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Mango fruit has a high nutritional value and health benefits due to important components. The present manuscript is a comprehensive update on the composition of mango fruit, including nutritional and phytochemical compounds, and the changes of these during development and postharvest. Mango components can be grouped into macronutrients (carbohydrates, proteins, amino acids, lipids, fatty, and organic acids), micronutrients (vitamins and minerals), and phytochemicals (phenolic, polyphenol, pigments, and volatile constituents). Mango fruit also contains structural carbohydrates such as pectins and cellulose. The major amino acids include lysine, leucine, cysteine, valine, arginine, phenylalanine, and methionine. The lipid composition increases during ripening, particularly the omega-3 and omega-6 fatty acids. The most important pigments of mango fruit include chlorophylls (a and b) and carotenoids. The most important organic acids include malic and citric acids, and they confer the fruit acidity. The volatile constituents are a heterogeneous group with different chemical functions that contribute to the aromatic profile of the fruit. During development and maturity stages occur important biochemical, physiological, and structural changes affecting mainly the nutritional and phytochemical composition, producing softening, and modifying aroma, flavor, and antioxidant capacity. In addition, postharvest handling practices influence total content of carotenoids, phenolic compounds, vitamin C, antioxidant capacity, and organoleptic properties.

RESUMEN Introducción: La identificación de factores de riesgo para las enfermedades cardiovasculares (ECV) puede ayudar a prevenir su desarrollo. Las hormonas esteroides a través de sus receptores y las variaciones genéticas influyen sobre el metabolismo de los lípidos y la presión arterial, entre otras funciones. Métodos: Estudio descriptivo realizado en niños y adolescentes entre 8 y 18 años de edad. Objetivo: Determinar los niveles de estradiol y su relación con género, edad, presión arterial, lípidos plasmáticos y polimorfismo XbaI del receptor de estrógenos. Resultados: No se encontró relación estadística entre el polimorfismo XbaI y las concentraciones de estradiol, pero sí entre el polimorfismo y el perfil lipídico, de igual manera entre las concentraciones de esta hormona con triglicéridos y c-VLDL. Conclusión: Este trabajo evidencia la relación entre niveles de estrógenos, edad, presión sanguínea y lípidos plasmáticos, de igual forma demuestra una relación entre polimorfismo XbaI del ESR1 y los niveles de lípidos. ABSTRACT Introduction: The identification of risk factors for cardiovascular diseases (CVD), can help to prevent their development. The steroid hormones, through their receptors and genetic variations, influence the lipids metabolism and blood pressure among other functions. Methods: a descriptive study carried out with children and adolescents between 8 and 18 years old. Objective: To determine levels of estradiol and its relationship with gender, age, blood pressure, plasmatic lipids and polymorphism XbaI of the estrogens receptor. Results: No statistical relationship between polymorphism XbaI and concentrations of estradiol was found, but it was found between polymorphism and lipid profile and, in the same way, between the concentrations of the hormone and triglycerides and VLDL-c. Conclusion: This work shows a relationship between estrogen levels, age, blood pressure and plasma lipids as well as it shows a relationship between XbaI polymorphism of ESR1 and lipid levels.

Extracts from a variety of fruit trees have been used for therapeutic applications for preventing oxidative stress associated to chronic diseases. Objective: To investigate the antioxidant and antiproliferative activity of ethanolic and aqueous extracts from leaves and fruits of Passiflora edulis. Materials and methods: A preliminary phytochemical screening was performed; antioxidant activity was evaluated through DPPH assay, the scavenging activity for hydroxyl radical, antihemolytic activity and total phenolic content; cytotoxic and antiproliferative activities were evaluated by MTT and sulforhodamine B assays respectively in colon adenocarcinoma SW480 cells and their metastatic-derived SW620 cells. Results: Phytochemical analyses revealed presence of tannins, flavonoids and cardiotonic glycosides. Ethanolic extract from leaves showed the best antioxidant activity (EC50 = 0.096 mg/ml) in the DPPH assay and the juice (EC50 = 0.022 mg/ml) for the Hydroxyl free radical-scavenging activity. All extracts inhibited more than 98% the hemolysis induced by H2O2. The aqueous extract from leaves showed the highest cytotoxic activity against SW480 and SW620 cells. Conclusions: Findings from this study suggest that P. edulis is a potential source of phytochemical compounds with antioxidant and antiproliferative properties. RESUMEN: Extractos de varios árboles frutales se han utilizado en diferentes aplicaciones terapéuticas para prevenir el estrés oxidativo asociado a enfermedades crónicas. Objetivo: investigar la actividad antioxidante y antiproliferativa de extractos etanólico y acuosos de las hojas y del fruto de Passiflora edulis. Materiales y métodos: se realizó marcha fitoquímica preliminar, la actividad antioxidante se evaluó por DPPH, actividad de remoción de radicales hidroxilo, actividad antihemolítica y contenido fenólico total. En células de adenocarcinoma de colon SW480 y sus derivadas metastásicas SW620 se evaluó la actividad citotóxica y antiproliferativa por el método de MTT y sulforodamina B respectivamente. Resultados: el análisis fitoquímico reveló la presencia de taninos, flavonoides y glicósidos cardiotónicos. El extracto etanólico de las hojas mostró la mayor actividad antioxidante (EC50 = 0,096 mg/ml) por DPPH y el jugo (EC50 = 0,022 mg/ml) para remover el radical hidroxilo. Todos los extractos inhibieron más del 98% la hemólisis inducida por H2O2. El extracto acuoso de las hojas mostró la mayor actividad citotóxica y antiproliferativa contra células SW480 y SW620. Conclusiones: los hallazgos de este estudio sugieren que P. edulis es una fuente potencial de compuestos fitoquímicos con propiedades antioxidante y antiproliferativa.

