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Tesis-Universidad de Murcia., MEDICINA ESPINARDO. DEPOSITO. MU-Tesis 613., Consulte la tesis en: BCA. GENERAL. DEPOSITO. T.M-1935.

Tesis - Universisdad de Murcia., MEDICINA ESPINARDO. DEPOSITO. MU-Tesis 690., Consulte la tesis en: BCA. GENERAL. DEPOSITO. T.M-2129.

Todos sabemos que el síndrome de Down es una alteración genética producida por la existencia de una copia extra de genes situada en el cromosoma 21. Desde hace tiempo se conocen las alteraciones morfológicas del cerebro en las personas con síndrome de Down, así como las posibles relaciones de éstas con la alteración de la función cerebral que produce la discapacidad intelectual. Sin embargo, aún hoy se desconocen qué genes de los triplicados son los implicados en estas alteraciones.

Tesis - Universidad de Murcia., MEDICINA ESPINARDO. DEPOSITO. MU-Tesis 694., Consulte la tesis en: BCA. GENERAL. DEPOSITO. T.M-2132.

Tesis - Universidad de Murcia., Consulte la tesis en: BCA. GENERAL. ARCHIVO UNIVERSITARIO. T.M.-1786.

Tesis-Universidad de Murcia., MEDICINA ESPINARDO. DEPOSITO. MU-Tesis 121., Consulte la tesis en: BCA. GENERAL. ARCHIVO UNIVERSITARIO. T.M.-224.

Antecedentes y estado actual del tema: La Esclerosis Múltiple es una enfermedad autoinmune y neurodegenerativa crónica de base inflamatoria que afecta a la sustancia gris y blanca del sistema nervioso central. Se caracteriza por la presencia de lesiones focales desmielinizantes y afectación difusa del tejido nervioso aparentemente normal, siendo la discapacidad consecuencia de la neurodegeneración progresiva, a la que se superpone la discapacidad que pueda aparecer como consecuencia de un brote. Los llamados tratamientos modificadores de la Esclerosis Múltiple limitan los brotes de inflamación que acontecen en la forma remitente-recurrente pero apenas modifican la progresión de la discapacidad porque no tienen efecto sobre la neurodegeneración. Además estos fármacos carecen de utilidad en la fase progresiva de la enfermedad pues no tienen un carácter neuroprotector ni regenerador de los axones ni de las vainas de mielina afectas. Las Células Mesenquimales producen un amplio rango de moléculas solubles involucradas en inmunomodulación, antiapoptosis, angiogénesis, estimulación de la proliferación y diferenciación celular, anticicatricial y quimiotáctico que ha incentivado el desarrollo de diversos ensayos clínicos con resultados esperanzadores. Sin embargo, se conoce poco sobre el modo de actuación de estas células en la etiopatogenia de la enfermedad. Objetivos de la investigación: El objetivo de este trabajo es analizar el potencial terapéutico y los mecanismos de actuación del trasplante de células mesenquimales en un modelo de desmielinización crónica. Estas propiedades se comparan con la de otros grupos celulares con potencialidad para ser utilizados en terapia celular, como son las células del ligamento periodontal y pulpa dental humanas, de oligodendrocitos maduros inmortalizados, así como del efecto directo del factor trófico FGF8. Además, se analizará la activación de los nichos neurogénicos del propio parénquima cerebral trasplantado y se evaluará la recuperación funcional de los axones remielinizados mediante estudios electrofisiológicos. METODOLOGÍA: Se realizaron los siguientes trasplantes guiados estereotáxicamente en la fimbria derecha del hipocampo de ratones crónicamente desmielinizados con cuprizona: 300.000 células de oligodendrocitos inmortalizados, de células mesenquimales del ligamento peridontal, de la pulpa dental o de la médula ósea, así como bolas de heparina embebidas en FGF8. A otro grupo se les inyectó el mismo volumen de solución vehículo sin células como control quirúrgico. En todos los casos se consideró la fimbria izquierda, contralateral al trasplante, como control de la desmielinización. Se analizó la respuesta frente al trasplante del sistema nervioso desmielinizado, mediante