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Natural populations of the spider crab Maja brachydactyla constitute a fishery resource of great economic importance in many countries. As in the rest of eubrachyurans, the females of this species have ventral-type seminal receptacles where they store sperm from copulations. Sperm can be stored in these structures for months and even years before egg fertilisation, with the consequent degradation of the sperm cells during the time. In this work, we analyse the viability and the possible genetic damage in sperm accumulated in the seminal receptacles of M. brachydactyla females as a function of the storage time (from 0 to 14 months) using the comet assay technique. On one hand, we developed an algorithm for comet image analysis that improves the comet segmentation compared with the free software Open comet v1.3.1 (97% vs. 76% of detection). In addition, our software allows the manual modification of the contours wrongly delimited via the automatic tool. On the other hand, our data show a sharp decline in sperm viability and DNA integrity in the first four months of storage, which could lead to a decrease in the fecundity rate and/or viability of the embryos or larvae from the second and third clutches of the annual cycle if the repair capacity in these gametic cells is low.

[Resumen] La citogenética es el estudio de la morfología, la estructura y el funcionamiento de los cromosomas. En el transcurso de poco más de 100 años, ha nacido y se ha desarrollado hasta convertirse en una de las herramientas más versátiles de la genómica, gracias al perfeccionamiento de técnicas cada vez más selectivas y refinadas. En este trabajo, se obtuvieron cromosomas metafásicos de varias especies: Palaemon elegans, Mytilus galloprovincialis, Lens culinaris, Allium cepa, Canis familiaris y Homo sapiens. Después, se puso en práctica el bandeo G en los cromosomas de H. sapiens. Debido a las variedad de especies, con cada una se llevaron a cabo protocolos específicos de obtención de cromosomas metafásicos. Los resultados obtenidos fueron después contrastados con la literatura existente respecto a cada una de las especies utilizadas., {Abstract] Cytogenetics is the study of the morphology, the structure and the functioning of chromosomes. In the course of slightly more than 100 years, it has been born and developed into one of the most versatile tools in the field of genomics, thanks to the perfectioning of continuously more selective and refined techniques. In this project, metaphase chromosomes of several species have been obtained: Palaemon elegans, Mytilus galloprovincialis, Lens culinaris, Allium cepa, Canis familiaris and Homo sapiens. Afterwards, G banding was carried out on H. sapiens chromosomes. Due to the high variety of species, specific protocols of chromosome obtention were used in each case. The results of this project were then contrasted with existing literature about each of the selected species.

Una de las principales formas de energía es la electricidad, la cual se consume en el mundo y constituye parte integral de los seres humanos. Sin embargo, lo que enmarca a esta actividad provoca contaminación del aire y el agua. La empresa Termoeléctrica Termogas Machala ha recibido quejas de ser una posible fuente de contaminación del agua de la playa de Bajo Alto, parroquia Tendales, Provincia de El Oro. Esta investigación se desarrolló desde el 2012 al 2015. Con la finalidad de evaluar los impactos al recurso agua derivados de la operación de la Central Termoeléctrica se determinaron i) los parámetros físico-químicos del agua de descarga: Temperatura, pH, Demanda Química de Oxígeno (DQO), Sólidos Suspendidos Totales (SST), ii) la concentración de contaminantes químicos: Hidrocarburos Totales de Petróleo (HTP), Aceites y Grasas (AyG), Metales Pesados, Sulfuros y Fenoles, y iii) contaminantes biológicos: Coliformes Totales (CT) y Fecales (CF), para compararlos con los Límites Máximos Permisibles de descarga desde centrales termoeléctricas (2007) y las normas generales para descarga de aguas residuales domésticas e industriales TULSMA (2015) y evidenciar si existe contaminación por parte de la Termoeléctrica al cuerpo receptor de agua marina. En las aguas de descarga, los parámetros físico-químicos se encontraron dentro de los límites permisibles, al igual que los contaminantes químicos. No se detectaron metales pesados, Cu, Cr+6, Pb ni Zn. Se observó contaminación de tipo biológica por Coliformes Fecales en el año 2015 donde se registraron valores máximos en el Límite Máximo Permisible de 2000 NMP/100 mL. Finalmente se realizó un análisis de componentes principales y una correlación de Pearson donde se observó correlación entre HTP y AyG (r=0,673; p=0,000); CT y CF (r=0,885; p=0,000) y SST vs DQO (r=0,791; p=0,000). Se concluye que la contaminación química como biológica del sector procede de fuentes externas a este proceso industrial de generación eléctrica.

To obtain a better understanding of the functioning of ecosystems and how they respond to disturbance, it is necessary to identify the relevant biotic interactions and specific trophic roles. Predation is one of the most important biotic interactions that can also define the spatial patterns of other species. Many predators are considered key species for the functioning and maintenance of ecosystems, as they play an important ecological role that can influence the dynamics at lower trophic levels. The Norway lobster Nephrops norvegicus is one of the most valued European fishing stocks. However, its value and capture have declined over the last decade. In the Atlantic Ocean, Atlantic cod Gadus morhua is the main predator of N. norvegicus. However, this species is not present in the Mediterranean Sea, and little is known about which species might prey on N. norvegicus in this area. Here, we combine 2 methodologies—genetic identification of stomach contents and stable isotope analyses—to identify, for the first time, the main predators of N. norvegicus in the Mediterranean Sea. Moreover, we have created the Predation Index, which determines the most influential predator affecting N. norvegicus population dynamics. Our results reveal that the major predators are the cephalopods Sepietta spp. and Abralia veranyi, which probably affect the early stages of N. norvegicus, followed by the elasmobranch Scyliorhinus canicula and the bony fishes Merluccius merluccius, Trigla lyra, and Conger conger. To evaluate possible fluctuations in the N. norvegicus population, we consider the assessment of these predator populations crucial

[Resumen] El propósito de este estudio es poder aprender acerca de la especie Columba livia (Gmelin, 1789), recogiendo información acerca de poblaciones de varios territorios de Europa, desde septiembre hasta diciembre del 2021, con el fin de estudiar sus distribuciones fenotípicas, agrupándolos por sus semejanzas. Hemos contado y evaluado un total de 645 individuos, más la información recogida de otros estudios. Tras esto, hemos confirmado que las distribuciones son diferentes entre poblaciones, así que hemos determinado si estas diferencias se deben a algunas características de los territorios estudiados., [Resumo] O propósito de este estudo é aprender acerca da especie Columba livia (Gmelin, 1789), recollendo información sobre poboacións de territorios de Europa, dende setembro ata decembro de 2021, co fin de estudar as súas distribucións fenotípicas, agrupándoos polas súas semellanzas. Contamos e avaliamos un total de 645 individuos, máis a información recollida doutros estudos. Tras isto, confirmamos que as distribucións son diferentes entre población, polo que determinamos se estas diferenzas débense a algunhas características dos territorios estudados., [Abstract] The purpose of this study is to learn about the specie Columba livia (Gmelin, 1789), recording data about populations from some territories of Europe from September to December of 2021, in order to study their phenotypic distributions, grouping them by their similarity. We counted and successfully evaluated a total of 645 individuals, plus the information collected by other studies. After this, we have confirmed that there are different distributions between populations, so we determined if these differences are due to some characteristics of the studied territories.

