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Orientador: Ronei Jesus Poppi Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Quimica Resumo: Este trabalho trata da aplicação de métodos quimiométricos no desenvolvimento de nova metodologia analítica, sem o auxílio de métodos de separação ou pré-concentração, na análise direta de tetraciclina em leite bovino. Para tanto, foram empregados a técnica de espectroscopia no Infravermelho com transformada de Fourier (FT-IR) e os métodos quimiométricos PLS, iPLS e SIMCA. Foram tomadas amostras de leite desnatado, que foram dopadas com quantidades progressivas de Tetraciclina, Clorotetraciclina e Oxitetraciclina, três dos antibióticos da classe das Tetraciclinas mais comumente usados em medicina veterinária e, portanto, com maior risco de contaminação do leite destinado a consumo humano. Tal dopagem ocorreu de forma a produzir amostras contendo cada uma das tetraciclinas citadas e também amostras contendo a combinação binária das mesmas. Para amostras dopadas com um tipo de tetraciclina, obteve-se uma matriz com 40 amostras, e uma matriz com 36 amostras para amostras contendo a combinação binária das três tetraciclinas. A faixa espectral utilizada na obtenção dos espectros foi de 900 a 1800 cm, correspondente à região do Infravermelho Médio. O SIMCA foi empregado na identificação de amostras, classificando-as como pertencentes às matrizes citadas. O grau de acerto na classificação foi de 100%. A partir da identificação das amostras partiu-se para o desenvolvimento do procedimento de quantificação das tetraciclinas em leite utilizando-se o PLS. A faixa de dopagem das amostras foi de 20 a 500 ppb (parte por bilhão), abrangendo uma ampla faixa, inclusive aquela considerada pelas legislações brasileira, americana e união européia, pois inicialmente não se tinha conhecimento do limite de detecção do método. O iPLS foi utilizado para a identificação e seleção da região espectral com melhor correlação com a quantidade de antibiótico presente na amostra. Os resultados obtidos foram promissores considerando a baixa concentração que se pretendia detectar: para faixas de trabalho acima de 100 ppb os erros de previsão obtidos foram, em média, inferiores a 13% e para a faixa abaixo de 100 ppb foram, em média, inferiores a 18%. Dessa forma, o método desenvolvido, apesar de não ser estritamente quantitativo, atende aos objetivos de detecção rápida, sem pré-tratamento das amostras e geração de resíduos, além de permitir a identificação, em uma amostra desconhecida de leite, do resíduo de tetraciclina presente. Abstract: This work treats of the application of chemometrics methods in the development of new analytical methodology, without the aid of separation methods or pre-concentration, in the direct analysis of tetracycline in bovine milk. For this purpose, it was used the Infrared Spectroscopy with transformed of Fourier (FT-IR) and the chemometrics methods PLS, iPLS and SIMCA. Samples of skimmed milk were doped with progressive amounts of Tetracycline, Chlortetracycline and Oxitetracycline, three of the antibiotics of the class of Tetracycline more commonly used in veterinary medicine and, therefore, with larger risk of contamination of the milk destined to human consumption. This procedure was adapted to produce samples containing each one of the mentioned tetracycline and also samples containing the binary combination of the same ones. For samples doped with a tetracycline type, it was obtained a matrix with 40 samples, and a matrix with 36 samples for samples containing the binary combination of the three tetracyclines. The spectral range used for the spectra obtaining was 900 to 1800 cm, corresponding to the Medium Infrared region (MIR - Mid Infrared). The SIMCA method was used in the identification of samples, classifying them as belonging to the mentioned matrix. The success degree in the classification was of 100%. For the identification of the samples, the next step was the development of the procedure of quantification of the tetracyclines in milk using the PLS method. The range of dope of the samples was from 20 to 500 ppb (parts per billion), including a wide range, considered by the Brazilian legislations, American and European Union, because initially there was not knowledge of the limit of detection of the method. The iPLS was used for the identification and selection of the spectral range with better correlation with the amount of presented antibiotic in the sample. The obtained results were promising considering the low concentration that was intended to detect: for concentration above 100 ppb, the errors obtained were, on average, less than 13% and for concentration below 100 ppb were, on average, less than 18%. In that way, the developed method, in spite of not being strictly quantitative, assists to the objectives of fast detection, without pre-treatment of the samples and generation of chemical residues, allowing the identification, in an unknown sample of milk, of the residue of present tetracycline. Mestrado Química Analítica Mestre em Química

Orientador: Dr. Luciano Paulino da Silva Coorientadora: Profa. Dra. Helena Hiemisch Lobo Borba Dissertação (mestrado) - Universidade Federal do Paraná, Setor de Ciências da Saúde, Programa de Pós-Graduação em Ciências Farmacêuticas. Defesa : Curitiba, 30/09/2021 Inclui referências: p. 78-92 Área de concentração: Insumos, Medicamentos e Correlatos Resumo: Antibióticos têm sido essenciais para a humanidade desde a sua descoberta. No entanto, diversos problemas têm levado à chamada crise dos antibióticos, em especial o surgimento de resistência bacteriana. Para controlar a resistência, o uso racional de compostos antibacterianos na medicina humana e na medicina veterinária é indispensável. As consequências do uso de antibióticos na pecuária vão além do desenvolvimento de resistência. Os alimentos de origem animal, em especial o leite, podem conter resíduos de antibióticos e colocar em risco a saúde dos consumidores, por isso, esses fármacos devem estar sempre em concentrações abaixo dos limites estabelecidos e considerados seguros pelas agências reguladoras. Para que esses limites sejam cumpridos, metodologias analíticas sensíveis e com alta seletividade são necessárias para detecção dessas moléculas e seus metabólitos derivados. Nos últimos anos, o avanço da nanotecnologia trouxe diversas inovações no campo analítico instrumental e, apesar de não serem citados ainda nos regulamentos técnicos e legislativos, muitos estudos têm desenvolvido novas metodologias com aplicações nanotecnológicas para detecção de antibióticos no leite e seus derivados. Para reunir, caracterizar e explorar as evidências atuais sobre esses métodos, o presente estudo consistiu em uma revisão sistemática sobre o tema. Para isso, foram pesquisados em bases de dados eletrônicas estudos contendo descritores relativos a "antibióticos", "métodos analíticos" e "leite e derivados" com as suas respectivas variações. As bases de dados utilizadas foram Pubmed, Web of Science e Scopus. As etapas de triagem, elegibilidade e extração de dados foram realizadas por dois revisores de maneira independente. Foram coletados os dados gerais dos estudos, como data de publicação, técnica analítica e aplicação nanotecnológica, bem como os dados de validação, levando em consideração os guias de validação do Ministério da Agricultura Pecuária e Abastecimento (MAPA) e guias de agências internacionais como do Food and Drug Administration (FDA). Na etapa de compilação e síntese dos dados, foram elaborados gráficos e tabelas para ilustrar e agrupar as características dos estudos e os resultados obtidos foram também apresentados de forma descritiva. Além disso, cada um dos parâmetros de validação foi discutido quanto à concordância com os guias de validação empregados atualmente. Um total de 5.174 estudos foram encontrados, dos quais 38 estudos que atenderam todos os critérios de inclusão foram selecionados para a extração de dados. Os resultados apontaram que o antibiótico mais avaliado pelas metodologias desenvolvidas foi o cloranfenicol, seguido da sulfadiazina, tetraciclina e enrofloxacina. A técnica analítica mais utilizada foi a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) associada ao uso da nanotecnologia, sendo que a aplicação nanotecnológica mais frequente foi para etapa de preparação da amostra com a extração em fase sólida (EFS). Os dados relacionados com a validação estiveram na maioria dos casos dentro dos limites impostos pelos guias, mas os critérios mais conceituais se mostraram pouco homogêneos entre os estudos, dificultando comparações diretas. Com isso, esse estudo visa nortear os pesquisadores da área de desenvolvimento de metodologias analíticas para detecção de antibióticos, mas também os órgãos responsáveis pela regulamentação, monitoramento e fiscalização da presença de resíduos de antibióticos no leite e derivados. Palavras-chave: resíduos de antibióticos; leite bovino; metodologias analíticas; nanotecnologia; validação de métodos; revisão sistemática. Abstract: Antibiotics have been essential to mankind since their discovery. However, the last decades have evolved into the so-called antibiotic crisis, in particular with the emergence of bacterial resistance. The rational use of antibacterials, both in human and in veterinary medicine, is essential to control resistance spread. The consequences of the use of antibiotics in farm animals go beyond the development of resistance. Foods of animal origin, milk in particular, can carry antibiotic residues that can endanger the health of consumers, so these drugs must always be within the limits determined and considered safe. For these limits to be met, analytical methodologies with high selectivity are required for these molecules. In recent years, the advance of nanotechnology has brought innovations in the instrumental analytical field and, despite not being mentioned in technical and legislative bodies, many studies have developed new methodologies with nanotechnology applications for detecting antibiotics in milk and dairy products. To gather, characterize and summarize evidence on these methods, this scientific study is a systematic review on this topic. For this, bibliographical references were searched in electronic databases with the descriptors of "antibiotics", "analytical methods" and "milk and dairy products" along with their variations. The databases used were Pubmed, Web of Science and Scopus. The screening, eligibility and data extraction steps were performed by two reviewers independently. General data were collected, such as publication data, analytical technique and nanotechnology application, as well as validation data taking into account the validation guide of the Ministry of Agriculture and international guides such as the Food and Drug Administration (FDA) guidance. In the data synthesis stage, graphs and tables were created to illustrate and group the characteristics of the studies and the results were provided descriptively. In addition, each of the validation parameters was discussed in terms of agreement with the validation guidelines. A total of 5,174 studies were found, of which 38 studies that met all inclusion criteria were selected for data extraction. The results showed that the antibiotics most evaluated by the developed methodologies were chloramphenicol, followed by sulfadiazine, tetracycline and enrofloxacin. The most used analytical technique was high performance liquid chromatography (HPLC) associated with the use of nanotechnology, and the most frequent application of nanotechnology was for the sample preparation step with solid-phase extraction (EFS). The data relating to validation were, in most cases, within the limits imposed by the guides, but the more conceptual criteria were not very homogeneous among the studies. Thus, this study aims to guide researchers in the area of development of analytical methodologies for the detection of antibiotics, but also the bodies responsible for the regulation and monitoring of antibiotic residues in milk and dairy products.

