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Submitted by Amanda Romagnoli Yu (amandarb.1708@gmail.com) on 2020-12-28T19:49:44Z No. of bitstreams: 1 Tese_Amanda_Romagnoli_Yu.pdf: 1726542 bytes, checksum: 68dcaa7c7704fe146d53bf3e47763133 (MD5) Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2021-01-04T18:01:29Z (GMT) No. of bitstreams: 1 yu_ar_dr_sjc.pdf: 1726542 bytes, checksum: 68dcaa7c7704fe146d53bf3e47763133 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-04T18:01:29Z (GMT). No. of bitstreams: 1 yu_ar_dr_sjc.pdf: 1726542 bytes, checksum: 68dcaa7c7704fe146d53bf3e47763133 (MD5) Previous issue date: 2020-10-29 O presente trabalho teve como objetivos: a) avaliar a atividade antimicrobiana dos extratos naturais de alecrim, bardana, romã e cavalinha, sobre oito cepas de micro-organismos multirresistentes de Acinetobacter baumanii em cultura planctônica, verificando a concentração inibitória mínima e concentração microbicida mínima (CIM e CMM); b) avaliar a atividade antibiofilme dos extratos que apresentaram atividade antimicrobiana em cultura planctônica sobre cepas multirresistentes de A. baumanii no tempo de 5 minutos; c) avaliar a citotoxicidade das concentrações mais efetivas dos extratos que apresentaram atividade antimicrobiana nos testes em cultura planctônica sobre queratinócitos, em ensaio da atividade mitocondrial celular pelo método MTT, no tempo de 5 minutos. Para a determinação da CIM e CMM dos extratos utilizou-se o método de microdiluição em caldo, segundo Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), norma M27-A21 (CLSI, 2002) suplementada por M27-S4 (CLSI, 2012). Este teste foi realizado sobre 8 cepas clínicas de Acinetobacter baumanii e 4 extratos, perfazendo 32 grupos experimentais (n=8). Os extratos que apresentaram ação bacteriostática ou bactericida nos testes anteriores foram avaliados sobre biofilmes monomicrobianos (8 cepas clínicas de Acinetobacter baumanii), no tempo de contato de cinco minutos. As concentrações dos extratos, que apresentaram ação anti-biofilme sobre as cepas bacterianas analisadas, foram submetidas à análise de citotoxicidade em queratinócitos humanos. A avaliação foi realizada por meio do teste colorimétrico MTT, que analisou a atividade mitocondrial celular, após contato dos extratos por 5 min. Os resultados foram analisados estatisticamente por ANOVA e Tukey Test, sendo considerada diferença estatística significativa quando p ≤ 0,05. O extrato de romã apresentou CIM e CMM para todas as cepas analisadas, em quanto o extrato de alecrim apresentou CIM e CMM para 6 cepas das 8 analisadas, ambos apresentaram redução de biofilme, entretanto, romã foi o que apresentou as maiores reduções para a maioria das cepas. O extrato de romã apresentou viabilidade celular superior a 80% na maioria das concentrações e o alecrim apresentou viabilidade celular para 5 concentrações das 8 analisadas. Com isso pode-se concluir que o extrato de romã apresentou um melhor resultado comparado aos outros extratos, pois demonstrou uma significativa atividade antimicrobiana e antibiofilme e ausência de toxicidade conforme tempo de aplicação e concentração utilizada contra as cepas clínicas multirresistentes de Acinetobacter baumanni, podendo ser considerado potencial agente terapêutico para o combate destes patógenos. The objective of the present work was: a) to evaluate the antimicrobial activity of the natural extracts of rosemary, burdock, pomegranate and horsetail on eight strains of multidrug resistant Acinetobacter baumanii microorganisms in planktonic culture, verifying the minimum inhibitory concentration and minimum microbicidal concentration (MIC) and CMM); b) evaluate the antibiofilm activity of extracts that showed antimicrobial activity in planktonic culture on multi-resistant strains of A. baumanii within 5 minutes; c) to evaluate the cytotoxicity of the most effective concentrations of the extracts that showed antimicrobial activity in the tests in planktonic culture on keratinocytes, in an assay of cellular mitochondrial activity by the MTT method, in 5 minutes. For