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Algunas especies de Ganoderma, principalmente G. lucidum se han utilizado en la medicina tradicional asiática por más de dos milenios, como tónico medicinal, tanto cuerpos fructíferos como micelio pulverizados. El consumo de este hongo se recomienda para tratar distintos padecimientos, entre estos el cáncer. Algunas especies del género sintetizan triterpenoides con actividad antiproliferativa. Ganoderma presenta una distribución cosmopolita, con registros en zonas templadas, tropicales y desérticas. La especie más estudiada y la única que se cultiva a nivel mundial es G. lucidum, no obstante existen más de 219 en el género y muchas de ellas aún no han sido estudiadas. En este trabajo se realizaron exploraciones a distintos puntos de Sonora, con el fin de aislar cepas de Ganoderma e identificarlas taxonómicamente. Se estudiaron ejemplares de ocho especies: G. applanatum, G. curtisii, G. lobatum, G. oerstedii, G. sessile, G. sessiliforme, G. subincrustatum y G. weberianum. Este es el primer reporte de G. lobatum y G. oerstedii en Sonora, y de G. sessile y G. weberianum en México. Además, se estudió la variabilidad morfológica de una cepa de G. subincrustatum, comparando basidiomas silvestres y cultivados. El estudio mostró que los caracteres propuestos para la delimitación de las especies del género (tipo de contexto e incrustaciones, forma de los elementos de la cutícula y esporas) son constantes entre los distintos ejemplares estudiados. También se evaluó la actividad antiproliferativa de extractos de dos fases de desarrollo (micelio dicariótico y cuerpos fructíferos) de aislados de G. subincrustatum y G. weberianum de Sonora, sobre distintas líneas celulares. Se encontró que los extractos de cuerpos fructíferos presentan mayor actividad que los de micelio. Mediante cromatografía en una columna con sílica se obtuvieron 26 sub-fracciones del extracto de cuerpos fructíferos de G. subincrustatum (escogido por su alta actividad), de las cuales las fracciones F7 y F15 presentaron actividad antiproliferativa en la línea A549 (IC50: 37.9 y 41.9 μg/mL, respectivamente). Sin embargo, el extracto completo tuvo mayor actividad (IC50

Quorum sensing (QS) es un mecanismo de comunicación bacteriano para regular la expresión génica en respuesta a la densidad celular, a través de moléculas de señalización y proteínas receptoras. En este trabajo se estudió el reconocimiento molecular del receptor de QS NprR con su péptido de señalización NprRB y con el regulador de respuesta Spo0F que participa en la regulación del inicio de la esporulación, todos codificados en el genoma de Bacillus thuringiensis (Bt). Primeramente, se produjo la proteína NprR recombinante utilizando Escherichia coli como sistema de expresión heterólogo. Para lograr el plegamiento y funcionalidad de NprR fue necesario co-expresar las chaperonas DnaK-DnaJ-GrpE y GroEL-GroES. Además, se optimizaron las condiciones de proceso para la producción de NprR utilizando un cultivo en lote alimentado, incrementando 98 veces el rendimiento de NprR con respecto al obtenido en matraz agitado. Se estudió la interacción entre NprR y distintos péptidos de señalización (NprRB) putativos y se encontró que SSKPDIVG, SKPDIVG y SSKPDIV se unieron a NprR con constantes de disociación de 7.19 nM, 28.20 nM y 70.92 nM respectivamente, determinadas por calorimetría de titulación isotérmica; además por espectroscopía de fluorescencia se demostró que la unión del péptido indujo cambios conformacionales en NprR y se observó cooperatividad positiva para la unión del péptido a la proteína. Nuestros resultados indican que el mecanismo de reconocimiento NprR-NprRB se da a través de un proceso de selección conformacional. Un hallazgo importante del presente trabajo fue que en función de las concentraciones de péptido presentes, diferentes holo-formas del complejo proteína-péptido pueden co-existir. Esto sugiere que la concentración de NprRB es un factor importante para las funciones de NprR. Palabras clave: receptor bifuncional NprR, péptido de señalización NprRB, quorum-sensing, reconocimiento molecular, regulador de respuesta Spo0F, phosphorelay.