Bacteria of Mollicutes Class are associated with intramammary infection and decrease in milk production. This study investigated the occurrence of Mollicutes and elucidated their risk factors in dairy herds from Southeast Brazil. For this, milk samples from 387 lactation cows from Minas Gerais, Rio de Janeiro and São Paulo States were subjected to the polymerase chain reaction (PCR) to detect Mollicutes. Species of Mycoplasma were investigated in Mollicutes positive samples by PCR, including Mycoplasma bovis, M. alkalescens, M. bovigenitalium, M. bovirhinis, M. arginini and A. laidlawii. An epidemiological questionnaire was applied to collect data on possible risk factors, which were assessed using Pearson’s Chi-square test followed by odds ratio (P≤0.05). Mollicutes were reported in 21% (4/19) of the herds and 4% (16/387) of the animals, while 1% (5/387) were positive for M. bovis and 3% (11/387) for M. arginini. All samples were negative to the other agents. Herds with more than 150 animals [OR=3.51 (95% CI 1.11-11.08)], manual milking [OR=9.97 (95% CI 2.80-35.49)] and not-milking animals with mastitis last [OR=6.54 (95% CI 1.92-22.29)] were risk factors. The presence of these conditions may favor intramammary infection by Mollicutes in dairy herds from Southeast Brazil. This is the first report of M. bovis in Rio de Janeiro and M. arginini in the studied states. RESUMO: Bactérias da Classe Mollicutes estão associadas à infecção intramamária e diminuição da produção leiteira. O objetivo deste estudo foi investigar a ocorrência de Mollicutes e elucidar seus fatores de risco em rebanhos leiteiros do sudeste brasileiro. Para isso, amostras de leite de 387 vacas em lactação dos estados de Minas Gerais, Rio de Janeiro e São Paulo foram submetidas à reação em cadeia da polimerase (PCR) para detectar Mollicutes. Espécies de Mycoplasma foram investigadas nas amostras positivas por PCR, incluindo Mycoplasma bovis, M. alkalescens, M. bovigenitalium, M. bovirhinis, M. arginini e A. laidlawii. Foi aplicado um questionário epidemiológico para a coleta de dados sobre possíveis fatores de risco, que foram avaliados pelo teste de Qui-Quadrado de Pearson seguido de odds ratio (P≤0.05). Mollicutes foram detectados em 21% (4/19) dos rebanhos e 4% (16/387) dos animais, enquanto 1% (5/387) destes foram positivos para m. bovis, 3% (11/387) para m. arginini, sendo todas as amostras negativas para os demais agentes. Rebanhos com mais de 150 animais [OR=3,51 (95% IC 1,11-11,08)], ordenha manual [OR=9,97 (95% IC 2,80-35,49)] e ausência de linha de ordenha [OR=6,54 (95% IC 1,92-22,29)] foram considerados fatores de risco. A presença dessas condições pode favorecer a infecção intramamária por Mollicutes em rebanhos leiteiros no sudeste do Brasil. Este é o primeiro relato de M. bovis no Rio de Janeiro e M. arginini nos estados estudados.

The indiscriminate use of antibiotics in dairy cattle without complying with the waiting period results in residual contamination, whose effective control in produced milk requires validated methods toensure analytical results. The aim of this study was to optimize and validate the HPLC-UV/VIS method at 365 nm for analyzingthe tetracycline in pasteurized cow milk in accordance with the European Community (2002/657/EC). Spiked milk with analytes (oxytetracycline, tetracycline, doxycycline, and chlortetracycline) was submitted to deproteinization and cleaning by a C18 solid-phase column and analyzed by HPLC using a gradient system with 0.01 mol L?1 oxalic acid-acetonitrile-triethylamine (90:9.9:0.1) and acetonitrile on a reverse phase (C18) column. Accuracy and precision were assessed by adding analytes to levels of 0.5, 1, and 1.5 times the permissible maximum limit allowed in Brazil. The method presented selectivity with a decision limit (CC?) and detection capability (CC?) ranging from 114.2 to 143.7 and from 129.3 to 188.7 µg kg?1, respectively. The recovery of tetracyclines was higher than 82.5% with a precision of 7.1%, demonstrating theefficiency in determining tetracycline residues in cow milk.

O leite bovino e um dos alimentos mais consumidos pela populacao brasileira e um dos grandes responsaveis pelo crescimento da economia nacional. Rico em gorduras, carboidratos, proteinas, agua e calcio, o leite promove beneficios para seus consumidores. Por todas as suas caracteristicas de composicao fisico-quimicas, ele e tambem um excelente meio de cultivo para diversos micro-organismos. Para minimizar os riscos de disseminacao de Doencas Transmitidas por Alimentos (DTAs) atraves dessa contaminacao microbiologica, o leite deve atender aos parâmetros exigidos pela Instrucao Normativa n° 62/2011 estabelecida pelo Ministerio da Agricultura, Pecuaria e Abastecimento, vigente atualmente. O comercio informal do leite e a inadequacao aos parâmetros mencionados elevam o risco de intoxicacoes alimentares, sobretudo pela sua contaminacao por agentes patogenos e possiveis toxinas produzidas, como e o caso do Staphylococcus aureus. A manipulacao e forma de obtencao estao diretamente ligadas a qualidade do produto e consequentemente a saude do consumidor uma vez que a ingestao de leite sem comprovada qualidade higienico-sanitaria esta associada ao aumento do numero de surtos alimentares, sobretudo aos de intoxicacao associadas as bacterias S. aureus produtoras de enterotoxinas termorresistentes pre-formadas no alimento que assumem relevância para a saude publica em virtude do risco de sua veiculacao ao homem. Diante disto, esta revisao de literatura teve como principal objetivo salientar a importância da adequacao do leite a IN n° 62/2011 assim como destacar um patogeno comumente encontrado nesse alimento que e atrelado as mas condicoes de higiene durante a cadeia produtiva do leite, o S. aureus.

Trabalho não financiado por agência de fomento, ou autofinanciado O leite é uma das vias de eliminação de resíduos de antiparasitários e agrotóxicos que podem afetar a saúde dos consumidores. Sendo assim, objetivou-se verificar a presença de resíduos de antiparasitários e agrotóxicos em leite bovino no Rio Grande do Norte. Foram coletadas 35 amostras de leite, 15 pasteurizados comercializadas formalmente e 20 in natura, comercializadas informalmente para análises de resíduos. Foram utilizadas a Cromatografia Líquida acoplada à Espectrometria de Massas (LC-MS/MS) para detecção de resíduos de antiparasitários e Cromatografia Gasosa acoplada à Espectrometria de Massas (GC-MS/MS) para detecção de resíduos de agrotóxicos. Observou-se ausência de resíduos de antiparasitários nas 35 amostras analisadas. Em relação a determinação de agrotóxicos, as 23 amostras analisadas foram consideradas satisfatórias, abaixo do Limite Máximo de Resíduo (LMR). Foram detectados e quantificados resíduos de agrotóxicos em cinco amostras de leite (22%), três pasteurizado (60%) e duas (40%) in natura com sete (6,6%) compostos químicos. Foi detectada a presença de resíduos de agrotóxicos proibidos no leite como flusilazol, penconasol e tebufempirade, o que indica um alerta em relação à qualidade do produto e a saúde dos consumidores, bem como a necessidade de um maior controle na entrada e comercialização destes produtos no Brasil Antiparasitics and pesticides residues are expelled through the milk, what may affect consumers’ health. The aim of this research was to determine the presence of antiparasitics’ residues and pesticides on the cows’ milk produced in Rio Grande do Norte. A quantity of 35 samples of milk were collected, being 15 whole pasteurized, formally commercialized, and 20 raw milk, informally commercialized. In order to detect antiparasitics residues, the Liquid Chromatography coupled with Mass Spectrometry (LC-MS/MS) method was carried, as well as the and Gas Chromatography coupled with Mass Spectrometry (GC-MS/MS) method was used to detect pesticides residues. After data analysis, no antiparasitic residues were found on the analyzed samples. Regarding the pesticides determination, the 23 milk analyzed samples were considered adequate, being under the Maximum Residue Limits (MRL). Pesticides residues were detected and quantified in five (22%) milk samples, being three (60%) in whole pasteurized milk and two (40%) in raw milk, with seven (6,6%) chemical compounds. Pesticides like flusilazole, penconazole and tebufenpyrad, that are prohibited, were found on the milk, what can be a warning related to the quality of the product and the consumers health, as well as the need of a more efficient control system in what regards the entry and trading of these products in Brazil

