSEF 9588) e 70,60% (IP 361) entre os isolados de B.bassiana, e variações entre 26,75% (CG 1316) e 53,28% (CG 1283) foram observadas em grupos tratados com isolados de I. javanica. Conídios e blastosporos de IP 146 (Metarhizium robertsii) e IP 361(Beauveria bassiana) foram produzidos em meio Ádamek, em seguida foram preparadas suspensões e estas ajustadas para 1 × 108 propágulos/mL. Tratamentos indiretos foram conduzidos espalhando-se a suspensão em papel filtro estéril ou em rações para avaliar a virulência em larvas de terceiro ou segundo ínstar de M. domestica, respectivamente. Apenas o tratamento com blastosporos IP 146 em ração foi eficaz contra larva de M. domestica. Larvas de M. domestica também foram imersas em soluções contendo matrine (tratamento direto) ou expostas a papel filtro estéril tratado com matrine (tratamento indireto) em diferentes concentrações (1, 5, 10 e 20 mg / mL); dez larvas foram utilizadas em cada tratamento e grupo de controle. Para ambos tratamentos concentrações de matrine superiores a 1 mg/mL foram eficazes contra larvas de M. domestica. A germinação de conídios dos isolados de Metarhizium spp., B. bassiana e I. javanica foi avaliada em 24 e 48 horas sobre meio BDAL acrescido de cloranfenicol e benomil, e suplementado ou não (controle) com matrine (2%). Todos os isolados tiveram germinação em torno de 100%, em ambos os tempos de incubação avaliados. O crescimento radial de isolados também foi avaliado em meio BDAL suplementado ou não (controle) com matrine. Nesse estudo, os isolados de Metarhizium spp. e B. bassiana, com exceção de CG 138, tiveram crescimento radial reduzido em meio contendo matrine. Os isolados de I. javanica, no entanto, não reduziram seu crescimento quando expostos à matrine em meio de cultura. Foi investigada a associação de fungos entomopatogênicos [IP 119 (Metarhizium anisopliae s.s.), CG 307 (Beauveria bassiana) ou CG 1285 (Isaria javanica)] com matrine (1; 0,5; 0,1; 0,05; 0,01 mg/mL) contra larvas de M. domestica. Em testes indiretos em papel filtro estéril, a associação de conídios fúngicos e matrine foi mais eficaz contra larva de M. domestica do que conídios apenas, e a associação foi mais eficiente do que matrine sozinho. Todos os experimentos foram incubados a 27 ± 1 oC e UR ≥ 80%. Concluindo, Metarhizium sp. é indicado como um agente microbiano promissor para controlar larvas de M. domestica; também, blastosporos do isolado IP 146 aplicados à ração foram eficazes no controle de larvas de segundo instar. Além disso, o alcaloide matrine foi eficaz para controlar larvas de M. domestica; não afetou a viabilidade dos conídios dos fungos investigados neste estudo, mas retardou o crescimento da maioria dos isolados de Metarhizium e Beauveria testados. O crescimento radial de isolados de Isaria sp. não foi afetado pela suplementação de meio com matrine. Não houve aumento da eficácia contra larva de M. domestica quando fungos foram associados ao matrine. The current study investigated the virulence of Metarhizium spp., Beauveria bassiana and Isaria javanica against Musca domestica larva; it also compared the virulence of different propagules, and evaluated the efficacy of matrine, a plant alkaloid, and the association of matrine and entomopathogenic fungi against larvae of Musca domestica. In addition, the study reports the conidial viability and radial growth of different fungal isolates in culture medium supplemented or not with matrine. Conidia produced on BDAL medium were suspended in Tween 80 0.01% and adjusted to 1 × 108 conidia / mL, and spread on filter paper for indirect treatment of third-instar larvae of M. domestica. The efficacy of treatment ranged from 77,44% (IP 119) to 87,35% (IP 146) among Metarhizium spp. isolates. The efficacy of treatment ranged from 39,37% (ARSEF 9588) to 70,60% (IP 361) among the isolates of B.bassiana; variations between 26,75% (CG 1316) and 53,28% (CG 1283) was reported in groups treated with isolates of I. javanica. Conidia and blastospores of fungi were produced on Adamek medium, and suspensions were prepared and adjusted to 1 × 108 propagules/mL. Aliquots were used in indirect treatments by spreading the suspension to sterile filter paper or to comminuted ration to evaluate virulence in third or second instar larvae, respectively. Only the treatment with IP 146 blastospores in ration was effective against M. domestica larva. Larvae were immersed on matrine solutions (direct treatment) or exposed to sterile-filter paper treated with matrine (indirect treatment) in different concentrations (1, 5, 10 and 20 mg/mL). Ten larvae were assayed in each treatment and control group. Matrine concentrations higher than 1 mg/mL were effective against M. domestica larva in both treatments. Germination of conidia of Metarhizium spp., B. bassiana and I. javanica isolates was assessed at 24 and 48 honto BDAL medium plus chloramphenicol and benomyl, supplemented or not (control) with matrine. All isolates had germination around 100%, in both incubation times evaluated. In addition, the radial growth of isolates was evaluated on BDAL medium supplemented or not (control) with matrine. The isolates of Metarhizium spp. and B. bassiana, with the exception of CG 138, had a reduced radial growth on medium containing matrine. Isolates of I. javanica did not reduce their growth when exposed to matrine. The association of entomopathogenic fungi [IP 119 (Metarhizium anisopliae s.s.), CG 307 (Beauveria bassiana) or CG 1285 (Isaria javanica)] with matrine (1; 0,5; 0,1; 0,05; 0,01 