inmunohistoquímica, PCR cuantitativa, electrofisiología y microscopía electrónica. RESULTADOS: Entre los resultados obtenidos destaca la activación y reclutamiento de progenitores de oligodendrocitos en la periferia del trasplante debido a la expresión y liberación de señales tróficas propias de las células trasplantadas. Estos progenitores proceden de nichos neurogénicos relativamente alejados de la zona trasplantada (zona subependimaria de los ventrículos laterales y el giro dentado del hipocampo), pero únicamente cuando son estimulados mediante el trasplante de células mesenquimales de la médula ósea, adquieren la capacidad de madurar a oligodendrocitos formadores de mielina capaces de reconstituir la velocidad de conducción del impulso nervioso del área trasplantada. Además, se observa como la administración intraparenquimal de FGF8 consigue unos resultados similares al trasplante de células mesenquimales procedentes de médula ósea, por lo que se postula que éste factor trófico está implicado directamente en la capacidad remielinizante de éste tipo celular. CONCLUSIONES: En este trabajo se demuestra que el trasplante de células mesenquimales estimula la activación y diferenciación de progenitores de oligodendrocitos endógenos. Además, únicamente mediante el trasplante de células mesenquimales procedentes de la médula ósea se crean las condiciones necesarias para formar nuevas vainas de mielina que restaura las propiedades de conducción en los axones periféricos al trasplante. Estos efectos se deben a factores tróficos secretados por las células trasplantadas que activan los nichos neurogénicos y promueven la proliferación, diferenciación, supervivencia y migración de los progenitores de oligodendrocitos originados de estos nichos.

PALABRAS CLAVE Células madre adultas, células madre neurales, ligamento periodontal, cresta neural, diferenciación neural, recambio celular, marcaje genético, cerebro adulto. RESUMEN Varios estudios previos sugieren que las células madre derivadas de la cresta neural pueden todavía existir en tejidos derivados de la misma, incluido el ligamento periodontal humano (hPDL). En este trabajo se estudia el potencial de diferenciación neural de las células derivadas del hPDL. In vitro, células derivadas del hPDL, bajo condiciones de proliferación, expresan marcadores de células madre mesenquimales, neurales y de la cresta neural. Tras su cultivo en medio inductor neural pueden proliferar formando neuroesferas, cambiando su morfología al cultivarlas con sustrato de adhesión y expresando marcadores de neuronas, astrocitos y oligodendrocitos. In vivo, los injertos celulares sobrevivieron al trasplante, se integraron, migraron y expresaron DCX, NF-M, GABA, GFAP y NG2 en el cerebro de ratón adulto. Las propiedades de diferenciación de las células derivadas hPDL en el cerebro de ratón adulto indica que son una fuente potencial de células madre neurales para su uso en medicina regenerativa. ABSTRACT Several previous studies have suggested that stem cells derived from the neural crest (NC) may still reside in NC-derivatives including the human periodontal ligament (hPDL). In this study we have examined the expression of NC-markers and the neural differentiation potential of hPDL-derived cells. In vitro we found that hPDL-derived cells expressed stem cell markers and a subset of NC cell markers. hPDL-derived cells were able to differentiate into neural-like cells based on cellular morphology and the expression of neural markers. In vivo, grafts of hPDL-derived cells survive transplantation, integrate, migrate and generate surviving human DCX+, NF-M+, GABA+, GFAP+ and NG2+ cells in the adult mouse brain. Some of the grafted hPDL-derived cells could be localized in stem cell niches. The differentiation properties of hPDL-derived cells in the adult brain indicate that hPDL-derived cells are a potential source of neural stem cells for use in regenerative medicine.

