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RAP1 (RAS proximate 1), uma pequena proteína GTPase da superfamília RAS, é um presumido oncogene altamente expresso em várias linhagens de células malignas e tipos de câncer, incluindo alguns tipos de carcinoma de células escamosas (CCE). No entanto, a participação de RAP1 na carcinogênese cervical iniciada pelo Papilomavírus humano (HPV) é desconhecida. Realizamos um estudo transversal de biópsias do colo uterino armazenadas em parafina para determinar a associação de RAP1 com a neoplasia intraepitelial cervical (NIC). A detecção e a genotipagem do HPV foram realizadas por reação em cadeia da polimerase (PCR) nested e a carga viral por PCR em tempo real dos mRNAs das oncoproteínas E6 e E7. Avaliações qualitativa e quantitativa das expressões imuno-histoquímicas de RAP1, RAP1 GAP, p16INK4A (p16) e Ki67 em tecido fixo foram realizadas em 319 biópsias cervicais armazenadas em parafina e classificadas como mucosa normal ou não-displásicas (MND) (n = 65); NIC grau 1 (n = 102), NIC de grau 2/3 (n = 85) e CCE (n = 67). Quantificação da expressão gênica de RAP1A, RAP1B e p16 foi feita por PCR em tempo real. O DNA do HPV foi detectado em 56,73% das amostras de todos os grupos, principalmente NIC 2/3 (68,42%) e CCE (75,00%). Foi observado um aumento gradual nas expressões de RAP1, RAP1 GAP, p16 e Ki67 nos grupos MND

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O câncer do colo do útero (CCU) afeta, no mundo, mais de 500 mil mulheres ao ano e é considerado uma das maiores causas de morte relacionadas ao câncer na população feminina. Nas duas últimas décadas tem crescido bastante o interesse pelo desenvolvimento de biomarcadores que identifiquem alterações celulares decorrentes da transformação viral, e que possam aumentar a sensibilidade e a especificidade dos métodos de triagem, diagnóstico e prognóstico do CCU. As proteínas de Manutenção de Minicromossomos (MCMs), incluindo a MCM7 são essenciais para a replicação do DNA e o controle do ciclo celular e, portanto, são utilizadas em diversos estudos como biomarcadores de proliferação e prognóstico em diferentes tipos de carcinomas. Nossa hipótese é a de que a proteína MCM7, apresenta potencial como biomarcador de prognóstico (grau de diferenciação) do CCU, e cuja imunomarcação em tecidos cervicais estaria relacionada à presença do Papilomavírus Humano (HPV) de alto-risco (AR). Avaliou-se nesse estudo em 43 biópsias de CCU e em 15 amostras de cervicite (controle) por meio de Imunohistoquímica e análise morfométrica, a área de marcação da proteína MCM7. Também foi analisada em amostras de DNA extraídas do tecido cervical a presença do DNA-HPV e do DNA-HPV16 de AR, por meio da reação de Nested-PCR e Heminested PCR, respectivamente. A presença do DNA-HPV foi observada na maior parte das amostras de tecido cervical, e aproximadamente metade dessas amostras foi positiva para o DNA-HPV16. Em relação à marcação de MCM7 em tecidos cervicais, observou-se marcação nuclear da proteína em células das camadas basais e parabasais do epitélio normal em amostras de Cervicite. Forte marcação nuclear de MCM7 foi verificada principalmente em células tumorais de origem epitelial, de massas tumorais localizadas no tecido conjuntivo. Contudo, áreas difusas de células não-marcadas também foram notadas nesses tumores em células mais atípicas, com maior grau de diferenciação. Sobre o parâmetro celularidade, as amostras de CCU apresentaram maior número de células marcadas para MCM7 quando comparadas ao grupo Cervicite. Verificou-se que os grupos pouco (CCEP) e moderadamente (CCEM) diferenciados, apresentaram correlação entre o número de células marcadas para MCM7 e o número de células contadas em todas as áreas lesionadas. Além disso, observou-se correlação entre o número de células totais marcadas para MCM7 em CCEP e CCEM e a área de lesão. De acordo com o grau de diferenciação, tumores pouco diferenciados apresentam maior nível de proliferação e agressividade do que os CCEM. Em relação à presença do HPV e do HPV16, verificou-se que maior número de amostras de CCEP foi positivo para MCM7 e para o DNA do HPV16 em comparação ao grupo CCEM. Portanto, o nosso estudo aponta o uso potencial da marcação tecidual de MCM7 como biomarcador de severidade desse câncer causado pelo HPV, auxiliando de forma significativa no diagnóstico e no acompanhamento de mulheres portadoras do CCU. Cervical cancer (CC) affects more than 500,000 women by year worldwide, and it is considered one of the most important causes of cancer-related deaths in