Kanďár, Roman, Lotková, Halka, Pohanka, Miroslav, Šatínský, Dalibor, Drábková, Petra, Kanďár, Roman, Lotková, Halka, Pohanka, Miroslav, Šatínský, Dalibor, and Drábková, Petra
Cílem této práce bylo (a) zavést metody pro stanovení vitaminů a antioxidantů v seminální plazmě mužů a porovnat jejich hladiny mezi různými skupinami pacientů a (b) zavést metody pro stanovení aminokyselin a oxokyselin v kultivačním médiu pro porovnání metabolismu mezi jednotlivými lidskými embryi a nalézt vztah mezi metabolismem aminokyselin a morfokinetickými parametry embrya určenými time-lapse analýzou. Byly zavedeny dvě metody pro simultánní stanovení antioxidantů (vitaminů) v seminální plazmě mužů, jedna pro stanovení kyseliny askorbové a močové, druhá pro stanovení retinolu a ?-tokoferolu. V obou případech se jedná o metody vysokoúčinné kapalinové chromatografie s UV detekcí. Vzorky spermatu byly získány od mužů léčících se pro neplodnost. Při stanovení kyseliny askorbové a močové, byly ejakuláty odstředěny a seminální plazma naředěna roztokem dithiothreitolu, po filtraci byly vzorky dávkovány na analytickou kolonu s vázanou reverzní fází. Při stanovení retinolu a ?-tokoferolu byla seminální plazma deproteinována ethanolem, vitaminy byly extrahovány n-hexanem a extrakty odpařeny do sucha v atmosféře dusíku. Odparek byl rozpuštěn v ethanolu a po filtraci byl vzorek dávkován na analytickou kolonu s vázanou reverzní fází. Analytické parametry těchto metod byly vyhovující. Nebyly nalezeny žádné statisticky významné rozdíly v koncentracích kyseliny askorbové i močové mezi kuřáky a nekuřáky [327,4 (263,0) ?mol/l a 298,7 (146,8) ?mol/l vs. 400,0 (367,8) ?mol/l a 304,2 (138,2) ?mol/l, p > 0,05]. Podobně hladiny retinolu a ? tokoferolu se statisticky významně nelišily mezi kuřáky a nekuřáky [12 (6) nmol/l a 1,9 (0,3) ?mol/l vs. 13 (8) nmol/l a 1,8 (0,5) ?mol/l, p > 0,05]. Byly zavedeny dvě metody vysokoúčinné kapalinové chromatografie s fluorescenční detekcí, jedna pro stanovení vybraných aminokyselin, druhá pro stanovení vybraných oxokyselin v kultivačním médiu. Dvacet čtyři hodin po intraplazmatické injekci spermií, byla jedna, náhodně vybraná zygota, přemístěna do, The aim of this work was (a) to develop methods for the determination of vitamins and antioxidants in human seminal plasma and to compare their levels between different groups of patients and (b) to develop methods for the determination of amino acids and ?-keto acids in human culture medium and to compare amino acids metabolism between human embryos and to find some relationship between amino acids metabolism and the embryo morphokinetic parameters studied via time-lapse analysis. Two methods for the simultaneous determination of antioxidants (vitamins) in human seminal plasma were developed; one for the measurement of ascorbic acid and uric acid and the second for the determination of retinol and ?-tocopherol, both using an high-performance liquid chromatography with UV detection. Semen samples were obtained from consecutive male partners of couples presenting for a fertility evaluation. For the determination of ascorbic acid and uric acid, ejaculates were centrifuged and the seminal plasma diluted with dithiothreitol solution and after a filtration injected onto an analytical reverse-phase column. For the determination of retinol and ?-tocopherol, seminal plasma was deproteinized with ethanol, vitamins were extracted with n-hexane and extracts were evaporated to dryness, under nitrogen. The dried residue was resuspended in ethanol and after a filtration, injected onto an analytical reverse-phase column. Analytical performance of these methods was satisfactory. No statistically significant differences in both ascorbic acid and uric acid concentration between the smokers and non-smokers [327.4 (263.0) ?mol/l a 298.7 (146.8) ?mol/l vs. 400.0 (367.8) ?mol/l a 304.2 (138.2) ?mol/l, p > 0,05] were observed and similarly no statistically significant differences in both retinol and ?-tocopherol concentration between the smokers and nonsmokers [12 (6) nmol/l a 1.9 (0.3) ?mol/l vs. 13 (8) nmol/l a 1.8 (0.5) ?mol/l, p > 0,05] were found. Two methods, one for the determinati, Fakulta chemicko-technologická