Search

Aim: We describe a case of an obstetric patient, asian, whose Red Blood Cells (RBCs) showed a low expression of the RH:1 antigen in the routine tests and the strategies used for the characterization of an unusual RHD variant. Material and methods: Japanese, 25th weak of pregnancy, showed discrepant results in RhD typing with different anti-D monoclonal antibodies (Clones MS-201/MS26 (Fresenius-Kabi); ESD-1 (Diaclon); Blend MS-201/MS26 (Fresenius-Kabi); P3×61, P3×290, P3×35, P3×61 and P3×21223 B10 (Grifols); RUM-1/ESD1-M (Grifols); D175+D415 (Immucor), NaTH119+LOR-15C9 (Imunoscan). The phenotype C, c, E, e, Cw was performed by Gel Card (DG Gel RH+Kell, Grifols). Screening was performed to detect the most prevalent RHD alelles variants in Asians: RHD*Del1 (c.1227G>A), RHD*DVI.3 (D-CE(3-6)-D); RHD*01.W11 (c.885G>T) and RHD*01.W15 (c.845G>A) according to PCR-Multiplex, PCR-RFLP protocols and Sanger Sequencing method. RHD zygosity genotyping was performed by AS-PCR protocol. The RhD antigen density of the sample was determined by Flow cytometry (Navius EX, Beckman Coulter) using monoclonal IgG anti-D (Clone MS26) and the secondary antibody was goat anti-human IgG, Fab-fragment, FITC-conjugated (Life Technologies). Results: The pregnant women was phenotyped as C+c-E-e+Cw-. Blood sample showed inconsistent hemagglutination reactions (negative/weak/2+) with the anti-D panel. Genomic analyzes defined a single nucleotide change (845G>A) in the exon 6, leading to the amino acid change Gly282Asp located between transmembranous and exofacial RhD protein that is associated with RHD*weak D type 15 phenotype. The low D density found (323 sites/cell) and the hemizigozity status could explain why RHD*01.W15 was mistyped as RhD-negative by some anti-D serum including identification antibody test. Discussion: RHD allele that encodes a protein with very weak expression of the D antigen are rare in asian population. These variations in the RhD antigen structure result either in a D partial, Del and weak D phenotype. Although the frequency of the RHD*01.W15 genotype is relatively common in Japanese populations (16%), this is the first case found in a Japanese pregnant woman detected in our service. Accurate identification of RhD Variants is of great significance for a safe and effective clinical measures to prevent Hemolytic Disease of Newborn (HDN) for women childbearing age. Conclusion: The identification of there rare individuals associated with unusual phenotypes is very important, both for Transfusion purposes and to prevent HDN.

Introdução: A titulação de anticorpos irregulares é um teste semi-quantitativo em que se determinada a concentração de anticorpos presente no soro ou plasma. O teste pode ser realizado em tubo ou em gel-teste, sendo o teste em tubo o procedimento padrão, amplamente validado. Em contrapartida, o teste em gel é uma alternativa mais simples e com potencial de automação. Entretanto, variações de pelo menos dois títulos acima da determinação em tubo são esperadas e a definição de um título clinicamente crítico por esta metodologia ainda não foi estabelecida. Objetivo: O objetivo desse estudo foi comparar o comportamento das metodologias em tubo e gel-teste para titulação de anticorpos. Material e métodos: No período de novembro de 2022 a fevereiro de 2023, foram avaliadas 40 amostras da rotina laboratorial atendendo a dois critérios: 1) Ter havido identificação e titulação de anticorpo irregular; 2) Haver volume excedente. As amostras foram anonimizadas para a análise. Do total de amostras, 24 eram positivas para o anticorpo anti-D, uma para o anti-C, três para o anti-c, três para o anti-E, seis para o anti-K, duas para o anti-Dia e uma para o anti-Fya. Para a titulação dos anticorpos, as amostras foram diluídas e homogeneizadas em solução comercial nas proporções: pura, 1:2, 1:4 e assim sucessivamente até o resultado de leitura negativo. As hemácias usadas para titulação em tubo foram as mesmas usadas para titulação em gel. A leitura foi feita de forma visual em tubo e gel. Todos os reagentes usados foram da Bio-Rad. Resultados: Nove (22%) das 40 amostras analisadas em gel-teste mostraram o mesmo título em relação á metodologia em tubo, 25 (63%) apresentaram variação de 2 títulos e seis (15%) uma variação de 3 títulos.Quando avaliamos os anticorpos específicos, verificamos que para anticorpo anti-D, seis (25%) das 24 amostras não apresentaram variação de título, 15 (62%) apresentaram variação de 2 títulos e três (13%) apresentaram variação de 3 títulos. As amostras positivas para anti-C e anti-Fya tiveram variação de 3 e 2 títulos respectivamente. Duas (40%) das cinco amostras com anti-E tiveram variação de 2 títulos e três tiveram variação de 3 títulos. As duas amostras positivas para anti-Dia tiveram variação de 2 títulos. Para o anti-Kell, duas (33%) das seis amostras não apresentaram variação nos títulos e quatro (67%) apresentaram variação de 2 títulos. Discussão: A variação de título foi observada em grande parte dos anticorpos estudados, sendo que em 15% deles a variação foi superior aos 2 títulos esperados, corroborando dados de estudos que relatam até 5 títulos de diferença em análises similares. Mesmo que 63% dos casos tenham tido a variação esperada, outros 22% tiveram títulos iguais, dificultando o estabelecimento de um padrão. Conclusão: Em conclusão, o uso da metodologia gel-teste para titulação de anticorpos irregulares não guarda correlação linear com a titulação em tubo, dificultando o estabelecimento de um padrão de correspondência em relação à metodologia em tubo. Estudos que determinem valores críticos em gel ainda são necessários, bem como determinação da reprodutibilidade do método, para que a técnica possa ser adotada com segurança. A AABB segue recomendando o uso de metodologia em tubo para a determinação do título de anticorpos irregulares.