"NprR es una proteína de la familia de receptores de quórum sensing RNPP, funciona como un regulador transcripcional y es activado por su péptido de señalización NprRB. El regulón de NprR-NprRB incluye genes involucrados en la resistencia a condiciones de estrés y antibióticos, genes que codifican para el sistema oligopéptido permeasa (Opp) y genes que codifican para enzimas degradativas, y hay además evidencias que indican que NprR participa en la esporulación. En este estudio evaluamos algunos fenotipos que podrían ser afectados en una mutante BtΔnprR-nprB. Posteriormente se expresaron los genes nprR-nprRB y variantes de este sistema de quórum sensing en dicha mutante para tratar de restablecer los fenotipos alterados. Así mismo se evaluó la adición de péptidos sintéticos en la mutante transformada sólo con el gen silvestre nprR o con un gen al que se le deletó la secuencia del dominio de unión a DNA (nprRΔHTH), en la complementación de la mutante. Los fenotipos de esporulación, actividad de proteasa neutra, “swarming”, formación de biopelícula y expresión de la proteína CryIAa se vieron afectados por la mutación. Los fenotipos de proteasa neutra y esporulación fueron complementados mediante la expresión de los genes nprR-nprRB a partir del plásmido pMAD con la construcción nprR-nprRB. La expresión del gen nprRΔHTH junto con nprRB restableció el fenotipo silvestre de esporulación, evidenciando una función de NprR independiente de su función como regulador transcripcional. Así mismo, los resultados de expresión de Cry1Aa, muestran que NprR probablemente es un represor de Cry1Aa, al observarse en la cepa mutante una mayor expresión de Cry1Aa en comparación con la cepa silvestre. La restauración del fenotipo de actividad de proteasa neutra con los péptidos sintéticos SKPDIVG y SSKPDIVG en la cepa ΔnprRnprRB[pNprR], indica que ambos péptidos son activos y sugiere que más de un único péptido de señalización codificado en nprRB es funcional. Palabras Clave: Quorum Sensing, NprR, Bacillus thuringiensis, Esporulación"

"Quorum sensing (QS) es la regulación de la expresión genética bacteriana en respuesta a la densidad celular, a través de moléculas de señalización autoinductoras y proteínas receptoras. En este trabajo se estudiaron la evolución y funciones del receptor de QS NprR y su péptido de señalización maduro NprRB. Se utilizó a la bacteria Bacillus thuringiensis (Bt), que produce proteínas insecticidas. NprR pertenece a la familia RNPP de receptores de QS (nombrada por sus miembros Rap, NprR, PlcR y PrgX). Se realizó una revisión sobre esta familia de proteínas y los péptidos de señalización que activan sus funciones en bacterias Gram positivas. Esta revisión fue publicada y se muestra en el Capítulo I. Posteriormente se analizó la evolución de nprR y nprRB a través de herramientas de bioinformática encontrándose que hubo una coevolución de ambos genes dentro del grupo Bacillus cereus. Con base en la secuencia del posible péptido de señalización maduro, se encontraron 6 ferotipos que podrían permitir o limitar la comunicación cruzada dentro del grupo de bacterias. Para estudiar las funciones de NprR en Bt, se diseñaron péptidos de señalización putativos codificados en el gen nprRB; éstos péptidos sintéticos se añadieron a cultivos de Bt8741 observando que tienen efecto en esporulación y expresión de cry1Aa, gen que codifica para la proteína insecticida del mismo nombre. En el Capítulo II se detallan los hallazgos publicados sobre la evolución del sistema y el efecto de los péptidos sobre Bt8741. La parte final del trabajo se enfocó en la participación de NprR en la esporulación de Bt. La modelación de la estructura de NprR sugirió que además de ser un activador transcripcional, podría interactuar con el regulador de respuesta Spo0F, proteína del phosphorelay que lleva al inicio de la esporulación. Utilizando ingeniería genética se demostró que NprR participa en la regulación temporal del inicio de la esporulación probablemente a través del phosphorelay y que esta función no requiere de la unión de NprR a ADN, definiendo que NprR es una proteína bifuncional. El Capítulo III, se describen los experimentos para definir a NprR como una proteína bifuncional que participa en la regulación del inicio de la esporulación en Bt."