the female population. In the last two decades, the interest for the development of biomarkers that can identify cellular changes resulting from viral transformation has considerably grown. The employment of these cell markers may improve the sensitivity and the specificity of CC screening, diagnosis, and prognosis methods. The Minichromosome maintenance (MCMs) proteins, including MCM7 are essential for DNA replication and cell cycle control and, therefore, they are used in many studies as proliferation and prognostic biomarkers in different types of carcinomas. Our hypothesis is that the protein MCM7 has potency to be evaluated as a prognostic biomarker for the CC, from whose immuno-staining in cervical tissues would be related to the presence of high-risk (HR) Human Papillomavirus (HR-HPVs). Therefore, in this study, 43 cervical cancer tissues and 15 cervicitis (control) samples obtained by biopsy were evaluated concerning the tissue immune labeling for MCM7 by using immunohistochemistry (IHC) and a morphometric-based analysis of the labeled area. In addition, presence of DNA-HPV and DNA-HPV16 was also analyzed using DNA samples extracted from cervical tissues, and by means of Nested-PCR and Hemi-nested PCR protocols, respectively. Presence of DNA-HPV was observed in most of cervical tissue samples, and approximately half of samples were positive for DNA-HPV16. Regarding the MCM7 expression in cervical tissues, a nuclear protein staining was observed in cells from the basal and parabasal layers of the normal epithelium in cervicitis samples. Strong nuclear labeling of MCM7 was mainly found in tumor cells from epithelial origin in tumor nests located in the connective tissue. However, diffuse areas of unlabeled cells were noted in tumors nests composed by more atypical cells and exhibiting a higher differentiation degree. Regarding the cell density (cellularity) parameter, CC samples showed higher number of MCM7-labeled cell, when compared with tissues from the cervicitis group. It was found that the cancer groups diagnosed as poorly (CCEP) and moderately (CCEM) differentiated showed a correlation between the number of MCM7-positive cells, and the total number of cells counted in the complete injured areas. In addition, a correlation between the total number of cells labeled for MCM7 in CCEP and in CCEM, and the complete cancer area was observed. Concerning the differentiation tumor grading, CCEP is a tumor with higher proliferation rates and aggressive behavior than CCEM cancers. Regarding the presence of HPV and HPV16 DNA, it was found that the number of CCEP samples which presented a higher number of MCM7-positive cells and positivity for HPV16- DNA, were greater when compared to cancer samples from the CCEM group exhibiting similar aspects. Therefore, our study points to the potential use of MCM7 as a biomarker of the severity of this HPV-associated cancer that may significantly improve the diagnosis, and assist the monitoring of women with CC.

O câncer do colo do útero mantém-se como um importante problema de saúde pública em mulheres no mundo e no Brasil. Somente no biênio 2016/2017, ocorreram cerca de 16.340 novos casos de câncer do colo do útero no país. Esse câncer é precedido pela neoplasia intraepitelial cervical (NIC), que se desenvolve, principalmente, a partir da complexa relação entre a infecção persistente por Papilomavírus humano (HPV) e inflamação crônica na mucosa escamosa do colo uterino. No contexto desta relação, o inflamassoma, uma plataforma de sinalização celular que ativa fatores pró-inflamatórios, tem sido associado a infecção viral e desenvolvimento do câncer. Assim, esse trabalho visa caracterizar o inflamassoma na NIC associada à infecção pelo HPV, particularmente no ceratinócito, o que poderá contribuir para a construção de novos conhecimentos e seleção de marcadores com utilidade clínica. Para tanto, realizamos um estudo descritivo da intensidade e do percentual da imunorreatividade imuno-histoquímica (IHQ) dos marcadores NLRP3, caspases-4/5 e 1 e interleucinas (IL) 1 e 18 em 35 biópsias do colo uterino com diagnósticos de cervicite inespecífica (n = 11), NIC1 (n = 14) e NIC2/3 (n = 10) e em 25 blocos celulares oriundos de citologia em meio líquido do colo uterino e com diagnósticos de inflamação (n = 12) e lesões intraepiteliais escamosas de baixo (LSIL; n = 7) e alto (HSIL; n = 6). A detecção do HPV foi realizada por IHQ e reação em cadeia da polimerase (PCR). As expressões epiteliais de NLRP3 e caspase-1, inflamatória de IL-18 e endotelial de caspases-4/5 foram