PURPOSE To analyze the relation between the cytological findings and telomerase activity (TA). METHODS Cervical samples were evaluated and classified according to the Bethesda System. Telomerase activity was measured total product generated values (TPG) using the TRAP assay (telomeric repeat amplification protocol); data were analyzed statistically using the χ2 test, with the level of significance set at p

En este trabajo se recogen los resultados obtenidos en el estudio de la producción extracelular de la lipasa de Rhizopus oryzae (ROL) expresada en la levadura metilotrófica Pichia pastoris bajo el PAOX1, utilizando una estrategia de alimentación con sustratos mixtos en la etapa de inducción para cultivos semicontinuos, con el fin de evaluar la viabilidad del uso del glicerol crudo como cosustrato en la producción de la lipasa para su posterior uso en la producción enzimática de biodiesel. En primer lugar se consideró la valorización del glicerol crudo obtenido a partir de aceites vegetales naturales y reciclados en la producción de biodiesel como una fuente de carbono para el crecimiento celular y la producción de la ROL. Se concluyó que en los procesos fermentativos con P. pastoris la utilización de glicerol crudo permite el crecimiento de la levadura y además no se evidencia un efecto negativo al utilizar glicerol crudo proveniente de la producción de biodiesel, en términos de rendimiento y velocidad específica de crecimiento. El sistema de expresión de la ROL en P. pastoris utilizando el PAOX1 depende de la utilización del metanol como sustrato inductor. En este trabajo se probaron diversas estrategias de adición de sustratos mixtos en cultivos semicontinuos para evaluar la producción de la proteína recombinante bajo este sistema de expresión. En primera instancia se llevó a cabo una alimentación mixta adicionando pulsos de metanol y alimentación exponencial con un cosustrato (glicerol). En el ensayo inicial, se alimentó con metanol como única fuente utilizando pulsos de metanol. Los resultados muestran que la estrategia de adición de metanol como único sustrato cada 12 horas mediante pulsos, resulta negativo tanto para el crecimiento como para la producción del producto heterólogo. En ensayos posteriores se realizaron cultivos en semicontinuo con una estrategia de alimentación mixta utilizando dos velocidades específicas de crecimiento con adición exponencial preprogramada de glicerol (0.1 y 0.02 h-1) y pulsos de metanol a dos concentraciones (10 y 5 g/L) adicionados a diferentes periodos de tiempo (1, 2, 6, y 12 h). Al utilizar una μ de glicerol de 0.1 h-1 el consumo de metanol se ve afectado, evidenciándose una clara represión del PAOX1. La concentración de los pulsos de metanol y su frecuencia tienen una influencia significativa en la producción del producto heterólogo. Posteriormente, se realizó una alimentación manteniendo fija la concentración de metanol (1.5 y 2 g/L) y el cosustrato siguiendo una alimentación preprogramada para una velocidad específica de crecimiento constante (0.02 h-1 y 0.05 h-1), Los resultados obtenidos mostraron que la producción de ROL en P. pastoris no es comparable entre las cepas Mut+ y Muts, aunque se empleen estrategias de cultivo similares. La presencia del glicerol como cosustrato no mejora la producción, ni la velocidad específica de producción. En las últimas estrategias, se planteó la utilización de sustratos mixtos en una alimentación exponencial preprogramada de glicerol a 0.02 y 0.04 h-1 con metanol para una velocidad específica de crecimiento de 0.02 h-1, y se realizó una comparación utilizando como cosustrato sorbitol a una velocidad de crecimiento de 0.02 h-1 con metanol para la misma velocidad específica de crecimiento. Se observa que el comportamiento de la cepa con sustratos mixtos glicerol y sorbitol a nivel de rendimiento Yp/x y productividad volumétrica presenta un comportamiento parecido al reportado cuando se utiliza metanol como única fuente de carbono. Los resultados de la velocidad específica de consumo de metanol son iguales cuando se utiliza metanol como única fuente de carbono y cuando se utiliza sorbitol como cosustrato, lo que muestra que el sorbitol no ejerce acciones represoras sobre el promotor PAOX1, contrario a lo observado cuando se utiliza glicerol como cosustrato donde el consumo de metanol disminuye 2.6 veces; mostrándose que, a pesar de encontrarse en condiciones limitantes el glicerol reprime al promotor PAOX1. Al