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Tese (doutorado) — Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2021. Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF) Poluição ambiental pode ser compreendida como o espalhamento de um material em um ambiente, de forma que esse tenha efeitos nocivos à biota que lá existe ou interage. Dentre os tipos de poluente, é possível se listar os poluentes convencionais, de origem natural e finitos, tais como hidrocarbonetos oriundos do petróleo; os poluentes xenobióticos, artificiais e finitos, tais como fármacos e agrotóxicos e os elementos xenogenéticos, gerados a partir de ações antrópicas e capazes de se reproduzir em seus hospedeiros, tais como plasmídeos epidêmicos. Em uma perspectiva de saúde única, a saúde humana é dependente e relacional com a saúde de animais domésticos e do meio ambiente como um todo, de forma que se faz necessário entender e mitigar as ações antrópicas nocivas ao meio ambiente. Em uma primeira etapa do presente estudo, foi feita a prospecção de microrganismos capazes de degradar cafeína e paracetamol, dois dos poluentes mais comuns em ambientes aquáticos, a partir de uma amostra de água superficial do lago Paranoá. Ao final da prospecção por enriquecimento, foi isolada uma colônia de bactérias, as quais eram capazes de crescer em meios mínimos contendo apenas um dos fármacos como fonte única de carbono e energia. Análises bioquímicas e genômicas identificaram a espécie do isolado como Klebsiella pneumoniae. Curiosamente, esse isolado produz um pigmento marrom apenas em culturas com paracetamol e análises espectroscópicas em ultravioleta, luz visível e infravermelho sugerem tratar-se de uma melanina, o que pode levar futuramente a aplicações biotecnológicas, tais como o uso dessas na remoção de novos poluentes, em uma segunda ordem de despoluição. Análises genômicas indicam a presença de genes e vias metabólicas de degradação desses fármacos, porém a ainda é necessária sua comprovação experimental. Em uma segunda etapa, foram avaliadas características de interesse médico do isolado, com foco em análises genômicas. Análises de average nucleotide identity (ANI) e in silico Multilocus sequence typing(MLST) revelam o isolado como pertencente a uma nova linhagem de K. pneumoniae, cujo número de linhagem tipo (strain type) foi depositado em banco de dados da espécie. O antibiograma do isolado mostra que esse possui o fenótipo de multirresistência a antibióticos, dentre eles quinolonas, cefalosporinas e carbapenems. Análises genômicas apontaram para poucas evidências relacionadas à hipervirulência do isolado, no entanto foram detectados grupos de genes relacionados à virulência e foram encontrados genes de resistência, incluindo genes de beta-lactacamase de espectro estendido e de carbapenemase, esse último associado a um transposon não descrito na literatura. O isolado também possui um contig extracromossômico idêntico a uma sequência observada em uma cepa de K. pneumoniae hospitalar, o que indica a presença de um fluxo de genes entre a rede de hospitais do Distrito Federal e o lago Paranoá, com novos estudos sendo necessários para um melhor entendimento deste fluxo. O achado de uma cepa bacteriana multirresistente no lago Paranoá é preocupante, uma vez que esse é utilizado para fins recreativos pela população local, bem como fonte de captação de água potável, ainda que existam processos a jusantes de tratamento desta. Por fim, estudos na literatura indicam a correlação no aumento de temperatura ambiental e aumento no número de infecções com bactérias multirresistentes a antibacterianos em humanos. Fatores bioquímicos de bactérias a mudanças nas sociedades humanas têm sido apontados como possíveis hipóteses para essa correlação e o reuso de água com bactérias multirresistentes pode ser um fator a contribuir com esta. Environmental pollution can be understood as the spread of a material in an environment, such that it causes harmful effects in its existing or interacting biotia. Among the different types of pollution, there are the conventional, of natural sources and finite, such as oil borne hydrocarbons; the xenobiotic, generated as a result of anthropic activities and finite, such as pharmaceuticals and agrotoxics and the xenogeneic, also resulted from human activities, but with the capacity of replication in their hosts, such as epidemic plasmids. Under the One Health perspective, human health depends on and relates with the health of domestic animals and the environment as a whole, so that it becomes necessary to understand and mitigate harmful effects of human actions in the environment. In the first part of the present study, microbes were prospected in function of their capacity for biodegrading caffeine and acetoaminophen, two of the most common xenobiotics in water bodies. This prospection was based on water samples from the local Paranoá lake. By the end of the prospection, a colony of bacteria was isolated, which was capable of growth in M9 minimal medium supplemented with either caffeine or acetoaminophen as sole carbon and energy sources. Biochemical and genomic analyses identified these bacteria as belonging to the Klebsiella pneumoniae species. Curiously, these bacteria were able to produce a brown pigment when in contact with acetoaminophen. Spectroscopic analyses in ultraviolet, visible and infrared light indicate that this pigment is a melanin, which may lead to future biotechnological applications, such as its use to remove new pollutants in an environment, as a second-order depollution. Genomic analysis of the isolate point towards the presence of metabolic pathways potentially involved in the biodegradation of these drugs; however further experimental assays are needed to demonstrate this capacity. In the second part of the study, medically relevant features of the bacterial isolate were analyzed, with a focus on genomic analysis. Average Nucleotide Identity (ANI) and Multilocus Sequence Typing indicate that this isolate represents a novel strain for the species, whose Strain Type was deposited in a database of K. pneumoniae. The antibiogram of the isolate shows that it possesses the multidrug resistance phenotype which comprehends resistance to quinolones, cephalosporins and carbapenems. Genomic analysis found little evidence related to the hypervirulent phenotype, though genes clusters related to virulence and related to drug resistance have been found, including genes of extended- spectrum beta-lactamase and carbapenemase, the latter of which associated with an undescribed transposon in the literature. The isolate also has an extrachromossomal contig that is identical to a sequence found in a local hospital strain, which points toward the presence of a gene flow from local hospitals into the lake, with further studies necessary to test this possibility. This hypothesis is concerning, given that the lake is used for recreational purposes by the local population and it is used as a reservoir for water reuse, including drinking water, even though there are downstream water treatment processes. Finally, there are studies in the literature which present a correlation between increases in environmental temperature and number of antibacterial-resistant bacterial infections in humans. Factors ranging from biochemical pathways to human societal changes have been attributed as possible causes for this correlation and water reuse with antimicrobial resistant bacteria may be one contributing factor.