Search

Předčasný porod, tedy porod před ukončeným 37. týdnem těhotenství představuje celosvětový problém (10 % dětí se ročně narodí předčasně). Je hlavním důvodem novorozenecké úmrtnosti a nemocnosti. V současné době nejsou dostupné vhodné predikční markery pro včasné odhalení rizika předčasného porodu. Cílem této práce je uvést základní přehled problematiky předčasného porodu, analyzovat vzorky plodových vod pomocí exploratorních proteomických metod a poskytnout možný panel dysregulovaných proteinů vhodných pro další studium. Tato studie porovnávající vzorky plodových vod od žen, které porodily předčasně s termínovými porody, odhalila 18 signifikantně dysregulovaných proteinů., Preterm birth is the birth of a baby less than 37 weeks of gestational age. It accounts for the main reason for perinatal mortality and long-term morbidity. The preterm birth rate (around 10 %) is a worldwide complication. A reliable screening tool that could reduce the incidence by early diagnosis has not been found. The aim of this project is to summarize current knowledge about the preterm birth problematic, analyze samples of amniotic fluid using the proteomic shotgun accesses and show the list of potential predictive markers suitable for further investigation. The results of this case-cohort study of amniotic fluid samples showed 18 significantly dysregulated proteins., Fakulta chemicko-technologická, Dokončená práce s úspěšnou obhajobou

Tato práce je zaměřena na indukci lipotoxicity v primárních kulturách hepatocytů potkana. Působení lysofosfatidylcholinu o zvolených koncentracích na primární kultury hepatocytů potkana bylo hodnoceno pomocí aktivity buněčných dehydrogenáz (WST-1 test), LDH leakage, aktivity kaspázy 3 a mikroskopického pozorování morfologických změn buněk ve fázovém kontrastu. Po vyhodnocení těchto parametrů byla optimalizována dávka lysofosfatidylcholinu indukující lipotoxicitu., This work is focused on the induction of lipotoxicity in primary rat hepatocyte cultures. The effects of lysophosphatidylcholine in given concentrations on primary rat hepatocyte cultures was assessed by the cellular dehydrogenase activity (WST-1 assay), LDH leakage, caspase 3 activity and evaluation of cell morphological changes by phase contrast microscopy. Dose of lysophosphatidylcholine was optimized after evaluating these parameters., Fakulta chemicko-technologická, 1. Prezentace výsledků diplomové práce. 2. Diskuze k posudku vedoucího a oponenta diplomové práce. 3. Student zodpověděl všechny dotazy a připomínky k DP.

Tato diplomová práce byla zaměřena na optimalizaci kultivačních podmínek hepatocytů v primární kultuře s ohledem na densitu buněk a dobu potřebnou pro přichycení buněk k povrchu mikrotitračních destiček (tzv. dobu seedingu). Primární kultury hepatocytů jsou používány pro toxikologické a farmakokinetické studie, pro studium metabolismu a genové exprese. Životaschopnost kultivovaných buněk a míra jejich poškození byla hodnocena pomocí aktivity buněčných dehydrogenáz (WST-1 test), aktivity laktátdehydrogenázy (LDH), resp. LDH-leakage, a aktivity kaspázy 3. Nejprve byla optimalizována densita buněk pro vybrané typy mikrotitračních destiček. Z výsledků vyplývá, že optimální density jsou 30 000 bb/j pro 96jamkové destičky, 200 000 bb/j pro 24jamkové destičky a 350 000 bb/j pro 12jamkové destičky. Tyto hodnoty odpovídají přibližně densitě 1,0×105 bb/cm2. Druhým úkolem bylo optimalizovat dobu potřebnou pro přichycení buněk k povrchu kultivačních destiček. Bylo zjištěno, že testované doby nemají vliv na hodnocené parametry hepatocytů., The thesis was focused on optimization of hepatocyte culture conditions in primary culture considering cell density and seeding time. Primary hepatocyte cultures are used for toxicological and pharmacokinetic studies, for the study of metabolism and gene expression. The viability of cultured cells and their damage rate was determined by cellular dehydrogenases activity (WST-1 test), lactate dehydrogenase activity (LDH), respectively LDH-leakage, and activity of caspase 3. At first, cell density for different well plate types was optimized. The results indicate that optimum densities are 30 000 cells/well for 96-well plates, 200 000 cells/well for 24-well plates and 350 000 cells/well for 12-well plates. These values correspond to a density 1,0×105 cells/cm2. Another aim of this work was to optimize the time of seeding. It was found that tested seeding times do not affect the evaluated parameters of hepatocytes., Fakulta chemicko-technologická, 1. Prezentace výsledků diplomové práce. 2. Diskuze k posudku vedoucího a oponenta diplomové práce. 3. Studentka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP.