the determination of the minimum inhibitory (MIC) and minimum microbicidal (CMM) concentrations of the extracts, the broth microdilution method according to the Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), standard M27-A21 (CLSI, 2002) supplemented by M27 was used. -S4 (CLSI, 2012). This test was performed on 8 clinical strains of Acinetobacter baumanii and 4 extracts, making 32 experimental groups (n = 8). The extracts that showed bacteriostatic or bactericidal action in the previous tests were evaluated on monomicrobial biofilms (8 clinical strains of Acinetobacter baumanii) at contact time of 5 minutes. The concentrations of the extracts, which showed anti-biofilm action on the bacterial strains analyzed, were submitted to cytotoxicity analysis in human kerotinocytes. The evaluation was performed by the MTT colorimetric test, which analyzed the mitochondrial cellular activity, after contact of the extracts for 5 min. The results were statistically analyzed by ANOVA and Tukey Test, being considered statistically significant difference when p ≤ 0.05. Pomegranate extract showed MIC and CMM for all strains analyzed, while rosemary extract showed MIC and CMM for 6 strains of the 8 analyzed, both showed reduced biofilm, however, pomegranate was the one that showed the greatest reductions for most of the strains. Pomegranate extract showed cell viability greater than 80% in most concentrations and rosemary showed cell viability for 5 concentrations of the 8 analyzed.Therefore it can be concluded that the pomegranate extract presented a better result compared to the other extracts, since it demonstrated a significant antimicrobial and antibiofilm activity and absence of toxicity according to the time of application and concentration used against the multidrug-resistant clinical strains of Acinetobacter baumanni, which can be considered a potential therapeutic agent to combat these pathogens.

Submitted by Marcela Dos Santos Oliveira (ma_soliveira@hotmail.com) on 2018-12-20T10:13:43Z No. of bitstreams: 2 Dissertação_Marcela Oliveira_-merged.pdf: 1302381 bytes, checksum: 54dbf98eb19c2cfbf259317ee6b0e561 (MD5) Dissertação_Marcela Oliveira_-merged.pdf: 1302381 bytes, checksum: 54dbf98eb19c2cfbf259317ee6b0e561 (MD5) Approved for entry into archive by Silvana Alvarez null (silvana@ict.unesp.br) on 2019-01-03T16:09:05Z (GMT) No. of bitstreams: 1 oliveira_ms_me_sjc.pdf: 1302381 bytes, checksum: 54dbf98eb19c2cfbf259317ee6b0e561 (MD5) Made available in DSpace on 2019-01-03T16:09:05Z (GMT). No. of bitstreams: 1 oliveira_ms_me_sjc.pdf: 1302381 bytes, checksum: 54dbf98eb19c2cfbf259317ee6b0e561 (MD5) Previous issue date: 2018-11-29 A resistência adquirida pelas bactérias aos antibióticos de amplo espectro tornou-se uma ameaça à saúde global. A necessidade de encontrar fármacos que consigam combater micro-organismos multirresistentes tem se tornado um grande desafio. Neste cenário, as plantas medicinais são promissoras por terem propriedades antimicrobianas eficazes, devido à presença de compostos fitoquímicos com atividades biológicas diversas. O objetivo desse estudo foi avaliar a ação antimicrobiana dos extratos glicólicos de Hamamelis virginiana (hamamélis) e de Persea americana (abacateiro) sobre cepas multirresistentes de Klebsiella pneumoniae e Pseudomonas aeruginosa. A avaliação da atividade antimicrobiana dos extratos vegetais foi realizada em sete cepas clínicas de K. pneumoniae e de P. aeruginosa, em comparação com uma cepa de referência de K. pneumoniae (ATCC 4352) e de P. aeruginosa (ATCC 15442). Para a determinação das concentrações inibitórias mínimas (CIM) e bactericida mínima (CBM) dos extratos de abacateiro e de hamamélis foi utilizado o método de microdiluição em caldo, segundo NCCLS. Após obtenção destes resultados, foi verificada a ação dos extratos sobre biofilmes monomicrobianos de oito cepas de K. pneumoniae e de P. aeruginosa (1 cepa ATCC e 7 cepas clínicas resistentes). Após o período de 48 horas para a formação do biofilme, os extratos foram adicionados separadamente, pelo período de cinco minutos, na