[Resumen] En los últimos años, el ADN ambiental (eDNA) ha demostrado ser un método prometedor y eficiente para el monitoreo de la biodiversidad, por ejemplo, los peces en los ecosistemas acuáticos. La fauna de peces del Canal de Panamá ha cambiado dramáticamente en los últimos años con la introducción de especies marinas no autóctonas (Castellanos-Galindo y col., 2020) lo que merece estudios más profundos para evaluar los futuros riesgos ambientales. Los avances recientes permiten amplios estudios de los sistemas acuáticos utilizando técnicas de código de barras de ADN (metabarcoding) de ADN ambiental. Sin embargo, el éxito de estos estudios depende en gran medida de la disponibilidad de bases de datos de ADN de referencia de relevancia local y de la elección de los cebadores utilizados para la amplificación por PCR. La mayoría de los estudios basados en el ADN de la diversidad de los vertebrados apuntan al uso del locus mitocondrial COI, pero para los peces están mejor resueltos a especies que utilizan otros loci (Zhang y col., 2020). Con el presente estudio se evalúa el uso de tres loci mitocondriales: ARNr 12S, ARNr 16S y COI, para proporcionar opciones multilocus para identificaciones a nivel de especie que tendrán una amplia aplicación en la identificación de especies de peces y estudios en donde se utilice ADN ambiental., [Abstract] In recent years, environmental DNA (eDNA) has proven to be a promising and efficient method for monitoring biodiversity, for example, fish in aquatic ecosystems. The fish fauna of the Panama Canal has changed dramatically in recent years with the introduction of non-native marine species (Castellanos-Galindo et al., 2020), which requires further studies to assess future environmental risks. Recent advances allow extensive studies of aquatic systems using DNA barcoding (metabarcoding) techniques of environmental DNA. However, the success of these studies is highly dependent on the availability of locally relevant reference DNA databases and the choice of primers used for PCR amplification. Most DNA-based studies of vertebrate diversity use the mitochondrial COI locus for species identification, but fish may be better resolved to species using other loci (Zhang et al., 2020). In this study, I evaluated the use of three mitochondrial loci: the 12S rRNA, 16S rRNA and COI, to provide multilocus options for species-level identifications that will have broad application for identification of fish species and studies using environmental DNA.

[Resumen] En la actualidad, el autoensamblaje de moléculas a través de interacciones covalentes se ha postulado como una herramienta de gran utilidad para la síntesis de nuevos receptores moleculares, que son de gran interés en biomedicina por su versatilidad y múltiples aplicaciones. Específicamente, los complejos host-guest resultan especialmente interesantes, ya que pueden responder a estímulos externos como cambios en el medio celular externo y ser modulados para su utilización como sistemas de liberación controlada de fármacos. Entre estos compuestos, destaca el macrociclo red box cuya capacidad aceptora puede ser modulada mediante reacciones redox y cambios de pH, con el fin de maximizar su potencial como vehículo de liberación controlada de fármacos en aplicaciones biomédicas. Como primer paso para evaluar el potencial de la red box como sistema de liberación de fármacos, en el presente estudio se evaluó su biocompatibilidad mediante la realización de ensayos biológicos basados en medidas de la viabilidad celular y citotoxicidad en una línea celular normal (HFF-1) y otra tumoral (HeLa). Además, para confirmar que el macrociclo es capaz de atravesar la membrana plasmática, se llevó a cabo un estudio de internalización celular. Los resultados mostraron que la red box afectó en mayor medida a la viabilidad y proliferación celular de la línea no tumoral, lo cual podría estar relacionado con la mayor velocidad de división de las células cancerosas y/o una mayor permeabilidad al compuesto de la línea no tumoral. Asimismo, el estudio preliminar de internalización celular en células HeLa reveló la entrada de un pequeño porcentaje de red box en el interior de las células siendo mayor a las 24 h de exposición., [Resumo] Na actualidade, a autoensamblaxe de moléculas a través de interaccións covalentes postulouse como unha ferramenta de gran utilidade para a síntese de novos receptores moleculares, que son de gran interese en biomedicina pola súa versatilidade e múltiples aplicacións. Especificamente, os complexos host-guest resultan especialmente interesantes, xa que poden responder a estímulos externos, coma cambios no medio celular externo e ser modulados para a súa utilización como sistemas de liberación controlada de fármacos. Entre estes compostos, destaca o macrociclo red box cuxa capacidade aceptora pode ser modulada mediante reaccións redox e cambios de pH, co fin de maximizar o seu potencial como vehículo de liberación controlada de fármacos en aplicacións biomédicas. Como primeiro paso para avaliar o potencial da red box como sistema de liberación de fármacos, no presente estudo avaliouse a súa biocompatibilidade mediante a realización de ensaios biolóxicos baseados en medidas da viabilidade celular e citotoxicidade nunha liña celular normal (HFF-1) e outra tumoral (HeLa). Ademais, para confirmar que o macrociclo é capaz de atravesar a membrana plasmática, levouse a cabo un estudo de internalización celular. Os resultados mostraron que a red box afectou en maior medida á viabilidade e proliferación celular da liña non tumoral, o cal podería estar relacionado coa maior velocidade de división das células cancerosas e/ou unha maior permeabilidade ao composto da liña non tumoral. Así mesmo, o estudo preliminar de internalización celular en células HeLa revelou a entrada dun pequeno porcentaxe de red box no interior das células sendo maior ás 24 h de exposición., [Abstract] Nowadays, self-assembly of molecules through covalent interactions has been postulated as a very useful tool for the synthesis of new molecular receptors, being of great interest in biomedicine due to their versatility and multiple applications. Specifically, hostguest complexes are especially interesting, since they can respond to external stimuli as those from the external cellular environment and be modulated for their use as controlled drug delivery systems. Among these compounds, the macrocycle red box, whose acceptor capacity can be modulated by redox reactions and changes in pH to maximize its potential as a vehicle for controlled drug delivery in biomedical applications, is of great interest. As a first step to evaluate its potential as a drug delivery system, in the present study the biocompatibility of red box was evaluated by conducting biological assays based on measurements of cell viability and cytotoxicity in a normal cell (HFF-1) and in a tumor cell (HeLa) lines. Furthermore, to confirm the macrocycle capability to cross the cell membrane, a cell internalization study was carried out. The results showed that the red box affected the cell viability and proliferation of the non-tumor line to a greater extent, which could be related to the higher division rate of cancer cells and/or the major permeability to the compound of the non-tumor line. Likewise, the preliminary study of cellular internalization in HeLa cells revealed the entry of a small percentage of red box inside the cells, being higher after 24 h of exposure.