Submitted by Amanda Bezerra Bertolini (amanda-bezerra@hotmail.com) on 2018-05-29T15:07:52Z No. of bitstreams: 1 dissertação AMANDA B BERTOLINI (1).pdf: 2410380 bytes, checksum: 12da15b860b33f4ab623708b4595482b (MD5) Approved for entry into archive by Maria Lucia Martins Frederico null (mlucia@fca.unesp.br) on 2018-05-29T18:25:39Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bertilini_ab_me_botfca_par(1).pdf: 449731 bytes, checksum: 1d2d3d0814669e06184904a104bb736e (MD5) Made available in DSpace on 2018-05-29T18:25:39Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bertilini_ab_me_botfca_par(1).pdf: 449731 bytes, checksum: 1d2d3d0814669e06184904a104bb736e (MD5) Previous issue date: 2018-04-12 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) O leite e seus derivados são bons meios para o desenvolvimento de microorganismos patogênicos e deteriorantes, exigindo cuidados rigorosos com a ordenha, processamento e armazenamento. Entre os vários grupos de bactérias que podem ser desenvolvidas em leite refrigerado cru, Yersinia enterocolitica, um enteropatógeno invasivo para humanos, é uma delas. Esta bactéria pode causar a uma série de sintomas clínicos intestinais e extraintestinais, variando de gastroenterite leve a linfadenite mesentérica, semelhante a apendicite. Para avaliar a prevalência de Yersinia enterocolitica patogênica no leite cru de tanques de expansão localizados no estado de São Paulo, foram avaliadas 102 amostras de leite bovino, pelas análises microbiológicas, seguido de provas bioquímicas; a Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e sequenciamento genético. Não houve o isolamento de Yersinia enterocolitica pelas provas microbiológicas. A análise de PCR revelou seis (6) amostras positivas para Yersinia enterocolitica (5,9%), confirmadas por sequenciamento genético. Somente o gene inv, foi detectado, presente em cepas virulentas e avirulentas. Portanto, ainda que o patógeno estudado não represente um risco potencial nas amostras de leite analisadas neste estudo, foram observados diversos fatores de risco nas fazendas visitadas e uma grande contaminação da microbiota presente no leite, podendo-se afirmar que a qualidade do leite cru em tanques de expansão das fazendas avaliadas é de risco para a saúde pública. Milk and its byproducts are good means for the development of pathogenic and deteriorating microorganisms, demanding rigorous care with milking, processing and storage. Among the various groups of bacteria that can be grown in raw refrigerated milk, Yersinia enterocolitica, an invasive enteropathogen for humans, is one of them. This bacterium can cause a number of intestinal and extraintestinal clinical symptoms, ranging from mild gastroenteritis to mesenteric lymphadenitis, similar to appendicitis. To evaluate the prevalence of pathogenic Yersinia enterocolitica in raw milk from bulk tanks milk located in the state of São Paulo, 102 bovine milk samples were evaluated by microbiological analysis, followed by biochemical tests; the Polymerase Chain Reaction (PCR) and genetic sequencing. There was no isolation of Yersinia enterocolitica by microbiological tests. PCR analysis revealed six (6) positive samples for Yersinia enterocolitica (5.9%), confirmed by genetic sequencing and later, identification of virulence genes by PCR. Only the inv gene, present in virulent and avirulent strains, was found. Therefore, although the pathogen studied does not present a potential risk in the milk samples analyzed in this study, several risk factors were observed in the farms visited and a great contamination of the microbiota present in the milk, and it can be stated that the quality of raw milk in tanks of the farms evaluated is a risk to public health. 2016/03582-9

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Aflatoxin M1 and polychlorinated biphenyls (PCBs) are toxic compounds and carcinogenic to humans. Both have their widespread occurrence through milk in a significant way. Milk is an important source of human exposure to these compounds also due to its expressive consumption worldwide, either in the fluid form or dairy prodtucs, mainly by young and elderly. Organic milk is geting space and preference for many consumers, since its production is standardized and can be certified according to animal welfare, sustainability, non-use of antibiotics, synthetic medicines and homones, for example, with a view to obtaining products without residues. In this study, 84 milk samples were investigated in total, and 63 (75 %) were contaminated with aflatoxin M1 above the limit of detection. No difference was observed between the samples from organic and conventional systems. There was no difference between pasteurized and raw milk samples. None of the samples contained aflatoxin M1 above the maximum level permitted by Brazilian Legislation (0,5 μg/kg for fluid milk). The levels of eleven congeners of polychlorinated biphenyls (PCBs) were evaluated in 60 samples of organic and conventional milk collected in three regions of Brazil. The congeners of four DL-PCBs investigated were not detected in any sample of milk analyzed. The results confirm the occurrence of low contamination by PCBs 153 and 180 in the two production systems, with a significant difference in the mean concentration detected for PCB 153 in conventional milks PCB 153 was present in average concentrations of 0.46 ng g-1 fat in organic milks and 1.12 ng g-1 fat in the conventional samples analyzed. PCB 180 was detected at mean concentrations of 0.12 ng g-1 fat and 0.18 ng g-1 fat in organic and conventional samples, respectively. These detected levels were in line with European legislation (40 ng g-1 for sum of indicator PCBs). PCB 153 was present in average concentrations of 0.46 ng g-1 fat in organic milks and 1.12 ng g-1 fat in the conventional samples investigated. There was no significant difference between the occurrence of PCB 153 and PCB 180 in raw and pasteurized milks. PCB 153 was detected in 50% of the conventional milk samples and in 13.33% of the organic samples analyzed. PCB 180 was detected in 10% of the conventional samples and in 6.66% of the organic milk samples analyzed.The levels detected were in accordance with the european legislation. The estimated daily intake (EDI) of aflatoxin M1 e PCBs through organic and conventional milk consumption was also evaluated. In this study, the EDI-values for aflatoxin M, PCB 153 e PCB 180 did not pose a toxicological risk for the population. However, it is suggested to consider the data obtained, especially in milks from organic production, as an impact factor on organic quality. In this sense, the systematic monitoring can be as a subsidy to the evaluation of the risk involved in the consumption of milk against the contamination by AM1 and POPs of hight toxicity, such as PCBs. To our best knowledge, this is the first report on aflatoxin M1 and PCBs levels in organic milk from Brazil. Aflatoxina M1 e bifenilos policlorados (PCBs) são compostos tóxicos carcinogênicos para humanos e ambos tem sua ocorrência difundida pelo leite de modo significativo. Assim, o leite constitui-se em importante fonte de exposição humana a esses compostos também pelo seu expressivo consumo à nível mundial, seja na forma fluida ou de derivados, principalmente por jovens e idosos. O leite orgânico vem ganhando espaço e preferência por muitos consumidores, uma vez que sua produção está normatizada e pode ser certificada conforme preceitos de bem estar animal, sustentabilidade, não utilização de antibióticos, medicamentos sintéticos e homônios, por exemplo, na perspectiva de obtenção de produtos isentos de resíduos. Neste estudo, um total de 84 amostras de leites foram investigadas em relação à ocorrência de AM1 e 63 (75%) confirmaram-se contaminadas acima do limite de detecção. Não foram observadas diferenças significativas na contaminação entre amostras produzidas em sistemas convencionais e orgânicos. Também não houve diferença significativa na ocorrência de contaminação por AM1 entre leites pasteurizados ou crus analisados. Nenhuma das amostras apresentou contaminação acima dos limites máximos permitidos pela legislação brasileira (0,5 μg/kg para leite fluido). Por sua vez, os níveis de onze congêneres de bifenilos policlorados (PCBs) foram avaliados em 60 amostras de leites convencionais e orgânicos coletados em três regiões do Brasil. Os congêneres de quatro DL-PCBs investigados não foram detectados em nenhuma amostra de leite analisada. Os resultados obtidos confirmaram a ocorrência de baixa contaminação pelos PCBs 153 e 180 nos dois sistemas de produção, havendo diferença significativa na concentração média detectada para o PCB 153 nos leites convencionais. PCB 153 apresentou-se em concentrações médias de 0,46 ng g-1 de gordura nos leites orgânicos e de 1,12 ng g-1 de gordura nas amostras convencionais analisadas. O PCB 180 foi detectado em concentrações médias de 0,12 ng g-1 de gordura e 0,18 ng g-1 de gordura em amostras orgânicas e convencionais, respectivamente. Esses níveis detectados estavam de acordo com o permitido pela legislação europeia (40 ng g-1 para somatório de PCBs indicadores). O PCB 153 foi detectado em 50% das amostras de leite convencionais e em 13,33% das amostras orgânicas analisadas. Já o PCB 180 foi detectado em 10% das amostras convencionais e em 6,66% das amostras de leite orgânico analisadas. Não houve diferença significativa entre a ocorrência do PCB 153 e do PCB 180 em leites crus e pasteurizados. A ingestão diária estimada (IDE) de AM1 e PCBs pelo consumo de leites convencionais e orgânicos do Brasil também foi avaliada. Neste estudo, a ingestão diária estimada de AM1, PCB 153 e PCB 180 pelo consumo de leites convencionais e orgânicos não representam um risco toxicológico para a população. Porém, sugere-se a consideração dos dados obtidos e o monitoramento sistemático como subsídio à avaliação do risco benefício envolvido no consumo de leite frente à contaminação por AM1 e por POPs de expressiva toxicidade, como os PCBs. Este estudo foi o primeiro a reportar níveis de AM1 e PCBs em leites orgânicos do Brasil.

