Search

El nematodo Strongyloides stercoralis es el principal causante de la estrongiloidiasis humana. Debido a la capacidad del parásito de perpetuar un ciclo autoinfectivo la infección puede prolongarse durante años en el hospedador, dando lugar a una enfermedad crónica en personas inmunocompetentes, mientras que en condiciones de inmunosupresión puede desembocar en cuadros clínicos graves con elevadas tasas de mortalidad. La región de La Safor valenciana ha sido considerada foco endémico de este parásito desde hace más de un siglo, habiéndose diagnosticado cientos de casos desde entonces, suponiendo un problema sanitario en la región. La presente Tesis contribuye a la mejora en el conocimiento proteómico de la larva infectante del parásito, L3i, con el fin de identificar nuevas moléculas para el diagnóstico de la enfermedad. Para ello se ha realizado un análisis de los transcritos más abundantes de la larva L3i, clonándose 8 de ellos, y obteniendo finalmente 5 fragmentos de proteínas recombinantes: Antígeno principal-Major antigen, 14-3-3 zeta, Aminopeptidasa sensible a puromicina, Ferritina 1 y Proteasa aspártica 4. Se han realizado diferentes ensayos para valorar la antigenicidad de estos fragmentos proteicos y su capacidad de ser reconocidos por los anticuerpos presentes en los sueros de pacientes enfermos. Además, se generaron anticuerpos policlonales frente a fragmentos de las proteínas 14-3-3 zeta, Ferritina 1 y Proteasa aspártica 4, evaluándose su posible utilidad como herramienta diagnóstica específica para S. stercoralis. Con idéntico fin, se han producido péptidos sintéticos a partir de las proteínas 14-3-3, Metaloproteinasa, Tropomiosina y Galectina identificadas en larvas L3i de S. stercoralis. Los ensayos inmunoenzimáticos, utilizando sueros de pacientes de diversos orígenes, han demostrado mayor reconocimiento para 2 de los 9 péptidos sintetizados, obteniéndose buenos resultados en cuanto a sensibilidad (hasta del 93%). Finalmente se han realizado estudios de inmunolocalización de las proteínas 14-3-3 zeta, Ferritina 1 y Proteasa aspártica 4 en cortes de vermes utilizando los anticuerpos policlonales producidos, y se ha contribuido a mejorar el conocimiento morfológico de la L3i, realizando un estudio de la superficie del parásito mediante microscopia electrónica de barrido. The nematode Strongyloides stercoralis is the causative agent of human strongyloidiasis. Since the life cycle of this parasite allows autoinfections, strongyloidiasis can become a chronic disease in immunocompetent individuals, while in immunocompromised is not rare the evolution to a severe and even a fatal course of the infection. The region of La Safor valenciana has been considered an endemic focus of the parasite since more than a century ago, with hundreds of cases diagnosed since then; strongyloidiasis is a sanitary problem in this region. This Doctoral Thesis provides new information about the protein content of the infective stage of the parasite, L3i larvae, in order to identify new molecules that could be applied in diagnosis. An analysis of the most abundant transcripts of L3i larvae was performed, cloning 8 of them, and finally obtaining 5 fragments of recombinant proteins: Major antigen, 14-3-3 zeta protein, Puromycin-sensitive aminopeptidase, Ferritin 1 and Aspartic protease 4. Also, several assays to evaluate antigenicity of these fragments, as well as the capacity of recognition by antibodies in serum of infected patients were done. In the same way, polyclonal antibodies have been generated against 3 fragments of recombinant proteins: 14-3-3 zeta, Ferritin 1 and Aspartic protease, which were employed as a diagnostic tool for the identification of the parasite. With the same purpose, synthetic peptides from the proteins of L3i larvae, Metalloproteinase, Tropomyosin and Galectin, were produced. Immunoenzymatic assays using serum of infected patients demonstrate greater immunogenic potential in 2 of the 9 synthetic peptides, with good sensitivity (up to 93%). Finally, an immunolocalization study of 14-3-3 zeta, Ferritin 1 and Protease aspartic 4 proteins was performed on larvae L3i cuts of S. stercoralis, using the polyclonal antibodies produced previously at the laboratory, also it has contributed to the improvement of the morphological knowledge of the surface of the L3i larvae, carried on by analysis with Scanning Electron Microscopy (SEM).

Formando parte de los estudios encaminados al conocimiento del parasitismo intestinal en la población infantil nicaragüense, la presente Tesis Doctoral tiene como objetivo básico abordar el parasitismo intestinal en los diferentes Departamentos que conforman la Región Pacífico, excepción hecha del Departamento de Managua. Para ello se ha estudiado coproparasitológicamente un total de 1881 sujetos (939 niños y 942 niñas), de edades comprendidas entre 0 y 15 años, procedentes de los Departamentos de Chinandega, León, Masaya, Carazo, Granada y Rivas. El espectro enteroparasitario ha quedado conformado por un mínimo de 20 especies (13 de protozoos y 7 especies de helmintos). Desde el punto de vista cuantitativo, el 83,6% de la población estudiada presentó parasitación por al menos una especie, siendo la prevalencia de parasitación por protozoos significativamente superior a la de helmintos (81,0% vs 19,5%). Blastocystis hominis resultó ser la especie de protozoo más prevalente (60,8%), seguido de Giardia intestinalis (33,3%), Entamoeba coli (31,6%) y Endolimax nana (27,1%). Las restantes especies de protozoos, excepción hecha de Entamoeba hartamanni (15,2%), no superaron el 10% de parasitación. Dentro del grupo de los helmintos, Trichuris trichiura ha sido la especie más prevalente (12,4%), seguido de Ascaris lumbricoides (7,8%) e Hymenolepis nana (3,7%), mientras que las restantes especies apenas alcanzan el 1%. Se ha llevado a cabo un análisis epidemiológico de los resultados obtenidos en función del sexo y de los diferentes grupos de edad establecidos (infantes, escolares y adolescentes), así como en relación al tipo de población objeto de estudio (procedencia urbana vs rural), obteniéndose diferencias estadísticamente significativas en algunas variables. El predominio del multiparasitismo sobre el monoparasitismo (59,1% vs 24,5%) ha sido evidente, con un predominio del parasitismo por 2 especies (24,5% de los multiparasitados), seguido de 3 especies (22,9%), hasta un máximo de 8 especies diferentes (0,2%). En el presente estudio se concluye resaltando la relevancia de los programas de diagnóstico y desparasitación asumidos por Nicaragua, si bien conviene continuar, no descuidar o incluso implantar donde no se lleve a cabo, la desparasitación masiva de helmintos, e incluso de protozoos, que se realiza en el marco de las jornadas de vacunación. Además, estos resultados van a poder permitir al gobierno nicaragüense plantearse estrategias de intervención, a nivel local, regional o nacional, encaminadas a impulsar programas de educación sanitaria y de mejora de las condiciones de vida de la población en general, y de la población infantil en particular.