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Programa de Pós-Graduação em Patologia Molecular, 2016. ____________________________________________________________________________________________________ Em atenção aos artigos 11 e 96 da Lei nº 9.279/96 (Lei da Propriedade Industrial) e em consonância com a Resolução CAD 005/2008 da Universidade de Brasília, informamos que o presente trabalho somente foi publicado na data indicada neste informativo. A respectiva defesa, para obtenção do título pretendido, foi realizada na modalidade de sessão fechada, conforme a documentação anexada, de forma que o requisito da novidade, exigida nos referidos artigos da Lei, foi devidamente preservado. A leishmaniose é uma antropozoonose que possui diferentes manifestações clinicas, sendo transmitida durante o repasto sanguíneo de flebotomíneos e causada por várias espécies de parasitos do gênero Leishmania. Esta doença causa grandes agravos na saúde humana em escala global, com altas taxas de mortalidade anualmente. Inúmeros fatores de risco impulsionam a transmissão do parasito para áreas anteriormente não endêmicas provocados tanto pelo ser humano quanto por variações naturais do ambiente. O controle da leishmaniose visceral (LV) no Brasil se faz por meio da detecção e eliminação dos reservatórios da doença, controle das populações de vetor, prevenção do contato com vetores infectados e tratamento dos casos humanos. No entanto, essas medidas são aplicadas frequentemente de forma isolada e tem-se mostrado limitadas. Como consequência, observase a manutenção ou mesmo expansão da LV para áreas onde sua ocorrência não era registrada. Nesse contexto, medidas que visem à redução da transmissão e suas aplicações de forma integrada são de fundamental importância, tais como o diagnóstico precoce e com alta sensibilidade dos humanos e dos cães infectados, tratamento eficaz e o emprego de vacinas. O diagnóstico tradicional da LV é baseado na presença de anticorpos anti-Leishmania e o padrão-ouro é a visualização de formas amastigotas do parasito em amostras biológicas. No entanto, a introdução da vacinação de cães nos últimos anos gera a necessidade de novos métodos sorológicos capazes de diferenciar entre animais vacinados e infectados. Assim, o objetivo do presente trabalho foi avaliar a metalopeptidase mitocondrial zinco dependente, secretada de L. infantum como marcador para diagnóstico sorológico de LV. A análise in sílico revelou que a proteína teria 47,35% de resíduos de aminoácidos expondo sua superfície ao solvente e nestas áreas foram encontradas possíveis zonas para epitopos de células B, sítios de glicosilação e fosforilação. A expressão das proteínas em sistemas diferentes possibilitou avaliar a imunogenicidade das proteínas heterólogas com e sem modificações pós-traducionais contra soro de cães infectados e sadios. O resultado do ensaio de ELISA mostrou altos índices de anticorpos específicos contra as proteínas heterólogas e a comparação dos resultados indicou que a proteína heteróloga expressa em modelo procarioto identificou todos os animais infectados nas diluições 1:50 e 1:100 de soro. Os dados estatísticos do teste t mostraram p value < 0.01, dando credibilidade na hipótese de uso desta proteína em possível diagnóstico para LV. O estudo realizado apresenta informações relevantes sobre o uso da metalopeptidase estudada para que possa ser associada ao melhoramento do diagnóstico da LV. Testes para definição da sensibilidade e especifidade fazem-se necessários em futuros trabalhos. Leishmaniasis is a anthropozoonosis with different clinical manifestations, being transmitted by sandfly during blood feeding and caused by several species of parasites of the genus Leishmania. This disease causes major health problems on a global scale, with high mortality rates annually. Several risk factors drive the transmission of the parasite to areas not previously endemic due to man activities and by natural environmental variations. Control of visceral leishmaniasis (VL) in Brazil is made through the detection and elimination of disease reservoirs, control of vector populations, preventing contact with infected vectors and treatment of human cases. However, these measures are often applied in isolation and has shown limited 0efficacy. As a result, there is the maintenance or expansion of the VL to areas where their occurrence was not recorded. In this context, measures aimed to reduce transmission and its applications in an integrated manner are of fundamental importance, such as early diagnosis with high sensitivity of humans and infected dogs, effective treatment and the use of vaccines. Traditional diagnosis of VL is based on the presence of anti-Leishmania antibodies and the gold standard is the visualization of amastigote forms of the parasite in biological samples. However, the introduction of vaccination of dogs in recent years creates the need for new serological methods able to differentiate between vaccinated and infected animals. The objective of this study was to evaluate the metallopeptidase zinc dependent secreted from L. infantum, as a marker for serological diagnosis of VL. In silico analysis revealed that the protein had 47.35% of amino acid residues exposed to the solvent, exhibiting on your surface areas for possible B cell epitopes, glycosylation and phosphorylation sites. The expression of proteins in different systems allowed to assess the immunogenicity of the heterologous proteins, with and without post-translational modifications, against sera from infected and healthy dogs. The results of the ELISA assay showed high levels of specific antibodies against heterologous proteins and the comparison of the results shows that heterologous protein expressed in a prokaryotic model was able to differentiate all infected animals at dilutions 1:50 and 1: 100 serum. Statistical analysis emphasize the potential of this protein to be used in diagnosis for VL. The study presents relevant information on the use of metallo-peptidase studied so it can be associated with the improvement of the diagnosis of VL. Tests to define the sensitivity and specificity are made necessary in future work.