mg/mL), was investigated against larva of M. domestica in indirect tests on sterile filter paper. The association of fungal conidia and matrine was more efficient against M. domestica larva than conidia, and the association was more efficient than matrine alone. All experiments were incubated at 27 ± 1 oC and RH ≥ 80%. In conclusion, Metarhizium sp. is indicated as a promising microbial agent to control larva of M. domestica; also, IP 146 blastospores applied to ration were effective in the control of second instar larvae. In addition, the alkaloid matrine was effective to control M. domestica larva; it did not affect the viability of the conidia of the fungi investigated in this study, but it slowed down the growth of most of the Metarhizium and Beauveria isolates tested. Radial growth of isolates of Isaria sp. was not affected by supplementation of medium with matrine. No increased efficiency against M. domestica larva was detected when fungi was associated with matrine. Conselho Nacional de Pesquisa e Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

Dentre os vários parasitos que podem ser encontrados na linha de abate da espécie bovina, é notório que a cisticercose é a de maior frequência. Além de ser uma zoonose e um problema de saúde pública, ainda causa grandes prejuízos econômicos na cadeia produtiva de carnes do Brasil. Por outro lado a fasciolose, também considerada uma zoonose, possui uma menor ocorrência quando comparada à cisticercose, fato que pode estar atribuído a sua dinâmica epidemiológica. Visando conhecer o nível de infecção destas zoonoses no rebanho bovino goiano, realizou-se este trabalho com o objetivo de determinar a prevalência e a distribuição espacial, além de avaliar a associação de algumas variáveis epidemiológicas com a ocorrência destas enfermidades nos animais e estimar as perdas econômicas causadas aos produtores e indústrias. Foi realizado um estudo do tipo retrospectivo referente a um total de 23.255.979 animais abatidos agrupados por ano, mesorregiões e microrregiões de Goiás. Os dados foram utilizados para criar um mapa epidemiológico da cisticercose bovina e um mapa epidemiológico da fasciolose bovina abrangendo todos os municípios goianos. A prevalência de cisticercose bovina no estado de Goiás foi de 0,53% (IC 95% 0,5295 – 0,5354), sendo a porcentagem de cisticercose viável 42,31% e cisticercose inviável 57,69% e a prevalência de fasciolose bovina de 0,0026% (IC 95% 0,0024 – 0,0028). A mesorregião Centro apresentou maior chance (OR = 4,44) de encontrar bovinos positivos para a cisticercose quando comparada as mesorregiões Norte (OR = 1) e Nordeste (OR = 1,02), enquanto as mesorregiões diagnosticadas com chances mais elevadas de se encontrar animais com fasciolose, porque continham maior rebanho efetivo (p ≤ 0,05) foram a Noroeste, Sul, parte da região Centro e dois municípios da região Leste do estado. As perdas estimadas para o período analisado, de 2007 a 2014, foram de R$ 64.809.817,50 reais (US$ 20.574.545,24 dólares) devido à presença da cisticercose no rebanho e cerca de R$ 15.072,75 reais (US$ 4.785 dólares) devido à presença de Fasciola hepatica no fígado de bovinos. Os resultados encontrados neste trabalho destacam a importância de se realizar medidas e ações políticas estratégicas na tentativa de controlar a disseminação destas importantes zoonoses. Amongst the several parasite-diseases that may be found on the bovine species slaughter line, cysticercosis surely is the most frequent one. Besides being a zoonosis and a public health issue, it also causes great economic losses on the Brazilian meat productive chain. On the other hand, fasciolosis, also considered a zoonosis, has a lower occurrence when compared to cysticercosis, fact that may be due to its epidemiologic dynamics. Aiming to learn the level of infection of these zoonosis in the bovine herd of the state of Goiás, this project was undertaken with the scope of determining the prevalence and spatial distribution, as well to evaluate the association with some epidemiologic variables with the occurrence of these diseases and also to estimate economic losses inflicted on the producers and industries. A retrospective study was carried out on a total of 23.255.979 animals slaughtered per year, mesoregions and microregions. The data were used to create one epidemiologic map for bovine cysticercosis and one for bovine fasciolosis, gathering all cities of the state of Goiás. A prevalence of bovine cysticercosis on the state of Goiás of 0,53% (CI 95% 0,5295 – 0,5354), where the percentage of viable cysticercosis was 42,31%, non-viable cysticercosis 57,69% and the presence of bovine fasciolosis was de 0,0026% (CI 95% 0,0024 – 0,0028). The mesoregion Centro presented a greater chance (OR = 4,44) of finding positive cattle for cysticercosis when compared to the mesoregions Norte (OR = 1) and Nordeste (OR = 1,02), whilst the mesoregions diagnosed with greater chances of finding animals positive for fasciolosis, due to having a greater effective herd (p ≤ 0,05), were Noroeste, Sul, part of the region Centro and two cities of the region Leste of the state. The losses estimated for the evaluated period, from 2007 to 2014, ranged from R$ 64.809.817,50 (US$ 20.574.545,24) due to the presence of cysticercosis, and around R$ 15.072,75 (US$ 4.785) due to the presence of Fasciola hepatica in bovine liver. Such results outline the importance of developing strategic measures and action policies to try and control the spreading of these relevant zoonosis.