Orientador: Flavia Maria Netto Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Engenharia de Alimentos Resumo: O leite bovino e um dos alimentos mais alergenicos para criancas na primeira fase da infancia, sendo as caseinas e as duas principais proteinas do soro - ¿¿- lactoalbumina (¿¿-la) e ¿À-lactoglobulina (¿À-lg) - os principais alergenos desse alimento. Recentemente, a complexacao de proteinas com compostos fenolicos comecou a ser investigada como uma estrategia para reducao da alergenicidade de alguns alimentos, como ovo e amendoim. Entretanto, estudos sobre a complexacao de proteinas do leite com compostos fenolicos com vistas a reducao da alergenicidade ainda sao escassos. Compostos fenolicos podem interagir com proteinas e formar complexos soluveis ou insoluveis. Essas interacoes podem acarretar alteracoes em sitios especificos da proteina que se ligam ao anticorpo, o que pode resultar em reducao da alergenicidade. O objetivo do presente trabalho foi avaliar o efeito da complexacao, com acido cafeico (AC) ou com epigalocatequina galato (EGCG), na alergenicidade do isolado proteico do soro de leite (IPS). Para isso, IPS foi complexado com AC ou EGCG em pH 3,5 e 7,0 a 25 ¿C em diferentes relacoes moleculares (proteina: composto fenolico) . 1:1; 1:0,5; 1:0,2 e 1:0,1. As modificacoes estruturais das proteinas do IPS foram investigadas por espectroscopia de fluorescencia, calorimetria de titulacao isotermica (ITC), dicroismo circular (CD) e hidrofobicidade superficial (S0), e a alergenicidade dos complexos foi avaliada por ELISA. Os complexos IPS-compostos fenolicos apresentaram quenching de fluorescencia acompanhado de red-shift, entalpia negativa e reducao da S0, evidenciando interacoes de natureza hidrofobica entre os dois compostos. Alem disso, mudancas na estrutura secundaria e aumento da estabilidade termica foram demonstradas por CD. Os complexos IPS-EGCG produzidos em ambos os valores de pH apresentaram reducao da capacidade de ligacao a IgE especifica a ¿À-lg e BSA. A capacidade de sensibilizacao oral dos complexos produzidos em pH 3,5 foi investigada utilizando camundongos C3H/HeJ. Os camundongos tratados com IPS-AC-3,5 apresentaram reducao dos niveis de IgE, IgG1 e IgG2a especificos as proteinas do IPS, enquanto os camundongos tratados com IPS-EGCG-3,5 apresentaram reducao dos niveis de IgG2a especifica ao IPS. Ambos os complexos foram capazes de reduzir os niveis de mMCP-1 no soro dos animais, avaliada por ELISA, evidenciando reducao da degranulacao de mastocitos. O tratamento com IPS-EGCG-3,5 resultou em aumento das populacoes de celulas T CD4+ IFN-¿Á+ (Th1), CD4+ IL-10+ (Th2), CD4+ FoxP3+ LAP- e CD4+ IL-17A (Th17) analisadas por citometria de fluxo, enquanto o tratamento com IPS-CA-3,5 resultou em aumento das populacoes de T CD4+ LAP+ (TGF-¿À1) FoxP3+ e CD4+ IL-17A (Th17). Esses resultados sugerem que o tratamento oral com os complexos induz tolerancia oral, porem por mecanismos moleculares diferentes. Alem disso, a capacidade de modulacao da degranulacao de mastocitos in vitro foi tambem avaliada utilizando celulas basofilas de linhagem leucemica de ratos (RBL-2H3). O complexo IPS-EGCG-3,5 reduziu a degranulacao in vitro de celulas RBL-2H3 previamente sensibilizadas com anticorpo IgE anti-DNP, indicando que este complexo apresenta capacidade antialergica. Em conjunto, os resultados indicam que a complexacao do IPS com AC ou EGCG nao somente reduziu a alergenicidade das proteinas devido as modificacoes de suas estruturas, mas tambem resultou na formacao de complexos com capacidade antialergica possivelmente em funcao da manutencao das propriedades bioativas dos compostos fenoli Abstract: Cow¿s milk is one of the most allergenic foods to children during the early childhood and the caseins and the two main whey proteins - á-lactoalbumin (á-la) e â- lactoglobulin (â-lg) ¿ are its main allergens. Recently, the complexation of proteins with phenolic compounds started to be investigated as a strategy to reduce the allergenicity of some foods, such as egg and peanut. However, studies about the complexation of milk proteins with phenolic compounds in order to reduce the milk proteins allergenicity are scarce. Phenolic compounds can interact with proteins and form soluble or insoluble complexes. These interactions could cause modifications on specific portions which bind to antibody which may result in allergenicity reduction. The aim of the present work was to evaluate the effect of complexation with caffeic acid (CA) or epigallocatechin gallate (EGCG) on the allergenicity of whey protein isolate (WPI). For this purpose, WPI was complexed with CA or EGCG at pH 3.5 or 7.0/25 °C in different WPI: phenolic compound molar ratios ¿ 1:1; 1:0.5; 1:0.2 and 1:0.1. Structural changes of WPI were investigated by fluorescence spectroscopy, isothermal titration calorimetry (ITC), circular dichroism (CD) and surface hydrophobicity (S0), and the complexes allergenicity was analyzed by ELISA. The WPI-phenolic compounds complexes showed fluorescent quenching, accompanied by red-shift, negative exothermic enthalpy and reduction of S0, evidencing interactions from hydrophobic nature between the compounds. Additionally, changes in secondary structure pattern and increase in thermal stability were demonstrated by circular dichroism. WPI-EGCG complexes obtained in both pH conditions showed decreased IgE-binding capacity to â- lg and BSA. The oral sensitization capacity of complexes produced at pH 3.5 was investigated using C3H/HeJ mice. The mice treated with WPI-CA-3.5 showed reduced levels of WPI-specific IgE, IgG1 and IgG2a, while mice treated with WPI-EGCG-3.5 showed reduced levels of WPI-specific IgG2a. Both complexes were capable to reduce the levels of mMCP-1 in the animals¿ serum, analyzed by ELISA, indicating a reduction of mast cells degranulation. The treatment with WPI-EGCG-3.5 resulted in increased frequency of CD4+ IFN-ã+ (Th1), CD4+ IL-10+ (Th2), CD4+ FoxP3+ LAP- and CD4+ IL- 17A (Th17) T cells, analyzed by flow cytometry, whereas treatment with WPI-CA-3.5 resulted in increased frequency of CD4+ LAP+ (TGF-â1) FoxP3+ and CD4+ IL-17A (Th17) T cells. These results suggest that oral treatment with both complexes induce oral tolerance, however by different molecular mechanisms. Moreover, the modulation capacity of mast cells degranulation was analyzed in vitro using a rat basophilic leukemia cell line (RBL-2H3). WPI-EGCG-3.5 reduced in vitro degranulation of RBL- 2H3 cells previously sensitized with anti-DNP IgE, indicating that this complex shows an anti-allergic capacity. Taken together, the results indicate that the complexation of WPI with CA or EGCG not only reduced the proteins allergenicity due to modifications of their structures but also formed complexes with anti-allergic capacity possibly owing to the maintenance of phenolic compounds bioactive properties Doutorado Nutrição Experimental e Aplicada à Tecnologia de Alimentos Doutora em Alimentos e Nutrição FAPESP 2015/26586-7 CAPES

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Milk and its derivatives are good substrates for the proliferation of pathogenic and quality-deteriorating microorganisms, demanding rigorous care with milking, processing, and storage. Among the various bacteria that can grow in raw refrigerated milk, Yersinia enterocolitica, is an invasive enteropathogen of humans. This bacterium can cause a number of intestinal and extraintestinal clinical symptoms, ranging from mild gastroenteritis to mesenteric lymphadenitis, similar to appendicitis. To evaluate the prevalence of pathogenic Yersinia enterocolitica in raw milk from bulk milk tanks located in the State of São Paulo, 102 bovine milk samples (one per dairy farm) were evaluated by microbiological analyses, followed by biochemical tests PCR and genetic sequencing. Microbiological testing did not isolate Y. enterocolitica. However, PCR analysis revealed six samples that were positive for Y. enterocolitica (5.9%), confirmed by genetic sequencing. Only the inv gene was detected, which is present in virulent and avirulent Y. enterocolitica strains. There was great difficulty in microbiological isolation due to the difficulty of competitiveness of Y. enterocolitica in a very rich microbiota of raw milk. Although virulence genes known to be present in potentially pathogenic strains of Y. enterocolitica have not been identified, the presence of this pathogen in milk from expansion tanks, identified through PCR and confirmed by genetic sequencing, suggests that Y. enterocolitica may be a risk to public health, especially if milk and its derivatives are consumed without heat treatment. O leite e seus derivados possuem substratos que favorecem o desenvolvimento de micro-organismos patogênicos e deteriorantes, devido a isso, cuidados rigorosos são exigindo durante a ordenha, processamento e seu armazenamento. Dentre os vários grupos de bactérias que podem contaminar o leite refrigerado cru está Yersinia enterocolitica. Esta bactéria pode causar a uma série de sintomas clínicos intestinais e extraintestinais, variando de gastroenterite leve a linfadenite mesentérica, semelhante à apendicite. Para avaliar a prevalência de Y. enterocolitica patogênica no leite cru de tanques de expansão localizados no estado de São Paulo, foram avaliadas 102 amostras de leite bovino, por análises microbiológicas, seguido de provas bioquímicas; a Reação em Cadeia de Polimerase (PCR) e sequenciamento genético. Não houve o isolamento de Y. enterocolitica pelas provas microbiológicas clássicas. No entanto, a análise de PCR, realizada diretamente do leite, revelou seis (6) amostras positivas para Y. enterocolitica (5,9%), confirmadas por sequenciamento genético. Somente o gene inv, foi detectado, que pode estar presente em cepas virulentas e avirulentas. Houve dificuldade de isolamento microbiológico devido à dificuldade de competitividade da Y. enterocolitica em uma microbiota muito rica do leite cru. Ainda que não tenham sido identificados os genes de virulência que sabidamente estão presentes em cepas de Y. enterocolitica potencialmente patogênicas, a presença desse patógeno no leite dos tanques de expansão, identificadas através da PCR e confirmadas por sequenciamento genético, sugere que Yersinia enterocolitica pode ser um risco potencial para a saúde pública, principalmente se o leite e seus derivados forem consumidos sem tratamento térmico.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Outra Agência Objetivou-se determinar atividade antisséptica do óleo essencial de Lippia origanoides na presença de leite bovino. A composição química do óleo essencial de alecrim pimenta foi determinada por cromatografia gasosa acoplada à espectrometria de massas (CG-EM), sendo detectados 53 compostos, dos quais 16 foram identificados (>0,1% área total). O carvacrol (32,7%), p-cimeno (23%), timilmetil éter, cariofileno (7,98%) e o γ-terpineno (5,40%) foram os componentes mais abundantes. A concentração inibitória mínima para Staphylococcus aureus ATCC 25923 e E. coli ATCC 8739 foi de 60μL/mL, enquanto para Salmonella Choleraesuis ATCC 35640 foi de 90μL/mL. A concentração bactericida mínima foi de 120μL/mL para as três bactérias. Avaliou-se a atividade antisséptica do óleo essencial na concentração de 120μL/mL na presença de leite bovino sobre as mesmas cepas bacterianas. O óleo em estudo apresentou efeito inibitório do crescimento das cepas em diferentes tempos de ação (p0.1% total area). The carvacrol (32.7%), p-cymene (23%), thymil methyl ether (10.03%), caryophyllene (7.98 %) and γ-terpinene (5.40%) were the most abundant components. The minimum inhibitory concentration for Staphylococcus aureus ATCC 25923 and Escherichia coli ATCC 8739 was 60uL/mL, as for this Salmonella Choleraesuis ATCC 35640 was 90uL/mL. The minimum bactericidal concentration was 120μL/mL for all three bacteria. We evaluated the antiseptic activity of the essential oil in the concentration of 120μL/mL in the presence of bovine milk for the same bacterial strains. The oil under study It showed an inhibitory effect of growth of the strains in different action times (p