fortes ou elevadas no NIC2/3. O marcador IL-1 apresentou uma fraca expressão no epitélio, no infiltrado inflamatório e no endotélio. Foi encontrada uma forte correlação na hiperexpressão do marcador NLRP3 nas amostras de NIC2/3 das biópsias e nas amostras de HSIL dos blocos de células.Além disso, a expressão epitelial de NLRP3 se associou com o HPV. Em conjunto, esses resultados evidenciam a associação do HPV com alteração do inflamassoma NLRP3 na neoplasia intraepitelial do colo uterino. Cervical cancer remains an important public health problem in women worldwide and in Brazil. In the 2016/2017 biennium alone, there were about 16,340 new cases of cervical cancer in the country. This cancer is preceded by cervical intraepithelial neoplasia (CIN), which develops mainly from the complex relationship between persistent Human papillomavirus (HPV) infection and chronic inflammation in the squamous mucosa of the uterine cervix. In the context of this relationship, inflammassoma, a cellular signaling platform that activates pro-inflammatory factors, has been associated with viral infection and cancer development. However, the involvement of inflammassoma in cervical carcinogenesis is unknown. Thus, this work aims to characterize the inflammassoma in the CIN associated with HPV infection, particularly in keratinocytes, which may contribute to the construction of new knowledge and selection of biomarkers with clinical utility. A descriptive study of the immunohistochemical immunoreactivity (IHC) of the biomarkers NLRP3, caspases-4/5 and 1 and interleukins (IL) 1 and 18 in 35 biopsies of the uterine cervix with diagnoses of nonspecific cervicitis (n = 11), CIN1 (n = 14) and CIN2 / 3 (n = 10), and in 25 cell blocks from cytology in the uterine cervix and diagnosed with inflammation (n = 12) and low squamous intraepithelial lesions (LSIL; n = 7) and high (HSIL; n = 6). HPV detection was performed by IHC and polymerase chain reaction (PCR).The NLRP3and caspases-4/5 expressions were strong or elevated in NIC2/3 and weak or basal in NIC1. In addition, NLRP3 epithelial expression was associated with HPV. Taken together, these results evidence the relationship of HPV with NLRP3 inflammassoma in intraepithelial neoplasia of the cervix.

Introdução e objetivos: A hanseníase é uma doença crônica, negligenciada, causada pelo Mycobacterium leprae. Essa evolução crônica, pode ser interrompida por episódios de inflamação aguda, conhecidos por reações hansênicas tipos 1 e 2. O padrão de imunidade desenvolvido pelo hospedeiro, permite resistir à doença ou desenvolver manifestações clínicas espectrais da hanseníase. Esse padrão espectral, tem relação direta com a imunidade montada pelo hospedeiro, a partir do reconhecimento do M. leprae pela imunidade inata. A reação tipo 1 é a principal causa de incapacidade e deformidade na doença, e existe uma escassez de biomarcadores que possam predizê-la. Diante desse problema, este estudo objetivou avaliar a associação de biomarcadores do inflamassoma com reações tipo 1. Pacientes e métodos: Estudo observacional, transversal e comparativo da expressão de biomarcadores do inflamassoma em pacientes com hanseníase, diagnosticados entre 2012 e 2015, em centro de referência de Minas Gerais, Brasil. Foram considerados casos, os pacientes com hanseníase que desenvolveram reações tipo 1 ao longo do primeiro ano de tratamento e, controles, aqueles que não as apresentaram. A expressão dos biomarcadores foi analisada através de imuno-histoquímica da pele, biopsiada no diagnóstico da hanseníase. Resultados: Em relação à resposta celular inflamatória, foi observada forte expressão do biomarcador NLRP3, em 57,1% dos casos em comparação a 7,7% dos controles. Diferença estatisticamente significativa (p < 0,05%), além de medida de risco (OR = 16,00 [IC 95%: 1,61; 159,31]) significativamente maior nesses casos de forte expressão de NLRP3 nas células do infiltrado inflamatório dérmico. Não foram observadas diferenças nos biomarcadores caspases 1 e 4/5, IL-1 e IL-6. Conclusão: Os resultados deste estudo indicam que NLRP3 pode ser um potencial biomarcador preditivo de reações hansênicas tipo 1 no momento do diagnóstico de hanseníase. Introduction and objectives: Leprosy is a chronic disease, neglected, caused by the Mycobacterium leprae. This chronic evolution can be interrupted by episodes of acute inflammation known as leprosy type 1 and 2 reaction. The immunity pattern developed by the host permits resisting to the disease or developing spectral clinic manifestation of leprosy. This spectral pattern has