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Neosporosis has become a concern since it is associated with abortionin cattle. Currently,in situdiagnosis is determined through anamnesis, evaluation ofthe history, and perception of the clinical signs of the herd. There is no practical andnoninvasive test adapted to a large number of samples, which represents a gap forthe use of new approaches that provide information about infections and the risksof herds. Here, we performed a search in theNeospora caninumgenome by linearB-cell epitopes using immunoinformatic tools aiming to develop a chimeric proteinwith high potential to bind specifically to antibodies from infected cattle samples.An enzyme-linked immunosorbent assay with the new chimeric antigen was devel-oped and tested with sera from natural fieldN. caninum-infected bovines. The cross-reactivity of the new antigen was also evaluated using sera from bovines infected byother abortive pathogens, includingTrypanosoma vivax,Leptospirasp.,Mycobacte-rium bovis, andBrucella abortus, and enzootic bovine leucosis caused by bovine leu-kemia virus, as well as with samples of animals infected withToxoplasma gondii. Theassay using the chimeric protein showed 96.6% 3.4% of sensitivity in comparisonto healthy animal sera. Meanwhile, in relation to false-positive results provided bycross-reactivity with others pathogens, the specificity value was 97.0% 2.9%. Inconclusion, immunoinformatic tools provide an efficient platform to build an accu-rate protein to diagnose bovine neosporosis based on serum samples A neosporose tornou-se uma preocupação, uma vez que está associada ao aborto em bovinos. Atualmente, o diagnóstico in situ é determinado por meio de anamnese, avaliação da história e percepção dos sinais clínicos do rebanho. Não existe um teste prático e não invasivo adaptado a um grande número de amostras, o que representa uma lacuna para a utilização de novas abordagens que forneçam informações sobre infecções e riscos dos rebanhos. Aqui, realizamos uma pesquisa no genoma de Neospora caninum por epítopos lineares de células B usando ferramentas de imunoinformática com o objetivo de desenvolver uma proteína quimérica com alto potencial para se ligar especificamente a anticorpos de amostras de bovinos infectados. e testado com soros de campo naturalN. bovinos infectados com caninum. A reatividade cruzada do novo antígeno também foi avaliada utilizando soros de bovinos infectados por outros patógenos abortivos, incluindo Trypanosoma vivax, Leptospirasp., Mycobacte-rium bovis e Brucella abortus, e leucose enzoótica bovina causada pelo vírus da leucemia bovina, bem como com amostras de animais infectados com Toxoplasma gondii. O ensaio com a proteína quimérica apresentou sensibilidade de 96,6% a 3,4% em relação a soros de animais sadios. Já em relação aos resultados falso-positivos proporcionados pela reação cruzada com outros patógenos, o valor de especificidade foi de 97,0% 2,9%. Em conclusão, ferramentas de imunoinformática fornecem uma plataforma eficiente para construir uma proteína precisa para diagnosticar neosporose bovina com base em amostras de soro