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Objetivo: analisar o polimorfismo genético de GSTP1 localizado no cromossomo 11.q13.2, exon 5 (Ile105Val) e associar a marcadores de estresse oxidativo e infecção por HPV. Métodos: o DNA foi extraído de raspados cervicais para identificação do HPV por PCR e genotipagem utilizando HPV-Screening PapilloCheck® e de sangue total para análise do polimorfismo por RFLP-PCR. O estresse oxidativo foi analisado através dos níveis séricos das espécies reativas ao ácido tiobarbitúrico, grupos carbonil, grupos tiol e atividade da catalase. Resultados: 75% das mulheres HPV positivas apresentaram infecções simples e os tipos virais 16 e 45 foram mais frequentes. 56,25% das mulheres apresentaram o genótipo variante Ile105Val GSTP1 (Ile/Val ou Val/Val) com prevalência de heterozigotos (43,75%). Entre as mulheres HPV positivas, a presença do variante alélico levou a um maior risco de desenvolver lesões cervicais (OR = 29,44). Mulheres infectadas com HPV (especialmente de alto risco) apresentaram menor atividade da catalase e aumento dos grupos carbonila. Considerando a presença dos genótipos variantes Ile/Val e Val/Val, as mulheres infectadas apresentaram aumento dos marcadores de estresse oxidativo e as mulheres HPV negativas apresentaram diminuição da capacidade antioxidante. Conclusão: estes achados sugerem uma possível influência do genótipo variante GSTP1 no aumento do estresse oxidativo e suscetibilidade a lesões cervicais em mulheres infectadas com HPV.Palavras-chave: gstp1; espécies reativas de oxigênio; hpv; lesão cervical.-----------------------------------------------------------------------------------------AbstractObjective: to analyze the genetic polymorphism of GSTP1 located on chromosome 11q13.2 exon 5 (Ile105Val) and its association with oxidative stress markers and HPV infection. Methods: DNA were extracted from cervical scrapes for HPV identification by PCR, genotyping using HPV-Screening PapilloCheck®, and from whole blood for analysis of polymorphisms by RFLP-PCR. Oxidative stress was analyzed by measuring the serum levels of thiobarbituric acid reactive species, carbonyl groups, thiol groups, and catalase activity. Results: of all HPV-positive women, 75% had simple infections. Viral types 16 and 45 were the most frequent. A total of 56.25% of women had variant Ile105Val GSTP1 genotype (Ile/Val or Val/Val) with a heterozygous prevalence (43.75%). Among the HPV-positive women, the presence of the allelic variant led to a higher risk of developing cervical lesions (OR = 29.44). Women infected with HPV (especially the high-risk type) showed lower catalase activity and an increase in carbonyl groups. Considering the presence of variant genotypes Ile/Val and Val/Val, the infected women presented an increase in some oxidative stress markers, and HPV-negative women showed a decreased antioxidant capacity. Conclusion: these results indicate the potential influence of variant GSTP1 genotype on increased oxidative stress and susceptibility to cervical lesions in women infected with HPV.Keywords: gstp1; reactive oxygen species; HPV; cervical injury.

Cervical cancer (CC) is the second cause of death cancer related among women worldwide. Nowadays,it is also done visual inspection with acetic acid to aid in detection of cervical lesions.Pap smear exam is insensitive, and false negatives occur. So, more accurate methods are needed to avoid problems with late diagnosis, once that it makes more likely the tumour spread, making the treatment more challenging. Genetic aspects like SNPs (single nucleotide polymorphisms) presence and methylation events can be related to CC development. SNP presence also can affect gene expression by altering promoter activity or by changing a coding codon. Methylation is related to gene expression, once the hypermethylation of the promoter region prevents gene transcription, while hypomethylation increases gene expression. This information can be used to have a more reliable diagnosis, as well be used to predict treatment efficacy or prognosis for the cancer evolution. Our work goal was to discover genes that have deregulated expression, which could be caused by methylation or SNPs. Then, this gene panel could be used as diagnosis or prognosis approach for CC patients. The in silico analysis was performed with Metacore® software database (Thomson Reuters, USA), with the follow word combinations: cervical cancer and methylation, cervical cancer and polymorphisms and cervical cancer and gene expression. The three sets of results were combined so that only genes that were affected in all aspects were considered. For methylation there were 54 genes, while 3003 genes were linked to expression deregulation and 4095 linked to SNPs. The intersection of these genes resulted in 16 genes. This gene list included genes such as CDKN2A (ciclindependent kinase inhibitor 2A), CDKN1A (ciclin-dependent kinase inhibitor), TP53 (tumor protein p53) and TP73 (Tumor protein p73) are related to cell cycle. Both TP73 and TP53 are tumor suppressor proteins, having their expression reduced when hyper-methylated, which is consistent with cancer development. Several other tumor suppressor proteins were found, for instance: FHIT (Fragile histidine triad), PTEN (Phosphatase and tensin homolog) and RB1 (Retinoblastoma 1), RASSF1 (Ras Association domain-containing protein 1). This indicates that CC development requires extensive damage to cells mechanisms of regulation. APC (adenomatous polyposis coli) also appears in the gene panel, once it was found hypermethylated and downregulated in CC, meaning that it has its activity reduced. APC is antagonist of the WNT signaling pathway. In colorectal cancer, loss of this function is associated with cancer progression. It is interesting to notice this gene presence in cervix samples probably due to epithelial cells similarity between cervical and colotectal regions. Further in vitro studies are needed in order to confirm these in silico results, but the use of genetic markers looks promising for a more reliable and accurate diagnosis of CC.

OBJETIVO: analisar, em mulheres com HPV em colo do útero, as características da infecção viral e os fatores de risco para lesão intraepitelial de alto grau e carcinoma cervical. MÉTODOS: realizou-se um estudo caso-controle com mulheres com HPV em colo do útero atendidas em serviço de Ginecologia de referência vinculado ao SUS, em Recife, Nordeste do Brasil. No grupo de casos (72 mulheres com lesão intraepitelial de alto grau ou carcinoma cervical) e de controles (176 mulheres com colpocitologia normal ou com alterações benignas), foram pesquisados seis genótipos virais (HPV 16, 18, 31, 33, 6 e 11) em material da ecto- e endocérvice com primers MY09/MY11. As variáveis independentes foram hierarquizadas em três níveis de determinação: distal (sociodemográficas), intermediário (comportamentais) e proximal (realização anterior de colpocitologia). A homogeneidade das proporções foi testada (χ2). Obtiveram-se ORs não ajustadas e, na modelagem final, realizou-se regressão logística hierarquizada com o ajuste do efeito de cada variável sobre o desfecho pelas variáveis do mesmo nível e de níveis anteriores de causalidade. RESULTADOS: em 76,6% das 248 mulheres participantes do estudo, o genótipo viral da infecção cervical foi identificado. Predominaram genótipos de alto risco oncogênico (83,4% nos casos e 67,1% nos controles), principalmente HPV 16 e 31. Foram identificados como fatores de risco (a) distais: residir em zona rural (OR=2,7; IC95%: 1,1-6,2), menos de três anos de estudo (OR=3,9; IC95%: 2,0-7,5) e renda familiar inferior a dois salários mínimos (OR=3,3; IC95%: 1,0-10,5); (b) intermediário: número de gestações igual ou superior a quatro (OR=2,0; IC95%: 1,0-3,7); (c) proximal: ausência de colpocitologia anterior (OR=9,7; IC95%: 2,4-38,2). CONCLUSÕES: em mulheres usuárias do SUS do Nordeste do Brasil predominam os genótipos virais 16 e 31 em infecções cervicais por HPV, sendo que fatores socioeconômicos, reprodutivos e relacionados à ausência de rastreamento citológico representam risco para lesão intraepitelial de alto grau e câncer cervical. PURPOSE: to analyze the characteristics of viral infection and the risk factors for high-grade squamous intraepithelial lesion and cervical carcinoma in women with cervical HPV infection. METHODS: a case-control study was conducted on women with cervical HPV at a Gynecology reference service enrolled at the Public Health System, located in Recife, Northeastern Brazil. The groups of cases (72 women with high-grade squamous intraepithelial lesion or cervical cancer) and controls (176 women with normal Pap smear or benign alterations) were investigated for six viral genotypes (HPV 16, 18, 31, 33, 6, 11) in ecto- and endocervical material using MY09/MY11 primers. The independent variables were ranked in three levels of determination: distal (sociodemographic), intermediate (behavioral) and proximal (previous Pap smear). The homogeneity of proportions was tested (χ2), unadjusted Odds Ratios (OR) were obtained and hierarchical logistic regression was applied to the final model, with adjustment of the effect of each variable to the outcome based on the variables in the same and previous levels of causality. RESULTS: the viral genotype of cervical infection was identified in 76.6% of the 248 women participating in the study. High-risk HPV genotypes (83.4% of cases and 67.1% of controls) were predominant, especially HPV 16 and 31. The distal risk factors identified were: living in a rural area (OR=2.71, 95%CI: 1.18-6.23), less than three years of study (OR=3.97, 95%CI: 2.09-7.54) and family income below two minimum wages (OR=3.30, 95%CI: 1.04-10.51); intermediate: four or more pregnancies (OR=2.00, 95%CI: 1.06-3.76); and proximal: absence of a previous Pap smear (OR=9.74, 95%CI: 2.48-38.28). CONCLUSIONS: genotypes 16 and 31 of cervical HPV infection are predominant among women assisted by the Public Health System in Northeastern Brazil. Socioeconomic and reproductive factors, as well as the absence of cytological screening, represent risk factors for the progression of infection to high-grade squamous intraepithelial lesion and cervical cancer.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A Kluyveromyces marxianus é uma levedura considerada não-convencional que produz 􀈕-galactosidase, enzima que hidrolisa a lactose em glicose e galactose, e que apresenta grande aplicabilidade industrial, sendo utilizada, principalmente, na redução do teor de lactose do leite e seus derivados destinados a pessoas portadoras de intolerância à lactose. A produção de biomassa e de 􀁅-galactosidase pela linhagem CBS 6556 de K. marxianus foi avaliada sob diferentes condições de cultivo. A atividade da enzima 􀁅- galactosidase não parece ser diretamente afetada pela taxa de oxigênio dissolvido, sendo mais importante a fonte de carbono utilizada. Em relação a fonte de nitrogênio, o aumento da atividade enzimática foi mais alta em meio contendo fosfato de amônia, a 34oC (4517,19 U/mg prot). Todavia, a velocidade específica de crescimento foi mais alta na temperatura de 30ºC nesta mesma fonte de nitrogênio (􀁐=40h-1). O coeficiente de partição da enzima 􀁅-galactosidase produzida em soro de queijo coalho foi avaliado em sistema bifásico aquoso (SBA) polietileno glicol(PEG)/Fosfato de potássio. A partição desta enzima foi afetado tanto pelo tamanho da cadeia do PEG quanto pela concentração dos componentes do sistema. O aumento da concentração do polímero (de 14% para 19,7%) demonstrou exercer grande influência na partição da enzima, resultando em inversão do coeficiente de partição (de K=0,008 para K=2,88) quando PEG 3350 foi utilizado para formar o SBA. A maior seletividade foi encontrada utilizando PEG 3350 (4,96); e a melhor recuperação da atividade enzimática foi obtida na fase superior do sistema PEG 8000/fosfato de potássio (76%).