utilizar glicerol y metanol como cosustratos se observa un aumento significativo de la actividad proteolítica independientemente de la velocidad específica de crecimiento sobre glicerol, lo que no se observó al utilizar sorbitol como cosustrato. Los niveles de biomasa alcanzados en los cultivos con glicerol como cosustrato son mayores que los alcanzados con sorbitol, por lo que puede ser que haya un mayor efecto de lisis celular en los cultivos con glicerol de forma que se recuperan más contaminantes en el producto final, sobre todo en etapas avanzadas del cultivo, ocasionando una disminución en la actividad específica de la proteína recombinante., In this work the results obtained in the study of the production of extracellular lipase of Rhizopus oryzae (ROL) expressed in the methylotrophic yeast Pichia pastoris under the PAOX1, using a strategy of feeding mixed substrates in the induction stage in semi-continuous cultures are shown. Firstly, the valorization of crude glycerol obtained from natural and recycled vegetable oils in the biodiesel production as a carbon source for cell growth and production of ROL was evaluated. It was concluded that in fermentation processes with P. pastoris using crude glycerol allows the growth of yeast and no negative effect is observed in terms of yield and specific growth rate. The ROL expression system in P. pastoris using the PAOX1 depends on the use of methanol as the inductor substrate. In this work various strategies are tested to evaluate the use of mixed substrates for the production of recombinant protein under this expression system. Preliminarly, it is carried out by adding pulses of methanol and following an exponential feeding of the co-substrate (glycerol). The results show that the strategy of adding methanol pulses as the sole substrate every 12 hours is negative for both, cell growth and production of heterologous product. In subsequent fermentations, semi-continuous cultures using two specific growth rates with preprogrammed exponential addition of glycerol (0.1 and 0.02 h-1) and methanol pulses at two concentrations (10 and 5 g/L) added at different time periods (1, 2, 6, and 12 h) were performed 0.1 h-1 glycerolmethanol consumption is affected, showing a clear repression of PAOX1. The concentration of the methanol pulses and its frequency has a significant influence on the production of the heterologous product. Subsequently, a different strategy was performed by maintaining the methanol concentration (1.5 and 2 g/L) and the co-substrate following a preprogrammed feeding with constant specific growth rate (0.02 h-1 and 0.05 h-1) The results have shown that the production of ROL in P. pastoris is not comparable between the Mut+ and Muts similar strains though cultivation strategies are employed. The presence of glycerol as co-substrate production does not improve the production, and the specific production rate. Finally, the use of mixed substrates was carried out using combined preset exponential feeding of glycerol (0.02 h-1 and 0.04 h-1) with methanol addition for a specific growth rate of 0.02 h-1. A comparison was made with the use of sorbitol as co-substrate at specific growth rate of 0.02 h-1 with methanol addition to let the same specific growth rate. It is noted the the values of Yp/x and volumetric productivity when glycerol and sorbitol are used as mixed substrates are very similar than reported when methanol is used as sole carbon source. The results of the specific rate of methanol consumption are equivalent when methanol is used as sole carbon source and when sorbitol is used as co-substrate, which shows that the sorbitol do not exerts repressive action on the PAOX1 promoter, contrary to what was observed when using glycerol as co-substrate where methanol consumption decreases 2.6 times; stating that, despite being in limiting conditions glycerol PAOX1 represses the promoter. Additionally, by using methanol and glycerol as co-substrates a significant increase in the proteolytic activity regardless of the specific growth rate of glycerol is observed. However, this fact was not observed when using sorbitol as co-substrate. Biomass levels achieved in cultures with glycerol as co-substrate are greater than those obtained with sorbitol, which might led to a greater cell lyses process and so, more contaminants in the final product, specially in later culture steps, causing a decrease in the specific activity of the recombinant protein.