Dissertação de Mestrado, Tecnologia e Segurança Alimentar, 11 de Julho de 2016, Universidade dos Açores. Higiene, no caso do leite, significa o conjunto de medidas utilizadas para impedir que microrganismos contaminem o leite e a superficie do teto. A qualidade do leite é, portanto, consequência direta das condições em que é obtido, dos procedimentos adotados na ordenha, do maneio pelos ordenhadores e das condições de conservação e transporte. Os procedimentos relacionados com o maneio de ordenha, ambiente, limpeza dos tetos, conservação e limpeza dos utensílios de ordenha, interferem diariamente no volume, composição e qualidade do leite (Torres, Oliveira, and Sousa n.d.). Este trabalho foi realizado na ilha Terceira, Região Autónoma dos Açores, tendo o qual como base uma avaliação dos hábitos de higiene da ordenha, praticada em 6 explorações leiteiras, às quais foram feitas visitas mensais, em conjunto com a equipa de contraste leiteiro, ao longo dos meses de Abril, Maio, Junho, Julho e Agosto de 2015, onde foi feito um acompanhamento e avaliação contínua das mesmas, tendo em conta dos dados recolhidos nas visitas bem como os dados recolhidos pelo Contraste Leiteiro e pelos dados das recolhas de leite realizadas pelo SERCLAT. Foi ainda realizado a inquérito mencionado anteriormente a 77 produtores de explorações leiteiras escolhidas aleatoriamente entre as explorações que realizam contraste leiteiro na Terceira, com o objetivo de perceber os hábitos de higiene na ordenha dos mesmos. ABSTRACT: Hygiene, in the case of milk, means the set of measures employed to prevent microorganisms from contaminating the milk and the teat surface. The quality of milk is thus a direct consequence of the conditions in which it is obtained, the procedures used for milking, the management by milkers and conditions for storage and transport. Procedures relating to the management of milking environment, cleaning of teats, conservation and cleaning of milking utensils, interfere daily in the volume, composition and quality of milk (Torres, Oliveira, and Sousa n.d.). This work was carried out on Terceira Island, Azores, base on the evaluation of the hygiene of the milking habits, practiced in six dairy farms visited on a monthly bases, together with dairy recording team, over the months of April, May, June, July and August 2015, where it was made a continuous monitoring and assessment, taking into account the data collected in the visits and the data collected by the dairy recording team and the data of the visits performed by SERCLAT. It was also made an inquiry to 77 producers of dairy farms randomly chosen from farms that perform dairy recording in Terceira, in order to realize the hygiene habits during milking.

Um procedimento detalhado para validação intralaboratorial de métodos, incluindo delineamento experimental, estatísticas e avaliação de premissas foi proposto e aplicado à validação de um método para ensaio de avermectinas em leite bovino por cromatografia líquida de alta eficiência com detector de fluorescência. Foram realizados ensaios com curvas de solventes e de matriz, amostras de leite bovino brancas e adicionadas. As premissas relacionadas às estatísticas empregadas foram avaliadas e confirmadas. Linearidade foi obtida entre 25 e 150 ng.mL-1. Não foram observados efeitos de matriz significativos nesta faixa. As médias de recuperação aparente variaram de 87,2 a 101,4%. Desvios padrão relativos sob condições de repetitividade estiveram entre 3,3 e 11,2%, enquanto os desvios padrão relativos de reprodutibilidade parcial foram de 7,4 a 14,7%. Estes resultados indicaram exatidão e precisão do método entre 10 e 30 µg.L-1 para os quatro analitos estudados. Os limites de detecção e quantificação experimentais foram 5 e 10 µg.L-1, respectivamente. Limites de decisão (12,6 a 13,7 µg.L-1) e capacidades de detecção (15,1 a 17,4 µg.L-1) foram estimados, assumindo um limite máximo de resíduo de 10 µg.L-1.A detailed procedure for in-house validation of methods, including experimental design, statistics and evaluation of assumptions, was proposed and applied to the validation of a method for screening avermectins in cow's milk by high performance liquid chromatography coupled with fluorescence detection. Assays were performed with solvent and matrix-matched calibration curves, milk blanks and spiked samples. The assumptions about the statistics employed were evaluated and confirmed. Linearity was achieved between 25 and 150 ng.mL-1. No significant matrix effects were observed in this range. Mean apparent recoveries varied from 87.2 to 101.4%. The relative standard deviations under conditions of repeatability ranged from 3.3 to 11.2%, while the relative standard deviations of partial reproducibility varied from 7.4 to 14.7%. These results indicated exactness and precision of the method between 10 and 30 µg.L-1 for the four analytes studied. The experimental limits of detection and quantification were 5 and 10 µg.L-1, respectively. Decision limits (12.6 to 13.7 µg.L-1) and detection capabilities (15.1 to 17.4 µg.L-1) were estimated, assuming a maximum residue level of 10 µg.L-1.

A produção de leite desempenha papel importante, tanto econômico, como social. Objetivou-se analisar a evolução da produção e produtividade do rebanho leiteiro no Estado de Goiás, no período de 2002 a 2011. Os dados foram obtidos do Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística (IBGE), nos anos de 2002 a 2011. Analisou-se a característica produtiva e a produtividade por total de vacas, bem como as taxas de crescimento anual da produção e produtividade por total de vacas. A produtividade por total de vacas foi de 1.331 litros, em 2011, o que representou uma taxa anual de crescimento de 1,9%, desde 2002 (1.120 litros). No período de 2002 a 2011, todas as mesorregiões do estado de Goiás aumentaram a produtividade do rebanho leiteiro. As mesorregiões Leste Goiano e Sul Goiano foram as que obtiveram maior crescimento na atividade leiteira. Nas microrregiões do estado de Goiás foram obtidas produtividades de 515 litros/total de vacas/ano no Vão do Paranã e de 1.884 litros/por total de vacas/ano em Catalão. As três microrregiões que apresentaram maior crescimento na produção foram Catalão (11,6% ao ano), Pires do Rio (10,7% ao ano) e Vão do Paranã (9,1% ao ano), no período analisado. Em 2011 o município de Jataí apresentou a maior produtividade que foi de 2.898 litros/total de vacas/ano e Portelândia ocupou o segundo lugar na produção por vaca (2.374 litros/total de vacas/ano). Os municípios com maiores produtividade por vaca concentram-se na parte centro e sul do estado. A produtividade por vaca total aumentou no período analisado, no entanto ainda há necessidade de especializar os sistemas de produção de leite. Milk production plays an important role both economically, and socially. This study aimed to analyze the evolution of production and productivity of dairy cattle in the state of Goiás, in the period 2002 to 2011. The data were obtained from the Brazilian Institute of Geography and Statistics (IBGE), from 2002 to 2011, analyzed the characteristic productive and productivity by total cows, as well as the annual rates of growth of production and productivity by total cows. The total yield per cow was 1,331 liters in 2011, representing an annual growth rate of 1.9% since 2002 (1,120 liters). In the period of 2002-2011, all mesoregions of the State of Goiás increased productivity of the dairy herd. The mesoregions East and South Goiás were with the greatest growth in the dairy business. In the micro-regions of the state of Goiás yield of 515 liters/ cow per total/year in the Vão do Paranã and 1,884 liters/cow per total/year in Catalão were obtained. The three microregions that showed higher growth in production were Catalão (11.6% per year), Pires do Rio (10.7% per year) and the Vão do Paranã (9.1% per year), in the analyzed period. In 2011 the municipality of Jataí had the highest productivity was 2,898 liters/cow per total/year and Portelândia ranked second in production per cow (2,374 liters/cow per total/year). The municipalities with the highest productivity per cow are concentrated in the central and southern part of the state. Productivity per cow increased overall during the period analyzed; however, there is still need to specialize the production systems of milk.

O setor agroindustrial do leite representa um dos maiores sistemas agroindustriais do mundo. O Brasil é, tradicionalmente, um grande produtor deste nobre alimento e, inclusive de soro lácteo juntamente com a produção de queijo. Objetivou-se avaliar a composição físico-química e microbiológica do leite e dos soros lácteos dos queijos minas frescal e mussarela estocado sob diferentes condições de temperatura. O experimento foi conduzido durante dois períodos distintos do ano de 2013. No leite foram realizadas análises físico-químicas e microbiológicas. Nos soros lácteos, acompanhados por 21 dias de estocagem nas temperaturas de 4±1ºC e 8±1ºC, foram realizadas aferições de pH, determinações da acidez titulável, teor protéico, perfil eletroforético e análises microbiológicas. Os dados foram comparados por meio de intervalos de 95% de confiança, construídos, em cada tempo, a partir da variável t-Student, e as análises realizadas com o software R versão 3.0.3. Os resultados das análises físico-químicas das amostras dos leites analisados indicaram índices em desacordo com a legislação vigente. Na contagem microbiana, tanto o leite como os soros lácteos estudados apresentaram valores de não conformidade com a legislação. Durante todo o período de estocagem, somente o soro do queijo minas frescal, armazenado a 4±1 ºC apresentou conformidade com a legislação para o pH e acidez titulável. Os teores médios de proteína total nos soros dos queijos pesquisados, nas temperaturas de 4±1 ºC e 8±1 ºC apresentaram-se em acordo com a legislação e, independente do tipo de queijo, não apresentaram diferenças significativas de proteínas (p> 0,05), ao longo do período de observação. O perfil eletroforético dos soros lácteos permitiu a observação de uma concentração mais acentuada nas bandas representativas de até o sétimo dia de armazenamento com 09 a 11 proteínas com pesos moleculares entre 14,4 a 116 kDa, em ambos os géis produzidos. Milkagroindustrial sector is one of the largest agribusiness systems in the world. Brazil is traditionally a large producer of this noble food and even whey along with the production of cheese. This study aimed to evaluate the physical, chemical and microbiological composition of milk and milk whey, as well as, fresh and mozzarella cheeses stored under different temperature conditions. The experiment was conducted during two different periods of the year 2013. We carried out physico-chemical and microbiological analyzes in milk, and pH measurements, determination of titratable acidity, protein content, electrophoretic profile and microbiological analyzes in milk whey, after 21 days of storage at temperatures at 4±1 ºC and 8±1 ºC. Data were compared using intervals of 95% confidence, built in each time, from the Student t variable, and the analyzes performed using the R version of 3.0.3 software. The results of physical-chemical analysis of milk samples analyzed indicated rates at odds with current legislation. In microbial count, both milk and milk whey studied presented values of non-compliance with legislation. Throughout the storage period, only the whey of fresh cheese, stored at 4±1 ºC showed compliance with the rules for pH and titratable acidity. The average levels of total protein in the whey of cheeses studied at temperatures of 4±1 ºC and 8±1 ºC were in accordance with the rules and, regardless of the type of cheese, no significant differences in protein (p > 0.05 ), was verified throughout the observation period. The electrophoretic profile of milk whey allows observation of a greater concentration in the bands representing up to the seventh day of storage at 09 th to 11th proteins with molecular weights of between 14.4 to 116 kDa in both gels produced. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES

The objective of the present study was to evaluate the reduction in somatic cell count (SCC) and total bacterial count (TBC) in bovine milk to acceptable parameters, using a dietary supplement, in three different dosages. The dietary supplement consisted basically of organic minerals derived from Lithothamnium calcareum (92.5 g/kg), Saccharomyces cerevisiae (2.5 g/kg) and yeast cell walls (5g/kg). Twelve crossbred cows that were more than 60 days postpartum and produced more than 20 Kg of milk/day were used in this research, which was conducted at the experimental farm of the Federal University of Uberlândia (Fazenda Experimental do Glória, Universidade Federal de Uberlândia, Uberlândia, Brazil). During the first 75 days, the animals were confined and received feed and silage. During the following 75 days, the animals were received feed and pasture. The 12 cows were divided into four groups of three animals each, the animals of each group receiving 0, 40, 60 or 80g of supplement per day. The supplement was mixed in 4 kg of feed and offered during milking. Milk samples were collected each month, the first one at the beginning of the experiment and the remaining samples every 30 days. These samples were collected at the beginning of the afternoon milking, before the placement of the teat cups, and were kept in containers with bronopol (2-bromo, 2-nitro-1, 3 propanediol). After being collected, the samples were cooled and sent to the Centro de Tecnologia para o Gerenciamento da Pecuária de Leite, at the Clínica do Leite (Esalq-USP). Flow cytometry was used to determine the SCC and flow cytometry PO ANA 010 was used to determine TBC. The average SCC ranged between 1,07 x 105 cells/mL and 2,78 x 105 cells/mL. The average TBC ranged between 4 x 103 CFU/mL and 17 x 103 CFU/mL. No significant changes in SCC and TBC counts were observed, regardless of the dosage used was observed. Este trabalho teve como objetivo avaliar se houve redução nas CCS e CBT do leite de vacas, usando um suplemento dietético, em três diferentes dosagens e constituído basicamente de minerais orgânicos oriundos da Lithothamnium calcareum (92,5g/kg), principalmente cálcio e magnésio, e leveduras de cana-de-açúcar (Saccharomyces cerevisiae) (2,5g/kg) enriquecidas com paredes celulares destas (5g/kg). A pesquisa foi realizada na Fazenda Experimental do Glória da Universidade Federal de Uberlândia, em Uberlândia, MG. Foram utilizadas 12 vacas mestiças leiteiras que estavam com mais de 60 dias pós-parto, com produção leiteira acima de 20 kg/dia. Durante o período da pesquisa cinco meses - todos os animais ficaram 75 dias em confinamento com ração e silagem e 75 dias com ração e pastagem. As 12 vacas foram divididas em quatro grupos de três animais cada um. Dos grupos, três receberam, respectivamente, 40, 60 e 80g/dia/animal de suplemento misturado aos quatro kg diários de ração, oferecidos durante a ordenha. Um grupo foi mantido como controle, sem receber o suplemento. Foram coletadas cinco amostras mensais de leite de cada animal, uma no início do experimento e as outras a cada 30 dias. As amostras de leite foram coletadas no início da ordenha da tarde, antes da colocação das teteiras, em recipientes com preservante bronopol (2-bromo, 2-nitro-1,3 propanediol), foram resfriadas e enviadas para o Centro de Tecnologia para o Gerenciamento da Pecuária de Leite, na Clínica do Leite (Esalq-USP). Através da citometria de fluxo foi determinada a CCS e da Citometria de Fluxo - PO ANA 010 foi determinada a Contagem Bacteriana Total (CBT). As médias de CCS e CBT variaram entre 107 x 1000 e 278 x 1000 células por mL e 4 x 1000 e 17 x 1000 UFC por mL, respectivamente. Não foi observada nenhuma alteração significativa nas CCS e CBT, com nenhuma dosagem utilizada. Mestre em Ciências Veterinárias

A produção de leite tem importância econômica e social estando presente em todo território brasileiro. Objetivou-se analisar a evolução da produção de leite bovino no Brasil, no Estado de Minas Gerais, na Zona da Mata e na Microrregião de Viçosa. Os dados foram obtidos do Instituto Brasileiro de Geografia e Estatística (IBGE) nos anos de 2002 a 2011, com ênfase na produção de leite e número de vaca ordenhada. Desta forma, analisou-se a taxa de crescimento anual da produção, do número de vaca ordenhada e produtividade por vaca em lactação. No período de 2002 a 2011, a produção de leite brasileira cresceu com taxa anual de 4,5%, sendo explicada pelo crescimento do número de vaca ordenhada e pelo aumento da produtividade por vaca. O volume de leite produzido em Minas Gerais cresceu a uma taxa de 4% ao ano. A produção de leite na Zona da Mata cresceu na taxa de 3,5% ao ano, isso em função do aumento do número de vaca ordenhada. A produtividade da microrregião de Viçosa, em 2011 foi de 1.277 litros/vaca ordenha/ano. E a produção total de leite cresceu na taxa de 2,5% ao ano. A produção de leite aumentou no período analisado, mas é necessário especializar os sistemas de produção de leite, principalmente a produtividade por animal, para tornar a atividade mais rentável e sustentável. Milk production has economic and social importance, and is present in all Brazilian territory. This study aimed to analyze the evolution of the production of bovine milk in Brazil, in the State of Minas Gerais, in the Zona da Mata and Microregion of Viçosa. Data were obtained from the Brazilian Institute of Geography and Statistics (IBGE) in the years 2002-2011, with emphasis on milk production and number of cows milked. Thus, we analyzed the annual growth rate of production, the number of cows milked and yield per lactating cow. In the period from 2002 to 2011, milk production in Brazil grew to an annual rate of 4.5%, is explained by the growth in the number of cows milked and by increasing productivity per cow. The volume of milk produced in Minas Gerais grew at a rate of 4% per year. Milk production in the Zona da Mata grew at a rate of 3.5% per year, due to the increase in the number of cows milked. The productivity of the region of Viçosa, in 2011 was 1,277 liters/cow milking/year. And the total milk production grew at a rate of 2.5% per year. Milk production has increased over this period, but it is necessary to specialize the production systems of milk, especially the productivity per animal, to make the activity more profitable and sustainable.

Staphylococcus aureus tem sido associado a surtos de origem alimentar, em virtude da capacidade de produzirem enterotoxinas. Dentre os alimentos envolvidos nestas intoxicações estão o leite e seus derivados, em decorrência de contaminação por estes patógenos que são os principais causadores da mastite bovina. Neste trabalho foi realizada a identificação de S. aureus e a avaliação do seu potencial enterotoxigênico, a partir de amostras de leite cru refrigerado de bovinos, obtidas do Laboratório de Análise da Qualidade de Leite da Escola de Veterinária da UFMG (LabUFMG), no período de Julho de 2009 a Março de 2010. Foram analisadas 251 amostras de leite de tanque de expansão e destas, foram obtidos 278 isolados de S. aureus (86,06%) e 45 isolados de Staphylococcus coagulase negativas-SCN (13,93%), pelos métodos microbiológicos de rotina. Estes isolados foram avaliados, por PCR convencional e biplex, para amplificação dos genes femA e mecA, e por PCR multiplex para pesquisa dos genes que codificam as enterotoxinas estafilocócicas. O percentual de 82,06%, para a presença do gene femA, entre os isolados de S. aureus, sugere o uso desta ferramenta para a identificação desta bactéria a partir do leite. Em 12 isolados, 4,31% deles apresentaram o gene mecA, identificando a presença de Staphylococcus aureus resistentes à meticilina (MRSA), nas amostras de leite trabalhadas. Entre as enterotoxinas estafilocócicas predominaram a seA e seB (1,07% cada). As presenças de genes de enterotoxinas e de amostras de MRSA evidenciam o potencial enterotoxigênico dos S. aureus isolados do leite originado de animais com mastites, e os riscos que isto pode apresentar para a saúde pública. S. aureus, avaliados pelo método de disco-difusão em ágar, apresentaram susceptibilidade à gentamicina (94%) e resistência à penicilina (90%) e a enrofloxacina (58%). Ao teste de concentração inibitória mínimaCIM, os isolados de S. aureus apresentaram susceptibilidade à enrofloxacina (92,54% e CIM90 4 µg/mL) e gentamicina (80% e CIM90 16 µg/mL) e resistência à penicilina G (18,47% e CIM90 64 µg/mL). Staphylococcus aureus has been associated with foodborne outbreaks, due to the ability to produce enterotoxin. Among the foods involved in these poisonings are milk and its derivatives, due to contamination by these pathogens that are the main cause of bovine mastitis. This work was performed to identify S. aureus and assessing their enterotoxigenic potential, from refrigerated raw milk samples of cattle, obtained from the Laboratory of Analysis of Quality of Milk Veterinary School, UFMG (LabUFMG) in the period July 2009 to March 2010. 251 samples were analyzed for bulk tank milk and these were obtained 278 strains of S. aureus (86.06%) and 45 isolates of coagulase-negative SCN (13.93%), by routine microbiological methods. These isolates were analyzed by PCR and conventional biplex for amplification of the mecA and femA genes and for investigation of multiplex PCR for genes encoding enterotoxins. The percentage of 82.06%, for the presence femA gene among isolates of S. aureus suggests the use of this tool for the identification of the bacteria from milk. 12 isolates showed 4.31% of the mecA gene, identifying the presence of methicillin-resistant Staphylococcus aureus (MRSA), in milk samples worked. Among the staphylococcal enterotoxin SEA and SEB (1.07% each) were predominat. The presence of enterotoxin genes and samples of MRSA have highlighted the potential of enterotoxigenic S. aureus isolated from milk originating from animals with mastitis, and the risks that this may present to public health. S. aureus evaluated by disk-agar diffusion were susceptible to gentamicin (94%) and resistance to penicillin (90%) and enrofloxacin (58%). The test of minimum inhibitory concentration-MIC, the isolates of S. aureus were susceptible to enrofloxacin (92.54% and MIC90 4 mg/mL) and gentamicin (80% MIC 90 and 16mg/mL) and resistance to penicillin G (18.47% and MIC90 64 mg / mL).