As hemoglobinopatias estão entre as doenças hereditárias monogênicas mais frequentes mundialmente. Especificamente, a α-talassemia é caracterizada pela redução na síntese de α-globina, comumente causada por deleções que envolvem, parcial ou completamente, o agrupamento gênico HBA, localizado no cromossomo 16 e composto por duas cópias do gene por alelo (HBA1 e HBA2). A gravidade do fenótipo da α-talassemia depende do número de genes afetados. Portadores da deleção de um único gene (-α/αα) são geralmente assintomáticos (portador silencioso), a deleção de dois genes (–/αα ou -α/-α) está associada ao fenótipo de traço talassêmico, com presença de anemia microcítica. A deleção de três genes (–/-α) está associada à doença de hemoglobina H, e a deleção de quatro genes (–/–) está associada a um fenótipo incompatível com a vida, a hidropsia fetal. O diagnóstico das α-talassemias é realizado pela análise de parâmetros clínicos e hematológicos, perfil de hemoglobinas e análise molecular do cluster gênico HBA. Este estudo tem como objetivo caracterizar a frequência e o perfil de variações em número de cópias (CNV) do agrupamento gênico da α-globina, em nosso laboratório, no período de outubro/2023 a julho/2024. A análise de CNVs foi feita por MLPA (Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification) utilizando o kit SALSA MLPA Probemix P140-C1 HBA. Neste período foram analisados 391 pacientes (219 do sexo feminino) com mediana de idade de 23 anos (0 – 93 anos). Foram detectadas CNVs em 239 casos (61,1%), sendo deleção -α3.7 a alteração mais frequente, identificada em 218 casos (91,2%). A deleção -α4.2 foi identificada em cinco casos (2,1%), sendo em dois como deleção única e em três casos com deleção bialélica -α3.7/-α4.2. O predomínio da deleção de 3,7 Kb (-α3.7) em relação a deleção 4,2 Kb (-α4.2) foi observado em estudos anteriores com MLPA e outras técnicas moleculares. Em cinco casos (2,1%) foi identificada a triplicação αααanti3.7. A presença de triplicação do gene da α-globina geralmente é assintomática, mas a concomitância desta alteração e o traço de β-talassemia pode levar a um desequilíbrio mais pronunciado entre as cadeias α e β da globina. Em dois casos (0,8%) foi identificada a deleção de três genes de α-globina, compatível doença de hemoglobina H. As deleções –α20.5 e –FIL ou –THAI foram identificadas em apenas um caso cada. O MLPA não permite a distinção entre os genótipos –FIL e –THAI. Em sete casos (2,9%) foram identificadas deleções envolvendo a região regulatória (HS-40). Em 124 casos (51,9%) foi identificada a deleção de dois genes de α-globina. Deleções de um gene foram identificadas 108 casos (45,2%). A investigação de CNVs pela técnica de MLPA permite a identificação das mutações mais frequentes na α-talassemia. Ainda que a alta prevalência de mutações nesta população esteja relacionada ao perfil de atendimento do laboratório e não represente a população geral, os resultados deste estudo mostram a diversidade de CNVs detectadas no gene de α-globina na amostragem analisada. Além da contribuição para o diagnóstico da α-talassemia, a investigação de CNVs nos genes de α-globina é importante para o aconselhamento genético e prevenção da forma mais grave da doença.