FACEPE A medicina passa neste momento por uma transformação onde as análises moleculares têm sido associadas com desfechos clínicos e contribuído para as decisões terapêuticas; dando origem a medicina de precisão. Esta se fundamenta no princípio de que cada indivíduo é único em sua identidade genética, metabólica e ambiental. O avanço das tecnologias em saúde tem impulsionado a pesquisa e validação de novos biomarcadores, e a oncologia é uma das áreas terapêuticas que tem maior evolução. O objetivo foi avaliar potencias marcadores moleculares do câncer de mama e hepatocelular. Um artigo Editorial comenta o papel dos dispositivos point-of-care na aplicação da medicina de precisão e discute a importância de estudos clínicos randomizados prospectivos e retrospectivos baseados na individualidade dos pacientes. Três diferentes abordagens moleculares foram utilizadas para aplicar estes conceitos no estudo da oncologia. A primeira trata de um caso clínico de carcinoma hepatocelular no qual o perfil genômico de mutações nos genes BRAF, CTNNB1, ERBB2, FBXW7, HF1A, KRAS, NRAS, PIK3CA, TP53permitiu associar as alterações nas vias metabólicas com o desenvolvimento clínico do paciente, que não seguiu o prognóstico esperado. A segunda abordagem foi baseada na análise in silico de mutações em alelos pobre metabolizadores do gene CYP2D6 (CYP2D6*7 e CYP2D6*14A), e permitiu avaliação impacto estrutural e funcional na enzima, demonstrando como estas alterações podem prejudicar o metabolismo do tamoxifeno, o pilar do tratamento endócrino do câncer de mama. A terceira abordagem molecular foi focada no estresse oxidativo e seu papel na saúde e na doença, que foi revisado no capítulo de livro e deu origem a uma hipótese de via molecular testada no câncer de mama. Desta forma, foi avaliada a expressão gênica dos genes PPARG, SIRT1, NFE2L2, UCP2 e RAC1 em amostras teciduais de câncer de mama. Os resultados demonstram correlação significativa entre os genes PPAGR e SIRT1 (p=0,0156), PPARG e NFE2L2 (p=0,0182); e NFE2L2 e RAC1 (p=0,0043), demonstrando o que pode haver um eixo de regulação metabólica e anti-oxidante no câncer de mama entre esses genes. Além disso, a expressão de PPARG foi associada ao estadiamento (p=0,00335 I vs III), a de RAC1 ao estadiamento [I vs II (p=0,0165) e I vs III (p= 0,0161)], tamanho do tumor (T1 vs T3, p=0,0347) e subtipos [HER2 vs Luminal (p=0,0036) e HER2 vs Triplo Negativo (p=0,0152). Em conclusão, o presente trabalho demonstrou, corroborando com outros estudos, que as ferramentas moleculares constituem o caminho para a oncologia de precisão, levando ao desenvolvimento tecnológico, à otimização dos custos e a eficiência para o tratamento do câncer Medicine is currently undergoing a transformation where molecular analysis has been associated with clinical outcomes and contributed to therapeutic decisions; giving rise to precision medicine. Precision medicine is based on the principle that individuals are unique in their genetic, metabolic and environmental identity. Advances in health technologies have driven research and validation of new biomarkers, and oncology is one of the most evolving therapeutic areas. The objective was to evaluate potential molecular markers of breast and hepatocellular cancer. The Editorial article comments on the role of point-of-care devices in the application of precision medicine and discusses the importance of prospective and retrospective randomized clinical trials based on patient individuality. Three different molecular approaches were used to apply these concepts in the study of oncology. The first is a clinical case of hepatocellular carcinoma in which the genomic profile of mutations in the genes BRAF, CTNNB1, ERBB2, FBXW7, HF1A, KRAS, NRAS, PIK3CA, TP53 allowed the association of metabolic pathway alterations with the patient's clinical development, which did not follow the expected prognosis. The second approach was based on in silico analysis of mutations in poor metabolizing alleles of the CYP2D6 gene (CYP2D6*7 and CYP2D6*14A), and allowed for structural and functional impact assessment on the enzyme, demonstrating how these changes may impair tamoxifen metabolism, the backbone of breast cancer endocrine therapy. The third molecular approach focused on oxidative stress and its role in health and disease, which was reviewed in the book chapter and gave rise to a molecular pathway hypothesis tested in breast cancer. At this point, the gene expression of NRF2, SIRT1, PPARG, UCP2 and RAC1 genes in breast cancer tissue samples was evaluated, and the results correlated to clinical parameters such as molecular subtypes, staging and tumor grade. Significant correlation between PPAGR and SIRT1 (p=0.0156), PPARG and NFE2L2 (p=0.0182) and NFE2L2 and RAC1 (p=0.0043) genes was demonstrated; indicating what may be an axis of metabolic and antioxidant regulation in breast cancer between these genes. In addition, PPARG expression was associated with tumor stage (p = 0.00335 I vs III), and RAC1 expression was associated with tumor stage (p = 0.0165 I vs II and p = 0.0161 I vs III), tumor size (p = 0.0347 T1 vs T3) and subtype (p = 0.0036 HER2 vs Luminal and p = 0.0152 HER2 vs Triple Negative). In conclusion, the present study demonstrated, corroborating with other studies, that molecular tools constitute the path to precision oncology, leading to technological development, cost optimization and efficiency for cancer treatment.

Esclerose Múltipla (EM) é uma doença inflamatória e crônica do Sistema Nervoso Central (SNC) atingindo mais de 2 milhões de pessoas no mundo, na sua maioria pacientes jovens e infelizmente ainda sem cura. Considerada uma desordem autoimune cuja susceptibilidade individual é governada por interface entre a genética individual e fatores ambientais (CROSS; PICCIO, 2014). A doença é marcada pelo padrão característ0ico de acometimento neurológico em que os surtos ocorrem disseminados no tempo (em momentos diferentes) e espaço (vários locais de acometimento no SNC). Do ponto de vista fisiopatológico, muitos aspectos vêm sendo elucidados, com destaque para estresse oxidativo. No entanto, existem lacunas a serem respondidas para um melhor entendimento da doença. Sirtuinas 1 (SIRT1) e 3 (SIRT3) vêm como moléculas candidatas para esta tarefa devido suas conhecidas funções como agentes reguladores de resposta a estresse oxidativo. No presente estudo, analisamos os perfis de expressão dos genes das SIRT1 e SIRT3 em 14 pacientes com esclerose múltipla, forma surto- remissão, oriundos do ambulatório de doenças desmielinizantes do Hospital das Clínicas da Universidade Federal de Pernambuco e correlacionamos com escala de incapacidade aferida pela Expanded Disability Status Scale (EDSS), idade, sexo, tipo de surto inicial e terapia medicamentosa. Utilizou-se PCR quantitativa em tempo real com análise das amostras em duplicata. Foi observada diminuição da expressão de RNA mensageiro dos genes SIRT1 e SIRT3 em relação aos parâmetros acima. Nossos dados sugerem que o perfil de expressão das Sirtuinas 1 e 3 em pacientes com EM forma surto- remissão pode ser útil no entendimento da patogênese desta condição além da possibilidade de apresentar-se como biomarcador para tal patologia auto-imune. Multiple Sclerosis (MS) is an inflammatory and chronic disease of the Central Nervous System (CNS) reaching more than 2 million people worldwide, mostly young patients and unfortunately still no cure. Considered an autoimmune disorder whose individual susceptibility is governed by the interface between individual genetics and environmental factors (Cross and Piccio, 2014). The disease shows the characteristic pattern of neurological impairment in which relapses occur at different times and in various sites through CNS. From the pathophysiological view, many aspects have been elucidated, with emphasis on oxidative stress. However, there are gaps to be answered for a better understanding of the disease. Sirtuins 1 (SIRT1) and 3 (SIRT3) come as candidate molecules for this task due to their known functions as oxidative stress response regulators. In the present study, we analyzed the expression profiles of the SIRT1 and SIRT3 genes in 14 patients with relapsing-remitting sclerosis multiple sclerosis, from the outpatient clinic of demyelinating diseases of the Hospital das Clínicas of the Federal University of Pernambuco and correlated with the scale of disability assessed by Expanded Disability Status Scale (EDSS), age, sex, type of initial relapse, and drug therapy. Real-Time PCR was performed with analysis of duplicate samples. Decreased messenger RNA expression of SIRT1 and SIRT3 genes was observed with the above parameters. Our data suggest that the expression profile of Sirtuins 1 and 3 in patients with relapsing-remitting MS may be useful in understanding the pathogenesis of this condition in addition to being able to present itself as a biomarker for such autoimmune pathology.

O câncer de mama representa um problema de saúde pública mundial, que se excluindo os cânceres de pele não melanoma, constitui-se no mais frequente tumor maligno entre as mulheres, com altas taxas de morbidade e mortalidade. Vários progressos têm ocorrido no campo epidemiológico, biológico e no desenvolvimento de novas drogas. Biomarcadores e vias de sinalizações oncogênicas com desenvolvimento de drogas contra alvos moleculares têm tido grande impacto no manejo das pacientes. Apesar de bem descrito na literatura, o processo de acetilação/deacetilação epigenética no câncer de mama, bem como o papel das histonas deacetilases, como as sirtuínas, não está ainda esclarecido. Desta forma, o objetivo do presente estudo foi identificar os biomarcadores e terapias com foco em alvos moleculares utilizados atualmente e ainda sem aplicabilidade clínica, além de avaliar o papel da expressão de sirtuínas SIRT1 e SIRT7 em amostras tumorais de pacientes com câncer de mama visando determinar seu potencial prognóstico e terapêutico. Para tanto, foi realizada uma busca pelos genes mais estudados em relação ao câncer de mama e por estudos clínicos em andamento constantes no banco de dados do National Clinical Trials (NCI). Em relação à análise dos genes SIRT1 e SIRT7, foram avaliados os níveis de expressão gênica em amostras de tecido tumoral através do uso de PCR em tempo real, e associados com variáveis clínicas de pacientes portadoras de câncer de mama tratadas no Hospital Barão de Lucena (Recife-PE). Nossos resultados demonstram que a análise de estudos clínicos em corrente de alvos terapêuticos em câncer de mama com potencial terapêutico foram aqueles que atuam em vias de sinalização como PI3K/Akt/mTOR, HER2+, JAK/STAT, MAPK, PARP, Resceptores hormonais, Ciclinas CDK4/6 e PDL-1 e PD1. A nível epigenético, a expressão de SIRT 1 esteve associada a um maior comprometimento axilar linfonodal e SIRT7, à prática do etilismo. Concluindo, vários alvos e vias de sinalizações estão em uso e outros em ensaios clínicos com resultados promissores. SIRT1 e SIRT7 pode ter um papel na carcinogênese mamária, sobretudo no que concerne a pacientes com maior envolvimento axilar linfonodal e prática de etilismo. Novos estudos com maior coorte são necessários para confirmarem esses dados e desenvolvimento de potencial alvo terapêutico de controle epigenético. Breast cancer represents a worldwide public health problem that, excluding non-melanoma skin cancers, is the most frequent malignant tumor among women, with high rates of morbidity and mortality. Several advances have been made in the field of epidemiology, biology and the development of new drugs. Biomarkers and pathways of oncogenic signaling with drug development against molecular targets have had a great impact on patient management. Although well described in the literature, the process of epigenetic acetylation / deacetylation in breast cancer, as well as the role of histone deacetylases, such as sirtuins, has not yet been elucidated. To carry out a review of the literature on biomarkers and future therapies focusing on molecular targets still without clinical applicability; the role of nuclear sirtuin SIRT1and SIRT7 expression in tumor samples and its association with clinical features in breast cancer patients was further evaluated. Search for ongoing clinical trials in the National Clinical Trials (NCI). The expression of SIRT1and SIRT7 was investigated in tumor tissue samples by RT-PCR, and the association with clinical variables of patients. Our results has been demonstrated a series of clinical trials currently, using therapeutic targets in breast cancer with potential therapeutical on signaling pathways such as PI3K/Akt /mTOR, HER2 +, JAK / STAT, MAPK, PARP, hormone receptors, CDK4 / 6 Cyclins and PDL-1 and PD1. In the epigenetic scenario, the expression of SIRT 1 was associated with greater axillary lymph node involvement and SIRT7, to the practice of alcoholism. In conclusion, several targets and signaling pathways are in use, and others in clinical trials with promising results. SIRT1 and SIRT7 may play a role in breast carcinogenesis, especially with regard to patients with greater axillary lymph node involvement and alcoholism. New studies with a larger cohort are needed to obtain data and the development of potential epigenetic control therapeutic vectors.