Dissertação (mestrado) — Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2021. O Schistosoma mansoni é um helminto que parasita o intestino e vasos sanguíneos de seu hospedeiro mamífero, gerando vários agravos para a saúde do hospedeiro, podendo levar a morte. Uma proteína presente nas glândulas esofágicas do S. mansoni, a Sm10.3, expressa em bactérias, demonstrou ação protetiva em testes com animais, podendo se tornar uma boa candidata para o desenvolvimento de novas vacinas. Assim, seria interessante expressá-la em um sistema eucarioto, como o sistema Bac-to- Bac. Este sistema de expressão utiliza o baculovírus infectando células de insetos. Nesse sistema, o geneSm10.3 foi expresso sob o promotor da poliedrina, que é altamente expresso neste sistema. O objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão da proteína Sm10.3 no sistema Bac-to-Bac. O cDNA de S. Mansoni foi clonado em pGEM-T Easy. Os clones obtidos foram subclonados no vetor pFastBac Amino. Após isso o gene recombinado foi clonado em células DH10Bac para geração do bacmídio recombinante. As células de insetos foram transfectadas com os bacmídios recombinantes com o auxílio de lipossomo catiônico. As proteínas recombinantes foram expressas em células de inseto. Apenas um clone da proteína recombinante foi reconhecido por anticorpos anti-6xHis, por western blot. Nele foram detectadas duas proteínas de tamanhos distintos, uma com o tamanho esperado de 21 kDa e outra menor, de aproximadamente 15 kDa, hipoteticamente gerada após o transcrito ter sofrido splicing. Observou-se que as proteínas recombinantes não foram fusionadas à proteína da poliedrina. Este trabalho atingiu o objetivo de clonar e expressar o gene Sm10.3 em sistema de expressão baculovírus, mostrando a eficácia deste sistema para a produção de proteínas heterólogas. Schistosoma mansoni is a helminth that parasitizes the intestine and blood vessels of its mammalian host, causing several damages to the host's health, which can lead to death. A protein present in the esophageal glands of S. mansoni, Sm10.3, expressed in bacteria, has shown protective action in animal tests, and may become a good candidate for the development of new vaccines. Thus, it would be interesting to express it in a eukaryotic system, such as the Bac-to-Bac system. This expression system uses the baculovirus to infect insect cells. In this system, the Sm10.3 gene was expressed under the polyhedrin promoter, which is highly expressed in this system. The objective of this work was to evaluate the expression of Sm10.3 protein in the Bac-to-Bac system. The S. mansoni cDNA was cloned into pGEM-T Easy. The clones obtained were subcloned into the pFastBac Amino vector. After that, the recombined gene was cloned in DH10Bac cells to generate the recombinant bacmid. Insect cells were transfected with recombinant bacmids with the aid of a cationic liposome. Recombinant proteins were expressed in insect cells. Only one clone of the recombinant protein was recognized by anti-6xHis antibodies, by western blot. In it, two proteins of different sizes were detected, one with the expected size of 21 kDa and the other smaller, of approximately 15 kDa, hypothetically generated after the transcript had undergone splicing. It was observed that the recombinant proteins were not fused to the polyhedrin protein. This work achieved the objective of cloning and expressing the Sm10.3 gene in a baculovirus expression system, showing the effectiveness of this system for the production of heterologous proteins

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2020. CNPq Klebsiella pneumoniae é uma bactéria Gram-negativa encapsulada que normalmente afeta pacientes imunocomprometidos. Na década de 1980, uma nova variante foi descoberta e chamada de hipervirulenta (hvKP). Esta é caracterizada por causar abscessos hepáticos em pessoas consideradas saudáveis, além de poderem se espalhar metastaticamente e de apresentarem o fenótipo de hipermucoviscosidade (hmv). Este pode ocorrer devido à expressão dos reguladores rmpA e/ou rmpA2, e é detectado por um string test positivo. Uma linhagem de K. pneumoniae (Kp 34) isolada de um paciente com bacteremia em Brasília apresentou extensiva resistência à antibióticos (XDR) e alta virulência, apesar de ser considerada atípica por não apresentar sorotipo capsular K1 ou K2 e não possuir os genes rmpA e rmpA2. O foco deste trabalho foi avaliar o papel da hipermucoviscosidade na patogênese de Kp 34 através de mutagênese com o transposon TnPhoA. 100 mutantes foram obtidos e analisados em relação à presença do fenótipo hmv, aqueles não hipermucoviscosos foram selecionados e avaliados com relação à sua curva de crescimento, presença de cápsula, produção de biofilme, sobrevivência em sangue e soro humanos, sobrevivência em células HEp-2 e citotoxicidade, indução da produção de NO e de PPAR-γ por essas células. Além disso, AP-PCRs seguidas de sequenciamento foram realizadas para identificar os possíveis genes interrompidos durante a mutagênese. Os resultados nos mostraram que a perda do fenótipo hmv afetou a capacidade dos mutantes em produzir biofilme e em sobreviver em sangue humano. Assim como afetou a capacidade de células HEp-2 infectadas de induzir a produção de NO. Porém, o fenótipo hmv não aparenta ser crucial na interação dessa linhagem com células epiteliais, pois os mutantes foram capazes de sobreviver mais no interior dessas células, além de serem mais citotóxicos do que Kp 34. Genes relacionados ao transporte de sideróforos e de ferro, transportadores ABC, sistemas de efluxo, proteínas ligadoras de ATP, sistema de secreção do tipo II e L-Fucose isomerase podem ter sido interrompidos durante a mutagênese, afetando assim a expressão do fenótipo de hipermucoviscosidade. Klebsiella pneumoniae is an encapsulated Gram-negative bacteria that can normally cause infections in immunocompromised patients. By the 1980s, a new variant called hypervirulent was discovered. This strain is able to cause liver abscesses in healthy individuals, is capable of metastatic spread and normally presents a hypermucoviscous phenotype (hmv). The hmv phenotype generally occurs due to the expression of the regulators rmpA and/or rmpA2 and is detected by a positive string test. A strain of K. pneumoniae (Kp 34) was isolated from a patient with bacteremia in Brasilia and presented extensive resistance to antibiotics (XDR) and high virulence. However, it was considered atypical because it didn’t present capsular serotype K1 or K2, nor the rmpA rmpA2 genes. The focus of this work was to evaluate the role of hypermucoviscosity in the pathogenesis of Kp 34 using transposon mutagenesis. A hundred mutants were obtained and analyzed in regard of the presence of hmv phenotype. Those hmv- (not hypermucoviscous) were selected and tested in regard of their growth curves, presence of capsule, biofilm production, survival in human blood and serum, survival inside HEp-2 cells and cytotoxicity, production of NO and PPAR-γ by HEp-2 cells. In addition, AP-PCRs followed by DNA sequencing were performed to identify the possible interrupted genes during mutagenesis. The results showed that the loss of the hmv phenotype impacted in the ability of the mutants to produce biofilm and to survive in human blood. In addition, it affected the ability of infected HEp-2 cells to produce NO. On the other hand, this phenotype does not seem to be crucial for the interaction of this strain with HEp-2 cells, because the mutants were able to survive better inside those cells and they were also more cytotoxic to those cells than Kp 34. Genes related to the transport of siderophores and iron, ABC transporters, efflux systems, ATP binding-proteins, type II secretion systems and LFucose isomerase could have been interrupted and impacted in the expression of hmv phenotype.