[Resumen]: Las especies reactivas de oxígeno (ROS: reactive oxygen species) son fundamentales en la señalización celular de múltiples procesos como la expresión génica o la apoptosis. Asimismo, se ha descrito una relación entre el aumento de ROS intracelular y diversas patologías como el cáncer o el Alzheimer. Debido a esto, el desarrollo de herramientas que permitan regular los niveles de ROS es necesario. El presente trabajo de fin de grado se centró en el estudio preliminar de la citotoxicidad y la producción de ROS de distintos compuestos derivados del viológeno. Dos de estos compuestos presentan una unidad de viológeno en su estructura: el Paraquat (P), un herbicida conocido por su citotoxicidad y capacidad de inducción de estrés oxidativo y PTPP, un compuesto análogo al Paraquat que presenta un transportador mitocondrial que aporta selectividad en su diana celular. Los otros dos compuestos estudiados presentan un enlace hidrazona entre los anillos de piridinio de la unidad del viológeno: H es un compuesto de estructura similar a P pero con este enlace en su estructura y HTPP, un análogo de H dirigido a la mitocondria. La capacidad de estos compuestos de disminuir la viabilidad celular y de aumentar el estrés oxidativo fue estudiado en varias líneas celulares (RAW264.7, HeLa, A549), siendo las 2 últimas de origen tumoral. Los resultados obtenidos parecen indicar que los compuestos con enlace hidrazona en su estructura (H, HTPP) presentan patrones de citotoxicidad y de producción de ROS distintos a los observados con los derivados del viológeno (P, PTPP). Además, se encontró una citotoxicidad selectiva para las células cancerígenas del compuesto H, si bien, es necesario realizar más estudios para determinar su potencial antitumoral y mecanismo de actuación., [Resumo]: As especies reactivas de osíxeno (ROS: reactive oxygen species) son fundamentais na sinalización celular de múltiples procesos como a expresión xénica ou a apoptose. Do mesmo xeito, describiuse unha relación entre o aumento de ROS intracelular e distintas patoloxías coma o cancro ou o Alzheimer. Debido a isto, é necesario o desenvolvemento de ferramentas que permitan regular os niveis de ROS. Este traballo de fin de grado centrouse no estudo preliminar da citotoxicidade e a produción de ROS de distintos compostos derivados do violóxeno. Dous destes compostos presentan unha unidade de violóxeno na súa estrutura: O Paraquat (P), un herbicida coñecido pola súa citotoxicidade e a capacidade de inducir estrés oxidativo e PTPP, un composto análogo ao Paraquat que presenta un transportador mitocondrial, que aporta selectividade na diana celular. Os outros dous compostos estudados presentan un enlace hidrazona entre os aneis de piridinio do violóxeno : H é un composto cunha estrutura similar a P pero con este enlace na súa estrutura e, HTPP, é un análogo de H dirixido á mitocondria. A capacidade destes compostos de diminuír a viabilidade celular e aumentar o estrés oxidativo estudouse en varias liñas celulares (RAW264.7, HeLa, A549), sendo as últimas dúas de orixe tumoral. Os resultados obtidos parecen indicar que os compostos con enlace hidrazona na súa estrutura (H, HTPP) presentan patróns de citotoxicidade e de produción de ROS distintos aos observados nos derivados do violóxeno (P, PTPP). Ademais, encontrouse unha citotoxicidade selectiva para as células canceríxenas do composto H, aínda que é necesario realizar máis estudos para determinar o seu potencial antitumoral e o seu mecanismo de acción., [Abstract]: Reactive oxygen species (ROS) are essential in cell signalling of multiple processes such as gene expression or apoptosis. Likewise, a relationship between the increase in intracellular ROS and various pathologies such as cancer or Alzheimer's has been described. Due to this, the development of tools to regulate ROS levels is necessary. This TFG is focused on the preliminary study of cytotoxicity and ROS production of different compounds derived from viologen. Two of these compounds contains a viologen moiety: Paraquat (P), an herbicide known for its cytotoxicity and capacity to induce oxidative stress, and PTPP, an analog of Paraquat bearing a mitochondrial carrier that provides selectivity in its cellular target. The other two compounds studied have a hydrazone bond between the pyridinium rings of the viologen: H, that is a compound with a similar structure to P but with this bond in its structure, and HTPP, an analog of H targeted to the mitochondria. The ability of these compounds to decrease cell viability and increase oxidative stress was studied in several cell lines (RAW264.7, HeLa, A549), being the last 2 ones from tumor origin. The results obtained seem to indicate that the compounds with hydrazone bond in their structure (H, HTPP) presented patterns of cytotoxicity and ROS production different from those observed with the viologen derivatives (P, PTPP). In addition, a selective cytotoxicity for cancer cells of compound H was found, although more studies are needed to determine its antitumor potential and mechanism of action.

[Abstract] Many marine species are under high fishing pressure, which can cause alterations in their mating systems and the structure of their populations. The spiny spider crab Maja brachydactyla is a commercial decapod on the east Atlantic coast. In Galicia, the most exploited region in Spain, the landing of ovigerous females is prohibited, favouring exploitation focused on males. The removal of males, especially the largest ones, may lead to sperm limitation and a reduction in the average size over generations. In these cases, polyandry can work as a mechanism to protect females against sperm limitation and to increase genetic diversity and effective population size. This study analyses the multiple paternity in M. brachydactyla in two localities that differ in female fecundity, fishing intensity, and management measures. Our results showed multiple paternity in this species for the first time, with a moderate bias between sires. However, the frequency of multiple paternity was almost seven times higher in the intensely exploited Golfo Ártabro (NW Spain; 69%) than in Carna (W Ireland; 10%), where exploitation levels and female fecundity are lower.