FACEPE Introdução: O câncer de mama é uma doença de grande impacto em mulheres no Brasil e no mundo. O câncer cervical, que está normalmente associado à infecção pelo vírus HPV, é a quarta causa de morte por câncer no país. Devido ao alto impacto destes dois tipos de cânceres na vida das mulheres em particular, identificar moléculas biomarcadoras que auxiliem tanto no diagnóstico, quanto no tratamento torna-se missão de relevância no campo científico. Estas moléculas biomarcadoras podem ser do tipo genético, epigenético, proteômico e podem ser usadas para o diagnóstico do câncer e seguimento da doença. Neste contexto o DEK, eNOS e TCF7L2 têm se mostrado bons candidatos a marcadores em cânceres como o de mama e o cervical. Objetivos: Identificar e avaliar moléculas de interesse em câncer de mama; estudar as interações do gene DEK com moléculas relevantes no câncer de mama e cervical; avaliar os níveis de expressão dos genes NOS3 e TCF7L2 em amostras de pacientes com câncer de mama; avaliar a presença de polimorfismos nos genes NOS3 e TCF7L2 em amostras de pacientes com câncer de mama. Metodologia: Foi realizado um estudo in silico para avaliar as possibilidades de interação dessas moléculas no contexto da célula com câncer de mama. Foi usado o banco de dados Pubmed para a metanálise. Foram realizadas análise de expressão gênica assim como analisados 3 polimorfismos do NOS3 e 3 polimorfismos do TCF7L2. Resultados: Na metanálise, foram encontrados 89 artigos, dos quais 20 foram selecionados para investigar a associação entre a eNOS e o câncer de mama. Foi observada a utilização desta proteína como biomarcador para câncer de mama. Nos testes experimentais, 22 amostras de pacientes com câncer foram analisadas e observou-se uma relação significativa na associação do NOS3 c.-813C>T para histórico familiar de câncer (p=0.022). Conclusão: O gene DEK apresenta uma correlação clara com o desenvolvimento dos cânceres em mulheres, sendo ele, entre os marcadores estudados, o melhor candidato tanto para uma associação a alvos terapêuticos como para marcador de prognóstico nos cânceres de mama e cervical. Apesar do TCF7L2 contribuir em vias que podem levar à super expressão de proliferação em células mamárias, não houve significância estatística nos resultados encontrados. Verificou-se que a eNOS tem potencial como biomarcador para câncer de mama. Introduction: Breast cancer has a hugh impact in women in Brazil and all over the word. Cervical cancer is associated with HPV infections and figures at fourth cause of death in the country. On account of the high impact of these cancers in women life, to identify biomarkers that may assist in both the prognostic and treatment become a relevant mission in cientific field. These biomarkers can be genetic, epigenetic, proteomic and can be used in cancer diagnostic and in follow up of disease. In this context DEK, eNOS and TCF7L2 has been shown as promising candidats for breast and cervical cancer biomarkers. Objectives: To identify and evaluate relevant molecules for breast and cervical cancer; study the DEK gene interections with relevant molecules in breast and cervical cancer; evaluate the expression levels of NOS3 and TCF7L2 genes in samples of breast cancer patients; evaluate the presence of polymorphism in genes of NOS3 and TCF7L2 in samples of breast cancer patients. Metodology: an in silico study was carried to evaluate the possibilities of interection of these molecules in breast cancer cell context. The Pubmed databank was used to the meta-analysis. Gene expression analysis was performed as well as the analysis of 3 polymorphisms of NOS3 and 3 polymorphisms of TCF7L2. Results: In the meta-analysis, 89 articles were found, of which 20 were selected to investigate the association between eNOS and breast cancer. Use of this protein as a biomarker for breast cancer has been observed. In the experimental tests, 22 samples from cancer patients were analyzed and a significant association was observed between NOS3 c.-813C> T and family history of cancer (p = 0.022). Conclusion: The DEK gene has a clear correlation with the development of cancers in women, being the best candidate for both therapeutic targets and prognostic marker in breast and cervical cancers. Although TCF7L2 contributes to pathways that may lead to overexpression of mammary cell proliferation, there was no statistical significance in the results found. It has been found that eNOS has potential as a biomarker for breast cancer.

CAPES Câncer de mama é o mais frequente entre as mulheres, com redução da mortalidade em lesões iniciais. Radiologicamente, microcalcificações suspeitas podem estar associadas a achados histológicos como lesões proliferativas com e sem atipias, e Carcinoma Ductal In Situ. Na atualidade, biopsias percutâneas e a vácuo permitem correlação anatomoradiológica e identificação de lesões precursoras, a as de risco para câncer. Nenhum biomarcador foi estabelecido para prever o câncer em mulheres diagnosticadas com doença benigna mamária e identificá-los poderia melhorar a capacidade de estratificar o risco individual das lesões benignas para câncer. O receptor do fator de crescimento derivado de plaquetas A (PDGFRA) tem papel em oncogênese, angiogênese e metástases tumorais, e sua ativação é encontrada em alguns tipos de câncer. Por outro lado, padrões de metilação do DNA são modificações iniciais no desenvolvimento do câncer que podem ser úteis para detecção precoce do câncer, sendo regulado por uma família de enzimas conhecidas como DNMTs (DNA metiltransferases). O objetivo desse estudo foi avaliar o perfil clinico e molecular das mulheres portadoras de microcalcificação mamária BI-RADS 4 e 5. Para tanto, foram realizadas análises estatísticas em relação ao perfil de 37 pacientes com microcalcificações mamárias; e determinados os níveis de expressão gênica do PDGFRA, DNMT1 e DNMT3a em tecido parafinado. Os dados de expressão gênica forma comparados com os dados de 26 pacientes com câncer de mama (tecido fresco em RNAlater), todas atendidas no ambulatório de mastologia do Hospital Barão de Lucena. Aspectos anatomoradiológico foram avaliados juntamente com achados clínicos e calculadas as frequencias percentuas. Os níveis de expressão gênica do PDGFRA e das DNMTs (DMNT3a) foram determinados por PCR quantitativa (qPCR), utilizando a β-actina como gene de referencia. Entre as pacientes com microcalcificação mamária, a média de idade das pacientes foi 55,9 anos, com etnia branca predominante (p

FACEPE O câncer do colo do útero é o quarto câncer que mais acomete mulheres em todo o mundo com cerca de 530 mil novos casos por ano deste câncer. Fatores como tipo do Papilomavírus Humano (HPV), infecção única ou múltipla e co-fatores como tabagismo, multiparidade parecem influenciar os mecanismos que determinam a regressão ou a persistência da infecção e também a progressão das lesões precursoras para o câncer invasivo. A citologia é a técnica padrão ouro no rastreamento de carcinomas cervical e seus precursores. A detecção da presença do HPV por técnicas é uma importante ferramenta para detecção do HPV. O rastreamento do colo de útero e a detecção do HPV tem em comum a coleta de material biológico que precisa ser ter qualidade e quantidade suficiente para uma análise correta que na rotina é coletada com escova citológica. Dessa forma, o objetivo deste estudo foi analisar amostras cervico-uterinas no agreste alagoano em seus aspectos moleculares, propor um dispositivo de coleta mais eficiente e desenvolver um aplicativo móvel para monitoramento. O estudo foi realizado com 1.480 mulheres atendidas na atenção básica no agreste alagoano, destas 709 tinham amostra biológica suficiente para investigação da presença do HPV por PCR convencional com os primers MY09/11 e GP5+/6+ em células da ecto e endocérvice. O sequenciamento pelo método Sanger identificou os genótipos virais do HPV em amostras cervicais. A presença do HPV foi identificada em 50,07% (N=355) . Destas, 16,9% (60) apresentaram infecções simples. Em 46,67% (N=42) foram detectados 9 tipos diferentes de HPV, sendo destes 95,24%(N=40) oncogênicos. Os tipos mais frequentes neste estudo foram o tipo 16 com 35,71% (N=15), seguidos dos tipos 70(11,9%, N=5), 61(11,9%, N=5) e 58(14,3%, N=6). Para monitoramento da população estudada foi desenvolvido um aplicativo móvel que possibilitará avaliação em tempo real do perfil das mulheres de uma determinada área a ser analisada. Durante as coletas de material biológico se verificou a necessidade de propor um dispositivo de saúde para auxiliar nas futuras coletas cervicais, para reduzir perdas amostrais. Este instrumento poderá ser utilizado para detecção de lesões no colo de útero como também obtenção de material genético. Este também pode ser utilizado para coleta de raspado de céluas, biópsia aspirativa e aplicar medicação. Cervical cancer is the fourth most common cancer in the world, with about 530,000 new cases per year of this cancer. Factors such as Human Papillomavirus (HPV), single or multiple infection, and co-factors such as smoking, multiparity appear to influence the mechanisms that determine the regression or persistence of infection and also the progression of precursor lesions to invasive cancer. Cytology is the gold standard technique in the screening of cervical carcinomas and their precursors. Detection of HPV by techniques is an important tool for detecting HPV. Cervical screening and HPV detection have in common the collection of biological material that needs to be of sufficient quality and quantity for a correct analysis that is routinely collected with a cytological brush. Thus, the objective of this study was to analyze cervico-uterine samples in the Alagoan wilderness in its molecular aspects, propose a more efficient collection device and develop a mobile application for monitoring. The study was carried out with 1,480 women attending primary care in rural Alagoas, of whom 709 had a sufficient biological sample to investigate the presence of HPV by conventional PCR with primers MY09 / 11 and GP5 + / 6 + in ecto and endocervix cells. Sanger sequencing identified the HPV viral genotypes in cervical samples. The presence of HPV was identified in 50.07% (N = 355). Of these, 16.9% (60) presented simple infections. In 46.67% (N = 42) 9 different types of HPV were detected, of which 95.24% (N = 40) were oncogenic. The most frequent types in this study were type 16 with 35.71% (N = 15), followed by types 70 (11.9%, N = 5), 61 (11.9%, N = 5) and 58 14.3%, N = 6). To monitor the population studied, a mobile application was developed that will allow real-time evaluation of the profile of women in a given area to be analyzed. During collection of biological material, it was verified the need to propose a health device to assist in future cervical collections, to reduce sample losses. This instrument can be used to detect lesions in the cervix as well as obtaining genetic material. This can also be used for collection of cell scaling, aspiration biopsy and medication.