"A nivel mundial, México ocupa el séptimo lugar en producción de carne de res (Bos primigenius taurus). El 38% de la producción nacional proviene de la zona tropical, donde las reses se alimentan de pastos y forrajes frescos con elevada concentración de β-caroteno. Parte de éste, se convierte en vitamina A y el excedente se deposita en tejido adiposo, produciendo coloración amarilla en la grasa que ocasiona el rechazo del consumidor. Se ha propuesto la expresión de la enzima β-caroteno 15,15’-monooxigenasa (BCMO1) en un probiótico que se adhiera al tracto digestivo animal y que degrade el exceso de β-Caroteno. El objetivo de este trabajo fue comprobar que la cepa Lactobacillus casei BL23 transformada con el gen bcmo 1 mantiene su capacidad de adherencia in vitro a las mucinas del rumen y del intestino delgado de la res, y comparar la producción de biomasa de L. casei BL23-bcmo en sistemas de cultivo por lote y por lote alimentado. Para determinar posibles cambios en la capacidad de adherencia de la cepa transformada se llevaron a cabo ensayos de interacción proteína-carbohidrato. La afinidad de la adhesión se cuantificó mediante ensayos similares a ELISA, entre proteínas superficiales de la cepa y mucinas obtenidas del rumen e intestino de la res. La afinidad de la adhesión se comparó con la de la bacteria no transformada. Los resultados demostraron que la bacteria no perdió su capacidad de adherencia, siendo esta significativamente mayor (p

El problema de pérdida de viabilidad de las esporas de los hongos entomopatógenos durante el almacenamiento de los micoinsecticidas no ha sido resuelto. Su vida de anaquel es corta, probablemente debido a que las esporas no sobreviven al estrés hídrico y térmico. Se sabe que algunos microorganismos reaccionan al estrés sintetizando varios compuestos protectores, entre los que destaca la trehalosa. Por lo que el objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de la adición de trehalosa, el tipo de formulación y el tipo de envase sobre la vida de anaquel de los conidios aéreos de Beauveria bassiana a diferentes humedades relativas (HR) y temperaturas. Los resultados muestran que el tipo de envase y el tipo de formulación no tienen efecto alguno sobre la supervivencia de los conidios, en cambio la adición de trehalosa a la formulación parece tener un efecto benéfico. Los conidios viables almacenados por 12 semanas a 4°C y 7% de HR conservaron su patogenicidad hacia Tenebrio mollitor y Galleria mellonella. Las tierras de diatomeas tuvieron un efecto sinérgico con los conidios de B. bassiana en las pruebas de patogenicidad con G. mellonella. Por otro lado, no se esclareció si el aceite mineral actuaba de manera aditiva o sinérgica con los mismos. También se observó que la HR y la temperatura influyen en gran medida en la pérdida de viabilidad de los conidios, encontrándose que bajas temperaturas (4°C) y bajas HR (7%) son las condiciones ideales de almacenamiento. Además, se encontró que las temperaturas altas (40ºC) son fatales para los conidios de B. bassiana formulados y envasados

Procesos bacterianos fundamentales tales como la producc antibióticos, la expresión de factores de virulencia, el desarrollo de la competencia genética, la formación de biopelículas y la esporulación regulados a través de sistemas de tipo quórum sensing. El quórum sensing es un sistema de detección de densidad que activa una serie de mecanismos de regulación de la expresión génica de acuerdo a la densidad poblacional bacteriana. Estos sistemas de comunicación célula-célula implican la reconocimiento, por parte de las bacterias, de señales químicas denominadas autoinductores, que les dan la facultad de coordinar su comportamiento. También activan sistemas de regulación que les permiten adaptarse a los cambios del medio ambiente para asegurar la sobrevivencia, presentando comportamientos coordinados similares a los de los organismos multicelulares (Waters y Bassler, 2005; Miller y Bassler, 2001; Dunny y Leonard, 1997; Havarstein et al. 1995). En bacterias Gram-negativas estos autoinductores son generalmente acil-homoserina lactonas y han sido muy estudiadas en Vibrio fisch (NealsonyHastings,1979Hastings,1979Fidopiastis et al. 2002; Cao y Meighen, 1989; Bassler et al. 1993; Chen et al. 2002). Respecto a bacterias Gram-positivas, el quórum sensing es mediado por péptidos, los cuales actúan mediante dos mecanismos (Bassler, 2002). Pueden actuar indirectamente a través de una proteína sensora en un sistema de dos componentes que reconoce al péptido, desencadenando una cascada de fosforilación que activa finalmente a una proteína reguladora relacionada. También actúan de manera directa cuando el autoinductor se une directamente a la proteína reguladora, como es el caso de las Rap fosfatasas de Bacillus subtillis y del regulador PlcR de Bacillus cereus (Perego y Brannigan, 2001; Slamti y Lereclus, 2002). Dentro del mecanismo directo, los péptidos de señalización pueden tener efectos activadores o represores al actuar sobre sus proteínas reguladoras.