Objective: To assess the safety of intraspinal infusion of autologous bone marrow mononuclear cells (BMNC) and, ultimately, to look for histopathological signs of cellular neurotrophism in amyotrophic lateral sclerosis (ALS) patients. Methods: We conducted an open single arm phase I trial. After six months observation, autologous BMNC were infused into the posterior spinal cord funiculus. Safety was the primary endpoint and was defined as the absence of serious transplant-related adverse events. In addition, forced vital capacity (FVC) and ALS-FRS, MRC and Norris scales were assessed six and three months prior to the transplant and quarterly afterwards for one year. Pathological studies were performed in case of death. Results: Eleven patients were included. We did not observe any severe transplant-related adverse event but there were 43 non-severe events. Twenty-two (51%) resolved in ≤2 weeks and only four were still present at the end of follow-up. All were CTCAE grade ≤2. No acceleration in the rate of decline of FVC, ALS-FRS, Norris or MRC scales was observed. Four patients died on days 359, 378, 808 and 1058 postransplant for reasons unrelated to the procedure. Spinal cord pathological analysis showed a greater number of motoneurons in the treated compared to the untreated segments (4.2+/-0.8 mns/section and 0.9+/-0.3 mns/section, respectively). In the treated segments, motoneurons were surrounded by CD90+ cells and did not show degenerative ubiquitin deposits. Interpretation: This clinical trial confirms not only the safety of intraspinal infusion of autologous BMNC in ALS patients but also provides evidence strongly suggesting their neurotrophic activity., Nuestro objetivo fue comprobar la seguridad de la infusión intraespinal de células mononucleadas de médula ósea autóloga (BMNCs) y buscar signos de neurotrofismo celular en pacientes con esclerosis lateral amiotrófica (ELA). Realizamos un ensayo fase I, infundiendo BMNCs en el cordón posterior medular. La seguridad se definió como la ausencia de eventos adversos severos relacionados con el tratamiento. Incluimos once pacientes. No hubo eventos adversos severos relacionados con el tratamiento. Tampoco hubo aceleración del deterioro de la capacidad vital forzada ni de las escalas ALS-FRS, Norris o MRC. Cuatro pacientes fallecieron por razones no relacionadas con el tratamiento. Se observó un mayor número de motoneuronas/sección en los segmentos tratados que en los no tratados (4.2±0.8 y 0.9±0.3 respectivamente). Estas motoneuronas estaban rodeadas por células CD90+ y no presentaban depósitos degenerativos. Este estudio confirma la seguridad de la infusión intraespinal de BMNCs en ELA y proporciona evidencias de su actividad neurotrófica.

The diencephalon is a complex brain area which derives from the caudal region of the prosencephalon. This structure is divided in horizontal zones along the dorso-ventral axis. The mechanisms that govern the formation of this axis during development remain unclear. Different signaling molecules have been described as involved in this process, known as morphogenes, which induce a specific neural fate to the neighbouring epithelium. In order to demonstrate that one of these signaling molecules, Wnt1, has a critical role in the correct establishment of the diencephalic territories, we carried out gain- and loss-of-function experiments. Our results indicate that Wnt1 signal has a key role in the structuration of the pretectal territories during embryonic development, as well as in the correct development of some diencephalic dorsal structures. Moreover, we demonstrate that Wnt1 signal is required for the diencephalic dorso-ventral regionalization. We further show that Wnt1 is directly induced by Bmp4, unraveling the molecular regulatory code modulating this regionalization in the diencephalon.

La Lisencefalia es una enfermedad grave del sistema nervioso central que implica una desestructuración profunda de la corteza cerebral. En concreto se manifiesta como una alteración en el patrón de giros y circunvoluciones debido a un defecto generalizado del desarrollo cortical. Esto tiene como consecuencia una aparición de crisis epilépticas recurrentes y de difícil tratamiento, daño cognitivo severo y un acortamiento de la esperanza de vida. Una de las causas más comunes de la aparición de Lisencefalia es la mutación de la proteína LIS1, la cual está implicada en diversos eventos celulares como por ejemplo la migración neuronal, la división celular o el transporte axonal. Durante la última década se ha sugerido que LIS1 podría estar implicada en la génesis de otras patologías menos drásticas que la Lisencefalia, que pueden aparecer asociadas a alteraciones leves del desarrollo cortical, como por ejemplo esquizofrenia, autismo o trastorno bipolar. El objetivo de esta tesis es determinar si en la corteza del ratón Lis1/sLis1, el cual presenta una alteración morfológica de la corteza no tan severa como la descrita en pacientes de Lisencefalia, existen alteraciones funcionales similares a las descritas en pacientes de los trastornos psiquiátricos anteriormente citados. Para esto, mediante el empleo de distintas aproximaciones electrofisiológicas (registros extracelulares e intracelulares en preparaciones in vitro y de registros in vivo) se describen distintas alteraciones funcionales que recapitulan en parte muchas de las ya descritas en modelos animales y pacientes de enfermedades como esquizofrenia, autismo o trastorno bipolar, concluyendo que el ratón Lis1/sLis1, puede servir como modelo para el estudio de enfermedades relacionadas con alteraciones del desarrollo cortical menos drásticas de las descritas en enfermos de Lisencefalia.