direct relation to the immunity assembled by the host, from the undertanding of the M. leprae by the innate immunity. The leprosy type 1 reaction is the main cause of the incapacity and deformity in the disease, and there is a lack of biomarkers that can predict them. Up on this problem, this study intended to assess the association of inflammasomes biomarkers with leprosy type 1 reaction. Patients and Methods: Observational study, transversal and comparative of the expression of inflammasomes biomarkers in patients with leprosy diagnosed between 2012 and 2015, in a center of reference in Minas Gerais, Brazil. The cases considered were patients with leprosy that developed leprosy type 1 reaction throughout the first year of treatment and, controls, those that did not presented them. The expression of biomarkers was analysed through immunohistochemistry of the skin, biopsied in diagnoses of leprosy. Results: In relation to the inflammatory cellular response, it was observed strong expression of the biomarker NLRP3, in 57,1% of the cases in comparison to 7,7% of the controls. Difference statistically significant, along with the measure of risk significantly higher in this cases of strong expression of NLRP3in cells of the infiltrated dermic inflammatory. Differences in the caspase-1 and 4/5, IL-1 and IL-6 biomarkers were not observed. Conclusion: The NLRP3 can be a potential predictive biomarker of leprosy type 1 reaction at the moment of leprosy diagnoses.

A hanseníase ainda permanece como grave problema de saúde pública no Brasil. Essa doença negligenciada possui ampla variedade de manifestações clínicas e histopatológicas que estão relacionadas com as respostas inflamatória e imune do hospedeiro. Mais recentemente, o inflamassoma, um complexo conjunto de proteínas, assumiu papel relevante na resposta inflamatória contra agentes microbiológicos. Entretanto, é pouco conhecida a participação do inflamassoma na hanseníase. Assim, realizamos um estudo observacional, transversal e comparativo da expressão imunofenotípica de proteínas associadas ao inflamassoma em diferentes formas imunopatológicas da hanseníase por imuno-histoquímica. Foram avaliadas a intensidade e o percentual da imunorreatividade de NLRP3, caspases 1 e 4/5 e interleucinas (IL) 1, 6 e 18 nos compartimentos epiderme, infiltrado inflamatório e endotélio das amostras de pele. Foram observadas fortes expressões de NLRP3 e das caspases inflamatórias 4/5, em todos os compartimentos das amostras do polo virchowiano, e da IL6, no endotélio das amostras do polo tuberculóide, além da pouca ou fraca expressão da caspase-1, IL1 e IL18 nessas formas polares da doença. A forma interpolar ou borderline apresentou imunofenótipo predominantemente similar ao polo virchowiano. Esses resultados demonstram, apesar da forte ativação das vias clássica e não-canônica do inflamassoma NLRP3 nas formas multibacilares, a inativação do inflamassoma NLRP3 na hanseníase, sugerindo evasão imune do M. leprae, o que poderá ser usado no diagnóstico ou tratamento da hanseníase. Leprosy still remains a serious public health problem in Brazil. This neglected disease has a wide range of clinical and histopathological manifestations which are related to the host inflammatory and immune responses. More recently, inflammasome, a complex set of proteins, has assumed a relevant role in the inflammatory response against microbiological agents. However, the involvement of inflammasome in leprosy is poorly understood. Thus, we performed an observational, cross-sectional and comparative study of the immunophenotypic expression of inflammasome-associated proteins in different immunopathological forms of leprosy by immunohistochemistry. The intensity and percentage of NLRP3, caspase-1 and 4/5 and interleukin (IL) 1, 6 and 18 immunoreactivity in the epidermal, inflammatory infiltrate and endothelial compartments of skin biopsies were evaluated. Strong expressions of NLRP3 and inflammatory caspases 4/5 were observed in all compartments of the virchowian pole and IL6 in the endothelium of the tuberculoid pole, in addition to the low expression of caspase-1, IL1 and IL18 in these polar forms. The interpolar or borderline form showed immunophenotype predominantly similar to the Virchowian pole. Despite of the strong activation of NLRP3 inflammasome classic and noncanonical pathways in the multibacillary forms, these results demonstrate the inactivation of NLRP3 inflammasome in the leprosy, suggesting immune evasion of M. leprae, which can be used in the diagnosis or treatment of Leprosy.