Introducción: El embarazo se acompaña de cambios en el metabolismo materno de las lipoproteínas para satisfacer las demandas nutricionales del feto. El objetivo de este trabajo fue determinar el comportamiento del perfil lipídico durante los diferentes trimestres en una población de gestantes colombianas. Metodología: el colesterol total, las lipoproteínas y los triglicéridos fueron estudiados en 422 mujeres durante los tres trimestres del embarazo. Colesterol, triglicéridos y lipoproteínas fueron medidos en suero por métodos enzimáticos. Resultados: Los triglicéridos (128,2 ± 85,8; 238,6 ± 130,2; 305,1 ± 168,7 mg/dL), el colesterol total (180,3 ± 70,8; 235,8 ± 72,5; 269.9 ± 107,5 mg/dL), las lipoproteínas de muy baja densidad (25,6 ± 17,2; 47,5 ± 25,8; 59,9 ± 31,7 mg/dL) y las lipoproteínas de baja densidad (123,8 ± 69,2; 158,3 ± 77,6; 185 ± 102,6 mg/dL). Las diferencias en las variables fueron estadísticamente significativas trimestre a trimestre (todos las p

El cáncer para poder prosperar en condiciones de suministro deficiente de sangre e hipoxia, debe adaptar su metabolismo, incluido el de los lípidos. Por consiguiente, la desregulación del metabolismo de lípidos en el cáncer implica múltiples aspectos, incluido un aumento de la captación de lípidos, síntesis de ácidos grasos endógenos de novo, oxidación de ácidos grasos y acumulación de colesterol, lo que promueve el crecimiento y la progresión tumoral., 1. Introducción --- _1_ 2. Objetivos de la Investigación --- _15_ 3. Metodología ----_16_ 4. Resultados ---_35 5. Discusión --- _76_, Maestría, Magíster en Ciencias Biomédicas

Introducción. Las lacasas (E.C. 1.10.3.2) son enzimas oxidoreductasas multicobre de gran importancia e interés biotecnológico, debido a su alto potencial oxidativo y a que durante la catálisis generan H₂O en lugar de H2O2. Las lacasas son útiles para remover (a través de la decoloración) colorantes sintéticos, oxidar compuestos fenólicos y degradar pesticidas, entre otros. No obstante, para asumir la producción, comercialización y uso a gran escala de las lacasas, es importante conocer la estabilidad y la vida media de la enzima (t1/2); lo que permitiría proponer condiciones de uso y almacenamiento, ajustadas a las características y origen de cada enzima. Objetivos. Producir a escala de 10 L, la enzima recombinante rPOXA 1B de Pleurotus ostreatus expresada en Pichia pastoris para la remoción de color en agua residual coloreada de laboratorio (CLWW) y conocer la estabilidad a tiempo real y acelerada de la misma. Metodología. Se utilizó la cepa recombinante Pichia pastoris X33/pGAPZaA-LaccPost-Stop (Clon 1) para la expresión de la lacasa POXA 1B (rPOXA 1B) de Pleurotus ostreatus. Se estandarizó la técnica para la detección de la actividad enzimática a través de dos diseños experimentales, un “D-optimal Design” y un “D-optimal Design (irregular)” para identificar las mejores condiciones de deteción en tampón acetato y tampón citrato respectivamente. El complejo enzima-sustrato fue evaluada mediante análisis de acoplamiento molecular empleando Autodock Vina. Luego se llevó a cabo la producción de 3 lotes de rPOXA 1B (L1, L3 y L4) en biorreactor a escala de 10 L con volumen efectivo de trabajo (VET) de 6 L, empleando un medio de cultivo previamente mejorado en nuestro grupo de investigación. Se optimizó (a escala de laboratorio) un medio de cultivo de bajo costo a través de la implementación de tres diseños experimentales; dos “Central Composite Design” (CCD-1 y CCD-2), seguidos de un “One Factor Experimental Design” (OFED). Se demostró (a escala de laboratorio) el efecto de la adición de metanol (CH3OH) después del agotamiento de la glucosa (C6 H12O6) para lo cual se utilizaron cuatro medios de cultivo diferentes con y sin adición de CH3OH. Para los estudios de estabilidad a tiempo real (RTS) con duración de 1 año, se utilizó parte de los concentrados enzimáticos (impuros y sin preservantes) provenientes de los lotes L1, L3 y L4, para lo cual se implementaron cinco temperaturas teóricas, -30, 4, 25, 30, 35 y 40 °C, [243.15, 277.15, 298.15, 303.15, 308.15 y 313.15 K] y utilizando la ecuación de Arrhenius se evaluó la estabilidad acelerada (AS) del concentrado de rPOXA 1B. El RTS fue soportado computacionalmente con estudios de dinámica molecular (MD) a cuatro temperaturas diferentes (-32, 5, 25 y 41°C); [241, 278, 298 y 314 K] muy cercanas a las evaluadas experimentalmente. Otra parte de los concentrados enzimáticos de los lotes L1, L3 y L4 se utilizaron en la remoción de colorantes en aguas residuales coloreadas de laboratorios (CLWW) de prácticas e investigación de la Facultad de Ciencias de la Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, D.C., Colombia. Se realizaron tres procesos (P1, P2 y P3) de remoción, empleando CLWW a 1500 unidades de color (UC), en una Planta Piloto de