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This study investigated the environmental contamination of groundwater as a consequence of the discharge of treated wastewater into the soil. The investigation focused on a wastewater treatment plant located in an area fractured by karst in the Salento peninsula (Apulia, Italy). Water samples were collected at four sites (raw wastewater, treated wastewater, infiltration trench, and monitoring well), monthly from May to December 2019 (with the exception of August), and were tested for (1) panel of bacteria; (2) enteric viruses; and (3) chemical substances. A gradual reduction in the concentration of bacteria, viruses and contaminants of emerging concern was observed across the profile of soil fissured by karst. All monitored bacteria were absent from the monitoring well, except for Pseudomonas aeruginosa. Pepper mild mottle virus and adenovirus were detected at all sampling sites. Personal care products and X-ray contrast media showed the greatest decrease in concentration from infiltration trench to the monitoring well, while the highest residual concentrations in the monitoring well were found for anticonvulsants (78.5%), antimicrobials (41.3%), and antipsychotic drugs (38.6%). Our results show that parameters provided by current law may not always be sufficient to evaluate the sanitary risk relating to the discharge of treated wastewater to the soil.

A total of 476 European isolates (310 Cryptococcus neoformans var. grubii, 150 C. neoformans var. neoformans, and 16 C. gattii species complex) from both clinical and environmental sources were analyzed by multi-locus sequence typing. Phylogenetic and population genetic analyses were performed. Sequence analysis identified 74 sequence types among C. neoformans var. neoformans (VNIV), 65 among C. neoformans var. grubii (56 VNI, 8 VNII, 1 VNB), and 5 among the C. gattii species complex (4 VGI and 1 VGIV) isolates. ST23 was the most frequent genotype (22%) among VNI isolates which were mostly grouped in a large clonal cluster including 50% of isolates. Among VNIV isolates, a predominant genotype was not identified. A high percentage of autochthonous STs were identified in both VNI (71%) and VNIV (96%) group of isolates. The 16 European C. gattii species complex isolates analyzed in the present study originated all from the environment and all belonged to a large cluster endemic in the Mediterranean area. Population genetic analysis confirmed that VNI group of isolates were characterized by low variability and clonal expansion while VNIV by a higher variability and a number of recombination events. However, when VNI and VNIV environmental isolates were compared, they showed a similar population structure with a high percentage of shared mutations and the absence of fixed mutations. Also linkage disequilibrium analysis reveals differences between clinical and environmental isolates showing a key role of PLB1 allele combinations in host infection as well as the key role of LAC1 allele combinations for survival of the fungus in the environment. The present study shows that genetic comparison of clinical and environmental isolates represents a first step to understand the genetic characteristics that cause the shift of some genotypes from a saprophytic to a parasitic life style. © 2019 Elsevier Inc.

Fundamental niche prediction of Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii in Europe is an important tool to understand where these pathogenic yeasts have a high probability to survive in the environment and therefore to identify the areas with high risk of infection. In this study, occurrence data for C. neoformans and C. gattii were compared by MaxEnt software with several bioclimatic conditions as well as with soil characteristics and land use. The results showed that C. gattii distribution can be predicted with high probability along the Mediterranean coast. The analysis of variables showed that its distribution is limited by low temperatures during the coldest season, and by heavy precipitations in the driest season. C. neoformans var. grubii is able to colonize the same areas of C. gattii but is more tolerant to cold winter temperatures and summer precipitations. In contrast, the C. neoformans var. neoformans map was completely different. The best conditions for its survival were displayed in sub-continental areas and not along the Mediterranean coasts. In conclusion, we produced for the first time detailed prediction maps of the species and varieties of the C. neoformans and C. gattii species complex in Europe and Mediterranean area. © 2017 Society for Applied Microbiology and John Wiley & Sons Ltd N8 9313133 We thank Dr. Lockhart (CDC, Atalanta, USA) for critical reading of the manuscript and for his useful comments. Dr. Ferreira-Paim was supported by a CAPES Science without Borders visiting fellow (N8 9313133) from Brazil. We declare we have no conflict of interests.