Amblyomma sculptum, pertencente ao complexo A. cajennense, parasita humanos, animais domésticos e silvestres. Apresenta importância mundialmente reconhecida na saúde pública e animal por espoliar seus hospedeiros e transmitir patógenos causadores de doenças, como Rickettsia rickettsii agente de Febre Maculosa no Brasil. Os carrapatos orientam-se por estímulos químicos detectados por seus órgãos sensoriais, como o órgão de Haller, localizado no primeiro par de patas, que possui sensilas olfativas capazes de detectarem moléculas voláteis, como os odores. No interior destas sensilas há neurônios que se projetam para os lobos olfativos, organizados em glomérulos, no interior do singânglio, o sistema nervoso central. Em carrapatos, pouco se sabe sobre como a percepção da informação olfativa é integrada no singânglio e esta compreensão permitiria obter mais detalhes sobre a biologia, contribuindo para o desenvolvimento de novas tecnologias de controle. Objetivou-se verificar a integração entre o órgão de Haller e o singânglio por meio da determinação dos padrões de projeção neuronal das sensilas olfativas aos lobos olfativos e da reconstrução tridimensional dos glomérulos. Machos e fêmeas adultos de A. sculptum foram imobilizados, o órgão de Haller seccionado e o nervos olfativos corados com dextran tetrametilrodamina 1%. Os singânglios foram dissecados em PBS, fixados em paraformaldeído 4%, lavados em PBST e PBS, desidratados em séries ascendente de etanol e montados em lâminas com glicerol. Os singânglios foram observados em microscópio de fluorescência Axio Scope.A1 para determinar aqueles onde houve projeção. Os lobos olfativos corados foram digitalizados em microscópio confocal a laser TCS SP8 e as séries de imagens confocais foram avaliadas no programa Reconstruct. Selecionaram-se os lobos olfativos de um macho e três fêmeas para identificação dos glomérulos, marcação manual e numeração, com posterior reconstrução 3D. O programa permitiu o cálculo dos volumes glomerulares que foram analisados por correlação de Pearson. As projeções neuronais originadas nas sensilas olfativas do órgão de Haller estiveram confinadas estritamente aos lobos olfativos, organizados em glomérulos. Os glomérulos no macho variaram entre 26 e 30 e nas fêmeas, entre 24 e 29. Macho e fêmeas apresentaram glomérulos similares, denominados homólogos, nos dois lobos olfativos quando comparados intra- e intersexualmente, com correlação positiva entre 72% e 95%. Com relação aos tamanhos e formas, os glomérulos foram similares e não foram identificados macroglomérulos, uma vez que os glomérulos com maiores volumes no macho e nas fêmeas não apresentaram valores superiores a duas vezes o valor da média. O número de indivíduos avaliados não permitiu inferir se a menor quantidade de glomérulo nas fêmeas foi estatisticamente significativa e, portanto, não se pode afirmar se há dimorfismo sexual. Em carrapatos este foi o primeiro trabalho em que se realizou a reconstrução tridimensional dos lobos olfativos. Os resultados obtidos contribuem para o conhecimento do processamento central da informação olfativa em carrapatos. Amblyomma sculptum belongs to Amblyomma cajennense complex and parasites human beings as well domestic and wild animals. This tick species has a world recognized importance in public and animal health due blood expoliation and transmission of some pathogens such as Rickettsia rickettsia, causal agent of Rocky Mountain Spotted Fever in Brazil. Ticks oriented themselves using chemical stimuli perceived by their sensorial organs. The Haller organ, which is localized in the first leg, has olfactory sensilla which perceive volatile molecules, as the odors. Inside of the sensilla there are neurones that project themselves to olfactory lobes in the synganglion, the central nervous system. In ticks, there is a gap in how the perception of the olfactory information is integrated in the synganglion and this comprehension would allow obtain details that could be used to the development of new control strategies. This work aims to verify the integration between the Haller organ and the synganglion by determining its neuronal projection patterns until the olfactory lobes as well accomplish its three-dimensional reconstruction. Males and females of A. sculptum were immobilized and the Haller organ was excised. The olfactory nerves were filled with one drop of dextran tetramethylrhodamine 1%. The synganglions were dissected in saline, fixed in 4% paraformaldehyde, washed in saline and triton X-100, dehydrated in alcohol series and mounted in glicerol. The synganlions were examined in a fluorescence microscope (Axio Scope.A1) to confirm filling from the peripheral neurons to the synganglion. The olfactory lobes stained were digitalized in a confocal microscope TCS SP8 (Leica) and the series were examined in the Reconstruct software. The olfactory lobes of one male and three females were selected to tracing the edges of each glomerulus in successive optical sessions in order to obtain the 3D reconstruction. The volume was calculated using the same software and their correlation was analyzed by Pearson correlation. The neuronal projections from the Haller organ were confined in the olfactory lobes, which were organized in glomeruli. The number of glomeruli in the males was 26 and 30 in each olfactory lobe examined and in the females varied between 24 and 29. Male and females showed similar glomeruli in both olfactory lobes, meaning they are homologues, when compared intra and intersexually, with a positive correlation between 72% and 95%. Considering the volume, the glomeruli were also similar and no macroglomerulus was identified, as any glomerulus in the male and female were two times bigger than the average volume. The number of specimens evaluated does not allow inferring if the lower number of glomeruli in the females was statistically significant. This work shows, for the first time, the 3D reconstruction of the olfactory lobe in a tick species. The results obtained contribute to understand how ticks process their olfactory information. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Foi determinada a soroprevalência em bovinos e os fatores de risco associados à infecção por Leptospira spp. em rebanhos do Sítio Histórico e Patrimônio Cultural Kalunga, localizado nos municípios de Cavalcante, Monte Alegre de Goiás e Teresina de Goiás, estado de Goiás, em área de Cerrado nativo e poucas áreas com pastagens formadas. Foram colhidas amostras sanguíneas de 4.860 bovinos de diferentes raças, faixas etárias e sexo, oriundos de 136 rebanhos predominantemente de corte, sob manejo extensivo. Foi aplicado questionário epidemiológico para identificar os fatores de risco associados à infecção. A determinação de anticorpos anti-Leptospira foi realizada pela técnica de soroaglutinação microscópica. A prevalência de bovinos positivos foi de 44,69%, sendo os sorogrupos Serjoe (sorovares Wolffii e Hardjoprajtino), Tarassovi sorovar Tarassovi e Grippothyphosa sorovar Grippotyphosa os mais frequentes. Foram identificados como fatores de risco para infecção por Leptospira spp. as variáveis região (OR 1,68 – 2,26), sexo (OR 0,47), idade (OR 2,91 – 2,96), presença de cão na propriedade (OR 1,32), contato com animais silvestres [mão pelada (OR 1,17), roedores (OR 1,11) e cateto (OR 1,09)], alimentação (OR 1,3 – 2,56), temperatura média anual (OR 1,36), desvio padrão da temperatura sazonal (anual) da propriedade (OR 1,76), altitude (OR 1,06) e colheita em período chuvoso (OR 1,11) e como fator de proteção a presença de gato na propriedade (OR 1,11). A educação continuada em saúde e medidas higiênico-sanitárias devem ser implementadas para minimizar os efeitos dos fatores de risco identificados neste estudo e reduzir a prevalência da infecção por Leptospira spp. nestes rebanhos. The seroprevalence in bovine was determined the risk factors associated with infection by Leptospira spp. In herds of the Kalunga Historical Site and Cultural Patrimony located in the municipalities of Cavalcante, Monte Alegre de Goiás and Teresina de Goiás, State of Goiás, in the area of Cerrado native and few areas with pastures formed. Blood samples were collected from 4,860 cattle of different races, genre and age groups, from 136 herds predominantly cut, under extensive management. An epidemiological questionnaire was used to identify the risk factors associated with the infection. The determination of anti-Leptospira antibodies was performed by the microscopic serum agglutination technique. The prevalence of positive cattle was 44.69%, with Serjoe serogroups (Wolffii and Hardjoprajtino serovars), Tarassovi serovar Tarassovi and Grippothyphosa serovar Grippotyphosa being the most frequent. Leptospira spp. was identified as a risk factor for infection. (OR 1.68 - 2.26), gender (OR 0.47), age (OR 2.91 - 2.96), presence of dog in the property (OR 1.32), contact with wild animals [Crabeating raccoon (OR 1.17), rodents (OR 1.11) and collared peccary (OR 1.09)], feeding (OR 1.3 - 2.56), mean annual temperature (OR 1.36), standard deviation of the seasonal (annual) temperature of the property (OR 1.76), altitude (OR 1.06) and rainy season harvest (OR 1.11) and as a protection factor the presence of cat in the property (OR 1.11). Continuing education in health and hygienic-sanitary measures should be implemented to minimize the effects of the risk factors identified in this study and reduce the prevalence of Leptospira spp. in these herds. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

Introdução e objetivo: Metarhizum anisopliae é uma das espécies de fungos entomopatogênicos mais estudadas em controle biológico por estar naturalmente associada a carrapatos e por apresentar alta virulência em condições laboratoriais. M. anisopliae é capaz de, sob condições in vitro, formar uma estrutura de resistência denominada microescleródio (ME). Os microescleródios têm-se mostrado mais eficazes do que produtos à base de conídios, quando aplicados diretamente ao solo para o controle de algumas pragas. Assim, o objetivo do presente trabalho consistiu em desenvolver e caracterizar formulação inorgânica peletizada contendo microescleródios de M. anisopliae IP119, avaliar sua estabilidade sob armazenamento a 4ºC e a 40ºC, e determinar sua tolerância à radiação UV-B. Métodos: Foram desenvolvidas e avaliadas seis formulações de pellets compostas por terra diatomácea, vermiculita, silicato de alumínio e magnésio ou dióxido de silício coloidal, de forma isolada ou em combinação. Os pellets foram obtidos pela técnica de extrusão-esferonização e a secagem foi realizada em leito fluidizado com temperatura do ar de saída mantida a 40ºC ou 50ºC. Durante a secagem, em intervalos pré-determinados de tempo, amostras foram coletadas para avaliação da umidade residual, produção e viabilidade de conídios. Além disso, avaliou-se a produção e a viabilidade de conídios após armazenamento dos pellets por 7 a 21 dias. Para a avaliação da tolerância de conídios e pellets contendo ME frente a radiação UV-B, os materiais foram expostos por até 4 horas (irradiância de 541,54 mW/m2) ou 12 horas (irradiância de 1239,23 mW/m2), respectivamente. Resultados e Discussão: Pellets com constituintes totalmente inorgânicos foram obtidos e a formulação selecionada foi àquela composta por vermiculita, terra diatomácea e dióxido de silício coloidal (78:20:2), que apresentou características de rendimento (48%), distribuição de tamanho (431,5 a 758,5 μm), tamanho médio (584,90 μm ± 122,40) e esfericidade (0,75 ± 0,07) adequados. Houve redução considerável da umidade residual entre o tempo 0 (~29%) e 5 minutos de secagem (~6%), e a umidade residual permaneceu estável até o final da operação. Dessa forma, a secagem dos pellets pelo período de 5 minutos a 40ºC ou a 50ºC se mostrou satisfatória. Além disso, os pellets selecionados e secos por leito fluidizado apresentaram produção de conídios sempre superior a 1,7x109 conídios/g de pellets, e a viabilidade dos mesmos foi maior do que 93%, em todos os tempos analisados e para ambas as temperaturas. Houve contaminação dos pellets sob armazenamento a 40ºC após o 7º dia de ensaio, sem diferença de produção (~1,3x109 conídios/g de pellets) e de viabilidade (>94%) dos conídios. Já na temperatura de 4ºC, a produção e a viabilidade dos conídios permaneceram estáveis até o 21º dia de armazenamento. No ensaio de tolerância à radiação UV-B, a DL50 estimada para os conídios de M. anisopliae foi de 5,545 ± 0,059 (kJ/m2), ao passo que para os pellets contendo microescleródios foi observada a manutenção da germinação (>98%) e uma elevada produção de conídios (>1,6x109 conídios/g de pellets). Conclusão: No presente trabalho, foi possível obter, pela técnica de extrusão-esferonização, pellets inorgânicos contendo material fúngico, com manutenção da viabilidade fúngica após secagem e alta tolerância à radiação UV-B, representando grande potencial para uso no controle biológico de artrópodes-praga. Introduction and objective: Metarhizium anisopliae is one of the most studied fungi for biological control, since it is found naturally associated with ticks and has showed high virulence in laboratory conditions. M. anisopliae