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Orientador: Marcelo Brocchi Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Salmonella enterica é um bacilo Gram-negativo pertencente à família Enterobacteriaceae responsável por grandes perdas econômicas e de saúde pública, podendo causar doenças ao homem, que variam de gastroenterites a infecções sistêmicas, e em animais, provocando grandes perdas econômicas. As sorovariedade Enteritidis e Typhimurium são as sorovariedade mais comumente isoladas em surtos de salmonelose no Brasil, Europa e Estados Unidos, tendo como principal fonte da infecção ovos e outros produtos derivados do frango. Uma das formas de se controlar infecções por S. enterica é através do uso de vacinas, as quais já vem sendo utilizadas em diversos países, apesar de ainda haver necessidade de melhora destas. Neste trabalho enfatizamos o uso de linhagens selvagens de S. enterica, realizando a caracterização genotípica e fenotípica destas linhagens, e comparando com mutantes obtidos a partir das mesmas, para testar a viabilidade em utiliza-los como vetores vacinais. Essas linhagens tiveram seus genomas sequenciados. Foram obtidos mutantes para os genes fis, hupA e hupB à partir dessas linhagens com o intuito de verificar o potencial destes mutantes no uso como vacinas vivas atenuadas. As proteínas codificadas por esses genes se associam ao nucleóide bacteriano e influenciam direta ou indiretamente na expressão de genes de virulência e quando deletadas podem levar a diferentes níveis de atenuação. Os mutantes de S. enterica Typhimurium para o gene fis demonstraram serem suficientemente atenuados e, portanto, passíveis de serem testados como vacinas vivas atenuadas. Mutantes para os genes hupA e hupB de S. enterica Enteritidis também foram obtidos e, embora os mutantes com apenas uma mutação (hupA ou hupB) não fossem atenuados, o mutante duplo hupAB mostrou-se suficientemente atenuado, permitindo doses superiores a 109 UFC por animal. Além disso, os mutantes atenuados obtidos neste estudo foram capazes de provocar uma resposta imune capaz de proteger camundongos Balb/c contra um desafio com a linhagem selvagem. Esses resultados demonstram claramente que as linhagens aqui desenvolvidas têm potencial para utilização como vacinas vivas atenuadas Abstract: Salmonella enterica is a gram-negative bacillus belonging to the family Enterobacteriaceae responsible for major economic and public health losses, may cause diseases to humans ranging from gastroenteritis to systemic infections and in animals, causing great economic losses. The most commonly isolated serovar in salmonellosis outbreaks in Brazil, Europe and the United States, are Enteritidis and Typhimurium, being eggs and other products derived from chicken the main source of infection. One way to control infections caused by Salmonella is by vaccination, a strategy that is already being used in several countries, although there is still need to improve those vaccines. Here we emphasize the use of wild strains of S. enterica, performing genotypic and phenotypic characterization of these strains, and compared with mutants for nucleoid associated proteins obtained from them, to test the feasibility of using these mutants as vaccine vectors. The wild-type strains had their genome sequenced. Starting from this wild-type strains we obtained mutants for the genes fis, hupA e hupB, intendind to verify their potential use as live-attenuated vaccines. The proteins encoded by these genes are associated to the bacterial nucleoid and directly or indirectly influences expression of virulence genes and when deleted may lead to different levels of attenuation. The S. enterica Typhimurium mutants for the fis gene showed to be sufficiently attenuated and therefore capable of being tested as live attenuated vaccines. S. enterica Enteritidis mutants for hupA and hupB genes were also obtained, although the single mutants (hupA or hupB) were not attenuated, the double mutant hupAB showed to be very attenuated, allowing doses greater than 109 CFU. Additionally, the attenuated mutants obtained in this study were able to elicit an immune response capable of protecting BALB / c mice against a challenge with wild type strain. These results clearly demonstrate that the strains developed herein have potential for use as live-attenuated vaccines Doutorado Bioquímica Doutor em Biologia Funcional e Molecular FAPESP 2012/05382-6