Fundamental niche prediction of Cryptococcus neoformans and Cryptococcus gattii in Europe is an important tool to understand where these pathogenic yeasts have a high probability to survive in the environment and therefore to identify the areas with high risk of infection. In this study, occurrence data for C. neoformans and C. gattii were compared by MaxEnt software with several bioclimatic conditions as well as with soil characteristics and land use. The results showed that C. gattii distribution can be predicted with high probability along the Mediterranean coast. The analysis of variables showed that its distribution is limited by low temperatures during the coldest season, and by heavy precipitations in the driest season. C. neoformans var. grubii is able to colonize the same areas of C. gattii but is more tolerant to cold winter temperatures and summer precipitations. In contrast, the C. neoformans var. neoformans map was completely different. The best conditions for its survival were displayed in sub-continental areas and not along the Mediterranean coasts. In conclusion, we produced for the first time detailed prediction maps of the species and varieties of the C. neoformans and C. gattii species complex in Europe and Mediterranean area. © 2017 Society for Applied Microbiology and John Wiley & Sons Ltd

Introduzione. Nell'area di Taranto si distinguono due tipi di sorgenti, le prime caratterizzate da portate irrilevanti che originano da falde superficiali localizzate nei depositi calcarenitici e le seconde connesse alla falda acquifera allocata nei calcari del rilievo Murgiano Jonico. Scopo dello studio è stato rilevare gli indici di contaminazione fecale (ICF) nelle acque di sorgente del secondo tipo che sfociano nel Mar Piccolo di Taranto (sede di molluschicoltura) responsabili di malattie oro-fecali. Sono stati ricercati, inoltre, gli agenti eziologici di malattie trasmesse per contatto diretto (Pseudomonas aeruginosa, Pa) o per inalazione (Legionella). Metodi. Sono stati eseguiti 2 campionamenti in 3 zone per la ricerca di: coliformi totali-CT, coliformi fecali-CF, Escherichia coli, Enterococchi, vibrioni (ICF), Pa e Legionella. Per la ricerca di CT, CF, E.coli è stato eseguito il metodo Most Probable Number, per gli enterococchi e Pa le procedure riportate rispettivamente nei Rapporti ISTISAN 07/5 ISS A 002 Rev. 00 (UNI EN ISO 7899-2:2003) e Rapporti ISTISAN 07/5 ISS A 003A Rev.00 (UNI EN ISO 12780:2002). I vibrioni sono stati rilevati con il metodo delle membrane filtranti su TCBS e Legionella con metodo colturale in accordo con Linee Guida nazionali. Risultati. Nei due campionamenti i valori di CT, CF, E. coli ed Enterococchi sono rimasti pressoché invariati. I vibrioni sono stati isolati in 2/3 campioni analizzati. Pa e Legionella sono risultati sempre assenti. Conclusioni. I nostri dati confermano l'importanza del controllo microbiologico sulle acque sotterranee che sfociano in mare poiché ridurrebbero le malattie a trasmissione oro-fecale e non. Ulteriori ricerche permetteranno di valutare l'influenza degli aspetti geologici e antropici sulla qualità delle acque sotterranee.

Until recently, Cryptococcus gattii infections occurred mainly in tropical and subtropical climate zones. However, during the past decade, C. gattii infections in humans and animals in Europe have increased. To determine whether the infections in Europe were acquired from an autochthonous source or associated with travel, we used multilocus sequence typing to compare 100 isolates from Europe (57 from 40 human patients, 22 from the environment, and 21 from animals) with 191 isolates from around the world. Of the 57 human patient isolates, 47 (83%) were obtained since 1995. Among the 40 patients, 24 (60%) probably acquired the C. gattii infection outside Europe; the remaining 16 (40%) probably acquired the infection within Europe. Human patient isolates from Mediterranean Europe clustered into a distinct genotype with animal and environmental isolates. These results indicate that reactivation of dormant C. gattii infections can occur many years after the infectious agent was acquired elsewhere.

Cryptococcus gattii has becoming more prevalent in temperate climate zones, during the past decades. We describe a C. gattii serotype B infection in an immunocompetent Italian patient with sclerosing cholangitis. The patient traveled once to Eastern Canada and otherwise no other countries than Italy were visited. Molecular analysis revealed that the C. gattii isolate belong to genotype AFLP4/VGI and has mating-type alpha which is the most common genotype in the Mediterranean environment. The C. gattii strain was found to be closely related, but not identical, to other C. gattii strains from the Mediterranean area.