can form in vitro an overwintering structure called microesclerotia (MS). The microsclerotia have been shown to be more effective than products based on conidia when applied directly to the soil for control of some pests. Thus, the objective of this study was to develop and characterize inorganic pelletized formulations containing microsclerotia of M. anisopliae IP119, assess its stability under storage at 4°C and 40°C and determine its tolerance to UV-B radiation. Methods: Six pellets formulations composed of diatomaceous earth, vermiculite, aluminum magnesium silicate or colloidal silicon dioxide, alone or in combination, were developed and evaluated. The pellets were obtained using the extrusion-spheronization technique and were dried in a fluid-bed dryer with an outlet air temperature kept at 40°C or 50°C. During drying, at pre-determined time intervals, samples were collected for evaluation of the residual moisture content, conidia production and viability. The pellets were also evaluated for their storage stability at 4°C and 40°C. Conidia production and viability were evaluated after storage periods of 7 to 21 days. In addition, UV-B tolerance of the conidia and pellets containing MS was evaluated by exposing them to the artificial light for 4h (irradiance of 541,54 mW/m2) and 12h (irradiance of 1239,23 mW/m2), respectively. Results and Discussion: Inorganic pellets were obtained and the selected formulation was composed by vermiculite, diatomaceous earth and colloidal silicon dioxide (78:20:2), since it showed the best yield (48%), size distribution (from 431.5 to 758.5 μm), average size (584.90 μm ± 122.40) and sphericity (0.75 ± 0.07). There was a considerable reduction of the residual moisture between time 0 (~29%) and 5 minutes (~6%), which remained stable until the end of drying operation. Thus, pellet drying for a 5 minutes period at 40ºC or 50°C resulted in a proper moisture content. Fluid-bed dried pellets presented conidia production always above 1.7x109 conidia/g pellets, with viability > 93%, at all times and for both temperatures. In the pellet storage at 40°C, a contamination was observed after the 7th storage day, without differences in conidia production (~1.3x109 conidia/g of pellets) and viability (> 94%). At 4°C, the conidia production and viability remained stable until the 21th storage day. Regarding the tolerance to UV-B radiation test, the calculated LD50 of M. anisopliae conidia was 5.545 (kJ/m2) ± 0.059. In the exposed pellets containing microsclerotia germination was >98%, and it was observed high conidia production (>1,6x109 conidia/g of pellets). Conclusion: It can be concluded that the inorganic formulation allow to obtain pellets containing fungal material by extrusion-spheronisation technique with maintenance of fungal viability after drying, resulting in a formulation with high UV-B tolerance. This solid platform has a great potential for use in pest biological control. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O objetivo do presente trabalho foi avaliar a atividade carrapaticida do extrato metanólico de Acmella oleracea e do espilantol sobre Rhipicephalus microplus e Dermacentor nitens. O extrato metanólico foi obtido através de maceração com metanol. Desse extrato, foi obtida uma fração diclorometano com 99% de espilantol (que pode ser considerado um composto puro), que também foi testada sobre larvas e fêmeas ingurgitadas de R. microplus e larvas de D. nitens. Para a avaliação da atividade sobre larvas, foi utilizado o teste de pacote de larvas modificados e o extrato metanólico e a fração diclorometano (99% de espilantol) foram testadas em concentrações de 0,2 a 50,0 mg/mL. No teste de tempo letal, também foi utilizado a técnica de pacote de larvas, o extrato metanólico foi usado na concentração de 12,5 mg/mL e a avaliação do percentual de mortalidade foi feita após 15, 30, 45, 60, 75, 90, 120 minutos e 24 horas. Nesse teste foi feito o cálculo de tempo letal 50% (TL50). O teste com fêmeas ingurgitadas foi feito apenas com R. microplus, sendo testadas concentrações de 25 a 200 mg/mL do extrato metanólico e concentrações entre 2,5 a 20,0 mg/mL para o espilantol. O extrato metanólico ocasionou mortalidade de 100% das larvas de R. microplus e D. nitens a partir de concentrações de 3,1 e 12,5 mg/mL, respectivamente. O espilantol resultou em mortalidade de 100% para larvas de R. microplus a partir da concentração 1,6 mg/mL e de 12,5 mg/mL para D. nitens. No experimento de tempo letal, a mortalidade foi de 100% para larvas de R. microplus e D. nitens após 120 minutos e 24 horas, com TL50 de 38 e 57 minutos. No teste com fêmeas, o peso da massa de ovos e percentagem de eclosão dos grupos tratados com concentrações iguais e/ou superiores a 50,0 mg/mL do extrato metanólico apresentaram redução significativa (p> 0,05) em relação ao controle, enquanto o espilantol provocou redução significativa do peso da massa de ovos e percentagem de eclosão em concentrações de 10,0 mg/mL e 2,5 mg/mL, respectivamente. As fêmeas tratadas com 200,0 mg/mL do extrato morreram antes de iniciar o processo de oviposição, resultando em eficácia de 100%, enquanto a melhor eficácia para espilantol foi de 92,9% na concentração de 20,0 mg/mL. Portanto, é possível concluir que o extrato metanólico da A. oleracea e o espilantol apresentam atividade acaricida sobre R. microplus e D. nitens. We evaluate the acaricidal activity of Acmella oleracea methanol extract and spilanthol on Rhipicephalus microplus and Dermacentor nitens. The methanol extract was made through maceration with methanol. From this extract, a dichloromethane fraction with approximately 100% spilanthol was obtained and tested on R. microplus larvae and engorged females and D. nitens larvae. For evaluation against larvae, modified larvae test packages were used, and both methanol extract and the dichloromethane fraction were tested at concentrations of 0.2 to 50.0 mg/mL. The larvae package technique was also used in the lethal time (LT) test, with methanol extract at a concentration of 12.5 mg/mL and the mortality percentage assessment was made after 15, 30, 45, 60, 75, 90, 120 minutes and 24 hours. The lethal time calculation 50% (LT50) was performed in this test. The engorged female test was done with R. microplus only, at concentrations of 25 to 200 mg/mL for methanol extract and 2.5 to 20.0 mg/mL for spilanthol. The methanol extract caused 100% mortality of the R. microplus and D. nitens larvae at concentrations from 3.1 and 12.5 mg/mL, respectively. Spilanthol resulted in 100% mortality for R. microplus larvae at concentration from 1.6 mg/mL and 12.5 for D. nitens. In the lethal time essay using the methanol extract, the mortality rate was 100% for R. microplus and D. nitens larvae after 120 minutes and 24 hours with LT50 of 38 and 57 minutes. In the test of females, the egg mass weight and the hatching percentage of the groups treated with concentrations equal to and/or higher than 100.0 mg/mL of methanol extract showed significant differences (p> 0.05) while spilanthol causes significant reduction of the egg mass weight and hatching percentage at concentrations of 10.0 mg/mL and 2.5 mg/mL, respectively. Females treated with 200.0 mg/mL of extract died before starting the oviposition process, resulting in 100% effectiveness, while the best efficacy for spilanthol was 92.9% at concentration of 20.0 mg/mL. Thus we conclude that the methanol extract of A. oleracea and spilanthol present acaricide activity against R. microplus and D. nitens.