[Abstract] The spiny spider crab Maja brachydactyla is a decapod of high commercial interest. Despite the large number of studies conducted on this species, genetic research is still scarce. This doctoral thesis was focused on studying genetic aspects of the biology of M. brachydactyla relevant for a sustainable exploitation of stocks. As these studies require high-quality DNA, the first step consisted of performing methodological improvements of DNA extraction process, from choosing an adequate starting tissue to selecting the most effective protocol, both for adults and eggs. These improvements for DNA extraction facilitated the analysis of nuclear and mitochondrial markers. The analysis of microsatellites revealed multipaternity, although the prevalence differed between populations with different exploitation levels, probably due to the selective fishing focused on large males promoted by some fishing regulations. The analysis of mitochondrial genes disclosed heteroplasmy, likely caused by hybridisation with the congeneric species Maja squinado. Multipaternity and heteroplasmy, together with the high connectivity of the stocks, are probably responsible for the typical sperm limitation and genetic diversity loss of highly exploited populations not being detectable in this crab yet. However, if intense fishing continues, spider crab stocks will reach an unbridgeable bottleneck. For this reason, it is urgent to review the management measures that promotes male-selective fishing in M. brachydactyla., [Resumen] La centolla Maja brachydactyla es un decápodo de gran interés comercial. A pesar de los múltiples trabajos realizados sobre esta especie, los estudios genéticos son todavía escasos. Esta tesis doctoral se centró en el estudio de aspectos genéticos de la biología de M. brachydactyla relevantes para una explotación sostenible de los stocks. Dado que estos estudios requieren ADN de alta calidad, el primer paso consistió en realizar mejoras metodológicas en el proceso de extracción de ADN, desde la elección de un tejido inicial adecuado hasta la selección del protocolo más eficaz, tanto para adultos como para huevos. Estas mejoras para la extracción de ADN facilitaron el análisis de marcadores nucleares y mitocondriales. El análisis de microsatélites reveló multipaternidad, aunque la prevalencia varió entre poblaciones con diferentes grados de explotación, probablemente debido a la pesca selectiva de machos grandes promovida por algunas normas de regulación pesquera. El análisis de genes mitocondriales reveló heteroplasmia, posiblemente causada por la hibridación con la especie congénere Maja squinado. La multipaternidad y la heteroplasmia, junto con la alta conectividad de los stocks, son probablemente la causa de que la limitación de esperma y la pérdida de diversidad genética típicas de las poblaciones explotadas todavía no sean detectables en centolla. Sin embargo, si este intenso grado de explotación continúa, los stocks alcanzarán un cuello de botella insalvable. Por esta razón, es urgente revisar las medidas de gestión que promueven la pesca selectiva de machos en M. brachydactyla., [Resumo] A centola Maja brachydactyla é un decápodo de grande interese comercial. A pesar dos múltiples estudos realizados nesta especie, os estudos xenéticos son aínda escasos. Esta tese de doutoramento centrouse no estudo de aspectos xenéticos da bioloxía de M. brachydactyla relevantes para unha explotación sostible dos stocks. Dado que estes estudos requiren ADN de alta calidade, o primeiro paso consistiu en realizar melloras metodolóxicas do proceso de extracción de ADN, desde a elección dun tecido inicial adecuado ata a selección do protocolo máis eficaz, tanto para adultos como para ovos. Estas melloras para a extracción de ADN facilitaron a análise de marcadores nucleares e mitocondriais. A análise de microsatélites revelou multipaternidade, aínda que a prevalencia variou entre poboacións con distinto grao de explotación, probablemente debido á pesca selectiva de machos grandes promovida por algunhas normas de regulación pesqueira. A análise de xenes mitocondriais revelou heteroplasmia, posiblemente causada pola hibridación coa especie conxénere Maja squinado. A multipaternidade e a heteroplasmia, xunto coa elevada conectividade dos stocks, son probablemente a causa de que a limitación de esperma e a perda de diversidade xenética típica de poboacións explotadas aínda non sexan detectables en centola. Non obstante, se este elevado grao de explotación continúa, os stocks chegarán a un pescozo de botella insslvable. Por este motivo, é urxente revisar as medidas de xestión que promoven a pesca selectiva de machos en M. brachydactyla.