Tratamiento que consta de un tanque de homogeneización, neutralización y mezcla de 20 L, seguido de un biorreactor de aireación prolongada (flujo turbulento y oxígeno de disolución > 1 mgL-1) de 15 L con 10 L de VET, a temperatura ambiente del laboratorio (~19 ± 3 °C) y con un tiempo de retención hidráulica de 72 h, seguido de dos filtros de arena cuarcítica. Durante el curso de la investigación y de acuerdo a la exigencia de cada metodología, se midió: actividad enzimática (UL-1), concentración de proteínas (mg mL-1), concentración de azúcares reductores (gL-1), actividad específica (Umg-1), biomasa (gL-), velocidad específica de crecimiento µx (h-1), tiempo de duplicación td (h), velocidad máxima de reacción Vmax (mM min-1), constante de Michaelis-Menten KM (mM), productividad (UL-1h-1), carbono total (CT) (mgL-1), nitrógeno total (NT) (mgL-1), relación carbono-nitrógeno C/N, constante de desactivación kd (meses-1), vida media t1/2 (meses), energía de desactivación Ed (kJ mol-1), variación de entalpía H* (kJ mol-1), variación en la energía libre de Gibb´s G* (kJ mol-1), variación de entropía S* (J mol-1K-1), carbono inorgánico (CI) (mgL-1), carbono orgánico total (COT) (mgL-1), demanda química de oxígeno (DQO) (mgL-1), demanda biológica de oxígeno a los 5 días DBO5 (mg L-1), relación COT/NT, relación DQO/COT, pH, unidades de color UC e índice de germinación IG (%). Resultados. El uso de tampón citrato incrementó la afinidad de rPOXA 1B por el sutrato (ABTS) con una KM inferior a la del tampón acetato; las condiciones estandarizadas fueron pH 3.0 ± 0.2; λ420 nm, 2 mM ABTS y los análisis de acoplamiento molecular obtuvo un complejo de unión enzima sustrato con una energía libre de unión de -6.4 KJ mol-1. En biorreactor de 10 L con el medio previamente mejorado se obtuvo 8,506.95 ± 1,993.65 UL-1 con actividad específica de 213.64 ± 55.83 Umg-1 a las 192 h de cultivo, usando tampón citrato. Después de la optimización estadística secuencial se obtuvo un medio (20 gL-1 glucosa USP, 50 g L-1 proteína de soya aislada 90 % (p/p), 11.74 g L-1 extracto de malta, 4.91 gL-1 (NH4)2SO4, 0.16 gL-1 CuSO4 y 0.1 gL-1 cloranfenicol) 89.84 % menos costoso, con una actividad enzimática de 12,877.3 ± 481.2 UL-1 y actividad específica de 1324.58 ± 114.19 U mg-1 en 168 h, lo que significó un incremento en la actividad enzimática del 33.94 % con relación a los resultados en biorreactor de 10 L con medio mejorado. La adición de metanol después del agotamiento de la glucosa tuvo un efecto positivo sobre la actividad enzimática y se obtuvo 14,868.06 ± 461.58 U L-1 con actividad específica de 1597.6 ± 76.28 U mg-1 en 192 h utilizando el medio optimizado de bajo costo, para un incremento de 41 % de la actividad enzimática en comparación con el mismo medio sin adición de metanol. En el RTS se recuperó 101.16, 115.81, 75.23, 46.09, 5.81 y 4.83 % de la actividad enzimática relativa, a las diferentes temperaturas ensayadas. Los estudios de AS mostraron que el concentrado de rPOXA 1B se puede conservar a 240.98  5.38, 277.40  1.32 o 297.53  3.88 K con t1/2 de 230.8, 46.2 y 12.6 meses, respectivamente. Los parámetros cinéticos y termodinámicos respaldaron la alta estabilidad de rPOXA 1B con bajas variaciones de KM y Vmax a temperaturas de 240.98  5.38 y 297.53  3.88 K, Ed de 41.40 KJ mol-1 y valores apropiados de ∆H, ∆G y ∆S. La MD mostró que las fluctuaciones en la estructura 3D de POXA 1B, específicamente en regiones bucle, coils or loops con aminoácidos hidrofílicos o de polaridad intermedia, así como en algunos residuos, se incrementa con el aumento de la temperatura; pasando de 3 residuos fluctuantes (LEU159, ALA391 y ASP429) a 278 K a 6 residuos (THR160, ASP266, GLU293, ALA334, ASP341 y LEU459) a 298 K y a 9 residuos (ASP101, THR160, GLY265, ASN297, ALA334, GLY370, ALA391, PRO393 y ASP433) a 314 K. La remoción de color promedio del CLWW (1500 UC) fue de 96.75 % y se logró la reducción de los parámetros de descarga TOC, TC, DQO y DBO5. Conclusiones. Con el medio optimizado se aumentó la actividad enzimática 33 % con relación al medio previamente mejorado. Se demostró el efecto positivo de añadir CH3OH al cultivo, después del agotamiento de la glucosa, lo que generó un incremento de 41 % en comparación con el medio sin metanol. Es importante destacar que la adición de metanol no es una opción amigable con el medio ambiente, ya que el concentrado enzimático se utiliza impuro y podría contener trazas de metanol, pero resulta de utilidad si se requiere la producción de la enzima pura para usos no ambientales, además, de que rompe con el hábito de utilizar estrictamente glucosa para la expresión de proteínas recombinantes bajo el control del promotor pGAP, como sucede con la mayoría de los trabajos publicados. La lacasa rPOXA 1B es una enzima estable, lo cual fue demostrado experimental y computacionalmente con