CAPES Os fatores Kruppel-like (KLF) são responsáveis pela ativação e repressão de diversos genes envolvidos em processos fisiológicos e patológicos, como desenvolvimento cardíaco, adipogênese e diabetes. A família KLF possui um domínio conservado de ligação ao DNA contendo no qual mutações missense podem afetar a eficiência de ligação e regulação da transcrição. Apesar de alguns fatores de transcrição já serem conhecidos por estarem relacionados a síndrome de Down (SD), o papel das KLFs ainda é desconhecido para o desenvolvimento de defeitos cardíacos congênitos (DCC) na SD. O objetivo do estudo foi realizar análises de bioinformática dos efeitos funcionais e estruturais de mutações missense em KLFs envolvidas no desenvolvimento cardíaco e doenças cardíacas, assim como, avaliar o perfil de expressão gênica da KLF2 e KLF10 em crianças com SD e DCC. Dezessete algoritmos foram utilizados para predizer o efeito das mutações sobre a estrutura e função de sete KLFs. Foram selecionadas as mutações Top3 em cada categoria: mutações no domínio dedo de zinco em resíduos conservados e não-conservados. Um total de 850 mutações missense foram encontradas em sete KLFs envolvidas no desenvolvimento cardíaco e doenças cardíacas. Apenas a KLF5 p.Cys410Phe, mutação de resíduo conservado de interação ao zinco, foi predita como deletéria em todos os algoritmos, enquanto apenas a KLF15 p.Arg364Pro afeta a ligação ao DNA. Para a análise de expressão da KLF2 e KLF10, amostras de sangue de 42 crianças de João Pessoa e Recife, com e sem SD e DDC, foram coletadas e analisadas por qPCR. A expressão relativa da KLF2 mostrou uma menor expressão em todos os grupos estudados, enquanto a KLF10 não mostrou expressão em crianças saudáveis, porém, foi expressa em crianças com SD e crianças com SD/DCC, mostrando uma diferença significativa (p=0.0111). Nossos resultados reforçam a importância da avaliação computacional através de diferentes algoritmos para determinar as mutações KLF mais importantes a serem estudadas in vitro e in vivo. Além disso, sugerem a KLF2 e KLF10 como fatores de transcrição que podem estar envolvidos não apenas em DCC, bem como em SD/DCC, destacando a importância do entendimento desses defeitos na SD. Kruppel-like Factors (KLF) are responsible for activating and repressing many genes involved in physiologic and pathological processes, like cardiac development, adipogenesis, and diabetes. KLF family shows three conserved zinc-fingers, so non-synonymous variants in this domain can affect the binding efficiency and transcription regulation. Although some transcription factors have already been known related to Down syndrome (DS), the role of KLFs in the congenital heart defects (CHD) development in DS has not yet known. The aim of this study was to perform a computational evaluation of the structural and functional effects of non-synonymous variants in KLFs involved in cardiac development and diseases, as well as, to evaluate the expression profile of KLF2 and KLF10 in DS children with CHD. Seventeen algorithms were used to predict the effect of the non-synonymous variants over the structure and function of seven KLFs. The Top3 variants were selected from each category: conserved and non-conserved residues in the zinc-finger domain. A total of 850 non-synonymous variants were found in KLFs involved in the cardiac development and diseases. Only KLF5 p.Cys410Phe, mutation of conserved residue of zinc interaction, was predicted as deleterious in all algorithms, and only KLF15 p.Arg364Pro affects DNA-binding. For analysis of KLF2 and KLF10 expression, blood samples of 42 children from Pernambuco and Paraíba, with and without DS and CHD, were collected and analyzed by qPCR. The relative expression showed KLF2 downregulated in all groups studied, while KLF10 showed no expression in healthy children, however, was expressed in DS and in DS/CHD with a significant difference (p=0.0111). Our results reinforce the importance of performing computational evaluations through different algorithms to determine the most important KLF variants to be studied in vitro and in vivo. In addition, suggest KLF2 and KLF10 as transcription factors involved not only in CHD as well as in DS/CHD, highlighting the importance of understanding these congenital defects in DS.

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In Brazil, an incidence of the disease increases and the number of new cases of breast cancer can be attributed to the increase in life expectation of women and changes related to reproductive factors and lifestyle. Objectives: The aim of this study was to analyze the literature on breast cancer risk factors and knowledge about the disease and to identify associations between risk factors and triple-negative breast cancer. Methods: Two scientific articles were developed for publication. The first article deals with an integrative review on the knowledge of breast cancer and its risk factors in Latin American studies. The second article deals with a cross-sectional study on lifestyle risk factors and triple-negative breast cancer, performed with 236 women diagnosed with invasive breast cancer in the state of Paraiba. Results: In the integrative review, of 47 studies selected, 27 were about risk of breast cancer and 20 were about knowledge or awareness. The main risk factors identified by the authors were obesity and overweight, old age, family history of breast cancer, nulliparity and menopause. The articles on knowledge focused in early diagnosis of breast cancer and breast self-examination was the most investigated method of detection. The cross - sectional study showed that smoking and obesity had associations with the triple- negative subtype of breast cancer. Women who smoked sometime in their lives had 3.70 (OR = 0.270, 95% CI: 0.10-0.68, p = 0.006) times less likely to have a triple-negative subtype. Patients with obesity had 3,514 (95% CI: 1.23 - 10.03; p = 0.019) more likely to have the triple-negative subtype when compared to the Luminal A subtype. Conclusions: The literature on breast cancer risk factors presents a better methodological outline and theoretical basis than the literature on the knowledge of the disease. Smoking is associated with lower chances of having triple-negative breast cancer, while obesity is associated with a higher chance of developing this type of breast cancer. Introdução: O câncer de mama é o tipo de neoplasia que mais causa mortes entre as mulheres nos países em desenvolvimento. No Brasil, a incidência da doença é elevada no Nordeste do país e o aumento no número de casos novos pode ser atribuído às mudanças relacionadas aos fatores reprodutivos e do estilo de vida. Objetivos: Esta dissertação teve como objetivo analisar a literatura sobre os fatores de risco do câncer de mama e o conhecimento sobre a doença e identificar associações entre fatores de risco e o câncer de mama do tipo triplo-negativo. Métodos: Foram desenvolvidos dois artigos científicos para publicação. O primeiro artigo trata-se de uma revisão integrativa sobre o conhecimento da neoplasia mamária e seus fatores de risco em estudos Latino americanos. O segundo artigo trata-se de um estudo transversal sobre fatores de risco do estilo de vida e o câncer de mama triplo-negativo, realizado com 236 mulheres diagnosticadas com câncer de mama invasivo no estado da Paraíba. Resultados: Na revisão integrativa da literatura foram selecionados 47 artigos, dos quais 27 eram sobre fatores de risco do câncer de mama e 20 eram sobre conhecimento ou consciência sobre a doença. Os principais fatores de risco identificados pelos autores foram obesidade e sobrepeso, idade avançada, historia familiar de câncer de mama, nuliparidade e menopausa. Os artigos sobre conhecimento destacaram o diagnóstico precoce da neoplasia mamária e o autoexame foi o método de detecção mais investigado. O estudo transversal mostrou que tabagismo e obesidade tiveram associações com o subtipo triplo-negativo do câncer de mama. As mulheres que já fumaram alguma vez na vida tiveram 3.70 (OR= 0.270; 95% CI: 0.10-0.68; p= 0.006) vezes menos chances de ter o subtipo triplo-negativo. Pacientes com obesidade tiveram 3.514 (95% CI: 1.23- 10.03; p= 0.019) mais chances de ter o subtipo triplo-negativo quando comparadas com o subtipo Luminal A. Conclusões: A literatura sobre fatores de risco do câncer de mama apresenta melhor delineamento metodológico e fundamentação teórica do que a literatura sobre o conhecimento da doença. O tabagismo está associado a menores chances de ter o câncer de mama triplo-negativo, enquanto que a obesidade está associada a maiores chances de desenvolver esse tipo de câncer de mama.

Desde 2015 o Brasil tem registrado casos de infecção por Arbovírus e de nascimentos de crianças com microcefalia no Nordeste do país. Neste período, os vírus CHIKV e ZIKV se disseminaram nesta região, mas o impacto destas infecções ainda não está esclarecido na população. Por outro lado, a sintomatologia da infecção por ZIKV e CHIKV se confundem em alguns momentos, levando a possíveis erros diagnósticos devido à sua diversidade. Enquanto estudos epidemiológicos e genéticos do vírus estão sendo realizados, faz-se necessário ampliar os estudos sobre a condição do hospedeiro na infecção viral. Desta forma, o presente estudo teve por objetivo avaliar os níveis de vitamina D em pacientes acometidos por infecção por Arbovírus, além de crianças portadoras de microcefalia. Amostras de soro foram utilizadas para realização dos testes sorológicos de diagnóstico das arboviroses e para dosagem de vitamina D. As análises estatísticas foram realizadas considerando significativos valores de p menores que 0,05. Foram incluídos 179 pacientes no estudo, subsequentemente divididos em dois grupos sendo constituídos de adultos e grávidas (n=91) além do binômio mãe/criança com microcefalia (n=88). A análise de concentração de vitamina D mostrou que 58,56% dos 179 pacientes apresentou suficiência. No grupo dos adultos, 95% apresentou-se DENV-IgG+ e 59,46% foram ZIKV-IgG+ com vitamina D suficiente. Neste grupo os sintomas cefaléia e diarréia foram estatisticamente relacionados a pacientes ZIKV-IgG+; enquanto a ocorrência paralisia dos membros foi relacionada aos níveis de vitamina D em ZIKV-IgG+ e a rash cutânea significativamente associada a níveis de vitamina D em pacientes ZIKV-IgG+ e CHIKV-IgG+. No grupo de mães e crianças, 60,87% das mães apresentou valores suficiente para vitamina D e dentre elas 92,86% ZIKV-IgG+. Em crianças, 57,14% apresentou níveis satisfatórios de vitamina D. Apesar de não ter sido encontrada diferença estatística, foi observado que a maioria dos indivíduos suficientes para vitamina D não apresentaram sorologia positiva para os arbovírus. Os resultados obtidos têm grande importância para o conhecimento sobre a relação causa-efeito das Arboviroses na população. Futuros estudos devem ser realizados numa coorte maior visando determinar o papel da 25(OH)vitamina D como molécula imunomoduladora, desde os níveis considerados suficientes até a regulação hormonal e enzimática. Since 2015 Brazil has registered cases of Arbovirus infection and of nutrition for children with microcephaly in the Northeast of Brazil. In this period, the CHIKV and ZIKV viruses spread in this region, but the populational impact of these infections still not clear. On the other hand, the ZIKV and CHIKV infections symptomatology may be confused, leading to diagnostic mistakes. While epidemiological and genetic studies of the virus are being conducted, it is important to elucidate the host's condition in viral infection. Thus, the present study aimed to evaluate vitamin D levels in patients with Arbovirus infection, as well as children with microcephaly. Serum samples were used to perform serological tests for the diagnosis of arboviruses and vitamin D dosing. Statistical analyzes were performed using the graphpad Prism software, with significance to p values lower than 0.05. A total of 179 patients included in this study, they were subsequently divided into two groups consisting of adults and pregnant (n=91) and the binomium mother/child with microcephaly (n=88). The analysis of vitamin D concentration showed 58.56% among the 179 patients presented sufficient levels. In the adults group, 95% presented DENV-IgG+ and 59.46% were ZIKV-IgG+ with sufficient vitamin D dosage. In this group, the symptoms of headache and diarrhea were related to patients with ZIKV-IgG+; while paralysis was related to vitamin D levels in ZIKV-IgG+ and rash associated with vitamin D levels in patients ZIKV-IgG+ and CHIKV-IgG+. In mothers and children group, 60.87% of mothers were sufficient for vitamin D, among them 92.86% ZIKV-IgG+. Among children with microcephaly, 57.14% presented satisfactory levels of vitamin D. Although no statistical statistic was found, it was observed that a majority of vitamin D sufficient patients did not present positive serology for arboviruses. The results obtained have great importance for the knowledge about a cause-effect relationship of Arboviruses in the population. Further researches should be performed in a larger cohort to determine the role of vitamin D as immune modulator, including the sufficient rates assumed as adequate, hormonal regulation and enzyme regulation involved in the virus infection.

