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A comparative nonisotopic in situ hybridization (ISH) analysis was carried out for the detection of Bmp-4, Shh and Wnt-5a transcripts during mice odontogenesis from initiation to cap stage. Bmp-4 was expressed early in the epithelium and then in the underlying mesenchyme. Shh expression was seen in the odontogenic epithelial lining thickening, being stronger in the enamel knot area, during the cap stage. Wnt-5a transcripts were expressed only in the mesenchyme during the initiation, bud and cap stages, with strong expression in the dental mesenchyme during the bud stage. The present results showed that Bmp-4, Shh and Wnt-5a are expressed since the very early stages of tooth development, and they suggest that the Wnt-5a gene is expressed in different cell populations than Bmp-4 and Shh. No presente trabalho, realizou-se uma análise comparativa não isotópica por hibridização in situ a fim de se detectar a presença de transcritos de Bmp-4, Shh e Wnt-5a durante as fases iniciais da odontogênese em camundongos, desde a iniciação até o estágio de capuz. No estágio de iniciação, observou-se expressão precoce de Bmp-4 no epitélio e no mesênquima subjacente, enquanto que a expressão de Shh ocorreu durante o estágio de capuz, na região de espessamento do revestimento epitelial odontogênico, tornando-se mais intensa na área de nó do esmalte. Os transcritos de Wnt-5a foram expressos somente no mesênquima durante os estágios de iniciação, botão e capuz, com intenso sinal na região no mesênquima na fase de botão. Estes resultados mostraram que Bmp-4, Shh e Wnt-5a são expressos desde os estágios mais precoces do desenvolvimento dentário, sugerindo que o gene Wnt-5a seja expresso em populações celulares distintas daquelas que expressam Bmp-4 e Shh.

Orientador: Maria Silvia Viccari Gatti Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O vírus da encefalomielite murina de Theiler (TMEV) é um patógeno entérico de camundongos, pertencente ao gênero Cardiovirus da família Picornaviridae. O TMEV é um vírus não envelopado, icosaédrico, com 20 - 30 nm e genoma constituído de RNA fita simples com polaridade positiva. Os TMEV têm sido classificados em dois subgrupos, de acordo com sua atividade biológica após inoculação intracerebral. Cepas neurovirulentas (GDVII e FA) induzem uma encefalite aguda e fatal, enquanto aquelas de baixa virulência (TO, WW, DA e BeAn) persistem no sistema nervoso central, induzindo doença crônica, caracterizada por desmielinização. A infecção natural por TMEV tem sido demonstrada em colônias onvencionais de camundongos e, em sua maioria, a infecção é assintomática. Embora o TMEV seja descrito como um patógeno de camundongos, anticorpos para TMEV-GDVII têm sido detectados em soros de ratos provenientes de biotérios que mantêm colônias convencionais. A prevalência da infecção por TMEV-GDVII nestas colônias de ratos é alta, em torno de 54,6%. Assim, este trabalho teve por finalidade demonstrar, por métodos sorológicos e molecular, a infecção natural por TMEV em colônias de ratos. Soros destes animais foram analisados pela reação de imunofluorescência indireta e a presença de anticorpos anti-TMEV-GDVII foi detectada em 86,3% deles. Ao mesmo tempo, pelo teste de soroneutralização, 77,2% destes soros demonstraram anticorpos neutralizantes para TMEV-GDVII. Com o objetivo de isolar o vírus de ratos, sistemas ¿in vitro¿ e ¿in vivo¿ foram utilizados. Nove passagens sucessivas de amostras de suspensão intestinal foram feitas em células BHK-21 e não foi possível demonstrar efeito citopático. Sinais clínicos da infecção por TMEV em camundongos, ou seja, paralisia das patas posteriores e tremores, foram demonstrados em camundongos e ratos neonatos inoculados com suspensão intestinal de ratos soropositivos e com a cepa padrão de TMEV-GDVII. Os resultados da RT-PCR demonstraram a presença de RNA viral em amostras de cérebro de ratos inoculados com a suspensão intestinal, com TMEV-GDVII e nas amostras de fezes de ratos provenientes de diferentes biotérios convencionais. Os resultados demonstram que ratos se infectam naturalmente por TMEV e, embora hajam poucas descrições na literatura da interferência deste vírus em pesquisas biomédicas, a monitoração sanitária para TMEV em biotérios que mantêm colônias de ratos deve ser incluída Abstract: Theiler¿s murine encephalomyelitis virus (TMEV) is an enteric pathogen of mice and belongs to the Cardiovirus genus in the family Picornaviridae. TMEV is a non-enveloped, icosaedric virus with 20 ¿ 30 nm size and it has an RNAss positive sense genome. TMEV has been divided in two subgroups on the basis of their biological activities after intracerebral inoculation. Neurovirulent strains (GDVII and FA) causes an acute and fatal encephalitis in mice and in contrast, low neurovirulent strains (DA, BeAn 8386, WW and TO) causes a persistent infection in the central nervous system and produce a chronic disease characterized by demyelination. TMEV infection with low neurovirulent strains has been used as an experimental model to help the studies on demyelination process induced by virus infection and to study diseases as Multiple Sclerosis. The natural infection by TMEV has been related in conventional colonies of mice and it¿s frequently asymptomatic. Although TMEV has been described as a pathogen of mice, antibodies against TMEV-GDVII has been detected in serum of rats reared in non-barrier colonies. Facing this, the purpose of the present study was to demonstrate the natural infection of TMEV in rat colonies through serological and molecular methods (RT-PCR). The rat serum were analysed by indirect immunofluorescence assay and antibodies against TMEV-GDVII were detected in 86,3% of the serum analysed. In the neutralization assay, 77,2% of the same serum showed neutralizing antibodies anti TMEVGDVII. To further isolate this rat virus, ¿in vitro¿ and ¿in vivo¿ systems were used. Nine blinded passages of the intestinal suspension were realized in BHK-21 cells, but no citopathic effect was identified. Clinical signs of TMEV infection in mice were characterized by flaccid paralisis of hind legs and tremor when newborn rats and mice were inoculated with intestinal suspension of seropositive rats and with the prototype strain of TMEV-GDVII. The RT-PCR results showed the RNA genome in the brain samples of rats and mice inoculated both with the intestinal suspension and the prototype strain. In the fecal samples, the RNA genome was also detected. In summary, rats can be naturally infected by TMEV and although there are a few examples in the literature of TMEV infection interference with biomedical researches, a health monitoring program for TMEV should be included in the rat colonies Mestrado Microbiologia Mestra em Genética e Biologia Molecular