[Resumen] La terapia celular con células madre mesenquimales (MSCs) se ha convertido en una herramienta de gran interés en diversas aplicaciones de medicina regenerativa debido a las numerosas propiedades de estas células, entre las que se incluyen, su capacidad de renovación y diferenciación. A su vez, la terapia génica de MSCs permite potenciar las propiedades de esta población celular, de modo que expresen el gen terapéutico de interés, con el fin de promover el proceso de regeneración tisular. Los transposones son un tipo de sistema de transferencia génica no viral con gran potencial en este tipo de terapias, debido a que combinan la capacidad de lograr una expresión génica estable característica de los vectores virales, con el uso de componentes no infecciosos más seguros. Estos sistemas se basan en la utilización de dos plásmidos, un plásmido donante (tranposón piggyBac) y un plásmido ayudante (transposasa) que mediante un mecanismo de “corta y pega” producen la integración del transposón en regiones específicas de la célula huésped. En el presente trabajo se estudió la eficiencia de transfección del transposón piggyBac en cultivos primarios de MSCs mediante la utilización de dos tipos de vectores no virales: Lipofectamina y TransIT2020. Los resultados obtenidos mostraron que la combinación 100/100 transposón/transposasa con el reactivo TransIT2020 llevó a los niveles más altos y sostenidos de expresión de la proteína verde fluorescente (GFP) en MSCs. Futuros estudios incluyendo la cuantificación de la expresión de GFP mediante medidas de fluorescencia y la selección de colonias de MSCs transfectadas de forma estable con el antibiótico G418, podrían ayudar a confirmar estas observaciones., [Resumo] A terapia celular con células nai mesenquimais (MSCs) converteuse nunha ferramenta de grande interese en diversas aplicacións de medicina rexenerativa, debido ás múltiples propiedades destas células, entre as que se inclúen a súa capacidade de renovación e diferenciación. Á súa vez, a terapia xénica de MSCs permite mellorar as propiedades desta poboación celular, de xeito que expresen o xene terapéutico de interese, co fin de promover o proceso de rexeneración do tecido. Os transposóns son un tipo de sistema de transferencia xénica non viral cun gran potencial neste tipo de terapia, pois combinan a capacidade de obter unha expresión xénica estable característica dos vectores virais, co uso de compoñentes non infecciosos máis seguros. Estes sistemas están baseados na utilización de dous plásmidos, un plásmido doante (tranposón piggyBac) e un plásmido auxiliar (transposasa) que mediante un mecanismo "corte e pegado" producen a integración do transposón en rexións específicas da célula hóspede. No presente traballo, estudouse a eficiencia de transfección do transposón piggyBac nos cultivos primarios de MSC utilizando dous tipos de vectores non virais: Lipofectamina e TransIT2020. Os resultados obtidos mostraron que a combinación de transposón/ transposasa 100/100 co reactivo TransIT2020 levou aos niveis de expresión máis altos e sostidos da proteína fluorescente verde (GFP) en MSC. Futuros estudos incluíndo a cuantificación da expresión de GFP por medicións de fluorescencia e a selección de colonias de MSC transfectadas de forma estable con antibióticos G418, poderían axudar a confirmar estas observacións., [Abstract] Cell therapy with mesenchymal stem cells (MSCs) has emerged as a tool of great interest in regenerative medicine, due to the multiple properties from these cells, including their capacity for renewal and differentiation. Likewise, gene therapy of MSCs allows to enhance the properties from this cell population, in order to express the therapeutic gene of interest promoting tissue regeneration process. Transposons are a type of non-viral gene transfer system with strong potential in this type of therapy, as it combines the ability to achieve stable levels of transgene expression characteristic from viral vectors, with the use of safe non-infectious components. These systems are based on the use of two plasmids, a donor plasmid (transposon piggyBac) and a helper plasmid (transposase) that by means of a "cut and paste" mechanism lead to the integration of the transposon in specific regions from the host cell. In the present work, the transfection efficiency of the piggyBac transposon in MSC primary cultures was studied using two types of non-viral vectors: Lipofectamine and TransIT2020. The results obtained showed that the 100/100 transposon/transposase combination with TransIT2020 reagent led to the highest and most sustained levels of green fluorescent protein (GFP) expression in MSCs. Further studies including the quantification of GFP expression by fluorescence measurements and the selection of MSC colonies stably transfected with G418 antibiotics, could help to confirm these observations.

[Abstract] The rockpool shrimp Palaemon elegans and the common littoral shrimp P. serratus are two ecologically important crustacean species on European coastlines. Palaemon serratus is also an economically relevant resource, since it is considered a prized delicacy in European markets. This PhD thesis aims to contribute to the understanding of the population and reproductive biology of P. elegans and P. serratus by investigating the underlying genetics. Firstly, a phylogeographic analysis was carried out in P. elegans using twenty-one newly developed microsatellite loci. A Mediterranean sympatric cryptic species was revealed, while genetic differentiation was detected in P. elegans sensu stricto across the Atlantic-Mediterranean transition area, with the Almería-Orán Front as biogeographical barrier. Secondly, seven Palaemon mitochondrial genomes, including those of P. elegans and P. serratus, were described and used to conduct phylogenetic analyses. The cryptic species within P. elegans was confirmed, and the Messinian Salinity Crisis was disclosed as its origin. Furthermore, we proposed that the Atlantic and Mediterranean lineages of P. serratus could actually be two separated species. Finally, a gonadal reference transcriptome of P. serratus was de novo assembled and annotated. The first findings on sex-related genes were reported, providing new insights into the sexual development of this commercial species., [Resumen] El camarón de roca Palaemon elegans y el camarón común P. serratus son crustáceos ecológicamente importantes en las costas europeas. Palaemon serratus es también económicamente importante al considerarse una apreciada delicia en los mercados europeos. Esta tesis doctoral pretende ampliar el conocimiento de la biología poblacional y reproductiva de P. elegans y P. serratus investigando diferentes aspectos de la genética subyacente. En primer lugar, se realizó un análisis filogeográfico en P. elegans con veintiún marcadores microsatélite nuevamente desarrollados. Se encontró una especie críptica y mediterránea, así como diferenciación genética en P. elegans sensu stricto a través de la transición Atlántico-Mediterráneo, con el Frente Almería-Orán como barrera biogeográfica. En segundo lugar, se describieron siete genomas mitocondriales de Palaemon, incluyendo los de P. elegans y P. serratus, con los que se realizaron análisis filogenéticos. Se confirmó la especie críptica de P. elegans y se determinó su origen en la Crisis Salina del Messiniense. Además, se propuso que los linajes atlántico y mediterráneo de P. serratus son realmente dos especies. Finalmente, se analizó de novo el transcriptoma gonadal de P. serratus, aportándose los primeros hallazgos sobre genes relacionados con el sexo y proporcionando nueva información sobre el desarrollo sexual de esta especie comercial., [Resumo] O camarón de roca Palaemon elegans e o camarón común P. serratus son crustáceos ecoloxicamente importantes nas costas europeas. Palaemon serratus é tamén economicamente importante ao considerarse unha prezada delicia nos mercados europeos. Esta tese de doutoramento pretende ampliar o coñecemento da bioloxía poboacional e reprodutiva de P. elegans e P. serratus investigando diferentes aspectos da xenética subxacente. En primeiro lugar, realizouse unha análise filoxeográfica en P. elegans con vinte e un marcadores microsatélite novamente desenvolvidos. Atopouse unha especie críptica mediterránea e simpátrica, así como diferenciación xenética en P. elegans sensu stricto a través da transición Atlántico-Mediterráneo, coa Fronte Almería-Orán coma barreira bioxeográfica. En segundo lugar, describíronse sete xenomas mitocondriais de Palaemon, incluídos os de P. elegans e P. serratus, e leváronse a cabo análises filoxenéticas empregándoos. Confirmouse a especie críptica de P. elegans e a súa orixe fixouse na Crise Salina do Messiniense. Ademais propúxose que as liñaxes atlántica e mediterránea de P. serratus sexan realmente dúas especies distintas. Finalmente, analizouse de novo o transcriptoma das gónadas de P. serratus, proporcionando os primeiros achados de xenes relacionados co sexo e ampliando a información sobre o desenvolvemento sexual desta especie comercial.