O Câncer de Colo Uterino é um importante problema de saúde pública no mundo, especialmente em países em desenvolvimento. No Brasil, a estimativa de incidência de casos novos em 2016 foi de 16.340 casos. O Papiloma Vírus Humano (HPV) é o agente etiológico de 95% dos cânceres de colo de útero. O HPV 16 causa cerca de 65% dos cânceres cervicais, além de tumores mais raros como ano-genitais e de orofaringe, o que faz do HPV 16 um dos carcinógenos humanos mais potentes. No entanto, não se sabe que infecção vai persistir, que infecção vai dar origem a lesões pré-cancerígenas e que lesões pré-cancerígenas vão progredir pra câncer, e que fatores vão participar ou influenciar esse processo. Desta forma, biomarcadores são essenciais para o entendimento e futuras intervenções - medicamentosas ou não - no processo. Na busca por esses biomarcadores algumas moléculas vêm ganhando grande interesse da comunidade científica como as Sirtuínas (SIRTs). SIRTs são uma família de Desacetilases de Histonas dependente de NAD+. Existem sete SIRTs com diversas localizações celulares e funções. Essas proteínas estão envolvidas em processos celulares importantes como resposta ao estresse, sobrevida celular, metabolismo, senescência, envelhecimento, supressão e promoção de câncer pela desacetilação de vários substratos. O objetivo desse estudo foi elucidar o significado funcional e clinico-patológico da expressão de SIRT1, SIRT3 e SIRT5 no Câncer de Colo de Útero. Análise de níveis de expressão gênica foram realizados em amostras de Câncer cervical e os resultados correlacionados aos dados obtidos dos prontuários das pacientes. Os resultados obtidos apresentam grande importância na compreensão do desenvolvimento do câncer cervical. Cervical cancer is a major public health problem in the world, especially in developing countries. In Brazil, the estimated incidence of new cases in 2016 was 16,340 cases. Human Papilloma Virus (HPV) is the etiologic agent, a necessary cause of cervical cancer. HPV 16 causes 65% of cervical cancers, as well as rarer tumors such as ano-genital and oropharynx, making HPV 16 one of them potent human carcinogens. However, it is not known that infection will persist, that infection will give rise to pre-cancerous lesions and that pre-cancerous lesions will progress to cancer, and what factors will participate or influence this process. In this way, biomarkers are essential for under standing and future interventions - medicines or not - in the process. In the search for these biomarkers some molecules have been gaining great interest from the scientific community as the Sirtuins. Sirtuins (SIRTs) are a family of NAD-dependent histone deacetylases (NAD + - dependent class III histone deacetylases - HDACs). There are seven SIRTs with several subcellular locations and functions. These proteins are involved in critical cellular processes including stress response, cell survival, metabolism, senescence, aging, and tumorigenesis by the acetylation of various substrates. The objective of this study was to elucidate the functional and clinical-pathological significance of SIRT1, SIRT3 and SIRT5 expression in Uterine Cervical Cancer. Analysis of gene expression levels were performed and the results correlated to the data obtained in the patients' medical records. The results obtained are of great importance in understanding the development of cervical cancer and the therapeutic response presented by the patient.

FACEPE O câncer de mama é o tipo que possui a maior taxa de mortalidade entre mulheres de todo o mundo. Ele possui diferentes características moleculares, classificando-se em: Luminais A e B, HER2 e basal-like. O tamoxifeno, tratamento clássico dos tumores mamários luminais, é uma pró-droga que precisa ser metabolizada por enzimas hepáticas, especialmente a CYP2D6, para exercer suas funções terapêuticas. No entanto, cerca de 40% das pacientes não respondem adequadamente ao tratamento com tamoxifeno e existem evidências que apontam a perda de função da CYP2D6 como causa das respostas indesejáveis do tamoxifeno, embora os dados sejam conflitantes. A CYP2D6 é uma enzima do P450, altamente polimórfica, fenotipicamente classificada de acordo com a atividade em metabolizadores pobres, intermediários, rápidos e extensivos. O objetivo deste trabalho foi aplicar ferramentas de bioinformática para avaliar o impacto das mutações de sentido trocado na estrutura e função de alelos metabolizadores pobres da CYP2D6. A base de dados CYPalleles foi consultada para catalogar os alelos pobre metabolizadores da CYP2D6 e suas respectivas mutações e selecionar alelos que contêm exclusivamente mutações de sentido trocado. Todos os polimorfismos presentes nos alelos selecionados, CYP2D6*7 e CYP2D6*14A, foram submetidos a análise através de sete algoritmos de predição de impacto estrutural e/ou funcional na proteína. Subsequentemente foram construídos modelos 3D baseados na estrutura terciária alterada pelas mutações. Os resultados evidenciaram que a única mutação presente no alelo CYP2D6*7, a H324P, compromete a dinâmica do sítio ativo devido a sua localização entre duas alfas hélices, resultando em alto impacto funcional. Por outro lado, o alelo CYP2D6*14A possui quatro mutações, os polimorfismos R296C e S486T estão presentes em vários alelos da CYP2D6, e as análises in silico não apontam significantes efeitos deletérios. A mutação P34S também está presente em vários alelos, mas foi predita como deletéria devido a considerável efeito estabilizante pelo surgimento de uma nova ponte de hidrogênio. Por outro lado a G169R caracteriza genotipicamente o alelo CYP2D6*14 e leva a aumenta a acessibilidade ao solvente com severa desestabilização da enzima, pois está presente numa região de interface entre as cadeias monoméricas. As análises in silico evidenciaram efeitos deletérios das mutações de sentido trocado na estrutura e função da CYP2D6, o que pode explicar a resistência ao tratamento com tamoxifeno. Breast cancer is the most incident cancer around the world, with high index of mortality, according to the markers expressed, it can be molecular classified in luminal A or B (hormonal receptors), HER2 and basal-like breast cancer. Tamoxifen, the standard treatment of luminal breast tumors, is a prodrug that must be metabolized by liver enzymes, especially CYP2D6, to be therapeutic active. However, about 40% of patients do not respond to treatment with tamoxifen and there are evidence pointing to poor function of CYP2D6 causing underperformance of tamoxifen, although the data are conflicting. CYP2D6 is a highly polymorphic enzyme from P450 cytochrome, which is phenotypically classified according to enzyme activity in poor, intermediate, extensive and ultra metabolizers. The objective of this study was applying bioinformatics tools to assess the impact of missense mutations in CYP2D6 structure and function. The database CYPalleles was consulted to catalog the poor metabolizers alleles of CYP2D6 and their respective mutations. Thereafter, there were selected the alleles CYP2D6*7 and CYP2D6*14A, that contain only missense mutations. All polymorphisms in the selected poor metabolizers alleles were analyzed through seven algorithms to predict the structural and/or functional impact of each mutation over the protein. Subsequently, 3D models were constructed to evaluate the tertiary structure altered by the mutations. The results for the allele CYP2D6*7, showed that H324P mutation, which is the only one present in this allele, compromises the dynamics of the active site due to its location between two α-helixes, resulting in high functional impact. The allele CYP2D6*14A has four mutations, three of then are present in various alleles but while R296C and S486T were not predicted as deleterious, P34S leads to a gain of one H-bound and severe protein stabilization, with function loss. The last polymorphism is G169R, that characterizes genotypically the allele and leads to a high structural and functional impact due to gain of solvent accessibility and severe enzyme destabilization, as it is present in an interface region between the monomeric chains. The in silico analyzes showed that the deleterious effects of missense mutations in the structure and function of CYP2D6 may explain the resistance to tamoxifen treatment.