Introdução: Estudos apontam relação entre grupos sanguíneos e diversas condições clínicas como, por exemplo, eventos trombóticos, doença de von Willebrande doenças infecciosas como SARS-CoV-1, H. pylori entre outros. Associação entre maior susceptibilidade à COVID-19 e pior evolução em indivíduos do grupo sanguíneo A vem sendo estudada por diversos grupos. Objetivo: Neste estudo, analisamos a correlação entre os grupos sanguíneos ABO e resultado do teste para o vírus SARS-CoV-2 por RT-PCR em um laboratório de análises clínicas com grande fluxo de amostras representativas das cinco regiões do Brasil. Material e métodos: Os dados foram obtidos do banco de dados do laboratório referente a 20 anos de registro, analisados de forma anonimizada e de acordo com as regras que regem a lei geral de proteção de dados (LGPD). Os registros possuem um identificador numérico único que leva em conta CPF e data de nascimento e todas as análises foram feitas considerando-se esta identificação. Foram obtidas as tipagem sanguínea ABO/Rh e os resultados de RT-PCR para SARS-CoV-2. Para este último, os indivíduos foram classificados “covid-positivo”quando ao menos um exame resultou positivo. Os demais foram considerados “covid-negativo”. As análises foram realizadas no banco de dados obtido do cruzamento do banco de indivíduos únicos com tipagem sanguínea e ao menos um teste para COVID-19. Análise estatística foi realizada do teste chi-quadrado de Pearson e V-quadrado de Cramér. Resultados e discussão: Foram identificados 66.181 indivíduos que realizaram tipagem sanguínea e ao menos um teste para SARS-CoV-2. A distribuição global dos grupos ABO é a que segue: grupo O 44%, grupo A 41%, grupo B 11% e grupo AB 4%, compatível com a distribuição dos grupos no Brasil (O 45%, A 42%, B 10% e AB 3%).Do total de indivíduos estudado, 21% (13.617) apresentou ao menos um resultado positivo para SARS-CoV-2, distribuídos da seguinte forma por grupo sanguíneo: tipo O 42%, A 42%, B 12% e AB 4%. A distribuição dos grupos sanguíneos entre os indivíduos negativos para SARS-CoV-2 foi: tipo O 44%, A 41%, B 11% e AB 4%. As análises consideraram grupo ABO e Rh. Foi realizado um teste chi-quadrado de independência de variáveis e verificou-se associação positiva entre o tipo sanguíneo e a infecção por COVID-19 (χ2 = 27,273, df = 7, p = 0,0002975).O teste pós-hoc de comparação entre status de COVID-19 e tipo sanguíneo sugere associação entre o tipo B- e infecção por COVID-19 (p = 0.0407700).Entretanto, este dado não foi confirmado por análise adicional pelo teste V de Cramér, sugerindo que o efeito observado está provavelmente associado ao grande número de amostras do que uma associação real entre as variáveis.Sabe-se que a testagem para COVID-19 pode resultar em falso negativo quando realizada fora da janela de maior sensibilidade para detecção do vírus. Deve-se considerar que, na presente análise, a informação sobre início dos sintomas e data de realização do teste não está disponível. Entretanto, o grande número de casos analisados diminui o impacto da ausência desta informação. Outro ponto importante a ser considerado é que não foram avaliados parâmetros de evolução clínica dos pacientes, sendo os dados restritos à presença ou não de diagnóstico positivo para COVID-19. Conclusão: Não foi demonstrada associação entre o tipo sanguíneo e a suscetibilidade a infecções por COVID-19 no grupo analisado.

Competing Interests: Conflicts of interest None.

Atherosclerotic Cardiovascular Disease (ASCVD) represents the leading cause of death worldwide, and individual screening should be based on behavioral, metabolic, and genetic profile derived from data collected in large population-based studies. Due to the polygenic nature of ASCVD, we aimed to assess the association of genomics with ASCVD risk and its impact on the occurrence of acute myocardial infarction, stroke, or peripheral artery thrombotic-ischemic events at population level. CardioVascular Genes (CV-GENES) is a nationwide, multicenter, 1:1 case-control study of 3,734 patients in Brazil. Inclusion criterion for cases is the first occurrence of one of the ASCVD events. Individuals without known ASCVD will be eligible as controls. A core lab will perform the genetic analyses through low-pass whole genome sequencing and whole exome sequencing. In order to estimate the independent association between genetic polymorphisms and ASCVD, a polygenic risk score (PRS) will be built through a hybrid approach including effect size of each Single Nucleotide Polymorphism (SNP), number of effect alleles observed, sample ploidy, total number of SNPs included in the PRS, and number of non-missing SNPs in the sample. In addition, the presence of pathogenic or likely pathogenic variants will be screened in 8 genes (ABCG5, ABCG8, APOB, APOE, LDLR, LDLRAP1, LIPA, PCSK9) associated with atherosclerosis. Multiple logistic regression will be applied to estimate adjusted odds ratios (OR) and 95% confidence intervals (CI), and population attributable risks will be calculated. Clinical trial registration: This study is registered in clinicaltrials.gov (NCT05515653)., Competing Interests: The authors have declared that no competing interests exist., (Copyright: © 2024 Alves de Oliveira Junior et al. This is an open access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original author and source are credited.)