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Microbiana, 2019. Fundação de Apoio à Pesquisa do Distrito Federal (FAP/DF); Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq). A doença de Chagas (DC) ou Tripanossomíase americana é uma doença negligenciada que afeta cerca de 8 milhões de pessoas no mundo, sendo um milhão somente no Brasil. Os diagnósticos laboratoriais da DC em pacientes na fase aguda são realizados através de testes parasitológicos diretos, enquanto em pacientes crônicos, devido à baixa parasitemia, dependem de testes sorológicos. Recentemente um grupo de trabalho, através de metodologias de proteômica e espectrometria de massas, identificou proteínas secretadas/excretadas ou localizadas na superfície das formas tripomastigotas e amastigotas de T. cruzi. Desse trabalho foram selecionadas duas proteínas: a metacaspase-3 e a cruzipaína. O objetivo deste trabalho foi avaliá-las em testes sorológicos (ELISA) contra soros de pacientes crônicos da DC. Para isto, foram realizadas expressões heterólogas em 3 sistemas diferentes: bactéria, baculovírus e células de mamífero. Foram produzidas predições de epítopos para células B e de similaridade com Leishmania infantum, Leishmania brasiliensis e T. rangeli. Somente a metacaspase-3 foi obtida nos três sistemas de expressão, a cruzipaína só foi expressa em células de mamíferos. Nas avaliações por ELISA, a metacaspase-3 expressa em E. coli, apresentou níveis de IgGs mais elevados em pacientes crônicos do que em pacientes com sorologia negativa. Pacientes com os quadros clínicos indeterminados e cardíacos também diferiram do grupo negativo. A metacaspase-3 expressa em baculovírus também mostrou diferença, no entanto só pacientes com a forma digestiva apresentaram níveis de IgGs maiores do que pacientes negativos. Nos ensaios de ELISA com as proteínas expressas em células HeLa os soros dos pacientes crônicos reagiram às proteínas metacaspase-3, cruzipaína e GFP (controle negativo), sendo que os grupos indeterminado e digestivo, testados com a cruzipaína, mostraram diferenças significativas em relação ao negativo. No grupo testado com metacaspase-3 somente a forma mista não mostrou diferença significativa. Também foi observada uma reação imunogênica do controle GFP. Testes sorológicos que possam diferenciar pacientes pelas manifestações clínicas podem abrir novas expectativas nos tratamentos de pacientes chagásicos, principalmente aqueles com a forma indeterminada. Dessa forma as proteínas aqui testadas apresentaram um perfil de um diagnóstico diferencial. Porém estudos mais aprofundados sobre as eficácias para exames sorológicos são necessários. Chagas disease (CD) or American Trypanosomiasis is a neglected disease that affects about 8 million people worldwide. The diagnoses of CD in patients in the acute phase are performed through direct parasitological tests, whereas in chronic patients, due to the low parasitemia, they depend on serological tests such as the ELISA test. Recently a working group, through proteomics and mass spectrometry methodologies, identified proteins secreted/excreted or located on the surface of trypomastigote and amastigote forms of T. cruzi. From this study were selected two proteins: metacaspase-3 and cruzipain. The objective of the present study was to evaluate them in serological tests (ELISA) against blood samples from chronic patients with CD. For this, heterologous expressions were performed in 3 different systems: bacterium, baculovirus, and mammalian cells. Predictions of B cell epitopes and of similarity with Leishmania infantum, Leishmania brasiliensis and T. rangeli were performed. Only metacaspase-3 was obtained in all three expression systems, cruzipain was only expressed in mammalian cells. In the ELISA evaluations, the metacaspase-3 expressed in E. coli presented higher IgGs levels in chronic patients than patients with negative serology and patients with Indeterminate and Cardiac also differed from the negative group. Metacapse 3 expressed in baculovirus also showed a difference; however, only patients with the digestive form showed higher IgGs levels than negative patients. In the ELISA assays with proteins expressed in HeLa; sera from chronic patients reacted with metacaspase-3, cruzipain and GFP, and the Indeterminate and digestive groups tested with cruzipain showed a significant difference in relation to the negative control. In the group tested with metacaspase-3 only the mixed form showed no significant difference. An immunogenic reaction of the GFP control was also observed. Serological tests that may differentiate patients by clinical manifestations may open new expectations in the treatment of chagasic patients. Thus, the proteins tested here presented profiles of a differential diagnosis. Further studies on the efficacy of serological tests are required.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Odontologia, Programa de Pós-Graduação em em Odontologia, 2019. Estudos demonstram a deterioração da saúde bucal em pacientes hospitalizados em função do acúmulo do biofilme microbiano em dentes e língua, além da inflamação gengival. A microbiota bucal adquirida após hospitalização pode ser composta de microrganismos mais agressivos e passível de aspiração, podendo causar agravos à saúde geral, a exemplo da pneumonia nosocomial. O objetivo desse estudo foi caracterizar o estado de saúde e a microbiota bucal relacionada a infecções hospitalares e à resistência microbiana de pacientes internados no Hospital Universitário de Brasília e a transição microbiana em até sete dias após a admissão hospitalar. Pacientes hospitalizados foram examinados por um cirurgião dentista e três swabs da mucosa bucal foram coletados respectivamente nos tempos T1 (até 48 horas da hospitalização), T2 (48 horas após T1) e T3 (7 dias após hospitalização). Para determinação do status de saúde bucal foi utilizado o Instrumento de Avaliação da Saúde Bucal para a Triagem Odontológica (IASBTO) e o Índice de Saburra Lingual (ISL). Os swabs foram processados em laboratório de microbiologia e as amostras foram inoculadas em meios de cultura cromogênicos para identificação de microrganismos relacionados à infecções hospitalares. A média do IASBTO em T1 foi de 6,17 (± 1,88) e do ISL foi de 2,41 (± 0,88). As médias no sétimo dia foram 5,78 (± 2,26) e 2,46 (± 0,69), respectivamente. Identificou-se a presença de Escherichia coli em 80% das amostras iniciais, Enterococcus em 69%, Enterobacter em 60%, Pseudomonas em 52%, Candida albicans em 52%, Staphylococcus aureus em 39% e Klebsiella em 17%. A prevalência de Enterococcus, Pseudomonas e Proteus aumentou no sétimo dia, enquanto diminuiu a de E. coli, Enterobacter e S. aureus. Conclui-se que, nos pacientes internados em Enfermaria, o status de saúde bucal se manteve mediano entre o segundo e o sétimo dia de hospitalização. O índice de saburra lingual foi considerado alto em todo o período de sete dias de acompanhamento. A prevalência de microrganismos potencialmente patogênicos e relacionados à veiculação de resistência aos antimicrobianos na cavidade bucal foi alta nos três tempos de acompanhamento. Previous research has shown