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O município mineiro de Juiz de Fora se destaca no contexto epidemiológico por possuir indicadores de vulnerabilidade, como alto número de notificações do estado, com casos ocorrentes no perímetro urbano, que detém elevada densidade populacional, ocupação de áreas limítrofes com fragmento de mata, as quais margeiam áreas confirmadamente endêmicas, possibilitando o intercâmbio de artrópodes vetores com mamíferos hospedeiros. Tais áreas propiciam o desenvolvimento e a manutenção dos ciclos enzoótico e epidêmico para Febre Maculosa. Mediante ao exposto, o objetivo geral deste projeto foi investigar e mapear a relação natural entre espécies de Rickettsia sp. e seus potenciais vetores em cinco regiões de vulnerabilidade do município. Especificamente, objetivaram-se: a determinação da composição da fauna de ectoparasitos potencialmente vetores coletados sobre hospedeiros vertebrados, bem como livres no ambiente; análise do ciclo enzoótico através da detecção de rickettsias por meio de Reação em Cadeia da Polimerase (PCR); a caracterização dos agentes rickettsias por sequenciamento e análises filogenéticas e a avaliação dos aspectos epidemiológicos da rickettsias circulantes, dos vetores e seus hospedeiros vertebrados. Os ectoparasitos foram coletados no período de 2013-2014 em localidades que carecem de informações sobre a manutenção do ciclo de transmissão de rickettsias: Caetés, Igrejinha, Paula Lima, Torreões e Valadares. No total foram coletados e identificados 12.692 ectoparasitos, entre pulgas do gênero Ctenocephalides e carrapatos dos gêneros Amblyomma, Rhipicephalus e Dermacentor, com posterior processamento de 2.379 espécimes de maneira individual ou reunidos em lotes de acordo com localidade, sexo, estádio de desenvolvimento, constituindo 249 amostras. O DNA genômico destas amostras foi extraído e submetido à pesquisa de genes rickettsiais gltA (gênero Rickettsia) e ompA (Grupo da Febre Maculosa-GFM). Foram obtidas 29 amostras positivas, exceto para Caetés; sendo 16 para o gene gltA, com 11 amostras sequenciáveis, e 13 amostras para o gene ompA, com sete sequenciáveis; com destaque para Amblyomma cajennense sendo a espécie mais prevalente e com 4,29% de taxa de infecção mínima. Sequências com 99 e 100% de identidade com a espécie patogênica Rickettsia felis foram diagnosticadas em Ctenocephalides canis e Ctenocephalides felis. E de forma inédita o registro de Rickettsia bellii em Amblyomma dubitatum na Microrregião de Juiz de Fora, apresentando sequências com 97% de homologia. O presente trabalho revela uma maior distribuição geográfica de rickettsias do GFM, incluindo R. felis causadora da rickettsiose felis, na Microrregião de Juiz de Fora. The city of Juiz de Fora, in the Brazilian state of Minas Gerais, stands out in the epidemiologic context for possessing vulnerability indicators, such as a high number of this state´s notifications, with cases occurring in the urban perimeter, which contains an elevated population density, and the occupation of limit areas with forests´ fragments, which have a frontier with confirmed endemic areas, making possible the interchange of arthropod vectors with mammal hosts. Such areas propitiate the development and the maintenance of the enzootic and the epidemic cycles for the Spotted Fever. By the above, the general objective of this project was to investigate and to map the natural relation between Rickettsia sp. Species and its potential vectors in five regions of vulnerability in the city. Specifically, here are the objectives: the determination of the fauna composition for ectoparasites potentially vectors, collected on vertebrate hosts, as well as loose in the environment; analysis of the enzootic cycle through the detection of rickettsias by Polymerase Chain Reaction (PCR); the rickettsias agents characterization through sequencing and phylogenetic analyses and the evaluation of the epidemiologic aspects of the circulating rickettsias, of the vectors and their vertebrate hosts. The ectoparasites were collected in the period of 2013-2014 in places that need information on the maintenance of rickettsias transmission cycle: Caetés, Igrejinha, Paula Lima, Torreões e Valadares. As a total, there were collected and identified 12,692 ectoparasites, among fleas from the gender Ctenocephalides and ticks from the genders Amblyomma, Rhipicephalus and Dermacentor, with a posterior processing of 2,379 specimens in an individual way or gathered in lots according to place, sex, development state, constituting 249 samples. The genomic DNA from these samples was extracted and submitted to research of rickettsiais gltA (gênero Rickettsia) e ompA (Grupo da Febre Maculosa-GFM) genes. There were obtained 29 positive samples, except for Caetés; from which 16 for the gltA gene, with 11 sequenced samples, and 13 samples for the ompA gene, with seven sequenced; especially Amblyomma cajennense as the most prevalent species and with 4.29% of minimal infection rate. Sequences with 99 and 100% of identity with the pathogenic species Rickettsia felis were diagnosed in Ctenocephalides canis and Ctenocephalides felis. And in a surprising way the register of Rickettsia bellii in Amblyomma dubitatum in Juiz de Fora´s Micro-region, presenting sequences with 97% of homology. This paper reveals a bigger geographic distribution of rickettsias from GFM, including R. felis that causes rickettsiosis felis, in Juiz de Fora´s Micro-region. Keywords