Data-independent acquisition (DIA) allows comprehensive proteome coverage, while it also potentially works as a unified protocol to determine a multitude of proteins found in blood. Because of its high specificity, mass spectrometry may greatly reduce the interference observed in other assays to evaluate blood markers. Here, we combined DIA with volumetric absorptive microsampling (VAMS) and automated proteomics sample processing in a platform to assess clinical markers. As a proof of concept, we evaluated two hemoglobin-related biomarkers: the glycated hemoglobin (HbA1c) and hemoglobin (Hb) variants. HbA1c by DIA showed good correlation with the reference method, but method imprecision did not meet the quality requirement for this biomarker. We developed a strategy to identify Hb variants based on a customized database combined with a workflow for DIA data extraction and rigorous peptide evaluation. Data are available via ProteomeXchange with identifier PXD029918.

Background: São Paulo city has been one of the regions most affected by the COVID-19 pandemic in Brazil. Frequent asymptomatic and oligosymptomatic infections and poor access to diagnostic tests make serosurveys crucial to monitor the magnitude of the epidemic and to inform public health policies, such as vaccination plans., Objectives: To estimate, early in the epidemic, the seroprevalence of antibodies to SARS-CoV-2 in adults living in the six most affected districts in São Paulo city, and to assess potential associated risk factors., Methods: This was a cross-sectional population-based survey of 1,152 households randomly selected from 72 census tracts. During the period May 4-12, 2020, 463 participants completed a questionnaire on sociodemographic characteristics and history of symptoms in the past two weeks, and provided a blood sample. Prevalence of SARS-CoV-2 antibodies was the outcome of interest and was estimated based on results of two immunoassays, Maglumi SARS-CoV-2 chemiluminescence assay Immunoglobulin (Ig) M (IgM) and IgG, and Roche electrochemiluminescence assay total Ig. Serum samples reactive to either assay were considered positive., Results: Weighted overall seroprevalence was 6% (95%CI 3.9-8.3%). No association was observed between seropositivity and sex, age group or education level. Participants who reported black and brown skin color showed a 2.7 fold higher prevalence than people with white skin (p = 0.007). Among the 30 seropositive individuals, 14 (46.6%) reported no COVID-19 compatible symptoms in the past two weeks., Conclusion: This study represents the first assessment of SARS-CoV-2 seroprevalence in the city of São Paulo and 6% is the baseline estimate of a series of population-based seroprevalence surveys. Serological screening using sound serological assays is the key tool to monitoring temporal and geographic changes in the spread of the virus through an important epicenter of the COVID-19 pandemic in Brazil. Ultimately, it may inform prevention and control efforts., Competing Interests: Conflicts of interest Authors associated with Grupo Fleury (C.F.H.G., M.C.T.P. and E.G.R.) and Ibope Inteligência em Pesquisa e Consultoria (M.C.N.) disclose the following potential conflict of interest: the two organizations co-funded the project by providing their services at or below cost. These include data and blood sample collection and laboratory tests. The companies sell these services in the market and might profit from the publicity generated by the results of this research. B.H.T., M.C.G.P.A. and F.C.R. declare no conflict of interest., (Copyright © 2021 Sociedade Brasileira de Infectologia. Published by Elsevier España, S.L.U. All rights reserved.)

The outbreak of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) is pressing public health systems around the world, and large population testing is a key step to control this pandemic disease. Here, we develop a high-throughput targeted proteomics assay to detect SARS-CoV-2 nucleoprotein peptides directly from nasopharyngeal and oropharyngeal swabs. A modified magnetic particle-based proteomics approach implemented on a robotic liquid handler enables fully automated preparation of 96 samples within 4 hours. A TFC-MS system allows multiplexed analysis of 4 samples within 10 min, enabling the processing of more than 500 samples per day. We validate this method qualitatively (Tier 3) and quantitatively (Tier 1) using 985 specimens previously analyzed by real-time RT-PCR, and detect up to 84% of the positive cases with up to 97% specificity. The presented strategy has high sample stability and should be considered as an option for SARS-CoV-2 testing in large populations.