1- Introducción Históricamente se consideraba que las lesiones traumáticas de los nervios periféricos eran lesiones irreparables y cuya recuperación quedaba totalmente condicionada al grado de lesión que sufrían las fibras nerviosas en el momento del traumatismo, por lo que las técnicas quirúrgicas descritas inicialmente estaban orientadas a reestructurar la anatomía del antebrazo para, mediante intervenciones sobre los tendones y las articulaciones funcionantes, tratar de paliar la pérdida de movilidad que padecía el paciente y/o conseguir un miembro lo más funcional posible. En el caso de la lesión del nervio radial el cuadro clínico producido es conocido como "mano caída", ya que dicho nervio es el principal responsable de la extensión de la muñeca y de los dedos. Actualmente están descritas diferentes técnicas para la transposición nerviosa a nivel periférico para conseguir la reinervación del nervio radial, incluyendo la rama interósea posterior y así conseguir la restauración de la extensión activa de la muñeca y los dedos. 2 - Objetivos de la investigación Describir una técnica quirúrgica nueva, relativamente sencilla, en base a la anatomía del antebrazo y de las ramas de los nervios periféricos que permite, con un sacrificio apenas inexistente de las funcionalidad residual del miembro y con una agresividad quirúrgica mínima, capaz de restaurar en la mayor medida posible y en ocasiones hasta rangos casi normales, la movilidad de la mano de los pacientes que padecen parálisis radial de origen periférico, demostrando la efectividad de la misma proporcionar a los pacientes no sólo una mejoría funcional, sino una mejoría en su calidad de vida de manera global. 3 - Metodología, hipótesis y plan de trabajo Se plantea realizar una tesis con un conjunto de publicaciones, centradas cada una en los diferentes aspectos descritos en el espacio anterior: - Descripción de la técnica quirúrgica y resultados funcionales a largo plazo en los pacientes intervenidos. - Estudio de la repercusión en la calidad de vida de los pacientes intervenidos mediante esta técnica.

INTRODUCCIÓN El glioblastoma multiforme (GBM) es el tumor maligno primario más frecuente del sistema nervioso central y el más agresivo en adultos. La heterogeneidad histológica no está limitada sólo al tumor, sino que también se extiende al tejido peritumoral. El frente de infiltración, clásicamente poco estudiado y sin repercusión en la gradación del estadio tumoral y la toma de decisiones terapéuticas, parece un lugar clave para actuar con las nuevas terapias inmunológicas. El tejido peritumoral se define en Resonancia Magnética (RM) como el área de cerebro alrededor del tumor, hiperintensa en secuencias potenciadas en T2 y sin realce de contraste. No obstante, necesitamos establecer la correlación anatomopatológica con las técnicas de RM avanzada para definir mejor esta área. La supervivencia global (SG) en pacientes con GBM varía significativamente. Es esencial poder predecir la evolución mediante factores pronósticos independientes que nos permitan seleccionar la mejor terapia e incrementar la supervivencia. OBJETIVOS - Valorar la infiltración peritumoral de los tumores de alto grado mediante las técnicas de RM avanzada: difusión (DWI), tensor de la difusión (DTI), espectroscopia multivoxel y perfusión. - Valorar la alteración en la microvasculatura cerebral peritumoral en relación con los pericitos. Demostrar que los pericitos son los que condicionan la malformación vascular y no la neovascularización. - Buscar marcadores radiológicos reproducibles en la infiltración tumoral que puedan correlacionarse con las alteraciones inmuno-histoquímicas estudiadas en la pieza quirúrgica. - Establecer si los marcadores radiológicos en el momento del diagnóstico pueden correlacionarse con la supervivencia global. MATERIAL Y MÉTODOS En 70 pacientes con GBM confirmado se realizó estudio radiológico mediante las técnicas de RM avanzada. Un neurorradiológo experto obtuvo valores tumorales y peritumorales relativos respecto a la sustancia blanca contralateral a partir de los mapas de ADC en DWI, fracción de anisotropía (FA) en DTI, cocientes de metabolitos del espectro y volumen sanguineo cerebral (VSC) en perfusión. En 28 casos se seleccionó el área de mayor infiltración peritumoral radiológica y se obtuvieron muestras de tejido