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Se evalúa el efecto de dos colorantes en la esferificación inversa de un modelo de coctel. Se obtienen esferas a partir de disoluciones de alginato de sodio, alginato de sodio + colorante Sunset yellow y alginato de sodio + colorante rojo Ponceau 4R, con proporciones de 0.6% m/v de alginato y 1.66% m/v de lactato de calcio; se pudieron incorporar ambos colorantes hasta una concentración de 0.15% m/v. Las disoluciones de alginato evidencian un comportamiento newtoniano con adecuada viscosidad y pueden conservarse entre 4 y 6 ºC durante 28 días sin afectación del color. Las esferas se evalúan sensorialmente en la categoría “buena” y el tipo de colorante no influyó de manera significativa en la sinéresis hasta los 10 min de preparadas.

La enfermedad meningocócica es una afección invasiva, de amplia incidencia mundial, cuyo agente causal es la bacteria gramnegativa Neisseria meningitidis . Existen vacunas polisacarídicas sin conjugar o conjugadas, contra cuatro de los cinco serogrupos responsables del 95% de los casos en el mundo. Para el serogrupo B, cuyo polisacárido es pobremente inmunogénico, se han evaluado varios candidatos vacunales producidos a base de vesículas de membrana externa. La determinación de la actividad bactericida y la cuantificación de IgG por ELISA han sido los métodos más utilizados en la medición de la respuesta inmune generada por vacunas contra la meningitis meningocócica. El segundo de estos métodos es utilizado en el Instituto Finlay como ensayo de inmunogenicidad para la liberación de lotes de VA-MENGOC-BC®. Como parte de una colaboración con investigadores noruegos, se trabaja en la obtención de un candidato vacunal contra los serogrupos A y W135 , basado en vesículas de membrana externa. En el presente trabajo se describe la estandarización de un ELISA para ser utilizado en la evaluación de la respuesta inmune del candidato vacunal bivalente.

Se describe la validación de un ELISA tipo inhibición, reportado por primera vez en la literatura científica para cuantificar un antígeno vacunal: el polisacárido Vi de Salmonella Typhi, para ser empleado en el control de la calidad de la vacuna antitifoídica cubana vax- TyViâ. El ensayo consta de seis pasos: 1) Recubrimiento de placa de reacción con poli-L-lisina y posteriormente polisacárido Vi; 2) Bloqueo con leche descremada; 3) Inhibición o neutralización en tubos de suero anti-Vi de conejo, respectivamente, con polisacárido Vi de Curva de Calibración (concentraciones desde 1–32 μg/mL), control positivo y muestras de vacuna (3 diluciones); 4) Neutralización de anticuerpos anti-Vi libres, presentes en las mezclas anteriores, por el Polisacárido de Recubrimiento; 5) Reconocimiento de anticuerpos anti-Vi unidos a la placa (conjugado anti-IgG de conejo-fosfatasa alcalina) y 6) Revelado por reacción enzima-sustrato. Los parámetros de validación estudiados y sus resultados fueron: 1) Precisión, expresada como coeficiente de variación a tres niveles de concentración de polisacárido, comprendidos en el rango de su especificación (35, 50 y 70 μg/mL) y evaluada en términos de repetibilidad; precisión intraensayos (cuatro analistas) y reproducibilidad (seis analistas): £ 20%; 2) Linealidad (100*R2): 99,68 %; 3) Límite de detección: 0,5 μg/mL; 4) Exactitud (recuperación para las tres diluciones de la muestra: entre 100 y 118%), y 5) Robustez: no influye 1,5 h de bloqueo (p = 0,52) ni ± 5 min para leer placa (p = 0,56); influye grandemente la calidad del agua (p = 0,026), a favor del agua para inyección. El ensayo es adecuado para los fines propuestos y es una medida de la inmunogenicidad in vitro del polisacárido Vi.

La potencia del componente pertussis, presente en la vacuna DPT-vax, se evalúa mediante el ensayo de Kendrick. La cepa recomendada por OMS para este ensayo es Bordetella pertussis 18 323, la cual debe ser conservada de manera que se asegure su viabilidad, pureza y virulencia. Como parte de dicho ensayo debe calcularse la concentración de una suspensión de la cepa, cuya opacidad se compara a simple vista con la 5ta Preparación Internacional de Referencia de Opacidad. Este método es muy inexacto y con frecuencia conduce a errores. En este trabajo se elaboró y caracterizó un lote de siembra de Bordetella. pertussis 18 323; se calculó la concentración de dicha cepa empleando una curva de calibración. El lote se empleó en ocho ensayos de potencia y en los mismos se cumplieron los criterios de validez establecidos.