INTRODUCTION. Tetracyclines are a large spectrum class of antibiotic, widely used in prevention and treatment of infection in dairy cattle. Though its indiscriminate use and the disrespect to the withdraw period may result residues in milk, which can cause bacteria resistance, allergies, and economic losses to producers of milk and dairy products. Therefore, surveillance and monitoring of the presence of antibiotics in milk are needed to ensure consumer safety and avoid financial losses. For that, several methods have been used, and the high performance liquid chromatography is preferred by presenting analysis speed, selectivity, accuracy and reproducibility. Moreover, laws of several countries have established safe limits of residues in food (LMR). OBJECTIVES. (I) Provide information about the methods used in the determination of tetracyclines in milk reported in the literature. (II) Validate a multiresidue method for the determination of tetracyclines (oxytetracycline, tetracycline, chlortetracycline and doxycycline) in bovine milk by high performance liquid chromatography with UV-VIS detector according to analytical criteria defined by European Commission 2002/657/EC. (III) Investigate the occurrence of tetracyclines residue in bovine pasteurized milk by high performance liquid chromatography detection system with UV/VIS. (IV) Assessment the population exposure to antimicrobial residues in milk commercialized in the State of Parana, Brazil. MATERIAL AND METHODS. A review of analythical methods for determination of tetracyclines reported in the literature was performed. Validation of an extraction method, wherein the milk samples were deproteinated with Mcllvaine buffer and 20% trichloroacetic acid and cleanup carried out in C18 columns. Tetracyclines have been separated into a high efficiency liquid chromatograph with UV/VIS detector set at 365 nm by a gradient composed of oxalic acid 0.01 mol/L, acetonitrile and triethylamine in C8 column. To investigate the occurrence of tetracyclines, 100 samples were collected in the State of Parana, between March/2010 and October/2011, and analyzed by the validated method. To evaluate the exposure to the tetracyclines residue, it was calculated the Estimated Daily Intake (EDI) according to the JECFA. The EDI was compared to the Acceptable Daily Intake (ADI) from 0 to 0.03 mg/kg body weight (bw). RESULTS AND DISCUSSION. The steps for determining antibiotic residues in milk are: extraction, cleanup, identification/quantification and confirmation. The main problem with this analysis due the matrix effect that may interfere with the determination of these residues. Therefore, we have investigated methods of extraction and cleanup witch consist of deproteinization and removal of these components, but that are simple and quick. Thus, many researchers have used to solutions and acidic buffers,and solid phase columns. For identification and quantification, the most used techniques are high performance liquid chromatography and capillary electrophoresis, which show precise results and the confirmation is generally made by mass spectrometry. The validated method in this work presented the limits of detection and quantification from 42.3 to 75.8 and 43.2 to 76.4 µg/kg, respectively. The decision limit (CCα) and detection capability (CCß) varied from 114.2 to 143.7 and 129.3 to 188.7 µg/kg, respectively. Recoveries of tetracyclines in fortified samples were above 82.5%. Of 100 samples analyzed, three were contaminated with values of 121.8 µg/kg for oxytetracycline, 93.5 µg/kg for tetracycline and 134.6 µg/kg for chlortetracycline (61.6 13 µg/kg) and doxycycline (73.0 µg/kg). The median of residues of tetracyclines found in the samples was 42.3 µg/kg and EDI was 0.05 µg/kg bw/day for Brazil, 0.08 µg/kg bw/day for the Southern region and 0.07 µg/kg bw/day for the State of Parana. CONCLUSIONS. Among the analytical techniques for the determination of tetracyclines residue in milk, the most commonly used is the high performance liquid chromatography (HPLC) with ultraviolet detection system (UV) or diode array. Although there are techniques which have good results, but with lower sensitivity such as capillary electrophoresis, but allows a rapid and less polluting analysis. The method validated in this study for determination of tetracyclines in pasteurized bovine milk, according to regulation 2002/657/EC of the European Union, presented linearity, specificity, selectivity, precision and accuracy. Therefore, this method showed efficiency enough for the monitoring of tetracyclines in milk. Results of analysis of the collected samples showed that the occurrence of tetracylines in milk was low (3%), but had samples above the MRL (2%), and the risk to the population to these residues in the milk was regarded as egligible (

O objetivo deste trabalho é apresentar os principais resultados da pesquisa sobre o leite instável não ácido ou LINA. A proporção de amostras de leite com estabilidade térmica, abaixo do mínimo exigido pela indústria brasileira, configura um sério problema, com uma ocorrência mais elevada durante os períodos de carência alimentar. Trata-se de um problema multifatorial, cujos fatores intervenientes são relacionados à execução do teste (concentração do álcool), ao manejo (alimentação, clima, relação homem-animal), ao animal (suscetibilidade ao estresse, potencial produtivo, estádio da lactação, sanidade, problemas digestivos e metabólicos, frações da caseína), entre outros. Existem dúvidas quanto à capacidade do teste do álcool em estimar a estabilidade térmica do leite. A indústria necessita de um teste rápido, de baixo custo e que realmente identifique o leite adequado ao processamento térmico. O manejo correto dos animais, aliado ao uso de parâmetros realistas de execução do teste do álcool, pode contribuir para melhorar a estabilidade do leite. This paper aimed to present the main results about the unstable non acid milk (LINA). The proportion of milk samples with thermal stability below the Brazilian dairy industry standard is a serious problem, with highest occurrence at short food supply periods. It is a multi factorial problem, which causing factors are related to test execution (ethanol concentration used), to management (feeding, climate, human-animal relation), to animal (stress susceptibility, productive potential, lactation stage, sanitary condition, digestive and metabolic disorders), among others. There are doubts to the accuracy and precision of the alcohol test to detect stability problems. Dairy industry needs a fast, low price and easy test, but that can identify milk suitable to thermal processing. An adequate animal's management besides realistic parameters of milk test might contribute to improve milk stability.

Dissertação de Mestrado em Ciências Biomédicas. O leite representa um componente importante na dieta humana com elevado valor nutritivo. As alergias alimentares associadas à ingestão de leite têm-se tornado um problema emergente na sociedade. Com efeito, surgem, cada vez mais no mercado, produtos funcionais derivados ou à base de leite como forma de reduzir a incidência de pessoas com intolerância às proteínas do leite de vaca. Deste modo, o objectivo principal do presente trabalho incidiu sobre o desenvolvimento de uma metodologia para a criação de um novo tipo de leite modificado/funcional (a partir de leite cru desnatado) para indivíduos intolerantes às caseínas, utilizando uma enzima proteolítica vegetal adequada para a sua modificação, nomeadamente a bromelaína. Foi pois desenvolvido um método de separação e quantificação das principais proteínas do leite bovino, pequenos péptidos e aminoácidos livres, por cromatografia líquida de alta pressão (HPLC), tendo sido analisadas amostras de leite cru desnatado e de leite magro e meio gordo ultrapasteurizado (UHT) com o objectivo de comparar o grau de hidrólise das mesmas. Numa segunda fase do trabalho, o leite modificado (sem e após diálise) foi analisado in vitro no sentido de averiguar o seu possível efeito no controlo da hipertensão pela inibição da enzima conversora da angiotensina (ACE). Os tipos de leite analisados apresentaram diferenças em termos de inibição da ACE sendo que o leite UHT registou uma inibição próxima dos 50% e o leite cru desnatado inferior a 20%. A curva de Lineweaver-Burk efectuada revelou que os péptidos do leite modificado comportam-se como inibidores não competitivos. Por último, o leite meio gordo UHT modificado foi submetido a um painel sensorial com o intuito de testar as suas características organolépticas e a sua aceitação junto de potenciais consumidores. Os resultados obtidos foram muito positivos pois 86% das pessoas inquiridas consideraram o leite modificado agradável relativamente ao leite convencional. A criação de um leite funcional a partir de leite cru desnatado é possível. Este novo produto será uma mais valia para a Região, não só por representar um conceito inovador, mas também pelo facto de manter as características do leite ao contrário das outras fórmulas existentes no mercado. Certamente, serão necessários mais estudos para que este produto seja passível de aplicar na indústria tendo em consideração os requisitos de produção da fábrica onde será implementado. Além disso, será fundamental avaliar este tipo de leite funcional in vivo como uma fórmula hipoalergénica e hipotensiva. ABSTRACT: Milk represents an important component in human diet with high nutritional value. Food allergies associated to milk intake have become a sinking problem in society. Indeed, functional products derived or based on milk are been introduced in the marked as a form of reducing the incidence of people with intolerance to cow’s milk protein. Thus, the main aim of the present work was to develop a methodology for the production of a new functional/modified milk (from skimmed raw milk) for casein intolerant persons, using a proteolytic enzyme to its modification, namely bromelain. For this purpose, it was developed a methodology, for the appropriate separation and quantification of the major bovine milk proteins, small peptides and free amino acids, using high-pressure liquid chromatography (HPLC), in which skimmed raw milk, ultra high temperature (UHT) skim and half skimmed milk samples were analyzed to compare the degree of hydrolysis between them. In the second taske of the work, the modified milk (with and without dialysis) was analyzed in vitro in order to find out it’s possible effect on blood pressure by inhibiting the angiotensin converting enzyme (ACE). The types of milks analyzed had differences in the inhibition of ACE, the UHT modified milk had a inhibition closer to 50% and the raw skim milk less than 20% in comparison to non-modified UHT and raw milk, respectively. The Lineweaver-Burk plot made show that the modified milk peptides act as a non-competitive inhibitors. At last, the half-skimmed UHT milk was submitted to a sensorial analysis panel with the purpose to verify the organoleptic characteristics and the acceptance of the functional milk in potential consumers. The results obtained were very positive since 86% of the participants found a pleasant taste in the modified milk in comparison with conventional UHT milk. This new product will be an additional gain to the Region of Azores, not only because it represent an innovative concept, but also by the fact that this functional milk preserves the characteristics of the milk unlike other formulas in the marked. Certainly, more studies will be necessary to improve this new milk formula to industrial production, taking into account the requisites of the factory which will be implemented. Furthermore, it is crucial to evaluate this modified milk in vivo as hypoallergenic and hypotensive milk formula.