peritumoral en el quirófano para estudio inmuno-histológico. Las variables histológicas estudiadas fueron: infiltración perivascular de células tumorales GFAP positivas (proteína gliofibrilar ácida), malformación vascular (MV) como vasos tortuosos con aspecto glomeruloide, presencia de células NG2 immunopositivas (pericitos) en la pared vascular e infiltración de células con carácter macrofágico (inmunopositivas para CD68) en el parénquima peritumoral. Se realizó un análisis estadístico de las variables radiológicas e histológicas. RESULTADOS Las técnicas de RM avanzada son capaces de valorar la infiltración peritumoral, al diferenciar el tejido tumoral del peritumoral de forma estadísticamente significativa, a excepción del cociente colina / creatina (CHO / CR), que no obstante podría ayudarnos a delimitar el frente de infiltración. Las alteraciones de la microvasculatura cerebral detectadas en la pieza quirúrgica han demostrado tener una correlación significativa entre los marcadores histológicos de MV y GFAP con el marcador NG2 o pericito, por lo tanto podemos postular que los cambios histológicos en el frente infiltrativo estarían condicionadas por el pericito. Los marcadores radiológicos que presentaron correlación con las alteraciones detectadas en la pieza quirúrgica fueron: GFAP con ADC tumoral y peritumoral relativos (r) como marcadores de infiltración, MV con VSCr tumoral y cociente CHO/CR peritumoral, NG2 con VSCr tumoral y lípidos peritumorales y el CD68 con VSCr tumoral y el cociente colina/N-acetilaspartato (CHO/NAA) peritumoral. Los marcadores que resultaron ser factores pronósticos independientes respecto a la supervivencia fueron: de las variables radiológicas el ADCr peritumoral, el cociente CHO/NAA peritumoral y los valores normalizados de lípidos tumorales a 1.3ppm, y de las variables histológicas, el GFAP y la malformación vascular. La edad también resultó ser un factor pronóstico independiente. INTRODUCTION Glioblastoma multiforme (GBM) is the most aggressive and frequent primary malignant tumor of the central nervous system in adults. The histological heterogeneity of GBM is not limited to the tumor, but also extends to the peritumoral tissue. Actually, the tumor infiltration front, classically under-studied and without repercussion in the stage gradation and therapeutic decision making, seems to be a key place to understand GBM growth and a target for new immunological-based therapies. The peritumoral tissue is defined in Magnetic Resonance (MR) as the brain area around the tumor, hyperintense in T2WI sequences and without contrast enhancement. However, we need to define correlation between pathology and advanced MR techniques to better define this area. Overall survival (OS) in patients with GBM varies significantly. It is essential to be able to predict the evolution by independent prognostic factors that allow us to select the best therapy and increase survival. OBJECTIVES - To evaluate the peritumoral infiltration of high-grade tumors according to advanced MR imaging techniques: diffusion weighted imaging (DWI), diffusion tensor imaging (DTI), multivoxel spectroscopy and perfusion weighted imaging. - To assess the alteration in the peritumoral cerebral microvasculature with respect to the pericytes. To study the role of perycites in vascular malformation. - Search for reproducible radiological markers in tumor infiltration that can be correlated with the immunohistochemical alterations studied in the surgical specimen. - To know if radiological markers at the time of diagnosis can be correlated with the overall survival of GBM patients. MATERIAL AND METHODS In 70 patients with confirmed GBM, radiological study was performed using advanced MR techniques. Relative tumor and peritumoral values were obtained with respect to the contralateral white matter and applied to maps of apparent diffusion coefficient (ADC) in DWI, fractional anisotropy (FA) in DTI, multiple metabolite ratios and cerebral blood volume (CBV) in perfusion weigthed imaging. In 28 cases, the area of greatest radiological peritumoral infiltration was selected and peritumoral tissue samples were obtained during surgery for immunohistochemical study. The histological variables studied were: perivascular infiltration of GFAP tumor cells (glial fibrillary acidic protein), vascular