Obiettivi: Legionella spp si moltiplica e si diffonde attraverso i sistemi di distribuzione idrica, colonizzando soprattutto i tronchi morti e i circuiti dell’acqua calda. La modalità di infezione è rappresentata dall’inalazione di particelle di aerosol contaminate e il rischio di acquisizione della malattia è correlato alla virulenza del microrganismo e alla suscettibilità dell’ospite. In Puglia è attivo da anni un programma di sorveglianza clinica ed ambientale sulla diffusione di Legionella spp. Vengono di seguito riportati i risultati dello studio sulla presenza di Legionella nella rete idrica di strutture pubbliche e private.Metodi: negli anni 1999-2003 sono stati esaminati 4065 campioni di acqua potabile prelevata dal circuito idrico di docce, lavandini e vasche da bagno. Di questi, 2642 provenivano da strutture ospedaliere e 1423 da alberghi, case di cura e appartamenti civili. In parallelo, per ciascun campione è stata determinata la carica microbica totale (CMT) a 36° e 22°, la presenza di P. aeruginosa e, per alcuni campioni, gli aspetti chimico-fisici.Risultati: legionella spp è stata isolata nell’87.4% dei campioni. Le specie più frequenti sono risultate L. pneumophila sierogruppo 2-14 (70.5%), L. pneumophila sg 1 (23.8%) e Legionella species (0.6%). Il 5.1% dei campioni è risultato positivo per più specie contemporaneamente. Una correlazione significativa è evidenziata tra presenza di Legionella e CMT sia a 36° che a 22° (p‹ 0.005). P. aeruginosa è stata isolata nel 0.9% dei casi. Tra i dati chimici, il rame ha confermato il suo effetto microbicida.Discussione: i campioni positivi per Legionella hanno presentato una carica ›50.000 ufc/litro nel 71.5% dei casi, con una netta prevalenza dei sierogruppi 2-14. Questi dati sono allarmanti se si considera che tra le strutture esaminate sono compresi centri di ricovero per soggetti esposti al rischio di infezione. Pertanto risulta necessario monitorare le reti idriche e ampliare le indagini sperimentali sui sistemi di bonifica, considerato che risulta impossibile rimuovere la colonizzazione dei circuiti idrici.

Obiettivi: per quanto i casi di legionellosi segnalatinegli ultimi anni in Italia siano in aumento (da107 nel 1998 a 624 nel 2002), siamo ancora lontanidalle previsioni del WHO (1000-5000 casi/anno). Allo scopo di verificare la diffusione della malattia in Puglia, la Regione ha promosso una sorveglianza epidemiologica sui casi di polmonite da Legionella valutando sia gli aspetti clinici (su tutti i soggetti ricoverati per polmonite) che ambientali(diffusione del microrganismo nella rete idrica di ambienti pubblici e privati). Di seguito vengono riportati i risultati della sorveglianza clinica effettuata nell’ultimo biennio presso l’Azienda Policlinico di Bari.Materiali e Metodi: nel periodo marzo 2001-maggio 2003, sono stati arruolati 559 pazienti affetti da polmonite, ricoverati nell’Azienda Policlinico di Bari. Intutti i pazienti è stata effettuata la ricerca di antigene urinario, titolazione degli anticorpi specifici, verificadella sieroconversione e, ove possibile, esame colturale su espettorato, BAL e liquido pleurico.Risultati: i pazienti affetti da legionellosi sono risultati 26 (4.6 %), di cui 5 (19.2%) nosocomiali. La diagnosi è stata effettuata mediante titolazione di anticorpi (con sieroconversione dimostrata in tutti i pazienti), ricerca dell’Ag urinario (positiva in 9 pazienti) e indagini colturali su espettorato (positivo in tre casi, di cui uno per Legionella pneumophila sg 5, due per Legionella pneumophila sg 1).Discussione: se si considera che i nostri dati riguardano una sola Azienda Ospedaliera, si può concludere che la legionellosi è realmente sottostimata.Alla base di questa situazione potrebbe esserci la scarsa attenzione che il clinico pone nella diagnosi etiologica delle polmoniti e il fatto che non tutti i laboratori sono attrezzati per la diagnosi di questa malattia. Ne consegue che i pazienti non sono sottoposti a terapie mirate, né possono essere attuate corrette pratiche preventive.