Los nemátodos son gusanos redondos, no-segmentados, con sistemas excretorio, nervioso, digestivo, reproductivo y muscular pero carecen de sistemas circulatorio y respiratorio (Maggenti, 1981). De acuerdo a su forma de alimentarse, los nemátodos se consideran parásitos de plantas o animales, y aquellos que son patógenos de insectos plaga pueden considerarse como agentes de control biológico (Poinar, 1979; Peinar, 1983). Los nemátodos entomopatógenos de las familias Steinernematidae y Heterorhabditidae son los que más se han estudiado y usado para control biológico (Kaya y Gaugler, 1993). Una característica importante de los nemátodos entomopatógenos, es la asociación simbiótica que establecen los integrantes del género Steinemema con bacterias del género Xenorhabdus y las especies de Heterorhabditis con Photorhabdus, formando un complejo que ocasiona la muerte de los insectos hospedantes (Kaya y Gaugler, 1993). El mecanismo patogénico se inicia cuando el tercer estadio juvenil, que es el único estadio de vida libre, llamado también juvenil infectivo (JI) localiza al insecto hospedante y lo penetra a través de sus aperturas naturales (boca, ano o espiráculos) (Woodring y Kaya, 1988), aunque existen algunas especies que se introducen a través de la cutícula (e.g. Heterorhabditis) (Peters y Ehlers, 1997). Una vez que el nemátodo se encuentra dentro del insecto migra al hemocelo de éste liberando a la bacteria simbionte. Esta se multiplica rápídamente causando la muerte del insecto por septicemia en aproximadamente 48 h (Grewal y Georgis, 1998). En el hemocelo, las fases JI se deshacen de la cutícula extra (cutícula del juvenil 3 o J3) que los envuelve y reanudan su desarrollo fisiológico a través de los diferentes estadios de su ciclo de vida (Poinar, 1983). Al igual que en otros nemátodos, el ciclo de vida de los nemátodos entomopatógenos incluye un estadio de huevo, cuatro estadios juveniles (J1, J2, J3 y J4) Y los adultos (Poinar, 1983). Estos estadios se alimentan de la bacteria simbionte y de los tejidos degradados del insecto, desarrollando de 2 a 3 generaciones. Cuando se agota el alímento, los nemátodos J3 se cubren de la cutícula extra que les otorga resistencia a las condiciones del medio ambiente y salen del cadáver del insecto, como fases JI, en busca de otros insectos hospedantes (Poinar, 1983; Grewal y Georgis, 1998).

Bacillus thuringiensis es una bacteria Gram-positiva esporulada utilizada como bioinsecticida, ya que produce protoxinas Cry. Estas protoxinas presentan actividad específica contra insectos, por lo cual son ampliamente utilizadas para controlar insectos plaga y vectores de enfermedades al hombre. La mayoría de éstas proteínas insecticidas se producen durante la esporulación. En B. subtilis el inicio de la esporulación ha sido descrito detalladamente y es regulado por un sistema de transferencia secuencial de fosfatos, cuya función fisiológica es integrar las señales nutricionales, del ciclo celular, metabólicas y de densidad celular (Quorum sensing) involucradas en la regulación del inicio de dicho proceso de diferenciación celular. Las proteínas sensoras histidina cinasas (HCs) de B. subtilis son componentes del sistema de transferencia secuencial de fosfatos y se encargan de detectar estímulos intra y extracelulares y transmitirlos al interior de la célula por medio del sistema de transferencia secuencial de fosfatos. El objetivo final del sistema es alcanzar los niveles necesarios de fosforilación del regulador transcripcional SpoOA, que le permiten a bajos niveles de fosforilación reprimir la expresión del gen abrB y a altos niveles activar la expresión de genes específicos de inicio de esporulación, como spoIIA, spoIIG y spoIIE y por lo tanto desencadenar el proceso de diferenciación celular que culmina con la formación de una espora. Debido a la cercanía filogenética que comparte B. thuringiensis con B. subtilis, la regulación del inicio de la esporulación, así como el proceso de diferenciación celular puede ser similar en ambas bacterias. Mediante análisis comparativos entre los genomas de B. subtilis y de las bacterias del grupo B. cereus, del que B. thuringiensis forma parte, se han logrado identificar en esta última bacteria un mayor número de HCs que potencialmente podrían regular el inicio de la esporulación y por ende, la producción de la protoxina Cry. Con el objetivo de evaluar si en la regulación del inicio de la esporulación de B. thuringiensis están involucradas las proteínas sensoras HC kinA1 y kinA2, posibles ortólogas a la proteína KinA que regula el inicio de esporulación en B. subti/is, se generaron dos cepas mutantes nulas en los genes kinA1 y kinA2.