that deterioration in oral health occurs in hospitalized patients as a result of increased dental plaque accumulation on teeth and tongue, in addition to inflamed gums. The oral microbiota acquired after hospitalization may comprise aggressive pathogens that are prone to aspiration and may cause systemic diseases as the nosocomial pneumonia. The purpose of this study was to characterize the oral health and microbiota related to nosocomial infections and microbial resitance of hospitalized patients at the University Hospital of Brasília and their follow up evolution during seven days after the hospital admission. The hospitalized patients were examined by a dentist and oral swabs were collected in three moments during the hospitalization period: T1 (48 hours of hospitalization or less), T2 (48 hours after T1) and T3 (7 days after hospitalization). The oral health status was determined according to the tools: Instrumento de Avaliação da Saúde Bucal para a Triagem Odontológica (IASBTO) and Índice de Saburra Lingual (ISL). The swabs were processed in a microbiology laboratory and samples were plated on chromogenic culture media to identify the oral microbiota related to nosocomial infections. In T1, the IASBTO mean was 5.63 (± 2.22) and ISL mean was 2.58 (± 0.73). After seven days, the respective means were 5.78 (± 2.26) and 2.46 (± 0.69). The most prevalent microrganisms in T1 were Escherichia coli (80%), Enterococcus (69%), Enterobacter (60%), Pseudomonas (52%), Candida albicans (50%), Staphylococcus aureus (39%) and Klebsiella (15%). There was increase in Enterococcus, Pseudomonas and Proteus after seven days, while there was a decrease in E. coli, Enterobacter and S. aureus. This study shows that, in nonintensive care units hospitalized patients, the oral health status had a reasonable average during all the seven days. The tongue coating index was considered high throughout the follow up period. There was a great prevalence of potential nosocomial pathogens related to antimicrobial resistance in all three evaluated moments of hospitalization.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Odontologia, Programa de Pós-Graduação em em Odontologia, 2019. Introdução: O diamino fluoreto de prata (SDF) ganhou muita atenção nos últimos anos. Considerando o crescente interesse no seu uso e o aparecimento de novas técnicas utilizando esse material resolveu-se avaliar o comportamento e efeitos do SDF após a remoção seletiva de dentina cariada quando comparado à clorexidina. Este estudo teve como objetivo comparar diferentes agentes de limpeza cavitária. Materiais e métodos: trata-se de um ensaio clínico randomizado. Duas soluções de SDF com concentrações de 38%, 30% e Clorexidina a 2% foram estudadas. Foram selecionadas 40 crianças entre 7 e 10 anos apresentando lesão cariosa Cl I em molares decíduos. A amostra foi dividida aleatoriamente em quatro grupos: (G1) SDF a 38%; (G2) SDF a 30%; (G3) Clorexidina 2% e (G4) grupo controle. Durante o exame clínico, as lesões foram identificadas e classificadas e em sessão subsequente foram tratadas conforme a divisão dos grupos. Amostras de dentina foram coletadas antes e após a aplicação do agente de limpeza e levadas para análise laboratorial. No laboratório após a diluição apropriada as amostras foram plaqueadas em duplicata em meio de cultura BHI, MS e MSB e após a incubação, o número de UFC (unidades formadoras de colônias) foi determinado. As amostras sem diluição foram plaqueadas por esgotamento em meio de cultura seletivo Mitis Salivarius. As placas foram incubadas anaerobicamente a 37 °C durante 72 horas. Os micro-organismos totais foram contados e as espécies do gênero Streptococcus foram analisadas para posterior comparação entre os grupos. O comportamento clínico das restaurações foi avaliado 3 meses depois. Resultados: O grupo 2 apresentou menor número de microrganismos totais após a aplicação do SDF a 30%, seguido do grupo 1 (SDF a 38%) e do grupo 3 (Clorexidina 2%). Ficando em último lugar o grupo controle (G4). Em relação aos S. mutans, o grupo 2 também mostrou superioridade nos resultados, no qual a capacidade de inibir o crescimento em ágar MS foi de 99,97% dos participantes após tratamento e em ágar MSB foi completamente inibido em 100% dos participantes. No grupo 1 (SDF 38%), observou-se reduzido o crescimento bacteriano em 99,81% e 99,59% das placas em ágar MS e MSB respectivamente. No grupo 3 (clorexidina) houve redução do crescimento bacteriano de 86,22% em ágar MS e 90,3% em ágar MSB. No grupo 4 (controle) a redução em ágar MS foi de 18% e em ágar MSB não houve inibição do crescimento de S. mutans. Conclusão: O diamino fluoreto de prata se mostrou mais eficaz quanto a redução de micro-organismos e de S. mutans quando comparado à clorexidina. Da mesma forma em relação a susceptibilidade de Streptococcus à clorexidina foi menor do que a observada para SDF. As duas formulações de SDF têm ação semelhantes, embora o SDF a 30% tenha sido superior quanto à redução microbiana. Não houve diferença intergrupos no comportamento clínico das restaurações 3 meses depois do procedimento restaurador. Introduction: Silver diamine fluoride (SDF) has gained much attention in recent years. Considering the growing interest in the use of SDF and taking into account the emergence of new techniques using this material it was decided to conduct a randomized controlled clinical trial to evaluate the behavior and effects after the selective removal of carious dentin when compared to chlorhexidine. This randomized clinical trial study aims to compare different cavity cleaning agents. Materials and methods: Two SDF solutions at concentrations of 38%, 30% and a 2% chlorhexidine solution were studied. Forty children, between 7 and 10 years of age, were selected. They had caries lesions in the occlusal surface (Black/class I) of primary molars. Subjects was randomly divided into four groups: (G1) 38% SDF; (G2) 30% SDF; (G3) 2% chlorhexidine solution and (G4) control group. During the clinical examination, the carious lesions were identified, classified and x-rayed. The teeth were treated in the subsequent session according to the division of the groups. The dentin samples were collected before and after application of each cleaning agent in the same session, following the manufacturer's instructions and taken for laboratory analysis, where they were divided in two groups: diluted and undiluted. The diluted group was cultured, in brain heart infusion (BHI) and Mitis Salivarius media that was used to grow and count the total microorganisms and Streptococcus mutans after being incubated anaerobically at 37 °C for 72 hours. The undiluted samples were cultured in Mitis Salivarius medium, which allows selective growth of S. mutans. These samples were incubated under microaerophilic conditions at 37° C for 72 hours. Results: The results suggest that the G2 presented a lower number of total microorganisms after the treatment with 30% SDF, followed by G1 and G3. Considering the G4, control group, there was no comparable reduction observed in the test groups. About the S. mutans, G2 also showed superior results, being observed growth inhibition in MS agar in 99.97% of the subjects after treatment, while in MSB agar the growth was completely inhibited in 100% of the participants. Group 1 (SDF 38%) reduced bacterial growth in 99.81% and 99.59% of the plates on MS and MSB agar, respectively. In group 3 (chlorhexidine) there was reduction of bacterial growth of 86.22% in MS agar and 90.3% in MSB agar. In group 4 (control) the reduction in MS agar was 18% and in MSB agar there was no inhibition of S. mutans growth. Conclusions: Silver diamine fluoride was more effective than chlorhexidine when used to reduce total microorganisms and S. mutans. Regarding the susceptibility of Streptococcus to chlorhexidine was lower than that observed for SDF. Both SDF formulations have similar action, although the 30% SDF shows superior antimicrobial activity.