[Abstract] The genus Palaemon comprises worldwide marine and freshwater shrimps and prawns, and some of them are ecologically or commercially important species. Palaemon is not currently a monophyletic group, so phylogenetics and systematics are constantly changing. Species crypticism has been pointed out in several Palaemon species, being the clearest evidence in the European rockpool shrimp P. elegans. Here we sequenced and described seven European Palaemon mitochondrial genomes. The mitochondrial protein-coding genes were used, along with those of three other Palaemon species, to perform mitogenome phylogenetic analyses to clarify the evolutionary relationships within the genus, and particularly to shed light on the cryptic species found within P. elegans. The Messinian Salinity Crisis (5.3-5.9 Ma, late Miocene) was proposed to be the origin of this cryptic species and it was used as aged constraint for calibration analysis. We provide the largest and the first time-calibrated mitogenome phylogeny of the genus Palaemon and mitogenome substitution rate was estimated (1.59% per million years) in Decapoda for the first time. Our results highlighted the need for future systematics changes in Palaemon and crypticism in P. elegans was confirmed. Mitochondrial genome and cox1 (1.41%) substitution rate estimates matched those published elsewhere, arguing that the Messinian Salinity Crisis was a plausible event driving the split between P. elegans and its cryptic species. Molecular dating suggested that Pleistocene glaciations were likely involved in the differentiation between the Atlantic and Mediterranean populations of P. elegans. On the contrary, the divergence between the Atlantic and Mediterranean populations of the common littoral shrimp P. serratus was greater and dated to be much older (4.5-12.3 Ma, Plio-Miocene), so we considered that they could represent two separated species. Therefore, species crypticism in the genus Palaemon seems to be a common phenomenon.

The genus Palaemon comprises worldwide marine and freshwater shrimps and prawns, and some of them are ecologically or commercially important species. Palaemon is not currently a monophyletic group, so phylogenetics and systematics are constantly changing. Species crypticism has been pointed out in several Palaemon species, being the clearest evidence in the European rockpool shrimp P. elegans. Here we sequenced and described seven European Palaemon mitochondrial genomes. The mitochondrial protein-coding genes were used, along with those of three other Palaemon species, to perform mitogenome phylogenetic analyses to clarify the evolutionary relationships within the genus, and particularly to shed light on the cryptic species found within P. elegans. The Messinian Salinity Crisis (5.3-5.9 Ma, late Miocene) was proposed to be the origin of this cryptic species and it was used as aged constraint for calibration analysis. We provide the largest and the first time-calibrated mitogenome phylogeny of the genus Palaemon and mitogenome substitution rate was estimated (1.59% per million years) in Decapoda for the first time. Our results highlighted the need for future systematics changes in Palaemon and crypticism in P. elegans was confirmed. Mitochondrial genome and cox1 (1.41%) substitution rate estimates matched those published elsewhere, arguing that the Messinian Salinity Crisis was a plausible event driving the split between P. elegans and its cryptic species. Molecular dating suggested that Pleistocene glaciations were likely involved in the differentiation between the Atlantic and Mediterranean populations of P. elegans. On the contrary, the divergence between the Atlantic and Mediterranean populations of the common littoral shrimp P. serratus was greater and dated to be much older (4.5-12.3 Ma, Plio-Miocene), so we considered that they could represent two separated species. Therefore, species crypticism in the genus Palaemon seems to be a common phenomenon.

[Resumen] El ácido desoxirribonucleico o ADN es el contenedor de las instrucciones con las que nuestros organismos se guían durante nuestra etapa evolutiva como seres vivos. Desde finales de siglo XX, los expertos utilizan el ensayo del cometa para estudiar el daño producido en el ADN. Su estudio es importante porque proporciona información de qué agentes físicos y químicos externos pueden deteriorar su estructura. El ensayo del cometa se hizo rápidamente popular porque es sencillo, económico y accesible. Un equipo de biólogos de la Universidade da Coruña está realizando un estudio sobre el daño presente en el ADN de células espermáticas de centollo empleando el ensayo del cometa. Del ensayo obtienen imágenes microscópicas que necesitan analizar para obtener resultados cuantitativos. Para ello emplean herramientas automatizadas que segmentan el ADN en las imágenes y computan las métricas necesarias. No obstante, las herramientas gratuitas para el análisis de imágenes del ensayo no procesan adecuadamente sus imágenes mientras que las herramientas comerciales son costosas. Este proyecto consiste en el desarrollo de una herramienta que cubra sus necesidades. La solución propuesta se basa en la detección y segmentación del ADN en las imágenes mediante el uso de algoritmos automáticos de procesado de imagen por medio del estudio del histograma de las imágenes y la integración de dicha metodología en una herramienta que permite además la segmentación manual de las imágenes de forma simple y eficaz., [Abstract] Since the end of the 20th century, experts worldwide have been widely using the comet assay to study the damage caused to the DNA. Its analysis is relevant because it can reveal what physical and chemical agents have induced deterioration in its structure. The comet assay became popular due to its simplicity, affordability and accessibility. A team of biologists from the University of A Coruña is studying the damage on spider crab spermatic cells DNA using the comet assay. From the assay they obtain microscopic images that need further analysis to retrieve quantitative results. However, available free tools have not been able to process successfully their images and the commercial tools are too expensive. This project involves the development of a tool to fulfill their needs. The solution consists of image processing algorithms to detect and segment the DNA structures through the study of the image histogram which are integrated in a tool that allows the manual segmentation of the images in a simply and effective way.

1. The common littoral shrimp Palaemon serratus is an ecologically and economically important decapod crustacean. Understanding the spatial structure of its populations is crucial to implement effective management strategies. 2. In this study, 17 polymorphic microsatellite nuclear markers were examined in 252 individuals to explore the genetic diversity and the population structure underlying the geographical distribution of this crustacean in European waters. 3. Basic genetic descriptors, population genetic analyses based on F ST, analysis of the molecular variance (AMOVA), Bayesian clustering and the Mantel test were performed. Genetic differentiation was significant among sampling sites. 4. AMOVAs and Bayesian assignment tests showed genetic differentiation among localities from the Atlantic coast and those belonging to the area of the Strait of Gibraltar and the Mediterranean Sea. 5. The Guadalquivir estuary was significantly different from the remaining localities. A biogeographical break was detected to the west of the Strait of Gibraltar, and evidence of isolation by distance was obtained. 6. Localities on both sides of the English Channel showed genetic differentiation with the rest of the Atlantic sampling sites, indicating a biogeographical break in this area. 7. These results will contribute towards the better understanding of the biology and ecology of this shrimp and management of the valuable fishery. Two priority areas were delimited: the Atlantic and the Gibraltar¿Mediterranean. The Guadalquivir estuary, Anglesey and Calais should also be considered as different genetic stocks.