A infecção oculta pelo vírus da hepatite B é definida pela presença do ácido desoxirribonucleico (DNA) do vírus da hepatite B (HBV) no fígado de indivíduos com o antígeno de superfície do vírus da hepatite B (HBsAg) indetectável. A infecção oculta pelo HBV foi associada ao risco de transmissão do vírus por meio de hemotransfusão ou transplante hepático e à possibilidade de reativação endógena da hepatite B pósimunossupressão, além de ter sido associada a maior progressão de hepatopatias crônicas e ao desenvolvimento do hepatocarcinoma. A prevalência da hepatite B oculta no Brasil e a relevância clínica dessa condição ainda não são conhecidas completamente. O objetivo doestudo foi avaliar a presença do HBV DNA em pacientes portadores de hepatopatias de etiologias diversas no estado de Minas Gerais. Cento e quatro indivíduos portadores de hepatopatia, nos quais o HBsAg foi indetectável no soro, foram investigados para a presença do HBV DNA em tecido hepático por meio de nested-polymerase chain reaction(nested-PCR), utilizando-se dois protocolos diferentes para comparação. Quatorze entre 84 pacientes tinham o anticorpo para o antígeno do core (anti-HBc) detectável e 47 pacientes apresentavam todos os marcadores do HBV negativos. A HBO foi detectada em 6,7% dos 104 indivíduos investigados (considerando-se HBO apenas os casos que foram positivos nos dois protocolos). O primeiro protocolo testado identificou 13 casos em 104 e o segundo protocolo 9 casos. Ao lado das diferenças na prevalência da infecção pelo VHB em diferentes regiões, variações na técnica de PCR utilizada para amplificação do HBV-DNA podem levar a modificação na sensibilidade e especificidade do método explicando as diferenças de prevalência da HBO identificada em diferentes estudos. Há necessidade de melhor padronização do método diagnóstico utilizado para a identificação da HBO. Long-lasting persistence of hepatitis B virus (HBV) deoxyribonucleic acid (DNA) in the liver of individuals who lack detectable hepatitis B surface antigen (HBsAg) in serum is termed occult hepatitis B virus infection (OBI). This condition may influence several clinical situations including HBV transmission by blood transfusion and organ transplantation, and endogenous viral reactivation post imunossuppression. Furthermore, OBI may contribute to the progression of other chronic liver disease, and is supposed to be a risk factor forhepatocellular carcinoma development. The prevalence and clinical importance of this condition in Brasil are not known. We undertook a study to evaluate the occurrence of OBI in patients with liver diseases. We examined 104 patients HBsAg-negative with different liver diseases, for the presence of HBV DNA by nested-polymerase chain reaction (nested-PCR) performed in liver tissue using two different previously published protocols. Fourteen patients had detectable antibodies to the HBV core antigen (anti-HBc); 47 were negative for all HBV markers. OBI was diagnosed in 6.7% of the 104 patients (considering OBI only the cases in whom HBV DNA was identified by both protocols). The first protocol identified 13 cases in the total of 104 patients and the second protocol identified nine cases. In addition to differences in the prevalence of HBV infection in different regions, variations in the PCR technique used for HBV-DNA amplification may lead to diverse sensitivity and specificity ofthe method explaining the differences in the prevalence of OBI identified in different studies. It is necessary to better standardize the method used for the diagnosis of OBI.

