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Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2018. A paracoccidioidomicose (PCM) é uma micose sistêmica, causada pelo fungo termodimórfico Paracoccidioides brasiliensis, adquirida pela inalação de propágulos da forma miceliana, presentes no solo. O desenvolvimento da doença depende de fatores do fungo, como mecanismos de evasão, além de fatores do hospedeiro. Nesse contexto, o desenvolvimento de uma resposta imune adaptativa com predominância de linfócitos T auxiliares do tipo 1 é considerada adequada e associada a resistência à PCM em modelos murinos e em humanos. A resposta adaptativa é iniciada e direcionada principalmente por células dendríticas (DCs) após o reconhecimento de padrões moleculares de patógenos. Assim, este trabalho avalia a capacidade imunomodulatória de dois agonistas de receptores de reconhecimento padrão (PRRs) sobre DCs. Para isso DCs foram infectadas com P. brasiliensis e tratadas com agonistas de PRRs Zymosan e Pam3csk4, que são respectivamente ligantes de Dectina-1/TLR-2 e TLR-2. Observou-se que, em geral, o tratamento induz a uma modulação de diversas atividades de DCs infectadas com o fungo. Foi observado o aumento da produção de citocinas, como TNF-α, IL-6 e IL-1β, a indução significativa da maturação das DCs, que em geral é inibida pelo P. brasiliensis. Além disso, o tratamento induziu o desenvolvimento de um perfil de citocinas associadas a resposta com predominância de linfócitos Th1. Ainda foi observada a capacidade do fungo de inibir a produção de IL-12p70 por DCs pela redução da transcrição do gene il12a, que codifica a subunidade específica p35 dessa citocina. Finalmente, a administração de zymosan em camundongos infectados pelo P. brasiliensis resultou na diminuição significativa da carga fúngica. Paracoccidioidomycosis (PCM) is a systemic mycosis caused by the thermally dimorphic fungus Paracoccidioides brasiliensis. It is acquired by the inhalation of propagules pf the mycelial form from the soil from the soil. The development of the disease depends on fungus features such as evasion mechanisms, and of host factors. In this context, the development of an adaptative immune response with a predominance of type 1 helper T lymphocytes is considered adequate and associated with resistance to PCM in murine models and in humans. The adaptive response is initiated and directed mainly by dendritic cells (DCs) after the recognition of pathogens molecular patterns. In this context this work evaluates the immunomodulatory capacity of three pattern recognition receptor (PRR) agonists on DCs during interaction with P.brasiliensis. DCs were infected with P. brasiliensis and treated with PRRs agonists Zymosan, Zymosan Depleted and Pam3csk4, wich are bound respectively to Dectin-1/TLR-2, only Dectin-1 and only to TLR-2. It was observed that, in general, the treatment induces a modulation of various functions of fungal infected DCs. It was observed increased production of cytokines, such as TNF-α, IL-6 and IL-1β and significant induction of maturation DCs, which in general is reduced by P. brasiliensis. Furthermore, the treatment induced the development of a cytokines profile associated with Th1 response predominance of lymphocytes. Furthermore, this work demonstrated the capacity of the fungus to inhibit IL-12p70 production by DCs, via reduction of the il12a gene transcription that encodes the specific p35 subunit of this cytokine. Lastly, the administration of zymosan in mice infected with P. brasiliensis led to a significant reduction of the fungal burden in the lung and spleen.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Ciências da Saúde, 2011 Os fármacos atuais para o tratamento da leishmaniose ainda não são adequadamente eficazes e nenhuma vacina eficiente está disponível. Assim, o desenvolvimento de terapias alternativas é uma prioridade para o tratamento desta infecção. O objetivo deste estudo foi comparar as atividades leishmanicidas de (1) desoxicolato de anfotericina B (D-anfoB), (2) anfotericina B encapsulada em nanocápsulas de poliláctico-co-glicólico (PLGA) contendo ácido dimercaptosuccinico (DMSA) (D-anfoB-nano) e (3) D-anfoB-nano, anfotericina B encapsulada em nanocápsulas de PLGA contendo DMSA e fluido magnético à base de maghemita (D-anfoB-nano-MG) no tratamento da leishmaniose cutânea experimental em camundongos C57BL/6. Camundongos fêmeas (N = 6/grupo) foram infectados por via intradérmica na pata direita com promastigotas de Leishmania amazonensis na fase metacíclica. Os animais infectados foram divididos em quatro grupos e tratados por via intraperitoneal: (1) PBS 1% por 10 dias consecutivos; (2) D-anfoB, 2mg/kg/dia por 10 dias (totalizando 20mg/kg/animal), (3) D-anfoB-nano e (4) DanfoB- nano-MG, 6mg/kg nos dias 1, 4 e 7 e de 2mg/kg no dia 10, totalizando 20mg/kg/animal no final do tratamento. O grupo D-anfoB-nano-MG foi submetido a um campo magnético de frequência alternada para realizar a magnetohipertermia. As avaliações da atividade leishmanicida foram realizadas por meio de medições do diâmetro da pata enquanto o número de parasitas e a viabilidade celular foram investigados por meio da diluição limitante e ensaio de MTT. D-anfoB-nano mostrou a mesma eficácia que a D-anfoB na redução do diâmetro da pata e também promoveu maior redução no número de parasitas e de viabilidade celular. Assim, estas nanopartículas mostraram ser mais eficazes do