[Resumen]: La diversidad en la apariencia humana responde principalmente a la gran cantidad de caracteres morfológicos externos que presentamos como especie. Estos, a su vez, van a depender de su expresión genética que está condicionada por los factores ambientales, el carácter, etc. En este trabajo estudiaremos dos en concreto, el ratio 2D:4D (diferencia de longitud entre el dedo índice y el dedo anular de cada mano) y del ratio 1D:2D (diferencia de tamaño entre el primer dedo del pie y el segundo). Se compararán estos ratios de las cuatro extremidades de nuestro cuerpo en dos poblaciones: la primera muestreada al azar y formada por 30 individuos, donde compararemos cada ratio en función del sexo, de la tendencia a ser zurdo o diestro y en función de cada lado del cuerpo; la segunda conformada por una familia con tres generaciones donde analizaremos como influyen los mismos rasgos que en la anterior. Los resultados reflejan que no existen diferencias significativas entre los miembros izquierdo y derecho a partir de los individuos analizados. Además también se comprueba que no existe una asociación entre los ratios estudiados y las variables con las que se comparaban., [Resumo]: A diversidade na aparencia humana responde principalmente á gran cantidade de caracteres morfolóxicos externos que presentamos como especie. Estes, á súa vez, dependen da súa expresión xenética, condicionada por factores ambientais, o carácter, etc. Neste traballo estudaranse dous en concreto, o ratio 2D:4D (diferenza de lonxitude entre o dedo índice e o dedo anular de cada man) e o ratio 1D:2D (diferenza de tamaño entre o primeiro dedo do pé e o segundo). Compararanse estes ratios das catro extremidades do noso corpo en dúas poboacións: a primeira mostreada ó azar formada por 30 individuos, nela analizaranse cada ratio en función do sexo, da tendencia a ser zurdo ou destro e en función de cada lado do corpo; a segunda fórmana una familia con tres xeracións onde estudaremos a influencia dos mesmos rasgos comentados anteriormente. Os nosos resultados reflicten que non existen diferenzas significativas entre os membros esquerdo e dereito a partires dos individuos analizados. Ademais conclúese que non existe una asociación entre os ratios estudados e as variables coas que se comparaban., [Abstract]: There are a lot of external morphological human characters which differentiate us from each other. These will depend on their genetic expression that is conditioned by environmental factors, character, etc. In this work we study two in particular, the 2D:4D ratio (difference in length between the index finger and the ring finger of each hand) and the 1D: 2D ratio (size difference between the first toe and the second toe). These four ratios will be compared in two populations: the first randomly sampled and formed by 30 individuals, where we will compare each ratio according to sex, the tendency to be left or right handed and depending on each side of the body; the second one consist in a three generation family where we will analyze this traits as in the previous one. The results reflect that there are no significant differences between the left members and the right based on the analyzed individuals. In addition, it is also verified that there is no association between the ratios studied and the variables with which they were compared.

[Abstract] In this PhD thesis, different genetic studies were carried out in two marine species of the genus Palaemon Weber, 1795 (Crustacea, Decapoda): the common littoral prawn Palaemon serratus (Pennant, 1777) and the rockpool prawn Palaemon elegans Rathke, 1837. Both their European distribution and morphological similarity make them interesting candidate species for developing population and cytogenetic analyses, complementing phylogenetic studies in order to clarify the evolution of the genus Palaemon. Furthermore, given the commercial relevance of P. serratus, this thesis aims to contribute to the effective management and traceability of this natural resource. Firstly, we applied cytogenetic analyses based on conventional staining, banding techniques and fluorescence in situ hybridisation to identify and characterise these two prawn species. The results obtained from this study revealed a high degree of diversity in chromosome number, karyotype and sex determination system, ranging from the putative absence of heteromorphic sex chromosomes to the multiple chromosome system X1X1X2X2/X1X2Y. Afterwards, we carried out a phylogeographic analysis of P. serratus to test intraspecific genetic diversity and geographic structure. A pronounced genetic differentiation was detected between Mediterranean and Atlantic populations and an uncommon phylogeographic boundary was unveiled. Finally, we developed a species-specific PCR-assay as a traceability tool for authentication of P. serratus and other four economically important prawn species., [Resumen] En la presente tesis doctoral se han realizado diversos estudios genéticos en dos especies europeas de camarón pertenecientes al género Palaemon Weber, 1795 (Crustacea, Decapoda): el camarón común P. serratus (Pennant, 1777) y el camarón de roca P. elegans Rathke, 1837. Su distribución europea y su similitud morfológica, las convierten en interesantes candidatas para desarrollar análisis de poblaciones y citogenéticos que complementen los estudios filogenéticos existentes y ayuden a clarificar la evolución del género Palaemon. Además, debido a la importancia comercial de P. serratus, esta tesis pretende contribuir a la gestión y conservación efectiva de este recurso natural, así como a su trazabilidad. En primer lugar, se emplearon técnicas citogenéticas basadas en tinciones convencionales, técnicas de bandeo e hibridaciones in situ fluorescente para identificar y caracterizar estas dos especies de camarón. Los resultados obtenidos revelaron disparidad en el número cromosómico diploide, cariotipo y sistema de determinación sexual de las dos especies estudiadas, variando desde la supuesta ausencia de cromosomas sexuales heteromórficos hasta el sistema múltiple de determinación sexual X1X1X2X2/X1X2Y. En segundo lugar, se realizó un análisis filogeográfico en P. serratus para evaluar la diversidad genética intraespecífica así como su estructura poblacional. Se detectó una pronunciada diferenciación genética entre las poblaciones atlántica y mediterránea que revelaron la existencia de una barrera filogeográfica poco frecuente. Finalmente, se desarrolló un método especie-específico basado en la PCR como herramienta de trazabilidad alimentaria para la autentificación de P. serratus y otras cuatro especies de langostinos y gambas de interés comercial., [Resumo] Na presente tese de doutoramento realizáronse diversos estudos xenéticos en dúas especies europeas de camarón pertencentes ao xénero Palaemon Weber, 1795 (Crustacea, Decapoda): o camarón común P. serratus (Pennant, 1777) e o camarón de roca P. elegans Rathke, 1837. A súa distribución europea e a súa similitude morfolóxica, converten estas dúas especies en interesantes candidatas para desenvolver análises citoxenéticas e de poboacións que complementen os estudos filoxenéticos existentes e que axuden a clarificar a evolución do xénero Palaemon. Ademais, debido á importancia comercial de P. serratus, esta tese pretende contribuir á xestión e conservación efectiva deste recurso natural, así como á súa trazabilidade. En primeiro lugar, empregáronse técnicas citoxenéticas baseadas en tincións convencionais, técnicas de bandeo e hibridacións in situ fluorescentes para identificar e caracterizar as devanditas especies de camarón. Os resultados obtidos revelaron disparidade no número cromosómico diploide, cariotipo e sistema de determinación sexual das dúas especies estudadas, variando dende a suposta ausencia de cromosomas sexuais heteromórficos ata o sistema múltiple de determinación sexual X1X1X2X2/X1X2Y. En segundo lugar, realizouse unha análise filoxeográfica en P. serratus para avaliar a diversidade xenética intraespecífica así como a súa estrutura poboacional. Detectouse unha pronunciada diferenciación xenética entre as poboacións atlántica e mediterránea que revelaron entre elas unha barreira filoxeográfica pouco frecuente. Finalmente, desenvolveuse un método especie-específico baseado na PCR como ferramenta de trazabilidade alimentaria para a autentificación de P. serratus e outras catro especies de lagostinos e gambas de interese comercial.