Cílem této práce bylo (a) zavést metody pro stanovení vitaminů a antioxidantů v seminální plazmě mužů a porovnat jejich hladiny mezi různými skupinami pacientů a (b) zavést metody pro stanovení aminokyselin a oxokyselin v kultivačním médiu pro porovnání metabolismu mezi jednotlivými lidskými embryi a nalézt vztah mezi metabolismem aminokyselin a morfokinetickými parametry embrya určenými time-lapse analýzou. Byly zavedeny dvě metody pro simultánní stanovení antioxidantů (vitaminů) v seminální plazmě mužů, jedna pro stanovení kyseliny askorbové a močové, druhá pro stanovení retinolu a ?-tokoferolu. V obou případech se jedná o metody vysokoúčinné kapalinové chromatografie s UV detekcí. Vzorky spermatu byly získány od mužů léčících se pro neplodnost. Při stanovení kyseliny askorbové a močové, byly ejakuláty odstředěny a seminální plazma naředěna roztokem dithiothreitolu, po filtraci byly vzorky dávkovány na analytickou kolonu s vázanou reverzní fází. Při stanovení retinolu a ?-tokoferolu byla seminální plazma deproteinována ethanolem, vitaminy byly extrahovány n-hexanem a extrakty odpařeny do sucha v atmosféře dusíku. Odparek byl rozpuštěn v ethanolu a po filtraci byl vzorek dávkován na analytickou kolonu s vázanou reverzní fází. Analytické parametry těchto metod byly vyhovující. Nebyly nalezeny žádné statisticky významné rozdíly v koncentracích kyseliny askorbové i močové mezi kuřáky a nekuřáky [327,4 (263,0) ?mol/l a 298,7 (146,8) ?mol/l vs. 400,0 (367,8) ?mol/l a 304,2 (138,2) ?mol/l, p > 0,05]. Podobně hladiny retinolu a ? tokoferolu se statisticky významně nelišily mezi kuřáky a nekuřáky [12 (6) nmol/l a 1,9 (0,3) ?mol/l vs. 13 (8) nmol/l a 1,8 (0,5) ?mol/l, p > 0,05]. Byly zavedeny dvě metody vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenční detekcí, jedna pro stanovení vybraných aminokyselin, druhá pro stanovení vybraných oxokyselin v kultivačním médiu. Dvacet čtyři hodin po intraplazmatické injekci spermií, byla jedna, náhodně vybraná zygota, přemístěna do, The aim of this work was (a) to develop methods for the determination of vitamins and antioxidants in human seminal plasma and to compare their levels between different groups of patients and (b) to develop methods for the determination of amino acids and ?-keto acids in human culture medium and to compare amino acids metabolism between human embryos and to find some relationship between amino acids metabolism and the embryo morphokinetic parameters studied via time-lapse analysis. Two methods for the simultaneous determination of antioxidants (vitamins) in human seminal plasma were developed; one for the measurement of ascorbic acid and uric acid and the second for the determination of retinol and ?-tocopherol, both using an high-performance liquid chromatography with UV detection. Semen samples were obtained from consecutive male partners of couples presenting for a fertility evaluation. For the determination of ascorbic acid and uric acid, ejaculates were centrifuged and the seminal plasma diluted with dithiothreitol solution and after a filtration injected onto an analytical reverse-phase column. For the determination of retinol and ?-tocopherol, seminal plasma was deproteinized with ethanol, vitamins were extracted with n-hexane and extracts were evaporated to dryness, under nitrogen. The dried residue was resuspended in ethanol and after a filtration, injected onto an analytical reverse-phase column. Analytical performance of these methods was satisfactory. No statistically significant differences in both ascorbic acid and uric acid concentration between the smokers and non-smokers [327.4 (263.0) ?mol/l a 298.7 (146.8) ?mol/l vs. 400.0 (367.8) ?mol/l a 304.2 (138.2) ?mol/l, p > 0,05] were observed and similarly no statistically significant differences in both retinol and ?-tocopherol concentration between the smokers and nonsmokers [12 (6) nmol/l a 1.9 (0.3) ?mol/l vs. 13 (8) nmol/l a 1.8 (0.5) ?mol/l, p > 0,05] were found. Two methods, one for the determinati, Fakulta chemicko-technologická