INTRODUÇÃO: O carcinoma gástrico (CG) é a terceira causa de morte, entre os tumores malignos, no mundo, provocando, aproximadamente, 900.000 mortes/ano. Alterações em oncogenes que codificam receptores tirosina-quinase desempenham papel importante napatogênese do CG. O gene MET é um proto-oncogene que codifica o receptor tirosina-quinase c-MET e se faz necessário para desenvolvimento embrionário e reparo tecidual. O Fator de Crescimento Hepatocítico (HGF) é o único ligante conhecido para o receptor c-MET. Aativação oncogênica de MET suprime a apoptose e promove a sobrevivência da célula, proliferação, migração, diferenciação e angiogênese. Dentre os fatores angiogênicos, o VEGF é o regulador principal. Sua função biológica inclui promover a mitose de células endoteliais e estimular sua proliferação. A expressão desses biomarcadores no CG é relativamente recente e estudos de base populacional são necessários para definição do padrão de expressão.OBJETIVOS: Padronizar a técnica qPCR para avaliar, quantitativamente, em amostras teciduais parafinadas, a presença de expressão dos genes MET, HGF e VEGF no CG dos tipos difuso e intestinal. MÉTODOS: Foram estudados 20 pacientes com CG, sendo dez do tipo intestinal (idade média 72,1 anos) e dez do tipo difuso (idade média 50,1 anos). Em todos os pacientes foram analisadas amostras teciduais provenientes do tumor e de áreas distantes do tecido tumoral. A expressão relativa dos marcadores tumorais c-Met, HGF e VEGF foirealizada pela técnica de qPCR, através da comparação entre amostras tumorais e não tumorais, quando normalizados com o gene de referência constitutivo GAPDH. RESULTADOS: Para c-Met, 18/20 (90%) pacientes expressaram esse marcador e 9/20 (45%) superexpressaram esse gene, sendo três pacientes com CG tipo intestinal e seis comCG tipo difuso. Para o HGF, apenas 7/20 (35%) expressaram esse gene, sendo o mesmo superexpresso em 4/20 (20%) pacientes, sendo dois pacientes com CG tipo intestinal e dois pacientes com CG do tipo difuso. Para o VEGF, 20/20 (100%) pacientes expressaram esse marcador e em 12/20 (60%) pacientes foi observada superexpressão, sendo oito pacientes com CG tipo difuso e quatro com CG tipo intestinal. CONCLUSÕES: A técnica de qPCR foi padronizada e se mostrou viável para análise de expressão dos genes MET, HGF e VEGF nas amostras parafinadas de CG do tipo intestinal e difuso. A continuidade desse estudo, com maior amostragem, será conduzida para a caracterização do padrão de expressão desses biomarcadores no CG humano na população brasileira. INTRODUCTION: Gastric cancer (GC) is the third leading cause of death among malignant tumors worldwide, causing approximately 900,000 deaths / year. Changes in oncogenes that encode tyrosine kinase receptors play an important role in the pathogenesis of GC. MET gene is a proto-oncogene wich encodes a tyrosine kinase receptor c-MET and it is required for embryonic development and tissue repair. The hepatocyte growth factor (HGF) is the only known ligand for c-Met receptor. The MET oncogene activation suppresses apoptosis andpromotes cell survival, proliferation, migration, differentiation and angiogenesis. Among the angiogenic factors, VEGF is the main regulator. Its biological function includes promoting mitosis of endothelial cells and stimulate their proliferation. The expression of these biomarkers in GC is relatively recent, population-based studies are needed to define theexpression pattern. OBJECTIVES: Technical standardization of qPCR to evaluate quantitatively, in paraffin tissue samples, the presence of gene expression of the MET, HGF and VEGF in GC diffuse and intestinal types. METHODS: 20 GC patients were studied, ten patients were GC of intestinal type (average age 72.1 years) and ten of the diffuse type(average age 50.1 years). In all patients, tissue samples were analyzed from the tumor and distant areas of the tumor tissue. The relative expression of the tumor markers c-Met, HGF and VEGF was performed by qPCR technique by comparing tumor and non-tumor samples and they were normalized with the constitutive gene GAPDH. RESULTS: For c-Met, 18/20 (90%) patients expressed the marker and 9/20 (45%) overexpressed this gene, in which three were intestinal GC patients and six were diffuse GC patients. For HGF, only 7/20 (35%) express this gene and it was overexpressed in 4/20 (20%) patients, in which two wereintestinal GC patients and two were diffuse GC patients. For VEGF, 20/20 (100%) patients expressed this marker and in 12/20 (60%) patients was observed overexpression, in which eight patients had diffuse GC and four had intestinal GC. CONCLUSIONS: The qPCR technique was standardized and suitable for expression analysis of the biomarkers c-Met, HGF and VEGF using paraffin embedded tissue samples. The continuation of this study, with more samples will be conducted to characterize the expression pattern of these biomarkers in the human CG in the Brazilian population.