PEREIRA, Gisnayle Ana da Silva, também é conhecida em citações bibliográficas por: SILVA, Gisnayle Ana da CAPES O câncer do colo do útero é um dos principais tipos de câncer no mundo, e seu desenvolvimento está associado principalmente à infecção pelo Papilomavirus humano (HPV). Embora esse tipo de infecção esteja intimamente associado à atividade sexual, a alta incidência das lesões cervicais pode estar relacionada a uma deficiência na resposta imune. Receptores Toll-like (TLRs) tem um importante papel na imunidade inata, atuando no reconhecimento de antígenos e gerando sinais para produção das citocinas pró-inflamatórias. O TLR9, atua no reconhecimento do DNA bacteriano e viral conduzindo ao recrutamento de células imunológicas para os sítios da infecção. Polimorfismos de nucleotídeo único (SNP) em TLR9 podem influenciar no aumento da susceptibilidade a diversas doenças, como, por exemplo, o câncer cervical. O presente estudo teve por objetivo identificar polimorfismos não sinônimos com potencial correlação com a infecção por HPV, assim como avaliar efeitos estruturais e funcionais ocasionados por essas mutações em TLR9 através de ferramentas in silico. Análises para 5 nsSNPs da TLR9 foram realizadas por PCR-RFLP em amostras cervicais de 57 pacientes atendidas nas Unidades de Saúde da Família (SUS, Olinda – PE). Adicionalmente, para determinar como SNPs não sinônimos (nsSNPs) podem afetar a estrutura molecular e a função de TLR9, uma análise de nsSNPs existentes para TLR9 foi realizada e apenas nsSNPs que possuíam variação no grau de hidrofobicidade maior ou igual a 50% foram utilizados para análise preditiva do efeito estrutural e funcional através de 16 algoritmos. A metodologia para PCR-RFLP para os polimorfismos 7021T>G (Met85Arg), 7191G>A (Glu115Gln), 7351C>T (Ala168Val), 7986G>T (Asp380Tyr), 8159G>T (Met347Ile) foi desenhada através de bioinformática. A análise molecular demonstrou que para TR9 8159G>T, o alelo T pode estar associado com lesões cervicais (p=0.0005). Em relação à predição computacional, 18 nsSNPs foram encontrados com alto impacto funcional/estrutural para a TLR9, sendo 12 nsSNPs localizados na região de reconhecimento do patógeno. Através do nosso estudo, descobrimos polimorfismos que podem ter alta correlação com doenças causadas por agentes patogênicos, de acordo com a previsão dos impactos estruturais e funcionais através de polimorfismo deletério não sinônimo na molécula de TLR9. Cervical cancer is among the main types of cancer of higher incidence in the world. It is associated mainly with human papillomavirus (HPV) infection. Although this type of infection is closely associated with sexual activity, the high incidence of cervical lesions may be also related to a deficiency in the immune response. Toll-like Receptors (TLRs) play an important role in innate immunity, acting in the recognition of antigens and the generation of signals that produce proinflammatory cytokines. TLR9 operates in the recognition of bacterial and viral DNA leading the recruitment of immune cells to the infection sites. Therefore, single nucleotide polymorphisms (SNPs) in TLR9 could influence the increased susceptibility to many diseases, for example, cervical cancer. This study aimed to identify non-synonymous SNPs (nsSNPs) with potential correlation with HPV infection, also evaluating structural and functional effects caused by these mutations in TLR9 through computational analysis. Evaluation of 5 nsSNPs in TLR9 was performed by PCR-RFLP in cervical samples of 57 patients treated in the Family Health Units (SUS, Olinda - PE). To determine how nsSNPs may affect the molecular structure and function of TLR9, a computational analysis was performed, and only nsSNPs with of hydrophobicity variation degree equal or greater than 50% were used for predictive analysis of structural and functional effect through 16 algorithms. The PCR-RFLP test for 7021T> G (Met85Arg), 7191G> A (Glu115Gln), 7351C> T (Ala168Val), 7986G> T (Asp380Tyr), 8159G>T (Met347Ile) was determined through by bioinformatics approaches. Molecular analysis showed that T allele of TR9 8159G> T may be associated with cervical lesions (p=0.0005). Regarding the computational prediction, 18 nsSNPs were found with high functional/structural impact for TLR9, 12 nsSNPs located in pathogen recognition region. Through our study, we found polymorphisms that may have high correlation with diseases caused by pathogens, according to the prediction of structural and functional impacts through deleterious polymorphism not synonymous in TLR9 molecule.

CAPES FACEPE O câncer de colo do útero, o quarto tipo mais comum entre as mulheres brasileiras, é precedido por lesões epiteliais, classificadas como neoplasia intraepitelial cervical (CIN) de grau I, II, ou III, normalmente associadas com infecção genital pelo papilomavírus humano (HPV). Porém, os elementos envolvidos no prognóstico da infecção por HPV ainda estão pouco esclarecidos. O óxido nítrico (NO), um gás solúvel envolvido em processos de vasodilatação, neurotransmissão e imunidade, é produzido a partir da ação de 3 isoformas da enzima óxido nítrico sintase (NOS), sendo a endotelial (eNOS) uma das moléculas envolvidas com o câncer. No entanto, investigações sobre o efeito de mutação na eNOS no câncer ainda geram resultados conflitantes, com poucos estudos relacionando essas diferenças genéticas com CIN ou câncer cervical. No presente estudo, os polimorfismos 894G>T e VNTR 4b4/a forma investigados por PCR em amostras de mulheres atendidas em USFs de Olinda – PE. Os dados foram correlacionados com os aspectos de citologia oncótica, infecção por HPV, assim como genótipos de HPV de alto risco. Amostras de DNA de sangue de 94 pacientes atendidas em unidades de atenção primária foram avaliadas, e os dados analisados em relação ao tipo de lesão cervical para determinar o efeito do polimorfismo da eNOS na susceptibilidade à infecção por HPV. A distribuição dos polimorfismos de eNOS 894G>T e VNTR 4b/a apresentou maior frequência para os genótipos G/G (64,9%) e 4b/4b (67%), respectivamente. Apenas genótipo eNOS 894 T/T poderia estar associado à lesão cervical (p=0,0018), enquanto o genótipo VNTR 4a/4a não foi encontrado nesta população. Não houve associação entre os polimorfismos de eNOS com a infecção pelo HPV, HPV de alto risco ou vaginose bacteriana. No entanto, o haplótipo G/T+4a/4b apresentou OR de 5,3 para vaginose bacteriana (95% CI 0.76-37.1), enquanto T/T+4b/4a mostrou OR de 5,0 para infecção por HPV (95% CI 0.11-220) e para 1,8 lesões cervicais (95% CI 0.04-79.5). A combinação dos alelos T+4a apresentaram valores de OR para infecção por HPV de 3,0 (95% CI 0.07-115) e lesões cervicais 1,29 ( 95% CI 0.03-53.6). Os resultados indicam polimorfismos na eNOS podem influenciar na resposta imunológica do organismo contra o HPV e no surgimento das lesões cervicais. Estudos adicionais serão necessários para confirmar o papel polimorfismos da eNOS na evolução das lesões cervicais para o câncer. The cervical cancer, the fourth most common type among Brazilian women is preceded by lesions in the epithelium cervical intraepithelial neoplasia (CIN), usually associated with genital human papillomavirus (HPV). However, the elements involved in HPV infection of prognosis are still poorly understood. Nitric oxide (NO) is a soluble gas processes involved in vasodilation, neurotransmission and immunity. NO is produced from 3 isoforms of the enzyme nitric oxide synthase (NOS) and endothelial (eNOS) of the molecules involved in cancer. However, investigations of the mutation effect on eNOS in cancer also generate conflicting results, with few studies linking these genetic differences with cervical cancer. In the present study, a panel involving molecules associated with eNOS and signaling pathways related to eNOS was designed, highlighting 5 stimulatory molecules production eNOS, 4 and 38 signaling pathways related molecules eNOS. DNA from blood samples of 94 patients with and without cervical intraepithelial lesion were analyzed for the presence of two polymorphisms in the eNOS gene, G894T and intron 4VNTR (4a/b). The distribution of eNOS 894G>T and VNTR 4b/a polymorphisms showed higher frequency of G/G (64.9%) and 4b/4b (67%) genotypes. No VNTR 4a/4a genotype was found in this population. Only eNOS 894 T/T genotype may be associated with cervical lesions (p = 0.0018). There was no association between polymorphisms of eNOS with HPV infection, high risk HPV or bacterial vaginosis. However, the haplotype G/T + 4a/4b showed an OR of 5.3 for bacterial vaginosis (95% CI 0.76-37.1), while T/T + 4b/4a showed an OR of 5.0 to HPV infection (95 % CI 0.11-220) and 1.8 cervical lesions (95% CI 0.04-79.5). The combination of T + 4a alleles presented OR values for HPV infection of 3.0 (95% CI 0.07-115) and cervical lesions 1.29 (95% CI 0.03-53.6). The genotype 894 T/T associated with the genotype VNTR 4b/4a can be related to HPV infection. And more studies are needed to confirm the role of eNOS polymorphism in cervical lesions.