malformation (VM) as tortuous vessels with glomeruloid appearance, presence of immunopositive NG2 cells (pericytes) in the vascular wall and infiltration of macrophage cells (immunopositive for CD68) in the peritumoral parenchyma. A statistical analysis of the radiological and histological variables was performed. RESULTS The advanced MR techniques are able to identify the peritumoral infiltration, by differentiating the tumor tissue from the peritumoral tissue significantly, except for the choline / creatine ratio (CHO / CR) which could nevertheless help us to delimit the infiltration front. Alterations of the cerebral microvasculature detected in the surgical specimen have shown significant correlation between histological markers of VM and GFAP and the NG2 marker or pericyte; therefore, we can postulate that these histological changes would be conditioned by the pericyte. The radiological markers that correlated with the alterations detected in the surgical specimen were: GFAP with tumoral and peritumoral relative (r) ADC values as infiltration markers, VM with tumoral rCBV and peritumoral CHO / CR ratio, NG2 with tumoral rCBV and peritumoral normalized values of lipids and CD68 with tumoral rCBV and peritumoral choline / N-acetylaspartate (CHO / NAA) ratio. Markers that turned out to be independent prognostic factors for survival were: from the radiological variables the peritumoral rADC values, the peritumoral CHO / NAA ratio and the normalized values of tumor lipids at 1.3ppm, and from the histological variables, the GFAP and the VM. Age also turned out to be an independent prognostic factor.

INTRODUCCIÓN.- La etiopatogenia de la esquizofrenia es desconocida, siendo en la actualidad la hipótesis más aceptada, las alteraciones del neurodesarrollo. Diversos estudios demuestran que las alteraciones morfopatológicas de la corteza frontal y temporal en pacientes esquizofrénicos serían compatibles con anomalías en los procesos de migración neuronal. La proteína LIS1 desempeña una función importante en la migración neuronal durante la formación de la corteza cerebral, así como el fosfolípido factor activador de plaquetas (PAF), por lo que es posible que LIS1 y el gen que codifica el receptor de PAF (PAFR), estén alterados de alguna manera en pacientes psicóticos. HIPÓTESIS.- La disminución significativa de interneuronas en las capas superficiales de la corteza cerebral y de la corteza auditiva primaria (A1), causarían un incremento de la actividad neuronal en el ratón mutante (Lis1/sLis1) comparado con ratones Wild Type (WT), en condiciones basales. El estudio del área auditiva del cerebro humano con lisencefalia mostraría el mismo déficit de neuronas inhibitorias en las capas superficiales de la corteza, lo que nos permitiría especular con la posibilidad de una mayor actividad cortical basal y proponer esta anomalía en la migración neuronal como la base estructural de las alucinaciones auditivas en la esquizofrenia. OBJETIVOS.- Describir las alteraciones estructurales de la corteza auditiva y estudiar la actividad basal de la corteza auditiva de los ratones mutantes Lis1/sLis1. Describir las alteraciones estructurales de la corteza temporal en el cerebro de un paciente diagnosticado de lisencefalia tipo I. Desarrollar una hipótesis fisiopatológica para explicar las anomalías estructurales que puedan estar implicadas en las alucinaciones auditivas en la esquizofrenia. MATERIAL Y MÉTODOS.- Estudiamos las cortezas auditivas de estos ratones en condiciones de ruido ambiente normal y evaluamos la activación de las neuronas corticales en estado de no excitación específica. Analizaremos mediante la expresión de genes de respuesta rápida (c-fos) la actividad neuronal. Para ello, utilizaremos los siguientes grupos: a.) Ratones grupo control: 10 ratones WT. b.) Ratones experimentales: 10 ratones mutantes Lis1/sLis1. Diseño experimental: - Estudio morfológico de la corteza auditiva de mutantes heterocigóticos mediante inmunohistoquímica y tinciones citoarquitectónicas. - Determinación de la expresión de c-fos como marcador de la actividad neuronal en la corteza auditiva, en condiciones normales. En ratones WT y ratones Lis1/sLis1 en las mismas condiciones de ruido ambiental. Para la cuantificación se usó el programa Image J y el análisis estadístico se realizó con el programa Sigmaplot v11.0. Se realizaron comparaciones pareadas de las medias de los contajes de células positivas para c-fos, entre el mutante Lis1/sLis1 y WT. Los datos fueron comparados como media más el error standard utilizando el test t de Student. - Estudio morfológico de la corteza auditiva de un cerebro humano diagnosticado de lisencefalia. RESULTADOS Y CONCLUSIONES.