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ciências da Saúde, Departamento de Odontologia, Programa de Pós-Graduação em em Odontologia, 2019. Introdução: A estomatite protética é uma infecção fúngica comumente encontrada em usuários de próteses removíveis, especialmente idosos, podendo ser atribuída à disbiose. Produtos naturais têm despertado interesse como alternativa aos medicamentos sintéticos no tratamento da estomatite protética devido à segurança e eficácia. O objetivo desse estudo foi avaliar a eficácia de uma formulação de própolis associada à romã no tratamento da estomatite protética. Métodos: Um total de 40 pacientes idosos com estomatite protética foram alocados aleatoriamente em dois grupos para receber o tratamento tópico por via oral. O grupo controle (C) recebeu 20mg/g de miconazol gel oral e o grupo de estudo (PR) recebeu spray contendo extrato de própolis a 0,5% e extrato de romã a 0,9%, durante 14 dias. Os participantes foram examinados por um dentista nos dias 1, 7 e 14.O escore de Newton foi utilizado para avaliar o aspecto clínico da estomatite protética. O número de colônias de Candida spp foi quantificado e comparado antes e depois do tratamento (dias 1 e 14). Resultados: Ambos os tratamentos reduziram o escore de Newton, com taxa de cura clínica no grupo C de 75% e para o grupo PR de 40%. Houve redução significativa do número de UFC/mL somente para o grupo C. Conclusão: A eficácia clínica da própolis associada à Punica granatum foi não-inferior ao miconazol, considerando a margem de não inferioridade, e pode ser uma alternativa no tratamento da estomatite protética em idosos. Introduction: Denture stomatitis is a fungal infection commonly found in removable denture wearers, specially in older adults, and can be attributed to dysbiosis. Natural products have attracted interest as an alternative to synthetic drugs because of their effectiveness and safety that make them optimal to use in older adults. The objective of this study was to evaluate the efficacy of a propolis formulation associated with Punica granatum for the denture stomatitis treatment. Methods: A total of 40 older patients with denture stomatitis were randomly allocated into two groups in order to receive oral topical treatment. The control group (C) received 20 mg/g miconazole oral gel and the study group (PR) received spray containing 0.5% propolis extract and 0.9% pomegranate extract, during 14 days. Participants were examined by a dentist on days 1, 7 and 14. The Newton’s score was used to assess the clinical aspect of denture stomatitis. The number of colonies of Candida spp was quantified and compared before and after the treatment (days 1 and 14). Results: Both treatments reduced the Newton`s score; the cure rate for group C was 75% and for the PR group was 40%. There was a significant reduction of CFU / mL only in the group C. Conclusion: The clinical efficacy of propolis associated with Punica granatum was non-inferior to the miconazole considering the non-inferiority margin, and may be an alternative in the treatment of denture stomatitis in older adults.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, 2015. A tripanossomíase americana ou doença de Chagas (DC) é uma doença que afeta principalmente a população pobre de países latino americanos. Estima-se que 7-8 milhões de pessoas estão infectadas com Trypanosoma cruzi na América Latina, sendo que cerca de 2 a 3 milhões de pessoas são portadoras da forma crônica no Brasil. Apesar da realização do controle da transmissão vetorial da DC em regiões endêmicas, formas alternativas de transmissão tornaram-se evidentes como a transmissão oral. A transmissão oral ocorre principalmente pela ingestão acidental de triatomíneos infectados ou de alimentos contaminados com dejetos desses triatomíneos ou secreções de animais silvestres infectados com T.cruzi. O suco do açaí produzido artesanalmente é tido hoje como o principal responsável por surtos da DC no Norte do Brasil, pequenos surtos da DC já foram registrados após grupo de pessoas ingerirem a bebida contaminada com T.cruzi nos estados do Amapá, Amazonas e Pará. O objetivo desse trabalho é desenvolver e validar uma metodologia para detectar contaminação por T. cruzi em pasta e bebida de açaí (Euterpe oleracea). Para isto, 10 mL de polpa de açaí foram inoculados com 107 células de formas epimastigotas ou tripomastigotas de T.cruzi, que foram posteriormente isoladas por flutuação em sulfato de zinco, seguido de extração de DNA e análise por PCR. Para a detecção, foram amplificadas as regiões repetitivas do DNA nuclear (TCZ) e o gene ribossomal 28Sα (rDNA 28Sα). Também foram avaliadas a sensibilidade e a especificidade dos primers. A extração de DNA pelo método clorofórmio/álcool isoamílico foi testada após amostras serem isoladas por flutuação em Sulfato de zinco. O limite mínimo de detecção utilizando o gene ribossomal rDNA 28Sα foi observado na ordem de 20 pg de DNA de T. cruzi, enquanto que para as regiões repetitivas nuclear TCZ foi de 20 fg. Os números mínimos detectados de células em 10 mL de polpa de açaí foram: 170.000 tripomastigotas para rDNA 28Sα e 1,7 tripomastigotas para o TCZ. O limite de detecção para a amplificação do gene rDNA 28Sα foi de 400 fg em PCR em tempo real (qPCR) e o número de células detectadas foram 10.000. A metodologia de isolamento de T. cruzi pela flutuação em sulfato de zinco, juntamente com a amplificação de regiões repetitivas do DNA nuclear (TCZ) e do gene ribossomal (rDNA 28Sα) por PCR qualitativa e qPCR, demonstraram ser uma ferramenta aplicável para a detecção de açaí contaminado com T. cruzi. A utilização desta metodologia pode ser apropriada em casos de surtos de transmissão de doença de Chagas por via oral. The American trypanosomiasis or disease of Wounds (DC) is a disease that affects mainly the poor population of Latin American countries. It is estimated that 7-8 million persons are infected with Trypanosoma cruzi in the Latin America and around 2 to 3 million persons have the chronic form in Brazil. Despite the accomplishment of the control of the vector transmission for DC in endemic regions, the alternative forms of transmission became evident like the oral transmission. The oral transmission occurs by accidental ingestion of infected triatomines, foods contaminated with feces of these triatomines or