Bacillus thuringiensis (Bt) es una bacteria gram-positiva (Gram+) que durante suproceso de esporulación produce δ-endotoxinas, las cuales son de naturaleza proteica y resultan tóxicas para las larvas de varios insectos. Estas proteínas forman un cristal paraesporal y también se denominan proteínas Cry. En B. subtilis (Bs) la regulación de los genes de inicio de esporulación es mediado por un sistema multicomponente de transducción de señales, el phosphorelay; en el cual participan péptidos de señalización. Mientras que en Bt se han identificado varios péptidos de señalización relacionados con la regulación de genes que codifican para factores extracelulares de virulencia. Sin embargo, a la fecha sólo se ha identificado uno relacionado con la regulación del proceso de esporulación, el pentapéptido SKPDT. En varios estudios se ha demostrado que la actividad y especificidad de los péptidos de señalización es afectada por modificaciones en sus secuencias. El objetivo de este trabajo fue evaluar el efecto ocasionado por sustituciones con α y β-Alaninas en la secuencia de SKPDT, así como el de modificaciones químicas en su extremo amino terminal, sobre la expresión de una fusión de los promotores del gen cry1Aa de Bt con el gen reportero LacZ. Se determinó que la segunda y quinta posición son indispensables para que SKPDT sea funcional en la célula. Por otra parte, una versión de SKPDT modificada con Biotina y una secuencia espaciadora de 3 glicinas entre la Biotina y el péptido, se comportó igual que SKPDT sin modificar. Modificaciones con Metionina como aminoácido inicial tanto en un pentapéptido como en un hexapéptido, redujeron significativamente la capacidad de estimular la expresión de la fusión cry1Aa-LacZ. Por lo tanto, modificaciones químicas en la secuencia del péptido de señalización SKPDT afectan su capacidad de estimular la expresión del gen cry1Aa en Bacillus thuringiensis, debido probablemente a que interfieren en la afinidad de las interacciones que tiene el péptido con su proteína receptora.

Las técnicas de la ingeniería genética, aplicadas a las plantas, permitengenerar nuevas variedades con características que cubren o resuelven problemáticas específicas. Tales son, la resistencia a la exposición a herbicidas, condiciones ambientales desfavorables e incluso la expresión o sobreexpresión de nutrimentos importantes en la dieta humana. La gran diferencia con las técnicastradicionales no sólo es su rapidez, sino que hacen posible introducir genes de cualquier otro organismo, ya que no se limitan a las especies taxonómicamente relacionadas. Así, se entiende por planta modificada genéticamente (GM, por las siglas en inglés) aquella que ha sufrido alguna manipulación de su material genético, para expresar un gen que le confiera una característica deseada. Si el origen de tal gen es un organismo ajeno a la planta misma, puede aplicársele el término de planta transgénica al producto final. Cuando la nueva característica se obtiene modificando la expresión de un gen propio, la planta sólo recibe el término de modificada genéticamente. Algunos ejemplos de plantas transgénicas son los cultivares resistentes a herbicidas como el glifosato y glufosinato, a plagas, y a condiciones climáticas adversas como sequía y salinidad. También, están aquellos que aportan beneficios directos al consumidor, debido a su mejor valor nutricio, como el arroz dorado con un contenido alto de carotenos, Los productos de los cultivares GM, se utilizan en la misma forma que sus contrapartes convencionales, como alimentos completos o como ingredientes. Por extensión, a dichos productos se les llama alimentos transgénlcos o modificados genéticamente según el caso. Debido al amplio rango de aplicaciones de los cultivos modificados genéticamente y a las ventajas potenciales que ofrecen tanto a los productores como a los consumidores, sería de esperarse una buena aceptación por parte de los consumidores. Sin embargo, en su corta historia de poco más de 10 años, han generado y siguen siendo un tema controvertido, al que alimentan continuamente los medios de comunicación masiva.