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Substâncias de origem vegetal como óleos essenciais e seus componentes têm demonstrado potencial para serem empregados no controle de diferentes pragas, incluindo carrapatos. Entre essas substâncias destacam-se os monoterpenos timol e carvacrol e o fenilpropanóide eugenol, moléculas que já tiveram sua atividade evidenciada sobre os carrapatos Rhipicephalus microplus e Rhipicephalus sanguineus s.l., espécies de grande importância econômica. Apesar da ação isolada dessas substâncias sobre carrapatos ter sido demonstrada in vitro em diferentes trabalhos, até o momento não existem estudos sobre o efeito da combinação das mesmas e relato de possível ação sinérgica sobre ixodídeos. Também são escassos os trabalhos que avaliam a atividade dessas substâncias em ambientes naturais ou semi-naturais, visando controlar carrapatos com ações direcionadas sobre a fase não parasitária. Dessa forma, este estudo teve como objetivos, avaliar os efeitos das combinações dos monoterpenos timol e carvacrol e do fenilpropanóide eugenol sobre larvas de R. microplus e R. sanguineus s.l. e avaliar a atividade carrapaticida do timol sobre larvas de R. microplus em condições semi-naturais. O primeiro capítulo traz os resultados dos efeitos das combinações das substâncias sobre as larvas desses carrapatos e para esse fim, foi utilizado o teste de pacote de larvas. Primeiramente foi feito o cálculo de CL50 e em seguida essas substâncias foram testadas em associação ou isoladas em concentrações subletais. Para larvas de R. microplus foram observados valores de CL50 para o timol, carvacrol e eugenol de 1,53; 1,76 e 4,67 mg/mL, respectivamente, e sinergismo entre todas as nove combinações testadas. Os valores de CL50 do timol, carvacrol e eugenol observados para larvas de R. sanguineus s.l., foram de 2,98; 3,29 e 5,19 mg/mL, respectivamente, sendo esse o primeiro estudo a determinar a CL50 dessas substâncias para R. sanguineus s.l. Para esta espécie, oito misturas apresentaram efeito sinérgico e apenas a combinação de carvacrol+timol na concentração da CL50, apresentou efeito sinérgico moderado. No segundo capítulo foi observado, pela primeira vez na literatura, que o timol ao ser aplicado em mudas de Brachiaria decumbens infestadas artificialmente com larvas de R. microplus foi capaz de reduzir 11 significativamente a infestação por esse carrapato. As maiores concentrações (10, 15, 20, 25 e 30,0 mg/mL) ocasionaram eficácias acima de 95% e os valores encontrados para as CL50 e CL90 foram de 3,45 e 9,25 mg/mL, respectivamente. Conclui-se que associações entre timol, carvacrol e eugenol em concentrações subletais apresentam efeito sinérgico sobre larvas de R. microplus e R. sanguineus s.l. e que o timol apresenta potencial para redução de larvas de R. microplus em condições semi-naturais. Substances of plant origin, such as essential oils and their components have demonstrated the potential to be used to control different pests, including ticks. Among these substances stand out monoterpenes thymol and carvacrol and the phenylpropanoid eugenol, molecules that already had their activity demonstrated against ticks Rhipicephalus microplus and Rhipicephalus sanguineus s.l., species of great economic importance. Despite the isolated action of these substances on ticks has been demonstrated in vitro in different papers, until now there are no studies on the effect of the combination of this substances and report of possible synergistic action on ticks. Also there are few studies that evaluate the activity of these substances in natural and semi-natural environments in order to control ticks with targeted actions on the non-parasitic phase. Therefore, this study aimed to evaluate the effects of combinations of monoterpenes thymol and carvacrol and phenylpropanoid eugenol on larvae of Rhipicephalus microplus and Rhipicephalus sanguineus s.l. and evaluate the insecticidal activity of thymol on larvae of R. microplus in semi-natural conditions. The first chapter presents the results of the effects of combinations of substances on the larvae of these ticks. For R. microplus larvae were observed LC50 values for the thymol, carvacrol and eugenol of 1.53; 1.76 and 4.67 mg/ml, respectively, and synergism between all combinations tested. The LC50 values of thymol, carvacrol and eugenol observed for larvae of R. sanguineus s.l., were 2.98; 3.29 and 5.19 mg/ml, respectively. This is the first work reporting the LC50 values of these three substances against R. sanguineus s.l. For this species, eight combinations showed synergistic effect and only the combination of carvacrol+thymol in the concentration of LC50, showed moderate synergism. In this study it was observed that the larvae of R. microplus were more sensitive to the tested substances and their combinations. In the second chapter it was observed for the first time that thymol when applied in Brachiaria decumbens seedlings artificially infested with larvae of R. microplus was able to significantly reduce the infestation by this tick. The highest concentrations (10, 15, 20, 25 and 30.0 mg/ml) resulted efficiencies above 95% and the values found for the LC50 and LC90 were 3.45 and 9.25 mg/ml, respectively. It is concluded that associations between thymol, eugenol and carvacrol at sublethal concentrations have a synergistic effect on larvae of R. microplus and Rhipicephalus sanguineus s.l. and thymol has the potential for reducing R. microplus larvae in semi-natural conditions.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O presente estudo objetivou avaliar o efeito da combinação entre timol, carvacrol e (E)-cinamaldeido sobre larvas de Amblyomma sculptum e Dermacentor nitens, bem como realizar o primeiro calculo da concentração letal de 50%(CL50) para as espécies alvo e propor adaptações para as categorias qualitativas definidas por Chou (2006) para avaliação de combinações dos compostos ativos. O teste foi realizado por meio da técnica de pacote de larvas modificado e a mortalidade foi avaliada após 24h. Para a determinação da Concentração Letal 50 (CL50) as substâncias foram testadas nas concentrações de 0,62; 1,25; 2,5; 3,75; 5,0 e 7,5 mg/ml, com exceção do teste com o timol sobres larvas de A. sculptum(0,62; 1,25; 2,5; 5,0; 7,5 e 10,0 mg/ml) e nas concentrações de 0,31; 0,62; 1,25; 2,5; 5,0 e 7,5 mg/ml sobre larvas de D. nitens. Após a determinação da CL50, cada substância foi avaliada separadamente e combinada com outra substância na proporção de 1:1 nas concentrações da CL50, 1/2 e 1/4 da CL50. Os grupos foram mantidos em câmara climatizada (27±1°C e UR >80±10%). Para A. sculptum, o menor valor de CL50 foi obtido para o (E)-cinamaldeído 1,40, seguido do timol 2,04 e carvacrol 3,49 mg/ml, sendo observado o mesmo para D. nitens, com