t1/2 de 230.8, 46.2 ó 12.6 meses, si es conservada impura y sin preservantes a temperaturas de 240.98  5.38, 277.40  1.32 o 297.53  3.88 K respectivamente, lo cual tiene gran utilidad para los grandes productores. El tratamiento secundario de CLWW (1500 UC) con el concentrado de rPOXA 1B generó una remoción de color promedio de 96 % en 72 h de tratamiento con disminución de los parámetros de vertimiento. Introduction. Laccases (EC 1.10.3.2) are multi-copper oxidoreductase enzymes of great importance, and biotechnological interest, due to their high oxidative potential, and the fact that during catalysis they generate H2O instead of H2O2. Laccases are useful for removing (by bleaching) synthetic dyes, oxidizing phenolic compounds, and degrading pesticides, among others. However, to assume the large-scale production, commercialization, and use of laccases, it is important to know the stability, and half-life (t1/2) of the enzyme, which would allow proposing conditions of use, and storage, adjusted to the characteristics, and origin of each enzyme. Objective. To produce at 10 L scale, the recombinant enzyme rPOXA 1B from Pleurotus ostreatus expressed in Pichia pastoris for the removal of color in colored laboratory wastewater (CLWW), and to know its real-time, and accelerated stability. Methodology. The recombinant strain Pichia pastoris X33/pGAPZaA-LaccPost-Stop (Clone 1) was used for the expression of the laccase POXA 1B (rPOXA 1B) from Pleurotus ostreatus. The technique for the detection of enzymatic activity was standardized through two experimental designs, a "D-optimal Design", and a "D-optimal Design (irregular)" to identify the best detection conditions in acetate buffer, and citrate buffer, respectively. The enzyme-substrate complex was evaluated by molecular docking analysis using Autodock Vina. Then, the production of 3 batches of rPOXA 1B (L1, L3, and L4) was carried out in a bioreactor at 10 L scale, with an effective working volume (EWV) of 6L, using a previously improved culture medium in our group of investigation. A low-cost culture medium was optimized (on a laboratory scale) through the implementation of three experimental designs; two “Central Composite Design” (CCD-1, and CCD-2), followed by a “One Factor Experimental Design” (OFED). The effect of the addition of methanol (CH3OH) after depletion of glucose (C6H12O6) was demonstrated (at a laboratory scale) for which four different culture media with, and without addition of CH3OH were used. For the real-time stability studies (RTS) for 1 year, part of the enzyme concentrates (impure and without preservatives) from batch L1, L3, and L4 were used, for which five theoretical temperatures were implemented, - 30, 4, 25, 30, 35, and 40 ° C, [243.15, 277.15, 298.15, 303.15, 308.15, and 313.15 K], and using the Arrhenius equation, the accelerated stability (AS) of the rPOXA 1B concentrate was evaluated. The RTS was computationally supported with molecular dynamics (MD) studies at four different temperatures (-32, 5, 25, and 41ºC); [241, 278, 298, and 314 K] very close to those evaluated experimentally. Another part of the enzyme concentrates from bath L1, L3, and L4 were used in the removal of colorants in colored wastewater from laboratories (CLWW) of practices, and research of the Faculty of Sciences of the “Pontificia Universidad Javeriana, Bogotá, DC, Colombia”. Three removal processes (P1, P2, and P3) were carried out, using CLWW at 1500 color units (UC), in a Pilot Treatment Plant consisting of a 20 L homogenization, neutralization, and mixing tank, followed by a bioreactor prolonged aeration (turbulent flow, and dissolution oxygen > 1 mg L-1) of 15 L with 10 L of EWV, at room temperature of the laboratory (~19 ± 3 °C), and with a hydraulic retention time of 72 h, followed of two quartzite sand filters. During the course of the research, and according to the requirement of each methodology, were measured: enzyme activity (UL-1), protein concentration (mg mL-1), reducing sugar concentration (gL-1), specific activity ( Umg-1), biomass (gL-1), specific growth rate µx (h-1), doubling time td (h), maximum reaction rate Vmax (mM min-1), Michaelis-Menten constant KM (mM), productivity (UL-1h-1), total carbon (TC) (mgL-1), total nitrogen (NT), (mgL-1), carbon-nitrogen C/Nratio, deactivation constant kd (months-1) , half-life t1/2 (months), deactivation energy Ed (kJ mol-1), enthalpy variation H* (kJ mol-1), variation in Gibb's free energy G* (kJ mol-1), entropy change S* (J mol-1K-1), inorganic carbon (CI) (mgL-1), total organic carbon (TOC) (mgL-1), chemical oxygen demand (COD) ( mgL-1), biological oxygen demand at 5 days BOD5 (mgL-1), TOC/NTratio, COD/TOCratio, pH, color units UC, and germination index GI (%). Results. The use of citrate buffer increased the affinity of rPOXA 1B for substrate (ABTS) with a