concentração efetiva pré-determinada (CBM) e concentrações superiores. Posteriormente, os biofilmes foram lavados e mensurados por dois diferentes testes, em que foram avaliadas a biomassa do biofilme pelo cristal violeta e a viabilidade dos micro-organismos pelo teste de MTT. Os experimentos foram realizados com n=10, utilizando duas repetições para cada cepa/extrato. Os dados foram analisados estatisticamente pelo método ANOVA, complementado pelo Teste de Tukey, com nível de significância de 5% (p≤0.05). Os resultados demonstraram uma significativa atividade antibacteriana de ambos os extratos contra a cepa-padrão e as cepas clínicas multirresistentes de K. pneumoniae e P. aeruginosa. Os extratos de abacateiro e de hamamélis, em todas as concentrações, demonstraram uma redução estatisticamente significativa na biomassa formada para pelo menos alguma das cepas clínicas de K. pneumoniae e P. aeruginosa testada. Para avaliação da viabilidade celular, ambos os extratos, na concentração de 200 mg/mL, demonstraram redução estatisticamente significativa nas cepas multirresistentes avaliadas de K. pneumoniae e P. aeruginosa. Como conclusão, os extratos glicólicos de H. virginiana e P. americana apresentaram ação antimicrobiana, resultando em concentrações com capacidade bactericida e significativa redução antibiofilme formados pelas cepas multirresistentes e ATCC de K. pneumoniae e P. aeruginosa. The resistance created by bacteria to broad-spectrum antibiotics has become a threat to global health. The need to find drugs that can combat multidrug-resistant microorganisms has become a major challenge. In this scenario, medicinal plants are promising because they have effective antimicrobial properties due to the presence of phytochemical compounds with diverse biological activities. The objective of this study was to evaluate the antimicrobial action of the glycolic extracts of Hamamelis virginiana (hamamelis) and Persea americana (avocado) on multiresistant strains of Klebsiella pneumoniae and Pseudomonas aeruginosa. The evaluation of the antimicrobial activity of the plant extracts was carried out in seven clinical strains of K. pneumoniae and P. aeruginosa, compared to an strain of K. pneumoniae (ATCC 4352) and P. aeruginosa (ATCC 15442). The broth microdilution method, according to NCCLS, was used to determine the minimum inhibitory (MIC) and bactericidal (MBM) concentrations of the extracts of avocado and witch hazel. After obtaining these results, the extracts on monomicrobial biofilms of eight strains of K. pneumoniae and P. aeruginosa (1 strain ATCC and 7 resistant clinical strains) were verified. After the 48 hour period for biofilm formation, the extracts were removed, with a five-minute interval, in the effective exercise session (MBC) and in the upper sets. Afterwards, the biofilms were washed and measured by two different testicles, in which the biofilm biomass was evaluated by the violet glass and the viability of the microorganisms by the MTT test. The experiments were performed with n = 10, using two replicates for each strain / extract. The data were analyzed statistically by the ANOVA method, complemented by the Tukey test, with a significance level of 5% (p≤0.05). The results demonstrated an antibacterial activity of both extracts against the standard strain and as the clinical strains of K. pneumoniae and P. aeruginosa. The extracts of avocado and witch hazel at all concentrations demonstrated a statistically significant reduction in the biomass formed for at least some of the clinical strains of K. pneumoniae and P. aeruginosa tested. For evaluation of cell viability, both extracts, at a concentration of 200 mg / mL, demonstrated a statistically significant reduction in the multiresistant strains evaluated for K. pneumoniae and P. aeruginosa. In conclusion, the glycolic extracts of H. virginiana and P. americana showed antimicrobial action, resulting in concentrations with bactericidal capacity and significant antibiofilm reduction formed by the multiresistant strains and ATCC of K. pneumoniae and P. aeruginosa.