El etileno es una hormona vegetal necesaria para el crecimiento y desarrollo de las plantas. En los frutos climatéricos la síntesis de etileno se incrernenta al inicio de la maduración promoviendo los cambios fisiológicos y bioquímicos que le otorgarán al fruto sus características organolépticas de madurez. Para ejercer su acción el etileno se une a sus receptores, proteínas de membrana con actividad de histidina cinasas que funcionan como reguladores negativos de la cascada de transducción de señales del etileno. En la actualidad se han clonado receptores de etileno de frutos climatéricos y no climatéricos, encontrando diferencias tanto en el número de receptores así como en su expresión. El objetivo de la presente investigación fue clonar al gen que codifica para el receptor de etileno ERS1 y a su vez., evaluar la expresión de ERS1 y ETR1 en distintas etapas durante el desarrollo de frutos de mango. Se logró clonar un fragmento de 1173 pb del receptor de etileno ERS1 de mango a partir de cDNA. Este fragmento codifica para 391 aminoácidos, que tiene un porcentaje de identidad de 69 % con el homólogo de la planta modelo Arabidopsis thaliana y alrededor del 73 % con ERS1 de otros frutos climatéricos como pera, papaya, durazno y fruto de la pasión. El fragmento del receptor amplificado presenta un dominio GAF, un dominio híbrido de histidina cinasa que contiene el núcleo catalítico de actividad de histidina cinasa y el dominio regulador de respuesta, los cuales también están presentes en los receptores de etileno caracterizados en otras plantas y frutos. Por otro lado, la expresión de los genes ERS1 y ETR1 varía durante el desarrollo del mango 'Kent'. El gen ERS1 de mango presentó un patrón de expresión similar al ERS1 de otros frutos climatéricos, En ambos genes la expresión se incrementó durante el desarrollo, siendo mayor la expresión de ETR1 que de ERS1.

En Bacillus subtilis la comunicación célula-célula es mediada por péptidos señal que están implicados en un mecanismo llamado Quórum sensing, el cuál permite a la bacteria censar la densidad celular, controlar su expresión genética y regular la esporulación. Resultados previos de nuestro grupo de investigación sugirieron la existencia de péptidos señal en Bacillu thuringiensis. El objetivo de este trabajo fue demostrar que en B. thuringiensis existe un sistema de regulación de la esporulación mediado por péptidos señal similar al encontrado en B. subtilis. Para lo cual se estudió el efecto sobre esporulación en ambas bacterias del péptido señal CSF de B. subtilis y de un péptido señal putativo de B. thuringiensis (NprRB). Además, puesto que en esta última bacteria la expresión de cry1 Aa (gen que codifica para la proteína tóxica Cry) se lleva a cabo a partir de dos promotores (Btl y Btl), uno de los cuales se enciende en las etapas tempranas de esporulación y el otro en las tardías, se estudió la cinética de expresión de este gen. CSF estimuló la esporulación en B. subtilis pero no en B. thuringiensis, sin embargo, en esta bacteria incrementó la liberación de esporas y la expresión de cry1Aa a partir del promotor tardío (Btll), cuya transcripción requiere ok. NprRB no tuvo ningún efecto sobre B. subtilis, pero en B. thuringiensis aumentó la esporulación, la expresión de cry1 Aa a partir· del promotor tardío y la liberación de esporas. Estos resultados demuestran que en B. thuringiensis existe un sistema de comunicación célula-célula mediado por péptidos señal que regula la esporulación y por ende la expresión de cry1Aa.