lower KM than that obtained in acetate buffer; the standardized conditions were pH 3.0 ± 0.2; λ420 nm, 2 mM ABTS and molecular docking analysis yielded a binding free energy of -6.4 KJ mol-1. In a 10 L bioreactor with the previously improved medium, 8,506.95 ± 1,993.65 UL-1 was obtained with a specific activity of 213.64 ± 55.83 Umg-1 at 192 h of culture, using citrate buffer. After sequential statistical optimization, a medium was obtained (20 gL-1 glucose USP, 50 gL-1 isolated soy protein 90 % (w/w), 11.74 gL-1 malt extract, 4.91 gL-1 (NH4)2SO4, 0.16 gL-1 CuSO4, and 0.1 gL-1 chloramphenicol) 89.84 % less expensive, with an enzymatic activity of 12,877.3 ± 481.2 UL-1, and specific activity of 1324.58 ± 114.19 Umg-1 in 168 h, which meant an increase of 33.94 % of enzyme activity, in relation to the results obtained at 10 L bioreactor with an improved medium. The addition of methanol after depletion of glucose had a positive effect on the enzyme activity, and 14,868.06 ± 461.58 UL-1 was obtained with a specific activity of 1597.6 ± 76.28 Umg-1 in 192 h using the optimized low-cost medium, for a 41% increase in enzyme activity compared to the same medium without the addition of methanol. In the RTS, 101.16, 115.81, 75.23, 46.09, 5.81, and 4.83 % of the relative enzyme activity were recovered, at the different temperatures tested. AS studies showed that rPOXA 1B concentrate can be stored at 240.98 ± 5.38, 277.40 ± 1.32, or 297.53 ± 3.88 K, with t1/2 of 230.8, 46.2, and 12.6 months, respectively. The kinetic, and thermodynamic parameters supported the high stability of rPOXA 1B with low variations of KM, and Vmax at temperatures of 240.98 ± 5.38, and 297.53 ± 3.88 K, Ed of 41.40 KJ mol-1, and appropriate values of ∆H, ∆G, and ∆S. The MD indicated that fluctuations in the 3D structure of POXA 1B, specifically in loop regions, coils or loops with hydrophilic or intermediate polarity amino acids, as well as in some residues, increases with increasing temperature; going from 3 fluctuating residues (LEU159, ALA391, and ASP429) at 278 K to 6 residues (THR160, ASP266, GLU293, ALA334, ASP341, and LEU459) at 298 K, and to 9 residues (ASP101, THR160, GLY265, ASN297, ALA334, GLY370 ALA391, PRO393, and ASP433) at 314 K. The average of color removal of the CLWW (1500 UC) was 96.75 %, and the reduction of the discharge parameters TOC, TC, COD, and BOD5 was achieved. Conclusions. With the optimized medium, the enzyme activity was increased by 33 % about the previously improved medium. The positive effect of adding CH3OH to the culture, after depletion of glucose, was demonstrated, which generated an increase in enzyme activity of 41% compared to the medium without methanol. It is important to note that the addition of methanol is not an environmentally friendly option, since the enzyme concentrate is used impure, and may contain traces of methanol, but it is useful if the production of the pure enzyme is required for non-environmental uses. Furthermore, it breaks the habit of strictly using glucose for the expression of recombinant proteins under the control of the pGAP promoter, as is the case with most of the published works. Laccase rPOXA 1B is a stable enzyme, which was demonstrated experimentally, and computationally with t1/2 of 230.8, 46.2 or 12.6 months, if it is preserved impure, and without preservatives at temperatures of 240.98 ± 5.38, 277.40 ± 1.32 or 297.53 ± 3.88 K respectively, which is very useful for large scale producers. The secondary treatment of CLWW (1500 UC) with the rPOXA 1B concentrate generated an average of color removal of 96 % in 72 h of treatment with a decrease in the discharge parameters. Doctor en Ciencias Biológicas Doctorado https://orcid.org/0000-0002-1346-5582 https://scienti.minciencias.gov.co/cvlac/visualizador/generarCurriculoCv.do?cod_rh=0000905666

Los cambios en los estilos de vida y en la rutina dietaría de la población mundial parecen ser responsables del incremento observado de las enfermedades metabólicas como el hígado graso, asociada al desarrollo de otras enfermedades como diabetes mellitus tipo II e hiperlipidemia., Objetivos de la investigación 12, Componentes fenólicos y oligosacáridos de los extractos de Passiflora edulis 14, Citotoxicidad y actividad apoptótica de los extractos de hojas y de jugo de Passiflora edulis 29, Efecto de los extractos de Passiflora edulis sobre la actividad de la enzima a-glucosidasa 34, Recomendaciones 72, Doctorado, Doctor en Ciencias Biomédicas

Actualmente se ha incrementado el interés por parte de la medicina en encontrar medicamentos más eficientes y con menos efectos secundarios adversos para el tratamiento de diversas enfermedades., MARCO TEÓRICO 11, ANTECEDENTES 24, PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 26, JUSTIFICACIÓN 28, OBJETIVOS 29, METODOLOGÍA 30, RESULTADOS Y DISCUSIÓN 36, CONCLUSIONES 45, Pregrado, Licenciado en Biología y Educación Ambiental