- En ratones WT se observa como en la corteza A1 hay escaso número de células con expresión intensa de c-fos, principalmente en capa II y V. En el ratón mutante Lis1/sLis1 se aprecia un gran aumento de neuronas intensamente c-fos positivas en las capas II, IV y V (P˂0.05). La corteza auditiva del ratón mutante Lis1/sLis1, presenta una alteración de la migración de las interneuronas GABAérgicas en la corteza A1. Presenta, además, una actividad aumentada de las neuronas de la corteza A1 en condiciones basales de ruido ambiental. La corteza temporal de un cerebro humano con lisencefalia tipo I presenta una alteración de la migración de las neuronas GABAérgicas de las capas superficiales. Las similitudes observadas en nuestro estudio entre la corteza A1 del ratón Lis1/sLis1 y la corteza temporal del humano con lisencefalia, podría ofrecernos un modelo para el estudio de las causas neurobiológicas subyacentes a las alucinaciones auditivas, INTRODUCTION.- The etiopathogenesis of schizophrenia is unknown, but currently the most accepted hypothesis it is related with the neuronal development disorders. Several studies report that morpho-pathological alterations of the frontal and temporal cortex in schizophrenic patients would be compatible with anomalies in the neuronal migration processes. LIS1 protein and phospholipid platelet activating factor (PAF) play an important role in neuronal migration during the cerebral cortex development, so it is possible that both could be altered in some way in psychotic patients. HYPOTHESIS.- Under basal conditions, the significant decrease of interneurones in the superficial layers of the cerebral cortex and the primary auditory cortex (A1) could increase neuronal activity in mutant mouse (Lis1/sLis1) compare to Wild Type (WT) mouse. The study of the auditory area of the human brain with lysencephaly would show the same deficiency of inhibitory neurons in the superficial layers of the cortex, which would allow us to speculate with the possibility of this anomaly in the neuronal migration as the base of auditory hallucinations in schizophrenia. OBJECTIVES.- To describe the structural alterations of the auditory cortex and to study the basal activity of the auditory cortex of the Lis1/sLis1 mutant mice. To describe the structural alterations of the temporal cortex in the brain of a patient diagnosed with lysencephaly type I. To develop a physiopathological hypothesis to explain the structural abnormalities may be involved in auditory hallucinations in schizophrenia. MATERIAL AND METHODS.- We study the auditory cortex of these mice under normal ambient noise conditions and evaluated the activation of cortical neurons in a non-specific excitation state. We analyze gene expression by rapid response (c-fos) neuronal activity. To do this, we will use the following groups: A.) Control group mice: 10 WT mice. B.) Experimental mice: 10 Lis1 / sLis1 mutant mice. Experimental design: - Morphological study of the auditory cortex of heterozygous mutants by immunohistochemistry and cytoarchitectural stains. - Determination of c-fos expression as a marker of neuronal activity in the auditory cortex under normal conditions. In WT and Lis1/sLis1 mice under the same ambient noise conditions. For the quantification, the Image J program was used and the statistical analysis was performed with the Sigmaplot v11.0 program. Paired comparisons of mean counts of c-fos positive cells between the mutant Lis1 / sLis1 and WT were performed. Data were compared as mean plus standard error using Student's t-test. - Morphological study of the auditory cortex of a human brain diagnosed with lysencephaly. RESULTS AND CONCLUSIONS.- In WT mice, A1 cortex show a less number of cells with intense expression of c-fos, mainly in layer II and V. In the mutant mouse Lis1 / sLis1, a large increase of intensely c-fos positive neurons is observed in Layers II, IV and V (P0.05). The auditory cortex of the mutant mouse Lis1 / sLis1 presents an alteration of the migration of the GABAergic interneurons in the cortex A1. Futhermore has an increased activity of A1 cortex neurons under basal ambient noise conditions. The temporal cortex of a human brain with lysencephaly type I presents an alteration of the migration of the GABAergic neurons of the superficial layers. The similarities observed in our study between the A1 cortex of the Lis1 / sLis1 mouse and the temporal cortex of the human with lisencephaly could provide us a model for the study of neurobiological causes related with auditory hallucinations