La bacteria Bacillus thuringiensis (Bt), produce cristales con biotoxinas durante la esporulación. Estas son letales para al menos tres órdenes de insectos y son llamadas toxinas cry (por cry=crystal). Las toxinas Cry han sido utilizadas para control biológico de plagas como el gusano del tabaco Manduca sexta entre otros. El principal receptor de la toxina Cry1Ac es la aminopeptidasa N 1 o APN1. Previos reportes han sugerido que para la unión toxina-receptor, se requiere de una N-Acetil galactosamina (GalNAc) terminal. En este estudio, se realizó la caracterízación de los oligosacáridos de APN1 que están involucrados en la unión con Cry1Ac. APN1 fue purificada de las vesículas membranales de vellosidades intestinales de Manduca sexta, aislando una forma soluble (115 kDa) y una forma anclada a glico fosfatidil inositol (120 kDa). Inicialmente se caracterizaron los oligosacáridos mediante lectinas biotiniladas, como concanavalina A (ConA), aglutinina de Dolichos biflorus (DBA), aglutinina de soya (SBA), jacalina, aglutinina de Ricinus communis (RCA) y lectina de tomate (MPL) 1 que reconocieron a la APN de 120 kDa. De las lectinas mencionadas, ConA, DBA, SBA y UEA reconocieron la isoforma de 115 kDa. Cuando APN1 fue tratada con N-glicosidasa, la interacción entre Cry1Ac y APN1 fue anulada. Así mismo, se presentó éste comportamiento al incubar APN1 con N-acetil galactosaminidasa. APN1 fue desglicosilada con PNGasa F y los Nglicanos fueron marcados con aminopiridina (2AP), separados por HPLC y analizados por MALDI-TOF. Se les trató con otras exoglicosidasas. Basados en estos experimentos, se propuso un modelo del oligosacárido que interacciona con Cry1Ac y que posee un residuo de GalNAc terminal.

La comunicación célula-célula mediante el intercambio de péptidos señal coordina el inicio de la esporulación en Bacillus subtilis. Hasta el momento, se han identificado siete péptidos siendo, CSF, PhrA y PhrE los más estudiados. Estos ejercen un control negativo sobre las proteínas RapB, RapA y RapE, respectivamente y sus genes se encuentran organizados en pares, fosfatasapéptido, cada uno con su promotor. Los péptidos son procesados hasta alcanzar su tamaño funcional de cinco aminoácidos. El Interés de este trabajo fue determinar si B. subtilis y Bacillus thuringiensis tenían un control similar en la regulación de la iniciación de la esporulación a nivel fisiológico y particularmente a nivel de la fosfatasa RapA y el péptido PhrA. El análisis de la conservación de los genes involucrados en la señalización del inicio de la esporulación entre B. subtilis y B. thuringiensis, reveló la presencia de todos los genes centrales en la transducción de señales que regulan el nivel de fosforilación de Spo0A, lo que sugiere que el péptidos señal PhrA de B. subtilis podría tener un efecto en el inicio de la esporulación en B. thuringiensis. Sin embargo, se observaron diferencias fisiológicas importantes ya que inductores de esporulación en B. subtilis, como decoyinina y ácido microfenólico no tuvieron efecto en B. thuringiensis, En el caso de B. subtilis, se obtuvo algo inesperado, que fue la fuerte inhibición del crecimiento en la cepa que contiene al plásmido pHT315ΩXyl-Kpnl. Pudimos probar que el efecto dependía de xilosa pero no era causado por efecto del carbohidrato solamente, pues la cepa parental en ausencia del plásmido no muestra este comportamiento, La razón parece ser la expresión de la proteína XylA truncada. Curiosamente este efecto no se observó en B. thuringiensis. La diferencia ( 11 el crecimiento entre las cepas de B. subli/is y B. tlwringlensis que lnclulan el plásmido pHT3150XyI .. Kpnl, pudiera deberse a varias causa$, por ejemplo, un procesamiento diferencial de péptidos entre microorganismos. Por otra parte, la expresión de RapAPhrA en B. 1/wringien.sis incrementó la eficiencia de esporulación. Este efecto no fue observado en 13. subtilis, sel'\alando el alto nivel de control en el inicio de la esporulación que no se modifica por el incremento de alguno de los elementos que participan en la coordinación del mismo. La adición de péptido sefíal sintético no incremento la eficiencia de esporulación en ambas especies. Las diferencias en respuesta