O objetivo do presente trabalho foi realizar a análise energética da produção de leite bovino na Fazenda Experimental Professor Hamilton de Abreu Navarro FEHAN, do Instituto de Ciências Agrárias da UFMG, em Montes Claros MG. A busca por sistemas de produção mais sustentáveis vem adquirindo importância no cenário nacional e internacional. Com isso, a análise energética da atividade leiteira vem auxiliar na avaliação das formas de produção, além de fornecer subsídios para avaliar, de maneira mais aprofundada, o atual patamar de utilização das entradas e saídas energéticas (inputs e outputs) e o nível de dependência de energia do agroecossistema leiteiro. Por companhamento da produção no ano agrícola 2008/2009, por intermédio das informações obtidas na literatura, e por meio de relatos orais dos trabalhadores de campo da FEHAN, foi analisada cada operação do itinerário técnico da produção de leite bovino. Os resultados da análise energética foram apresentados pela estrutura dos dispêndios energéticos, por tipo, fonte e forma de energia e pela energia bruta produzida. Considerando o agroecossistema estudado, observou-se uma energia bruta do produto leite, isto é, saídas energéticas de 8.570,49 MJ.ha-1, com uma participação dos dispêndios, ou seja, entradas energéticas de 73,36% e 26,64% das energias direta e indireta, respectivamente. O agroecossistema leite é altamente dependente de energia de fonte biológica, principalmente devido ao uso de rações concentradas, com elevado valor energético. A eficiência cultural encontrada foi de 0,25, ou seja, para cada unidade calórica aplicada no agroecossistema, foi produzida apenas 0,25 unidade calórica, ou seja, para produzir uma unidade energética de leite, é necessária em média, a entrada de 4,0 unidades energéticas no agroecossistema estudado. Verifica-se, com isso, que o agroecossistema de produção de leite na FEHAN ICA/UFMG foi altamente dependente de energia e ineficiente, do ponto de vista energético, no ano agrícola estudado. This work aimed to analyze the energy spent on milk production of bovine dairy herd at Fazenda Experimental Professor Hamilton de Abreu Navarro FEHAN (Experimental farm), from Instituto de Ciências Agrárias da UFMG, in Montes Claros MG. The search for more efficient sustainable production systems is gaining importance in the national and international scenery. Thus, energy analysis of the milk activity may aid in the evaluation of production forms, besides providing subsidies to make a more accurate evaluation of the current situation of energy input and output use and the energy dependence level of the milk agroecosystem. In order to follow the production of the years 2008/2009, by means of information from the literature and oral statements from country workers of FEHAN, each operation of the technical itinerary of the dairy herd milk production has been analyzed. The results of the energy analysis were presented by the energy expenditure structure through energy type, source and form and by the produced gross energy. Considering the studied agroecosystem, we could observe a gross energy from the product - milk, that is, energy outputs of 8.570,49 MJ.ha-1, with a participation of the expenditures, i.e. energy inputs of 73,36% and 26,64% of the direct and indirect energy respectively. Milk agroecosystem is highly dependent on the biological source energy, mainly due to the use of concentrated feed with high energy value. The cultural efficiency found was 0,25, that is, for each caloric unit applied in the agroecosystem, only 0,25 caloric unit was produced. In other words, in order to produce one milk energy unit we need in average, the input of 4,0 energy units in the studied agroecosystem. We can verify through this that the agroecosystem of milk production at FEHAN ICA/UFMG was highly dependent on energy and inefficient from the energy point of view in the agricultural year studied.

Um procedimento detalhado para validação intralaboratorial de métodos, incluindo delineamento experimental, estatísticas e avaliação de premissas foi proposto e aplicado à validação de um método para ensaio de avermectinas em leite bovino por cromatografia líquida de alta eficiência com detector de fluorescência. Foram realizados ensaios com curvas de solventes e de matriz, amostras de leite bovino brancas e adicionadas. As premissas relacionadas às estatísticas empregadas foram avaliadas e confirmadas. Linearidade foi obtida entre 25 e 150 ng.mL-1. Não foram observados efeitos de matriz significativos nesta faixa. As médias de recuperação aparente variaram de 87,2 a 101,4%. Desvios padrão relativos sob condições de repetitividade estiveram entre 3,3 e 11,2%, enquanto os desvios padrão relativos de reprodutibilidade parcial foram de 7,4 a 14,7%. Estes resultados indicaram exatidão e precisão do método entre 10 e 30 µg.L-1 para os quatro analitos estudados. Os limites de detecção e quantificação experimentais foram 5 e 10 µg.L-1, respectivamente. Limites de decisão (12,6 a 13,7 µg.L-1) e capacidades de detecção (15,1 a 17,4 µg.L-1) foram estimados, assumindo um limite máximo de resíduo de 10 µg.L-1. A detailed procedure for in-house validation of methods, including experimental design, statistics and evaluation of assumptions, was proposed and applied to the validation of a method for screening avermectins in cow's milk by high performance liquid chromatography coupled with fluorescence detection. Assays were performed with solvent and matrix-matched calibration curves, milk blanks and spiked samples. The assumptions about the statistics employed were evaluated and confirmed. Linearity was achieved between 25 and 150 ng.mL-1. No significant matrix effects were observed in this range. Mean apparent recoveries varied from 87.2 to 101.4%. The relative standard deviations under conditions of repeatability ranged from 3.3 to 11.2%, while the relative standard deviations of partial reproducibility varied from 7.4 to 14.7%. These results indicated exactness and precision of the method between 10 and 30 µg.L-1 for the four analytes studied. The experimental limits of detection and quantification were 5 and 10 µg.L-1, respectively. Decision limits (12.6 to 13.7 µg.L-1) and detection capabilities (15.1 to 17.4 µg.L-1) were estimated, assuming a maximum residue level of 10 µg.L-1.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Atualmente, estudos sobre a nutrição de bovinos vêm crescendo para obtenção de produtos derivados com maior qualidade para o mercado. O urânio natural pode ser encontrado em todos os ambientes, podendo fazer parte da cadeia alimentar. O presente trabalho tem como principal objetivo avaliar os níveis de urânio natural na dieta bovina e no leite produzido por esses animais, e estimar o nível de ingestão desse radionuclídeo a que estão expostos os usuários dessa fonte de alimento, com a utilização de amostras representativas dos municípios de Pedra e Venturosa. Para tanto, foi utilizada a técnica de fluorimetria convencional e para a veracidade dos resultados, o teste de não paramétrico de Kolmogorov-Smirnov e Lilliefors. Os resultados demonstraram que a concentração do urânio natural observada nas amostras de palma forrageira (grande), apresentou um intervalo de 4 a 440 mBq.kg-1 na matéria seca (MS), enquanto que nas amostras de capim em geral, a concentração variou de 6 a 107 mBq.kg-1 (MS), sendo que o capim búffel apresentando uma faixa de variação de 6 a 68 mBq.kg-1 (MS), e o capim elefante uma variação de 26 a 107 mBq.kg-1 (MS). Para as amostras de silagem de sorgo as concentrações variaram de 17 a 65 mBq.kg-1 (MS). Nas amostras de concentrado obteve-se concentração de urânio natural variando de 7 a 78 mBq.kg-1 (MS). No sal mineral as concentrações foram as mais elevadas, variando de 652 a 4.774 mBq.kg-1 (MS). Para as amostras de farelo de algodão observou-se uma variação de 2 a 84 mBq.kg-1 (MS). As amostras de água apresentaram concentrações mais baixas, variando de 2 a 19 mBq.L-1. O leite e os seus derivados apresentaram concentrações de 12 até 1.835 mBq.L-1 e de 2 a 3.102 mBq.L-1 na matéria úmida, respectivamente. A taxa de ingestão média de urânio natural através do leite, queijo e soro pela população da região estudada, foi de 34,45 g/dia. Segundo dados da literatura, este valor de ingestão é insuficiente para produzir toxicidade nos rins dos seres humanos

Staphylococcus aureus produz uma larga variedade de fatores de virulência, que são relacionados à sua patogenicidade, além de oferecer grande resistência aos antimicrobianos existentes. Este microorganismo participa como agente infeccioso em importantes doenças, dentre elas a mastite. Neste trabalho foram identificados e testados 127 biotipos isolados de amostras de leite bovino, quanto à atividade enzimática: produção de coagulase e termonuclease; a toxigenicidade, produção de hemolisinas alfa, beta e delta; enterotoxinas (SEs) A-D e toxina 1 da síndrome do choque tóxico (TSST-1); além de testar a susceptibilidade in vitro frente a vários antimicrobianos. Todas as amostras testadas apresentaram reação positiva para coagulase e termonuclease (100%) pelo teste em tubo e difusão metacromática respectivamente. As amostras apresentaram um alto índice de toxigenicidade, 86,6% delas apresentaram algum tipo de hemólise (alfa, beta, alfa/beta), em placas de ágar sangue ovino; 42,5% produziram algum tipo de SE e 47,2% produziram TSST-1, detectadas pelo método de imunodifuso (OSP).Testes de Susceptibilidade aos antimicrobianos, pelo método de difusão em discos, revelaram sensibilidade a cefotaxima (100%), enrofloxacina (98,4%) e gentamicina (98.4%). Por outro lado, verificou-se resistência à polimixina-B (72.3%), penicilina (64.9%) e ampicilina (62,7%). Staphylococcus aureus has been isolated at high frequency from bovine milk. This microorganism produces a wide variety of vimlence factors, which may contribute to the pathogenicity of this organism. ln this study, 127 S. aureus strains isolated from bovine milk were examined for their productivity of virulence-associated factors and their susceptibility to antimicrobial drugs. The positive rates of the total isolates for various virulence factors were as follows toxic shock syndrome toxin-l (TSST-1) (47,2%) and staphylococcal enterotoxins (SEA-D) (43,3%); ot-haemolysin (43,3%), B-haemolysin (43,3%) and 5-haemolysin (17,3%); tliermostable nuclease (TNase) and coagulase (100%). On the antimicrobial tests 127 (100 %) strains of S. aureus were susceptible to cefotaxime, 125 (98,4%) to gentamicin and enrofloxacin while resistance to ampicillin, penicillin and polymyxin B were most common with 80-82 (62 -64 %) of strains. The results provide evidence that these pathogens use different mechanisms to produce intrammamary infections and their susceptibility to antimicrobial agents should be analyzed.