secretions of wild animals infected with T. cruzi. The craftily produced açaí (Euterpe oleracea) juice is considered the main responsible for outbreaks of the DC in the North of Brazil. Small outbreaks of the DC were already registered after groups of persons ingested the juice contaminated with T. cruzi in the states of Amapá, Amazon and Pará. The main objective of this work is to develop and to validate a methodology to detect T. cruzi contaminations in açaí-based foods and beverages. For this, 10 mL of açaí pulp were inoculated with 107 T. cruzi epimastigote or trypomastigote cells, which were subsequently isolated by flotation in zinc sulfate. Next, the extraction of DNA and PCR analysis were conducted. For PCR detection, the repetitive regions of the nuclear DNA (TCZ) and the ribosomal gene 28S α (rDNA 28S α) were amplified. Moreover, the especificity and sensibility of the primers were determined. The method using chloroform/isoamyl alcohol was chosen for T. cruzi DNA extraction from açaí samples. The minimum detection limit for the ribosomal gene rDNA 28Sα was observed in the order of 20 pg of T. cruzi DNA, while for the nuclear repetitive regions TCZ it was 20 fg. The minimum number of cells detected in 10 mL of açaí pulp were 170,000 trypomastigotes for rDNA 28Sα and 1.7 trypomastigotes for TCZ. The detection limit for the amplification of the rDNA 28Sα gene was 400 fg by real time PCR (qPCR) and the number of detected cells were 10,000. The methodology of T. cruzi isolation by flotation in zinc sulfate followed by the amplification of repetitive regions of the nuclear DNA (TCZ) and the ribosomal gene (rDNA 28S α) by qualitative PCR and qPCR, demonstrated to be an applicable strategy to detect T. cruzi contaminations in açaí-based foods and beverages. The application of this methodology can be appropriated in cases of outbreaks of Chagas disease transmission by oral route.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2017. A leishmaniose visceral é uma doença negligenciada, endêmica na Ásia, África, Américas e na região do Mediterrâneo. Cerca de 1,5 a 2 milhões de novos casos ocorrem a cada ano no mundo, sendo que aproximadamente 350 milhões estão sob risco de adquirir a doença e esta é responsável por 70 mil mortes anuais. A evolução clínica depende principalmente da resposta imune do hospedeiro. O cão é considerado o principal reservatório urbano do agente Leismania infantum que é transmitido pelo flebotomíneo Lutzomya longipalpis. Várias proteínas de secreção clássica e de superficie da Leishmania foram testadas como potenciais antígenos. Por outro lado, algumas proteínas intracelulares são capazes de modular a resposta imune do hospedeiro por serem mais imunogênicas e terem sofrido menos pressão seletiva evolutivamente. Durante a infecção, estas moléculas são liberadas após a destruição de amastigotas intracelulares por macrófagos ativados, mas, também podem ser excretadas por caminhos de secreção não-clássicos. Vários antígenos intracelulares, tais como proteínas de choque térmico,as proteínas ribossômicas e as histonas foram investigadas como possíveis vacinas contra diferentes espécies de Leishmania e como marcadores diagnósticos. As proteínas Rab1-GTPase e ADF/Cofilina foram surpreendentemente classificadas como potenciais fatores de virulência e moduladores da resposta imunológica, assim como as proteínas intracelulares mencionadas anteriormente. Desta forma, estudos adicionais que venham permitir melhorias nos metodos diagnósticos e que poderão favorecer a prevenção e o controle desta doença, representam uma perspectiva de melhoria da qualidade de vida da população, principalmente em áreas endêmicas. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar o potencial imunogênico das proteínas Rab1-GTPase e ADF/Cofilina, expressar e purificar as duas proteinas recombinantes e submetê-las a uma avaliação diagnóstica sorológica pelo metódo ELISA. A proteína Rab1-GTPase apresentou mais sitios possíves para epitopos de células B em relação a ADF/Cofilina. No entanto, a ADF/Cofilina possui poucas regiões conservadas, quando avaliadas pelo alinhamento múltiplo. O teste ELISA permitiu testá-las quanto à capacidade de serem reconhecidas por soro de cães infectados com LVC. Todavia, faz-se necessário aumentar o número de amostras e realizar novos testes que possibilitem determinar a sua sensibilidade, especificidade, valor preditivo positivo, valor preditivo negativo e a acurácia como alvos diagnósticos da LVC em testes sorológicos. Visceral leishmaniasis is a neglected disease, endemic in Asia, Africa, the Americas and the Mediterranean region. Approximately 1.5 to 2 million new cases occur every year around the world, with approximately 350 million being at risk of acquiring the disease and accounting for 70,000 annual deaths. The clinical course depends mainly on the immune response of the host. The dog is considered the main urban reservoir of the agent Leismania infantum which is transmitted by the sandfly Lutzomya longipalpis. Several classical and surface secretory proteins of Leishmania were tested as potential antigens. On the other hand, some intracellular proteins are able to modulate the immune response of the host because they are more immunogenic and have suffered less selective pressure evolutionarily. During infection, these molecules are released after the destruction of intracellular amastigotes by activated macrophages, but they may also be excreted by non-classical secretory pathways. Several intracellular antigens, such as heat shock proteins, ribosomal proteins and histones were investigated as possible vaccines against different Leishmania species and as diagnostic markers. Rab1GTPase and ADF/Cofilin proteins were surprisingly classified as potential virulence factors and modulators of the immune response, as well as the intracellular proteins mentioned above. In this way, additional studies that allow improvements in the diagnostic methods and that may favor the prevention and control of this disease represent a perspective of improving the quality of life of the population, especially in endemic areas. Thus, the objective of this study was to evaluate the immunogenic potential of the Rab1-GTPase and ADF/Cofilin proteins, to express and purify the two recombinant proteins and to submit them to a serological diagnostic evaluation by the ELISA method. The Rab1-GTPase protein showed more possible sites for B cell epitopes compared to ADF/Cofilin. However, ADF/Cofilin has few conserved regions when evaluated by multiple alignment. The ELISA test allowed them to be tested for serum recognition of LVC-infected dogs. However, it is necessary to increase the number of samples and perform new tests to determine their sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and accuracy as LVC diagnostic targets in serological tests