Estudios han involucrado a los elementos del Sistema Renina Angiotensina Aldosterona (SRAA) en la aparición de trastornos cardiovasculares, por esta razón se ha venido estudiando la actividad de la enzima convertidora de angiotensina (ECA) y su polimorfismo de Inserción/Deleción (I/D). En este trabajo se observó la relación de la presencia de los genotipos del polimorfismo I/D y los niveles de ECA en suero con la presión sanguínea en 1012 personas de la ciudad de Armenia en edades de 8 – 84 años a los cuales se les determinó la presión arterial, el índice de masa corporal (IMC), la actividad de la ECA y el polimorfismo I/D. Estos fueron separados por grupos de edad y género. Para el gen de la ECA: el alelo D (56.22%) y el genotipo ID (45%), fueron los mas frecuentes en la población. La presión sanguínea aumentó con la edad, teniendo una tendencia a ser mayor en hombres. El IMC tuvo el mismo comportamiento de la presión sanguínea a diferencia de las mujeres que tendieron a presentar valores mas altos. Los niveles de ECA en suero disminuyeron a medida que aumentó la edad, tendiendo a ser mas altos en los hombres. Se encontró relación estadísticamente significativa entre el polimorfismo I/D y niveles de ECA en suero, pero solo en los grupos de 11-19 años hombres y mayores de 60 años. Por ultimo, no se encontró relación estadísticamente significativa entre los genotipos del polimorfismo I/D y la presión arterial e IMC en la población estudiada., 1. INTRODUCCIÓN 13 2. OBJETIVOS 16 2.1. General 16 2.2. Específicos 16 3. MARCO TEÓRICO 17 3.1. Presión arterial 17 3.2. Sistema renina angiotensina 21 3.3. Polimorfismo y actividad de eca en suero 28 4. MATERIALES Y MÉTODOS 37 4.1. Tamaño de la muestra 37 4.2. Criterios de Inclusión 37 4.3. Criterios de exclusión 37 4.4. Toma de muestra 38 4.5. Actividad de la ECA en Suero 39 4.6. Extracción de ADN 40 4.7. Polimorfismo ID del gen de la ECA 40 4.8. Análisis de resultados 41 5. RESULTADOS 42 5.1. Datos generales 42 5.2. Frecuencias alélicas y genotípicas de la población 42 5.3. Comportamiento de la presión arterial en la población. 44 5.4. Comportamiento de los niveles de eca sérico en la población. 47 5.5. Índice de masa corporal en la población 48 5.6. Relación entre niveles de eca sérico y presión arterial 50 5.7. Relación entre el polimorfismo I/D, ECA, presión arterial e IMC en la población 51 6. DISCUSIÓN 54, Pregrado, Biólogo

La enzima convertidora de angiotensina (ECA) juega un importante papel en la homeostasis cardiovascular debido a que es la responsable de catalizar el paso de la Angiotensina I a Angiotensina II, un potente vasoconstrictor; a la vez que inactiva la Bradiquinina, una sustancia vasodilatadora. El polimorfismo Inserción/ Deleción (I/D) es una mutación consistente en la deleción o presencia de un fragmento de 287 pb en el intrón 16 del gen de la ECA; que ha sido relacionado con hipertensión, enfermedades cardiovasculares y desarrollo de preeclampsia., 1. RESUMEN 2. INTRODUCCIÓN 2 3. OBJETIVOS 5 3.1. Objetivo general 5 3.2. Objetivos específicos 5 4. ESTADO DEL ARTE 6 5. MARCO TEÓRICO 10 5.1. Sistema renina angiotensina 10 5.2. Enzima convertidora de angiotensina (ECA) 13 5.3. Acciones de la angiotensina II 17 5.4. Polimorfismo I/D del gen de la ECA 18 5.5. Hipertensión y preeclampsia 20 5.5.1. Hipertensión esencial 20 5.5.2. Hipertensión durante el embarazo 20 5.5.3. Preeclampsia 21 6. METODOLOGÍA 24 6.1. Población de referencia 24 6.1.1. Población de estudio 24 6.2. Criterios para la selección de los sujetos de estudio 24 6.2.1 Criterios de inclusión 25 6.2.2. Criterios de exclusión 25 6.3. Fase de consulta 26 6.4. Toma de la muestra 26 6.5. Fase de laboratorio 27 6.6. Definición de las Variables 27 6.6.1. Presión sanguínea 27 6.6.2. Diagnóstico de Preeclampsia 28 6.7. Actividad de la ECA en suero 28 6.8. Determinación del polimorfismo I/D 29 6.8.1. Extracción ADN. 28 6.8.2. Reacción en cadena de la Polimerasa. (PCR) 29 6.8.3. Electroforesis. 29 6.9. Análisis de resultados 30 7. RESULTADOS 31 7.1. Actividad de la enzima convertidora de angiotensina 32 7.1.1. La edad con relación a la presión arterial y los niveles de enzima convertidora de angiotensina 32 7.1.2. El tiempo de gestación con relación a la actividad de la ECA y a la presión arterial 33 7.1.3. La actividad de la ECA y presión arterial. 34 7.1.3.1. Presión arterial sistólica 34 7.1.3.2. Presión arterial diastólica 35 7.1.4. Actividad de la ECA y preeclampsia 36 7.2. Polimorfismo inserción/deleción (I/D) del gen de la ECA 37 7.2.1. Frecuencias alélicas y genotípicas 37 7.2.2. Polimorfismo I/D y la actividad de la ECA 38 7.2.3. Polimorfismo I/D y presión arterial sistólica 39 8. DISCUSION 41 9. CONCLUSIONES 51 BIBLIOGRAFIA 53, Pregrado, Licenciado en Biología y Educación Ambiental