Segundo a hipótese da programação fetal, alterações metabólicas in utero estabelecem padrões fisiológicos que modulam a saúde do ser humano, contribuindo ao desenvolvimento de síndrome metabólica (SMet), obesidade e diabetes tipo 2 (DT2) na vida adulta. O risco de estresse oxidativo é uma condição metabólica que se eleva durante a gravidez, desencadeando a expressão de genes cruciais ao desenvolvimento dessas patologias, como o TCF7L2. Portanto, torna-se importante identificar a frequência dos principais polimorfismos desse gene (49080T>C, 103894G>T e 53341C>T) assim como analisar sua expressão em amostras de RNs com peso ao nascer alterado e de pacientes adultos obesos. Desta forma, foram analisadas amostras de 149 indivíduos, subdividas em duas coortes: 98 recém-nascidos da cidade da Paraíba - JP, sendo 11 pequenos para idade gestacional (PIG), 41 grandes para idade gestacional (GIG) e 46 apropriados para idade gestacional (AIG); e 51 adultos atendidos na cidade do Recife - PE, sendo 12 obesos com DT2, 17 obesos sem DT2 e 22 saudáveis (não obesos). Em segundo momento, foram utilizadas ferramentas de bioinformática para compreender as interações biomoleculares envolvendo TCF7L2 na via de sinalização Wnt. O polimorfismo 49080T>C foi o mais prevalente na população estudada (38,9%) comparado ao 103894G>T (27,7%) e 53341C>T (31,9%). Níveis de mRNA entre as coortes analisadas demonstraram significância estatística (p=0,001). Recém-nascidos PIG apresentaram expressão de TCF7L2 maior que GIG (1,751 e 1,229, respectivamente) (p=0,017), além de expressão relativa similar com adultos obesos com DT2. Não houve diferença estatística entre a coorte dos adultos (p=0,115). GIG e obesos revelaram forte similaridade (p=0,922). Adicionalmente, análises in silico demonstraram que a resposta inflamatória condicionada ao estresse oxidativo durante a gravidez contribui para o aumento de IL-6 e TNFa. Essas citocinas estimulam o aumento de ß-catenina, que é translocada ao núcleo para ativar fatores de transcrição como TCF7L2. A rede metabólica da TCF7L2 envolve genes e produtos relacionados à via Wnt, como DKK1, CTNNB1, GCG, APOE, APOC1 e FTO. Estas moléculas participam da regulação via Wnt e do metabolismo de carboidratos e lipídeos. Dessa forma, TCF7L2 parece influenciar o peso ao nascer, o que contribui ao desenvolvimento de SMet e obesidade na vida adulta. According to fetal programming hypothesis, metabolic exchange in utero establishes physiological standards that modulate the human health, contributing to common diseases in adulthood development, like metabolic syndrome (MetS), obesity, and type 2 diabetes (T2D). The risk of oxidative stress is a metabolic condition that rises during pregnancy, triggering the expression of critical genes to the development of these pathologies, such as TCF7L2. Therefore, it becomes necessary to frequencies identify the main polymorphisms this gene (49080T>C, 103894G>T, and 53341C>T) and analyze their expression in samples of newborns with abnormal birth weight and obese individuals. Thus, 149 subjects of Northeast Brazilian were enrolled in this study, performed in two cohorts: 98 newborns, being 11 with small for gestational age (SGA); 41 large for gestational age (LGA); and 46 appropriate for gestational age (AGA); and 51 adults, being 12 obese with type 2 diabetes (T2D); 17 non-T2D obese; and 22 healthy adults. In the second step, were used bioinformatics tools to understand the molecular interactions involving TCF7L2 in the Wnt signaling pathway. 49080T>C polymorphism was more prevalent in the population (38.9%) compared to 103894G>T (27.7%) and 53341C>T (31.9%). mRNA levels were showing a statistical difference between newborns and adults cohorts (p=0.001). SGA neonates presented a TCF7L2 expression higher than LGA (1.751 and 1.229, respectively) (p=0.017), beyond a similar relative expression compared to adults obese DT2. There was no statistical significance in the adult cohort (p=0.115). LGA and obese adult groups revealed high similarity (p=0.922). 53341C>T, 103894G>T, and 49080T>C allelic frequencies were similar to the findings of other studies. Additionally, the in silico analysis demonstrated that inflammatory response due oxidative stress during pregnancy contributes to IL-6 and TNFa increases. This cytokine allowed to ß-catenin increase, with is translocated to the nucleus for activating of transcription factors such TCF7L2. Furthermore, this gene interacts with other genes and products related to Wnt signaling pathway, like GCG, DKK1, CTNNB1, APOE, APOC1, and FTO. Thus, TCF7L2 may influence the birth weight, therefore contributing for MetS and obesity in adulthood.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-03-07T17:28:24Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) PDF - Gibran Sarmento de Almeida.pdf: 2047277 bytes, checksum: 5ebb867fe98e9cbf6d649f633b48cd2f (MD5) Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-06-13T20:36:46Z (GMT) No. of bitstreams: 2 PDF - Gibran Sarmento de Almeida.pdf: 2047277 bytes, checksum: 5ebb867fe98e9cbf6d649f633b48cd2f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Made available in DSpace on 2016-07-21T21:03:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 PDF - Gibran Sarmento de Almeida.pdf: 2047277 bytes, checksum: 5ebb867fe98e9cbf6d649f633b48cd2f (MD5) license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) Previous issue date: 2015-08-25 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES foram identificados como variáveis independentes que aumentaram o risco, enquanto tempo total de amamentação >24 meses diminuiu o risco (OR= 0,258; IC: 0,084-0,787; p=0,017). Conclusão: Na amostra de pacientes com câncer de mama estudada, foi verificada elevada percentagem de tumores do subtipo molecular HER2+ e um aumento da taxa de pacientes com tumores TN com idade superior a 50 anos. Quanto menor a idade da menarca, número de filhos e período de amamentação, maior o risco para manifestação do câncer de mama. As taxas de incidência e mortalidade do câncer de mama estão aumentando na região Nordeste do Brasil. O objetivo deste estudo foi identificar os subtipos moleculares e os principais fatores de risco do câncer de mama invasivo em uma população de pacientes de um hospital público da Paraíba. Material e Métodos: Em ambos os estudos foram utilizados registros médicos de pacientes com câncer de mama. No primeiro estudo, do tipo retrospectivo, os dados de 269 pacientes, atendidas durante o período de 2005 e 2011, foram analisados a fim de identificar a frequência de receptores hormonais (HR), fator de crescimento epitelial (HER2), índice de proliferação celular (Ki67), e classificar os subtipos moleculares do câncer de mama em Luminal A e B, sobre-expressão do HER2 (HER2) e câncer de mama triplo negativo (TN). No segundo estudo, do tipo caso-controle, 81 mulheres diagnosticadas com câncer de mama invasivo e 162 controles, da mesma faixa etária (±5 anos), foram entrevistados para investigar os fatores de risco associados a essa doença. Resultados: Na amostra de 269 pacientes, 64 (23,79%) tumores foram classificados como Luminal A, 120 (44,61%) Luminal B, 39 (14,50%) sobre-expressão de HER2 e 46 (17,10%) triplo negativo; tendo, respectivamente, as idades médias de 58,25 (±1,827); 53,33 (±1,153); 56,59 (±2,054) e 55,63 (±2,025). Entretanto, 67,39% dos pacientes com tumores TN tiveram idade superior a 50 anos (p = 0,0046). A taxa de grau histopatológica (G3) foi elevada para HER2 (35,29%) e TN (34,28%) em comparação com os subtipos luminal A (3,92%) e Luminal B (12,62%), (p 10 anos (OR= 3,042; IC: 1,421-6,512; p = 0,04)

FACEPE O câncer de mama é o câncer mais comum e a principal causa de morte por câncer entre as mulheres, em todo o mundo. Diferentes mutações têm sido relacionadas ao câncer, mas apenas as mutações não conseguem esclarecer a heterogeneidade do câncer de mama. Desta forma, eventos epigenéticos têm sido estudados em tecido mamário cancerígeno. A metilação do DNA é a regulação epigenética mais estudada e bem compreendida, sendo catalisado pelas enzimas da família das DNA Metiltransferases; principalmente DNMT1, DNMT3A, e DNMT3B. Além disso, DNMT2 (TRDMT1), inicialmente considerada como um membro desta família foi mais tarde descrita como uma tRNA metiltransferase e, até o momento, pouco se sabe sobre a sua função. O objetivo deste estudo foi determinar o perfil de metilação do DNA em 31 pacientes com câncer de mama ductal invasivo e 04 tecidos saudáveis obtidos a partir da mama oposta. Os níveis globais de metilação foram observados por meio de um ensaio de ELISA, enquanto que os níveis de expressão das DNMTs (DNMT1, DNMT2 e DNMT3B) foram determinados por PCR em tempo real. Os níveis de expressão gênica também foram analisados para BRCA1, BRCA2, ERBB2 e ERBB4. Todos estes parâmetros foram correlacionados com os dados dos pacientes e as características intrínsecas dos tumores. Nossos resultados mostram que a metilação global em tumores de mama é significativamente menor em comparação com os tecidos saudáveis da mama (p = 0,0034). DNMT1 e DNMT3B foram mais expressos no tecido de carcinoma mamário (p = 0,0034; p = 0,0031, respectivamente), sendo o nível de DNMT3B significativamente maior (p = 0,0391) do que o nível de DNMT1. Apenas DNMT1 exibiu uma correlação com a metilação global, apesar de ser inversa. Além disso, a expressão das DNMTs apresentou uma forte correlação positiva com BRCA1 e apenas a DNMT2 mostrou estar relacionada com BRCA2. Pacientes submetidos a terapias adjuvantes apresentaram uma diminuição significativa na expressão de DNMT2 (p = 0,0013), indicando uma redução dos níveis de metilação em moléculas de tRNA. História familiar de câncer de mama foi a única variável independente que se correlacionou com os níveis de DNMT1 (p = 0,0043), sendo maior em pacientes com risco hereditário. Nossos resultados apontam para um importante papel das DNMTs no câncer de mama e mais estudos são necessários para elucidar os mecanismos subjacentes envolvidos no processo de metilação que contribuem para o desenvolvimento e progressão do câncer de mama. Breast cancer is the most common cancer and the leading cause of cancer deaths among women worldwide. Different mutations were related to breast cancer, but only their presence cannot explain de heterogeneity of this cancer. Then, epigenetic events have been studied in breast cancer tissues. DNA methylation is the most studied and well-understood epigenetic regulation, being catalysed by DNA methyltransferases family; mainly DNMT1, DNMT3A, and DNMT3B. Besides, DNMT2 (TRDMT1), initially thought to be a member of this family, was later described as a RNA methyltransferase and so far, little is known about its function. The aim of this study was to determine the DNA methylation profile in 31 patients with Invasive Ductal Breast Cancer and 04 healthy tissues obtained from the opposite breast. Tests were performed for global methylation levels through an ELISA assay and for the expression levels of DNMTs (DNMT1, DNMT2 and DNMT3B) by real-time PCR. Gene expression was also analysed for BRCA1, BRCA2, ERBB2 and ERBB4. All these parameters were correlated with patient‘s data and intrinsic characteristics of the tumours. Our results show that global methylation in breast tumours is significant lower compared to breast healthy tissues (p= 0.0034). DNMT1 and DNMT3B (p=0.0034; p=0.0031, respectively) showed high expression in breast cancer tissue, being DNMT3B level significantly higher (p=0.0391) than DNMT1 level. Only DNMT1 exhibit a correlation with the global methylation, despite inversely related. In addition, DNMTs presented a tightly positive correlation with BRCA1 and only DNMT2 seems to be related with BRCA2. Patients submitted to adjuvant therapies showed a significant decrease in DNMT2 expression (p=0.0013), indicating reduced methylation levels in tRNA molecules. Family history of breast cancer was the only independent variable that correlated to DNMT1 level (p=0.0043), being higher in patients with hereditary risk. Our results points to an important role of DNMTs in breast cancer and further studies are necessary to elucidate the underlying mechanisms involved in methylation process, contributing to breast cancer development and progression.

CNPq O Papilomavírus Humano (HPV) é um agente sexualmente transmissível que se destaca por infectar o trato anogenital, e devido à sua associação etiológica com uma grande variedade de carcinomas, encontra-se entre as mais importantes infecções sexualmente transmissíveis (IST) da atualidade. Acredita-se que a presença do vírus da imunodeficiência humana (HIV) e da Chlamydia trachomatis parecem favorecer a infectividade viral, proporcionando o surgimento de lesões que podem levar ao câncer. Desta forma, o presente trabalho teve por objetivo avaliar os genótipos do HPV presentes em amostras cervicais e anais, correlacionando com a infecção por Chlamydia trachomatis. Realizou-se um estudo incluindo 73 mulheres com idade entre 17 e 65 anos, atendidas no Hospital das Clínicas de Pernambuco (HC/UFPE) entre novembro de 2010 e fevereiro de 2013. As amostras foram obtidas e a extração do DNA foi realizada através de kits específicos. Posteriormente, os genótipos do HPV foram determinados pelo PapilloCheck® (GreinerBio-One) e a identificação da Chlamydia trachomatis por PCR em Tempo-Real. A prevalência do HPV no canal anal foi de 83,6%, estando associado com história de intercurso anal (p=0.0295) e infecção por HIV (p=0.0104). Infecção múltipla por HPV foi observada em 50,8% das pacientes, sendo o HPV44 o mais comum. Nos grupos HIV-positivo e HIV-negativo, o genótipo de alto risco mais frequente foi o HPV16, enquanto que HPV44 e o HPV43 foram os genótipos de baixo risco mais encontrados, respectivamente. A taxa de concordância entre os genótipos de HPV cervical e anal chegou a 52%. Apenas um paciente apresentou infecção por Chlamydia trachomatis em canal anal. Os resultados sugerem que o canal anal pode ter participação na infecção cervical funcionando como reservatório do vírus. Desta forma, o rastreamento dessas pacientes no serviço público de saúde pode favorecer um diagnóstico precoce, auxiliando os médicos no acompanhamento e prevenindo a evolução da infecção, principalmente em pacientes HIV-positivas.