[Abstract] High concentrations of herbicides proceeding from the agricultural practices come to the aquatic systems, where they exercise its toxic action on no-target organisms, such as microalgae. These organisms are in the base of the trophic chain; any alteration carries effects of long scope on the set of the trophic chain and the flow of energy of the ecosystem, causing permanent functional and structural modifications in ecosystems. The main purpose of this project was to penetrate into the knowledge of the cellular response of the microalga Chlamydomonas reinhardtii, to stress situations provoked by the exposure to atrazine. A methodological approach based on the analysis of the cytome, proteome and transcriptome of this microalga was proposed to characterize in depth the interaction xenobiotic-cell. Molecular and cellular alterations reported in the present work suggest that exposure to chemical substances, such as atrazine, induces ROS that produces physiological and biochemical alterations in cells that finally lead to the occurrence of cellular senescence alterations in the microalgal populations., [Resumo] Debido ao uso estendido de herbicidas na agricultura, a súa presenza en augas naturais é cada vez máis importante. Estes contaminantes exercen a súa actividade tóxica sobre algunhas especies de plantas ou de microorganismos fototróficos para os que non se deseñaron, como as microalgas. Estes organismos unicelulares atópanse na base da cadea trófica dos ecosistemas acuáticos, e calquera axente externo que os perturbe pode causar un desequilibrio maior nos niveis superiores da cadea, provocando modificacións funcionais e estructurais permanentes nos ecosistemas. O proxecto levado a cabo trata sobre o estudo da resposta da microalga Chlamydomonas reinhardtii, sometida a situación de estrés provocada pola atrazina, avaliando os cambios que se producen nas células a curto e medio prazo, a través dunha aproximación metodolóxica baseada na análise do citoma, proteoma e transcriptoma desta especie para caracterizar en profundidade a interacción xenobiótico-célula. Os cambios moleculares e celulares obtidos nestes estudos suxiren que a exposición a produtos químicos, como a atrazina, induce a produción excesiva de especies reactivas de osíxeno que produce cambios fisiolóxicos e bioquímicos nas células que finalmente conducen a fenómenos de senescencia celular en poboacións microalgais., [Resumen] Debido al uso extendido de herbicidas en la agricultura, su presencia en las aguas naturales es cada vez más importante. Estos contaminantes ejercen su actividad tóxica sobre algunas especies de plantas o de microorganismos fototróficos para los que no se habían diseñado, como las microalgas. Estos organismos unicelulares se encuentran en la base de la cadena trófica de los sistemas acuáticos, y cualquier agente externo que los perturbe puede ocasionar un desequilibrio mayor en los niveles superiores de la cadena, provocando modificaciones funcionales y estructurales permanentes en los ecosistemas. El proyecto que se ha llevado a cabo aborda el estudio de la respuesta de la microalga Chlamydomonas reinhardtii, sometida a un estrés provocado por la atrazina, evaluando los cambios producidos en las células a corto y medio plazo, a través de una aproximación metodológica basada en el análisis del citoma, proteoma y transcriptoma de esta especie para caracterizar en profundidad la interacción xenobiótico-célula. Las alteraciones moleculares y celulares obtenidas sugieren que la exposición a sustancias químicas, como la atrazina, induce una sobreproducción de especies reactivas de oxígeno que produce alteraciones fisiológicas y bioquímicas en las células que finalmente conllevan a fenómenos de senescencia celular en las poblaciones microalgales.

[Background] The maintenance of species and the promotion of speciation are closely related to chromosomal rearrangements throughout evolution. Decapoda represents the most species-rich order among crustaceans and, despite its ecological and economic importance, little is known about decapod karyology. We aim at cytogenetically characterizing two sympatric prawn species., [Results] Analysis of mitotic metaphases and meiotic diakinesis of the common prawn Palaemon serratus and the rockpool prawn P. elegans, revealed considerable differences between their karyotypes including chromosome numbers and sex determination systems. The cytogenetic data for P. serratus showed a diploid number of 56 and the putative absence of heteromorphic sex chromosomes. However, the diploid chromosome number in P. elegans was 90 for females and 89 for males. The karyotype of the females consisted of the three largest acrocentric pairs and 42 submetacentric and metacentric pairs, while the karyotype of the males comprised a clearly identifiable large metacentric chromosome and two acrocentric pairs as well as the smaller 42 pairs. These results highlight the presence of the X1X1X2X2/X1X2Y multiple sex chromosome system in P. elegans, which constitute the only sexual system for Decapoda reported cytogenetically using modern techniques. The origin of this sex chromosome system is discussed. We hypothesize that the chromosome evolution within the genus could involve several fusion events giving rise to a reduction on the chromosome number in P. serratus. In both species, the major ribosomal genes were located in two chromosome pairs and hybridization signals of the telomeric sequences (TTAGGG)n were visualized at the telomeres of all chromosomes. C-banding revealed that, when present, constitutive heterochromatin had a predominantly telomeric distribution and no centromeric constitutive heterochromatin was observed., [Conclusions] Although more comparative cytogenetic analyses are needed to clarify our hypotheses, the findings of this work indicate that the prawns of the genus Palaemon represent a promising model among Decapoda representatives to investigate the karyotype evolution and the patterns of sex chromosome differentiation.