que a terapia com D-anfoB, pois com a mesma dose total, durante 10 dias e com menor freqüência de aplicações das doses, apresentaram a mesma eficácia. _______________________________________________________________________________________ ABSTRACT Current drugs for the treatment of leishmaniasis are far from satisfactory and no effective vaccine is available. Thus, the development of alternative therapies is a priority for treatment of this infection. The aim of this study was to compare the leishmanicidal activities of desoxycholate amphotericin B (D-AMB), AMB nanoencapsulated in poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) and dimercaptosuccinic acid (DMSA) nanoparticles (Nano-D-AMB) and in D-AMBcoated PLGA–DMSA containing maghemite-based magnetic fluid (Nano-DAMB- MG) for the treatment of experimental cutaneous leishmaniasis in C57BL/6 mice. Female mice (N=6/group) were infected intradermally in the right footpad with promastigotes of Leishmania amazonensis in the metacyclic phase. The infected animals were divided into four groups to be treated intraperitoneally: (1) 1% PBS for 10 consecutive days; (2) D-AMB at 2mg/kg/day for 10 days (totalizing 20mg/kg/animal); (3) Nano-D-AMB and (4) Nano-D-AMB-MG at 6mg/kg on the 1 , 4 and 7 days and at 2mg/kg on the 10 day, also totalizing 20mg/kg/animal at the end of the treatment. The Nano-D-AMB-MG group was submitted to an AC magnetic field to produce magnetohyperthermia. The evaluations were done through paw diameter measurements while the parasite number and the cell viability were investigated by limiting dilution assay. D-AMBcoated PLGA–DMSA nanoparticles showed the same efficiency as free DAMB to reduce paw diameter, and Nano-D-AMB treatment also promoted a greater reduction in parasite number and cell viability than free D-AMB. Thus, these nanoparticles appeared more effective than free D-AMB therapy to reduce the dose frequency required to achieve the same therapeutic level, favoring an extended dosing interval.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, 2010. A cromoblastomicose (CBM) é uma micose subcutânea, crônica, de distribuição cosmopolita, causada por vários fungos demáceos, pigmentados e dimórficos. Pacientes com a doença ainda são tidos como desafio terapêutico, principalmente devido à sua natureza recalcitrante. Várias são as opções envolvendo o tratamento dessa micose comumente negligenciada, contudo, ainda não há terapia de primeira escolha no combate à doença. O itraconazol e a terbinafina foram os que apresentaram os melhores resultados no tratamento da CBM, embora a cura de casos severos ainda seja rara. No entanto, vários trabalhos relatam as vacinas de DNA como promissoras no tratamento de infecções fúngicas, as quais permitem o restabelecimento da imunidade celular geralmente deprimida, minimizando os efeitos tóxicos oriundos das terapias antifúngicas convencionais. Nesse contexto, o presente trabalho foi conduzido, visando estabelecer inicialmente um modelo experimental confiável da CBM, propondo ainda novas terapêuticas para a doença, incluindo a utilização da vacina de DNA-hsp65. Por meio de análise morfomética, histopatológica e quantificação/recuperação das unidades formadoras de colônia, foi possível evidenciar o surgimento de lesões crônicas da CBM, embora transitórias, semelhantes às apresentadas em humanos. O esquema de tratamento empregando o itraconazol e a anfotericina B, intralesionalmente, mostrou-se eficaz no tratamento da CBM experimental, assim como a terapia utilizando a vacina de DNA-hsp65, livre. Foi demonstrado ainda, que a associação: quimioterápico + DNAhsp65 é eficiente no tratamento da CBM experimental, acelerando o processo de cura da doença, mitigando possíveis efeitos tóxicos advindos de quimioterapias prolongadas. _________________________________________________________________________________ ABSTRACT Chromoblastomycosis (CBM) is a chronic worldwide subcutaneous mycosis, caused by several dimorphic, pigmented dematiaceous fungi. Patients with the disease are still considered as therapeutic challenge, mainly due to its recalcitrant nature. There is no treatment of choice for this neglected mycosis, but rather several treatment options. Itraconazole and terbinafine showed the best results in treating the disease, although the healing of severe cases is still uncommon. However, several studies have reported the DNA vaccine as promising in the treatment of fungal infections, which allow the host to restore depressed cellular immunity, minimizing the toxic effects from conventional antifungal therapies. In this matter, this work was conducted aiming the establishment of a suitable model for experimental CBM, suggesting also new therapies, including DNA-hsp65 vaccine. By analyzing the morfometrical and histopathological aspects, also the recovery/quantification of colony forming units, the results showed the establishment of a chronic, although transitory, experimental CBM model with lesions similar to that presented in humans. The treatment regimen using itraconazole and amphotericin B, intralesionally, was effective in treating experimental CBM, as well as therapy using naked DNA-hsp65 vaccine. It also has been shown that chemotherapy associated with DNA-hsp65 vaccine is efficient in the treatment of experimental CBM, accelerating the healing process of the disease, becoming able to tone down the toxic effects from prolonged chemotherapy.