Tato diplomová práce se zabývá stanovením tří cytokinů produkovaných peritoneálními makrofágy potkana - TNF?, IL-1? a IL-6 ve vztahu k rozdílnému přístupu operačního výkonu - laparotomickému či laparoskopickému. Byla měřena bazální produkce uvedených cytokinů a jejich produkce po stimulaci makrofágů bakteriálním lipopolysacharidem (LPS). Izolace buněk z peritonea probíhala ve dvou intervalech - 24 nebo 72 hodin po operaci. Vlastní analýze předcházela vždy 24 hodinová kultivace s, resp. bez LPS. Optimální koncentrace LPS vhodné pro stimulaci peritoneálních makrofágů bylo nutno experimentálně docílit. Zjištěná optimální koncentrace LPS byla 0,1 ?g/ml. Hladina cytokinů byla stanovena pomocí sendvičové ELISA metody. V teoretické části je popsána organizace imunitního systému a funkce jeho jednotlivých složek v imunitní odpovědi s důrazem na úlohu makrofágů. Významná část je věnována roli cytokinů v modulaci imunitní odpovědi. Dále je podána literární rešerše o dějích v peritoneální oblasti ve vztahu k laparotomickému či laparoskopickému zásahu do abdominální krajiny a zhodnocení systémové a lokální imunitní odpovědi, která tyto chirurgické zákroky doprovází. Experimentální část je věnována popisu principu EIA metod se zaměřením na ELISA metody a její variace. Dále je v této části uveden optimalizovaný postup izolace a kultivace peritoneálních makrofágů a vlastního stanovení jimi produkovaných cytokinů metodou ELISA. Výsledková část obsahuje postup optimalizace koncentrace LPS vhodného pro stimulaci peritoneálních makrofágů. Dále zahrnuje grafickou a slovní dokumentaci bazální i stimulované produkce jednotlivých cytokinů makrofágy izolovanými 24, resp. 72 hodin po zákroku. Bazální produkce cytokinů byla signifikantně vyšší u laparoskopované skupiny, nejvyšší produkci cytokinů stimulovanými makrofágy vykazovala naopak skupina po laparotomii. Zhodnocení získaných výsledků je rozebíráno v diskusi., This thesis deals with the determination of the three cytokines produced by rat peritoneal macrophages - TNF?, IL-1? and IL-6 in relation to the different approach of surgery - laparoscopic or laparotomic. Was measured basal production of cytokines and those of their production after stimulation of macrophages by bacterial lipopolysaccharide (LPS). Isolation of peritoneal cells was performed in two intervals - 24 or 72 hours after surgery. The actual analysis is always preceded by 24 hours of cultivation with, respectively without LPS. The optimal concentration of LPS suitable for stimulation of peritoneal macrophages was necessary to achieve experimentally. The observed optimal concentration of LPS was 0,1 ?g/ml. The level of cytokines was determined using a sandwich ELISA method. The theoretical part describes the organization of the immune system and functions of its individual components in the immune response with emphasis on the role of macrophages. A significant part is devoted to the role of cytokines in the modulation of immune responses. In addition, is given a literature review about actions in the peritoneal area in relation to laparotomic or laparoscopic intervention into the abdominal landscape and assess systemic and local immune response that accompanies the surgery. The experimental section is devoted to describing the principle of EIA methods, focusing on the ELISA method and its variations. Additionally, the optimized process isolation and cultivation of peritoneal macrophages and optimized determination of cytokines measured by ELISA is described there. Results contain the process of optimization of an appropriate concentration of LPS suitable for stimulation of peritoneal macrophages. It also includes a graphical and verbal documentation of basal and stimulated production of cytokines by macrophages isolated 24, resp. 72 hours after surgery. Basal cytokine production was significantly higher in laparoscopic group, the highest cytokine production, Katedra biologických a biochemických věd, 1) Prezentace výsledků diplomové práce 2) Diskuze k posudkům vedoucího a oponenta diplomové práce 3) Diplomantka zodpověděla všechny dotazy a připomínky k DP, Dokončená práce s úspěšnou obhajobou