Obiettivo: nell’ambito dello studio multicentrico sullalegionellosi in Italia, è stata effettuata una sorveglianza sui pazienti affetti da polmonite per valutare la frequenza d’infezioni nosocomiali e comunitarie da Legionella e, sui casi individuati, viene condotto uno studio caso-controllo per approfondire le conoscenze sui fattori di rischio correlati alla malattia.Metodi: la sorveglianza della legionellosi è stata allestita in 6 ospedali, utilizzando come test diagnostici la ricerca dell’Ag urinario, colture da escreato e sieroconversione.Per lo studio caso-controllo è stata allestita una scheda sulle modalità di reclutamento dei casi e dei controlli, sono state definite le analisi chimico-cliniche e immunologiche da effettuare sui soggetti reclutati, e predisposto un questionario per la raccolta d’informazioni sui fattori di rischio.Risultati: su 2.287 soggetti affetti da polmonite sono stati riscontrati 84 casi di legionellosi, per la maggior parte (n.76) di tipo comunitario. Tra i casi individuati, 60 sono stati reclutati per lo studio caso-controllo e sono stati associati a 117 controlli, una parte affetti da polmonite diversa da legionellosi, una parte sani. Nei soggetti affetti da legionellosi, la ferritina serica era significativamente piùelevata rispetto ai controlli, mentre il numero dellecellule natural killer era significativamente inferiore.Lo studio dei possibili fattori di rischio associati alla malattia non ha evidenziato differenze significative tra i casi ed i controlli per le abitudini personali e le condizioni espositive ambientali.Conclusioni: questa indagine ha permesso di verificareche circa il 4% delle polmoniti ricoverate sono da attribuirsi a Legionella. Gli 8 casi nosocomiali sono stati individuati in 3 degli ospedali sorvegliati, anche se in tutti gli ospedali partecipanti Legionella spp era presente nel sistema idrico.Dallo studio caso-controllo sono emersi alcuni fattori di rischio della malattia ed in particolare variazioni nel metabolismo del ferro e in alcuni parametri immunologici finora non segnalati in altre indagini.Sito web: www.legionellaonline.it

Obiettivi: é noto che effettuare diagnosi di Legionellosi risulta difficile a causa della sovrapposizione della sintomatologia con altre forme di polmonite. Questo spiega, in parte, perché i casi di Legionellosi siano sottostimati. I metodi diagnostici disponibili, sebbene richiedano tempi relativamente lunghi, sono necessari per l’esatta stima di prevalenza della Legionellosi e per gli eventuali interventi preventivi.Metodi: nell’Azienda Ospedaliera “G. Panico” di Tricase, seguendo i criteri delle Linee Guida della Legionellosi (G.U. 5 maggio 2000 n. 103) durante la degenza dei pazienti che presentavano segni clinici ed obiettivi di polmonite sono state eseguite indagini radiologiche (Rx Torace, TAC), esami di laboratorio (espettorato, sangue, urina) ed avviata terapia antibiotica (macrolidi e cefalosporine di III generazione). L’antigene urinario e le IgG anti-Legionella (metodo IFA), sono stati determinati in collaborazione con il Laboratorio di riferimento Regionale.Risultati: nel periodo ottobre 2001 gennaio 2003 sono stati notificati nel nostro ospedale 11 casi di Legionellosi accertati da indagini clinico-strumentali e di laboratorio: tutti i casi avevano titoli anticorpali abbastanza elevati, confermati poi da un secondo controllo a distanza di tempo. Solo due hanno presentato una positività per l’antigene urinario. All’atto della dimissione, per il 63.6% dei casi è stato documentato un miglioramento delle condizioni clinico-laboratoristico-strumentali, nel 18.2% si è avuta una effettiva guarigione. La letalità è stata pari al 18.2%. In tutti casi si è provveduto alla sorveglianza ambientale.Considerazioni: i nostri dati evidenziano che i casi di Legionellosi registrati sono stati tutti di tipo comunitario. Una corretta applicazione delle Linee Guida nel sistema di notifica permette l’avvio dell’attività di prevenzione oltre che la tempestiva diagnosi e cura dei casi.