A gestação é um fenômeno fisiológico que se inicia com a fecundação e progride no sentido de promover um ambiente adequado onde o feto possa crescer e formar um novo indivíduo com todo seu potencial genético expresso. Durante este período, os níveis lipídicos normalmente aumentam para permitir a manutenção da homeostase entre mãe e feto. Níveis lipídicos anormais estão relacionados com disfunção endotelial, reduzindo a produção de óxido nítrico (NO) e causando complicações para mãe e para o desenvolvimento fetal. O NO é principal regulador de eventos feto-placentários sendo produzido a partir da ação de 3 isoformas da óxido nítrico sintase (NOS). Polimorfismos de base única (SNPs) na NOS endotelial (eNOS) tem sido correlacionados à diversas patologias, sendo T-786C um dos SNPs responsáveis por reduzir a expressão da eNOS em 50%. Nosso estudo estabeleceu uma análise sobre estudo sobre o polimorfismo T-786C no gene da eNOS em mulheres no terceiro trimestre de gravidez, observando a possível associação com moléculas lipídicas e com a proteína c-reativa (PCR). Adicionalmente, a partir de ferramentas in silico, foram desenhados modelos de interação proteína-proteína (networks) para compreensão da importância do metabolismo da eNOS em condições normais e com patologias. Amostras de 92 mulheres grávidas foram submetidas à extração de DNA, identificação do polimorfismo T-786C por PCR-RFLP, e análise dos níveis de colesterol total (CT), HDL, LDL, triglicerídeos (TG) e PCR. Análise genotípica apresentou uma população de 71,73% TT, 26,08% CT e apenas 2,17% CC, estando o alelo C-786 presente em 15.21% do grupo estudado. Em relação à análise bioquímica, observou-se significância apenas para PCR quando as pacientes foram agrupadas por níveis sorológicos (normal ou alterado) de acordo com o genótipo da paciente. A CRP atua diretamente no desacoplamento da enzima eNOS prejudicando sua atividade e diminuindo a produção de NO, e servindo como marcador de eventos cardiovasculares. A partir das análises de bioinformática construímos duas networks. A primeira, denominada eNOSNet, possui 51 nós e 361 arestas de interação, mostrando proteínas ligantes da eNOS, pequenas moléculas e seus complexos formados. A segunda network, denominada eNOSNetD, relaciona proteínas envolvidas na via normal da eNOS com doenças descritas para o polimorfismo T-786C, tais como: doenças relacionadas ao sistema cardíaco, neurológico, à neoplasias e ao metabolismo lipídico, glicídico, protéico e hormonal. Estes dados podem ajudar na compreensão sobre a progressão de doenças que envolvem o funcionamento da eNOS e seus possíveis tratamentos e diagnósticos.

CAPES, FACEPE A infecção pelo HPV (Papilomavírus humano) é o fator de risco mais comum para o desenvolvimento de Neoplasia Intraepitelial Anal (NIA). Além do fator viral deve-se considerar história de intercurso anal, infecção pelo HPV em outros sítios (vulvar, vaginal ou cervical) e tabagismo, bem como processos inflamatórios crônicos anorretais que, associados à imunodepressão, podem acelerar a divisão celular e dar origem à neoplasia. Objetivo: Identificar a presença do HPV e avaliar a expressão da proteína p16 em amostras anais de mulheres HIV negativas portadoras de lesões visíveis a anuscopia. Métodos: O estudo foi realizado com pacientes atendidas no Hospital de Câncer de Pernambuco, submetidas a anuscopia de magnificação. Diante da presença de lesões entre o canal anal e a zona de transição com o reto, realizava-se a coleta de células anais e biópsia. Foi extraído DNA para posterior análise da identificação do HPV através da Reação em Cadeia Polimerase (PCR), utilizando-se os primers GP5+/6+ e MY09/11 e genotipagem através do PapilloCheck®. Os fragmentos de tecido obtidos por biópsia foram submetidos a rotina histológica, corados pela Hematoxilina-Eosina e a reação imunohistoquímica para identificação da expressão da proteína p16. Resultados: Foram classificadas histologicamente 65 amostras e agrupadas como: I-Negativo para displasia: Ia-Normal, alterações benignas e/ou inflamatórias 52,31%, Ib-alterações proliferativas 41,54% e II-Neoplasias 6,15%. Entre os casos negativos para displasia 93.44% não apresentaram marcação para p16. Em 75% dos casos de neoplasias observou-se marcação nuclear e/ou citoplasmática, quanto ao padrão de marcação nesses casos verificou marcação em um terço e três terços do epitélio para NIA I e III, respectivamente. Todas as lesões com diagnóstico histológico de neoplasia apresentaram positividade para HPV para o método da PCR utilizando os primers GP5+/6+ e MY09/11. O primer GP5+/6+ mostrou-se mais eficiente para detecção do DNA-HPV em amostras anais do que o MY09/11. Foram genotipadas 82 amostras e destas 50% apresentaram positividade para 20 genótipos do HPV, sendo HPV6 (18.84%) o mais prevalente seguido por HPV16 (15.94%) e HPV53 (10.14%). Foi observada múltipla infecção em 24.64%, mostrando variação entre 2 – 8 tipos virais. Conclusões: O uso de ferramentas adicionais como método molecular (PCR e genotipagem) e imunohistoquímico associados ao exame histológico pode oferecer um diagnóstico do HPV mais preciso nas lesões intraepiteliais anais.

Submitted by (lucia.rodrigues@ufrpe.br) on 2016-06-02T14:36:17Z No. of bitstreams: 1 Gustavo Alves do Nascimento.pdf: 1681544 bytes, checksum: acfb4a02e8653a17d32122ce9e6a41e5 (MD5) Made available in DSpace on 2016-06-02T14:36:17Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Gustavo Alves do Nascimento.pdf: 1681544 bytes, checksum: acfb4a02e8653a17d32122ce9e6a41e5 (MD5) Previous issue date: 2011-11-28 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES The bovine papillamatosis is a disease caused by papillomavirus that can generate damage for producers and farmers. In extreme cases it can affect all the herd. Diagnostic methods for bovine papillomavirus are essential to the sector because traditional methods of morphological observations are not very effective. The use of devices technological to recognize specific biological molecules may help treatment and prevention of bovine viral diseases. The biosensor incorporates a biological recognition element through electrochemical reactions that generate electrical signals that can be quantified and interpreted. Thus, this work aimed to develop molecular diagnostic methods for detection of bovine viral diseases through the construction of biosensors. One of the biosensor was constructed from pencil graphite type 4B and the other model biosensor was composed to three screen-printed electrodes. In both biosensors proposed, a DNA probe specific for the BPV was immobilized on the working electrode by electrodeposition or by adsorption and then a target sequence was hybridized with the probe immobilized. The hybridization redox signals were analyzed using differential pulse voltammetry. The results showed that biosensors could differentiate hybridization of non-hybridization. The hybridization occurrence showed decrease on the redox signal and represented the positive diagnostic for BPV infection. The two biosensors (pencil graphite and screen-printed electrodes) showed high sensitivity which detection limits were 3.84 nM and 4.35 nM, respectively. The biosensor also detected viral DNA extracted from bovine blood using screen-printed electrodes. The data obtained with the biosensors showed viability for the diagnosis of various bovine papillomavirus types, thereby allowing the development of a new portable detection system for viruses. Enfermidades virais bovina, com destaque para o papilomatose bovina, trazem prejuízos para os produtores, podendo acometer todo o rebanho. Métodos de diagnósticos para o papilomavírus bovino (BPV) vêm sendo indispensáveis para o setor, pois os métodos tradicionais de observação morfológica são pouco eficazes. O uso de dispositivos capazes de reconhecerem moléculas biológicas específicas, como os biossensores, pode auxiliar no tratamento e prevenção de doenças virais bovina. O presente trabalho visou o desenvolvimento de métodos diagnósticos para detecção molecular de enfermidades bovinas de origem viral através da construção de biossensores. Um dos biossensores foi construído a partir de lápis grafite tipo 4B e outro modelo de biossensor foi constituído por eletrodos impressos. Nos dois biossensores propostos, um sonda de DNA específica para o BPV foi imobilizada no eletrodo de trabalho por eletrodeposição ou por adsorção e em seguida uma sequência alvo foi hibridizada com a sonda imobilizada. Os sinais redox da hibridização foram analisados pela técnica de voltametria de pulso diferencial. Os resultados mostraram que os biossensores puderam diferenciar a hibridização da não-hibridização. A ocorrência da hibridização apresentou diminuição no sinal redox e representou a positividade para a infecção do BPV. Os dois biossensores propostos (lápis grafite e eletrodos impressos) apresentaram elevada sensibilidade cujos limites de detecção foram 3,84 nM e 4,35 nM, respectivamente. O biossensor detectou também DNA viral extraído a partir de sangue bovino utilizando os eletrodos impressos. Os dados obtidos com os biossensores mostraram viabilidade para o diagnóstico de vários tipos de papilomavírus bovino, permitindo com isso o desenvolvimento de um novo sistema de detecção portátil para os vírus.

Faculdade de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco Os Papilomavírus humano (HPV) são responsáveis por causar lesões epiteliais, podendo evoluir a diversos tipos de carcinomas. Segundo a Organização Mundial de Saúde, a infecção pelo HPV é o principal fator de risco para o câncer cervical sendo detectado em aproximadamente 99% dos casos. O HPV 16, assim como o HPV 18, são os genótipos virais mais prevalentes em carcinomas cervicais invasivos no mundo. O teste molecular é mais eficiente em exames preventivos, ratificando sua utilização para a triagem do HPV e, desta forma, favorecendo a prevenção das lesões causadas pelo vírus. A presente dissertação teve como objetivo identificar os genótipos prevalentes do HPV em amostras cervicais consideradas normais e com alterações. O estudo de corte transversal foi realizado com 241 mulheres de 18 a 60 anos, atendidas numa Unidade de Saúde da Família do município de Olinda - PE. As amostras de DNA foram extraídas de células de raspado do colo uterino utilizando kit comercial. A infecção pelo HPV foi investigada através da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) utilizando os primers consensus MY09/11 e GP5+/6+. Alterações celulares foram visualizadas pelo exame citopatológico (Papanicolaou). O PapilloCheck HPV-screen DNA-chip foi utilizado para genotipar os HPV presentes nas amostras biológicas. Através do exame citopatológico observou-se que apenas 2,90% das pacientes apresentaram alterações celulares características da infecção pelo HPV, enquanto que o diagnóstico molecular permitiu detectar a presença do DNA viral em 23,23% das pacientes. Os dois pares de primers testados tiveram eficiências similares, sendo o MY09/11 com 15,35% e, o GP5+/6+ com 17,01%, entretanto o percentual de concordância entre ambos foi de apenas 39,28%. Neste estudo, o HPV6 (16,94%) e os HPV16 e HPV11, cada um com 10,16%, foram os genótipos virais mais prevalentes, em conjunto respondendo por quase 30% dos casos. O percentual de amostras com múltipla infecção foi de 22,03% sendo o HPV52 o genótipo mais prevalente (8,47%). Neste estudo o HPV 18 não figurou como sendo um dos genótipos mais prevalentes. A alta prevalência dos genótipos HPV6, 16 e 11 contribui para a discussão sobre estratégias de implantação de uma vacina contra o HPV, melhorando assim, a qualidade da assistência à saúde, além de reduzir os gastos públicos com tratamentos. Contudo, estudos incluindo uma maior amostragem em diferentes áreas do município se faz necessário para obter uma visualização mais detalhada da prevalência genotípica do HPV na região