valores de 1,68, 2,17 e 3,33 mg/ml, respectivamente. Na avaliação das associações entre as substâncias, para larvas de A. sculptum, apenas a combinação entre carvacrol e timol (CL50) e carvacrol e (E)-cinamaldeído (1/4) apresentaram efeito sinérgico moderado, as demais misturas demonstraram efeito aditivo ou antagônico. Já para larvas de D. nitens as combinações entre timol e carvacrol (1/2 e CL50) apresentaram efeito sinérgico e as demais combinações apresentaram efeito aditivo e antagônico. Conclui-se que as combinações de timol e carvacrol (CL50) têm sinergismo moderado para larvas A. sculptum e timol e carvacrol (1/2 e CL50) tem efeito sinérgico para D. nitens. The objective of this study was to assess the paired combined effect of thymol, carvacrol and (E)-cinnamaldehyde on Amblyomma sculptum and Dermacentor nitens larvae, as well as to carry out the first calculation of the 50% lethal concentration (LC50) for the target species and propose adaptations to the qualitative categories defined by Chou (2006) for assessment of active compounds combinations. The effects of the treatments were evaluated by the modified larval packet test, to measure the mortality after 24 h. To determine the LC50, the substances were tested individually at concentrations of 0.62, 1.25, 2.5, 3.75, 5.0 and 7.5 mg/ml on A. sculptum larvae, except for the test with thymol (0.62, 1.25, 2.5, 5.0. 7.5 and 10.0 mg/ml). For D. nitens, the concentrations tested were 0.31, 0.62, 1.25, 2.5, 5.0 and 7.5 mg/ml for all substances. After determining the LC50, each substance was evaluated separately and in combination with another substance in a 1:1 proportion at the LC50 concentration and 1/2 and 1/4 of the LC50. The groups were kept in a climate-controlled chamber (27±1 °C and RH >80±10%). For A. sculptum, the lowest LC50 value was obtained for (E)-cinnamaldehyde (1.40), followed by thymol (2.04) and carvacrol (3.49 mg/ml). The same order of effectiveness was observed for D. nitens, with values of 1.68, 2.17 and 3.33 mg/ml, respectively. In the evaluation of the associations of substances against A. sculptum larvae, only the combinations between carvacrol and thymol (LC50) and carvacrol and (E)-cinnamaldehyde (1/4 LC50) presented synergetic effect. The other mixtures demonstrated additive or antagonistic effect. In turn, for D. nitens larvae the combinations between thymol and carvacrol (LC50 and 1/2 LC50) presented synergetic effect, while the others presented additive or antagonistic effect. Therefore, it can be concluded that combinations of thymol and carvacrol (LC50) have a moderate synergetic effect against A. sculptum larvae and thymol combined with carvacrol (LC50 and 1/2 LC50) has a synergetic effect against D. nitens larvae.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior As riquetsioses, causadas por organismos do gênero Rickettsia, são zoonoses presentes em todos os continentes. Com exceção de Rickettsia felis e Rickettsia akari associadas, respectivamente, a pulgas e ácaros, riquétsias tem como vetores e/ou reservatórios carrapatos. No Brasil Amblyomma cajennense, Amblyomma aureolatum e Amblyomma ovale são os mais importantes vetores para humanos. O presente estudo teve por objetivo avaliar a circulação de Rickettsia sp. em diferentes regiões da cidade de Juiz de Fora, Minas Gerais, área endêmica para Febre Maculosa. Foram coletados e identificados 5.832 espécimes de potenciais vetores na área urbana do município. A maioria dos locais de coleta tinham casos confirmados de Febre Maculosa. A análise da presença de Rickettsia sp. nas amostras coletadas foi realizada pela PCR quantitativa, utilizando-se oligonucleotídeos para a amplificação do gene ompA, e pela PCR qualitativa, empregada para a detecção dos genes ompA, gltA e htrA. Doze amostras de Amblyomma cajennense, espécie mais frequente nesse estudo, e uma de Rhipicephalus microplus coletada em equino foram positivas, na PCR quantitativa, para a presença de Rickettsia sp. Na PCR qualitativa foi encontrado Amblyomma cajennense, coletado sobre equino, positivo para riquétsia do Grupo febre maculosa. A relação temporal e espacial de A. cajennense com equinos aponta para o ciclo enzoótico de riquétsias envolvendo essas espécies durante atividade dos focos. Sua antropofilia, potencial de transmissão e ocorrência nos focos durante investigação apontam para seu papel como vetor no ciclo antropofílico. Características inerentes ao municipio de Juiz de Fora potencializam a possível circulação de riquétsias na região urbana, permitindo o contato dos diferentes hospedeiros com os carrapatos, aumentando a disseminação deste vetor pelo município. Os resultados indicam a necessidade de implementação da vigilância de ambiente no município de Juiz de Fora em relação à Febre Maculosa, especialmente pelo monitoramente de A. cajennense e cavalos. Rickettsial diseases caused by genus Rickettsia are zoonosis present in all continents. With exception of Rickettsia felis and Rickettsia akari, respectively associated to fleas and mites, the vectors and / or reservoirs of Rickettsia sp. are ticks. In Brazil, Amblyomma cajennense, Amblyomma aureolatum and Amblyomma ovale are the most important vectors to humans. This study aims evaluate the cycles of Rickettsia sp. in different regions of Juiz de Fora, Minas Gerais, Brasil, endemic area of Spotted Fever. Were collected and identified 5.832 specimens of potential vectors in the urban area, primarily in foci. The detection of Rickettsia sp. in the samples was analyzed by quantitative PCR using primers for amplification of ompA gene, and by qualitative PCR, used for detecting fragments of ompA, gltA and htrA. 12 samples of Amblyomma cajennense, species most observed in this study, and one of Rhipicephalus microplus, collected on horses, were positive in the quantitative PCR. A. cajennense, collected on equine, was positive for spotted fever group in the qualitative PCR. The temporal and spatial relationship of A. cjennense and horses indicate the involvement of these species in the enzootic cycle during the major activity of Rickettsia sp. in the foci. The anthropophily, potential of transmission and occurrence in foci, point to the role of this species as a vector in anthropophilic cycle. Inherent characteristics of the municipality can potentiate the circulation of rickettsiae in urban area, increasing the contact of hosts with tick , expanding the spread of this vector. The results indicate the need of implementation of the environmental surveillance to spotted fever in Juiz de Fora, especially by the monitoring of A. cajennense and horses.