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Instituto de Ciências Biológicas, Departamento de Biologia Celular, Programa de Pós-Graduação em Biologia Molecular, 2017. A paracoccidioidomicose é uma micose sistêmica causada por fungos termodimórficos do gênero Paracoccidioides. Embora seja uma das micoses sistêmicas de maior importância na América Latina, tanto por número de ocorrências quanto pela morbidade causada pela forma crônica da doença, trata-se de uma doença negligenciada e, portanto, vários aspectos relevantes à clínica da micose e à biologia do fungo não estão bem elucidados. A despeito dos registros de ocorrência da micose, o diagnóstico dessa é de difícil execução, pela dificuldade de se isolar o fungo a partir de hospedeiros infectados e pela relativa falta de padronização e elevada ocorrência de reações cruzadas em testes de imunodiagnóstico. Assim, dentre as estratégias para a melhoria do diagnóstico da doença, está o uso de proteínas expressas de forma heteróloga para servirem como alvos mais específicos e padronizáveis nestes testes. Já em relação à biologia de fungos, é sabido que poucas espécies fúngicas são capazes de infectar organismos homeotérmicos, em relação ao número de espécies capazes de infectar organismos pecilotérmicos. Em face disso, alguns trabalhos na literatura sugerem que a temperatura dos hospedeiros representa uma barreira importante para a infecção fúngica e que os mecanismos moleculares de termotolerância dos fungos patogênicos são fatores de virulência importantes. Recentemente, a proteína TCTP foi encontrada em trabalhos de proteoma em ambas as fases micelial e leveduriforme de Paracoccidioides lutzii, além de possuir estrutura primária idêntica à TCTP de Paracoccidioides brasiliensis, fazendo dessa proteína um candidato para imunodiagnóstico. Além disso, a proteína TCTP foi apontada em outros organismos como uma chaperona molecular de importância em situações de estresse térmico. Assim, o presente trabalho objetiva avaliar estas duas vertentes para os fungos do gênero Paracoccidioides. Propiedades relevantes para o imunodiagnóstico foram preditas in silico e apontam para a presença de fosforilações na proteína, bem como um alto grau de conservação de estrutura primária em eucariotos e, particularmente, em fungos. A proteína foi produzida em quantidades apreciáveis e com pureza considerável por meio de expressão heteróloga em Escherichia coli. Ensaios de ELISA e Western Blot utilizando a TCTP indicam que a proteína não foi reconhecida pela maioria dos soros oriundos de camundongos infectados com P.brasiliensis. Já em relação às propriedades de chaperona, ensaios de dicroísmo circular indicam que a proteína nativa é termoestável. Além disso, a expressão da TCTP em culturas de E.coli as tornaram mais resistentes a estresse térmico. Como perspectivas a esse trabalho estão a aplicação de sub-regiões da proteína como alvos em imunodiagnóstico e aplicações no desenvolvimento de vacinas contra a micose, além de se caracterizar as propriedades de chaperona propriamente ditas da TCTP. Paracoccidioidomycosis is a systemic mycosis caused by thermodimorphic fungi of the Paracoccidioides genus. Even though it is one of the most important systemic mycosis in Latin America, as a consequence of the number of its occurrences and the morbidity caused by the chronic phase of the disease, it is a neglected disease and, as such, many relevant aspects of its clinical approach and of the fungal biology are yet to be characterized. Despite the high occurrence records, the diagnostic of this mycosis is hard to be executed, because of the difficulty of isolating the fungus from infected hosts and because of the high cross-reaction occurrences in immunodiagnostic tests. In order to improve the diagnostics, one of the strategies being employed is the use of heterologously expressed proteins as targets of the immunodiagnostic tests, as they can be more precise and standardisable targets. As for the fungal biology, it is known that few fungal species are able to infect homeotherm hosts, in comparison to the number of species able to infect poikilotherm hosts. In face of this, some studies in the literature suggest the host temperature as an important barrier to the fungal infection and molecular mechanisms associated with the fungal thermotolerance as important virulence factors. Recently, the TCTP protein was found in proteome studies of both the mycelial and yeast forms of Paracoccidioides lutzii, in addition of having identical primary protein structure with the Paracoccidioides brasiliensis form of TCTP, properties which make this protein an interesting target for immunodiagnostics. In addition, the TCTP protein was identified as a molecular chaperone with significant importance in thermal stress situations. Therefore, the present study aims to evaluate these two aspects for the fungi of the Paracoccidioides genus. Relevant properties for the immunodiagnosis using this protein were predicted in silico and point to a considerable amount of phosphorilations in it as well as a high conservation of it among eukariotes and, particularly, in fungi. The protein was produced in considerable amounts and purity through heterologous expression in Escherichia coli.Immunodiagnostic tests of ELISA and Western Blot assays using the TCTP indicate this protein as not being recognized by most mice sera experimentally infected with P.brasiliensis. As in relation to the chaperone properties of the protein, circular dichroism assays indicate the native protein as thermally stable. Moreover, TCTP expression in E.coli cultures made them more resistant to thermal stress. The perspectives of this study are the application of sub-regions of the protein as targets in immunodiagnostic assays, as well as applications in vaccine development against the mycosis and the evaluation of the chaperone properties themselves of TCTP.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Ceilândia, Programa de Pós-Graduação em Ciências e Tecnologias em Saúde, 2016. Introdução: Estomatite Protética é um quadro associado à infecção fúngica de etiologia multifatorial, comum em usuários de prótese total. O desenvolvimento de produtos à base de própolis para seu tratamento tem atraído interesse especial devido a sua efetividade e segurança, tornando-se uma excelente alternativa para o uso em idosos. O objetivo desse estudo foi avaliar a eficácia de uma formulação muco-adesiva à base de gel contendo extrato padronizado de própolis (EPP-AF®) para tratamento de estomatite protética por Candida spp. Métodos: Um total de 40 pacientes idosos foi alocado em dois grupos, aleatoriamente, em um ensaio clínico de não inferioridade (NCT02818803). O grupo controle (MIC) foi tratado com gel de miconazol 20 mg/g e o grupo de estudo (PROP) foi tratado com a formulação contento extrato padronizado de própolis a 2% (20 mg/g) (EPP-AF®) durante 14 dias. Os pacientes foram examinados por um cirurgião-dentista nos dias T0, T7 e T14. A classificação de Newton foi usada para classificar a estomatite protética. As unidades formadoras de colônia (UFC/mL) foram quantificadas e identificadas (CHROMagar Candida®) para comparação antes e depois do tratamento (dias T0 e T14). Resultados: Idade, gênero, tempo de uso da prótese, características basais da classificação de Newton e contagem inicial de UFC/mL não diferiram nos dois grupos. Ambos os tratamentos reduziram os valores na escala de Newton (P