Invasive meningococcal disease constitutes a worldwide health problem. Gram negative bacteria, Neisseria meningitidis is the causal agent of this disease. Plain or conjugated polysaccharide vaccines are available against four of five serogroups responsible of more than 95% of cases in the world. Because serogroup B polysaccharide is non immunogenic, some vaccine candidates, based on outer membrane proteins have been obtained and evaluated in clinical trials. Bactericidal activity determination and ELISA IgG have been used to evaluate immune response generated by antimeningococcal vaccines. The latter has been used, as potency test, to release VAMENGOC- BC® vaccine lots, produced at Finlay Institute. As a result of the collaboration with Norwegian researchers, a vaccine candidate based on outer membrane proteins against serogroups A and W135, has been obtained and evaluated in animal models. The current work describes the standardization of an ELISA method to be used in the immune response evaluation of the bivalent vaccinal candidate. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Potency of pertussis component, present in DPT-vax, is evaluated by Kendrick assay. Strain Bordetella pertussis 18323 is recommended by WHO, which should be stored in a way that ensures its viability, purity and virulence. As part of the assay, the concentration of a strain suspension should be calculated, which opacity is compared at first sight with the Fifth Reference International Preparation of Opacity. This method is very inexact and frequently leads to errors. A seed lot from Bordetella. pertussis 18323 was elaborated and characterized in this study and the concentration of the strain using a calibration curve was calculated. The lot was used in eight potency assays and they complied with established validity criterion. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Maximizing the immune response by adsorption of an Aluminium-containing adjuvant has been a major goal of vaccines formulation since decades. It has been demonstrated that a complete adsorption may enhance antigen uptake and ensure activation of the dendritic cells that have taken up vaccine antigens. Some time ago, WHO stated an 80 % of adsorption to Aluminium salts as a desirable specification. However, several recent studies indicate that the percent of the antigen dose that was adsorbed in the vaccine was not proportionally related to the immune response. Today, the determination of the degree of adsorption is a not a routine quality control assay for the vaccine lot release, so there is no a clear idea on the relationship between the percent of antigen adsorbed and the vaccine immunogenicity. The present work aimed to explore this relationship in order to monitor how much adsorbed should be Tetanus and Diphtheria Toxoids to Aluminium hydroxide to reach the potency test specifications. For that, samples with different adsorption degrees, both by adding lower amounts of adjuvant as by adding phosphate groups, were prepared and analysed by immunization of mice. The sera obtained were evaluated by ELISA and in vivo Potency tests. We demonstrated that samples with different percents of adsorption (between 30 and 80 %) produced acceptable in vivo potency results and antibody levels (³ 21U/mL). This study allowed a better understanding of the incidence of the adsorption process on the biological activity of Tetanus and Diphtheria Toxoid vaccines in order to use this parameter as a routine vaccine control tool. [ABSTRACT FROM AUTHOR]

Validation of an inhibition-type ELISA intended for quantifying a vaccine antigen, Vi polysaccharide from Salmonella typhi, is reported here for the first time in a scientific paper. It is devoted to the quality control of the Cuban typhoid vaccine vax-TyVi™. The test requires six steps: (1) Coating the plate with poly-L-lysine and then Vi polysaccharide; (2) Blocking with skimmed milk; (3) Inhibition (or neutralization) in tubes of rabbit Vi antiserum with Vi polysaccharide contained in the Standard Curve (concentrations from 1 – 32 µg/mL), Positive Control and vaccine samples (3 dilutions) respectively; (4) Neutralization of free Vi antibodies existing in the previous mixtures by the coating polysaccharide; (5) Recognition of Vi antibodies bonded to the plate (Anti-rabbit IgG-alkaline phosphatase) and (6) Revealing by means of the enzyme-substrate reaction. The studied validation parameters and their results were: (1) Precision, expressed as the coefficient of variation, at three different polysaccharide concentration levels comprising the vaccine specification range (35, 50 and 70 µg/mL) and evaluated in terms of Repeatability, Intermediate Precision (four analysts) and Reproducibility (six analysts): ≤ 20%; (2) Linearity (100*R²): 99.68%; (3) Detection Limit: 0.5 µg/mL; (4) Accuracy (recovery at three different sample dilutions): between 100 y 118%, and (5) Robustness: neither 1.5 h blocking nor ± 5 min for plate reading influences the test (p = 0.52 and 0.56 respectively); however, water quality greatly influences the results (p = 0.026); water for injection showed the best results. The test is appropriate for the purpose it was validated; it also allows evaluating in vitro immunogenicity of Vi polysaccharide. [ABSTRACT FROM AUTHOR]