El retraso psicomotor, la epilepsia y en general los trastornos del neurodesarrollo, son entidades muy prevalentes en la edad pediátrica y suponen un reto profesional para el pediatra y un importante desafío epidiológico y ético para los sistemas sanitarios La gran angustia que genera este tipo de entidades, el importante impacto social y económico que supone en la dinámica familiar, junto con los problemas diagnósticos, los pronósticos inciertos y los escasos recursos terapéuticos disponibles, hacen que sea imprescindible intentar aproximarnos a la identificación y el conocimiento de las bases etiológicas de estas patologías. Dado que todos estos trastornos tienen su base fisiopatológica total o parcialmente localizada en la corteza cerebral, el conocimiento de la misma y su asociación con el neurodesarrollo, se hace indispensable. La proliferación de los precursores neuronales y la migración de las neuronas son probablemente los procesos más decisivos en el desarrollo cerebral, y por tanto, de su corteza. Como consecuencia de ello, diferentes grados de alteración de las mismas pueden producir alteraciones estructurales con disfunciones cerebrales muy dispares y cuadros clínicos muy diversos, desde retraso psicomotor y trastornos de conducta, hasta cuadros de epilepsia y microcefalia. Se han identificado varios genes involucrados en las principales etapas del desarrollo cortical TUBA1A1, DCX, ARX... destacando el LIS (17p13.3), que codifica para la proteína PAFAH1B1, regula la dineína citoplasmática e influye en la función de los microtúbulos, actuando tanto en la proliferación como en la migración neuronal. Así pues, la mutación del gen LIS1, así como de la región cromosómica en la que se encuentra, la Región Crítica de la Lisencefalia (RCL), producen diferentes grados de alteración del desarrollo de la corteza cerebral, que se pueden manifestar como diferentes tipos de anomalías congénitas. Se realiza un estudio observacional de casos y controles de un área sanitaria de la provincia de Alicante, el departamento 17, desde marzo de 2006 hasta diciembre de 2013, donde se incluyen 115 pacientes de la Unidad de Neuropediatría del Hospital Universitario de San Juan con retraso psicomotor y/o epilepsia y alteraciones en la neuroimagen y 400 voluntarios sanos de entre 23 y 45 años. Se lleva a cabo un estudio genético mediante técnicas de PCR donde se estudian 635 kb de la región genómica localizada en la RCL 34 en 17p13.3, analizando también la región codificante de LIS1 buscando alteraciones de transcripción, añadiendo el estudio de otros genes relacionados con LIS1 y la RCL, así como el de otros genes implicados en el neurodesarrollo, haciendo un análisis estadístico con el módulo "Statcalc" de Epiinfo 7.2.1 de los resultados obtenidos. En el estudio se puede observar un reagrupamiento de ciertas mutaciones genéticas en un área determinada y con una clínica y unos hallazgos radiológicos característicos, que pueden suponer un avance importante en el conocimiento y manejo de determinadas patologías. Se deduce que las alteraciones en la RCL pueden explicar la etiología de casi un 50% de los pacientes con retraso psicomotor y/o epilepsia con anomalías estructurales en el SNC, ya que los pacientes con esta patología y alteraciones inespecíficas estructurales del SNC, tienen casi 350 veces más de riesgo de presentar alteraciones en dicha región, que un grupo control. Por lo tanto, se puede concluir que la RCL es una de las zonas del genoma que más repercusión tiene sobre el neurodesarrollo, por lo que su estudio puede llegar a ser muy relevante para dar explicación causal de diferentes problemas neurológicos, así como servir de importante herramienta ya no solo diagnóstica, sino también pronóstica e incluso terapéutica.