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There are no records of autochthonous cases of canine visceral leishmaniasis in the city of Curitiba, Paraná state, Brazil. In 2020, a male French bulldog (CW01), approximately 2 years old was taken by its owners to a private veterinarian clinic. The suspicion of CVL was confirmed by means of a serology test (ELISA/IFAT reagent), rapid chromatographic immunoassay (DPP®) (ELISA - Biomanguinhos®), parasitological culture and quantitative polymerase chain reaction (qPCR). The animal routinely frequented parks in Curitiba and was taken on several trips to the municipalities of Bombinhas and Balneário Camboriú (Santa Catarina) and to Matinhos (Paraná) where CVL had not previously been reported. Treatment was initiated orally with Milteforan™ which resulted in a significant reduction in the parasitic load. The suspicion of autochthony was investigated through entomological research. A total of 10 traps were installed, one at the animal’s home, seven in adjacent city blocks and two in a forest edge. No sandflies were trapped in the dog’s home and adjacent houses. The traps in the forest edge caught one Migonemyia migonei female and five Brumptomyia spp. females. This case serves as a warning of the possible introduction of CVL in the city of Curitiba. Resumo Não há registros de casos autóctones de leishmaniose visceral canina (LVC) no município de Curitiba, Paraná, Brasil. Em 2020, um "bulldog" francês macho (CW01), com aproximadamente 2 anos de idade, foi levado por seus donos a uma clínica veterinária particular. A suspeita de LVC foi confirmada por meio de teste sorológico (reagente ELISA/IFAT), imunoensaio cromatográfico rápido (DPP®) (ELISA - Biomanguinhos®), cultura parasitológica e reação quantitativa em cadeia da polimerase (qPCR). O animal frequentava, rotineiramente, parques de Curitiba e foi levado em diversas viagens para Bombinhas e Balneário Camboriú (Santa Catarina) e para Matinhos (Paraná), onde a LVC não havia sido relatada anteriormente. O tratamento foi iniciado por via oral com Milteforan™ (Virbac) o que resultou em redução significativa da carga parasitária. A suspeita de autóctone foi investigada por meio de pesquisa entomológica. Foram instaladas 10 armadilhas, uma na casa do animal, sete em quarteirões adjacentes e duas na borda da mata. Nenhum inseto foi capturado na casa do proprietário do animal e nas casas adjacentes. As armadilhas na borda da mata capturaram uma fêmea de Migonemyia migonei e cinco Brumptomyia spp. fêmeas. Este caso serve de alerta para a possível introdução da LVC na cidade de Curitiba.

Seven hundred twenty cases of oral cavity lesions in dogs were diagnosed from 2015 to 2020 in Distrito Federal, Brazil. Four hundred thirty-two (60%) lesions were neoplastic, and 288 (40%) were non-neoplastic. Of the neoplasms, 229 (53%) were considered malignant and 203 (47%) benign, affecting mainly males, of 43 different breeds, with an average age of 9.4 years, mainly the gum and lip. Melanoma was the most (96/432, 22.2%) commonly diagnosed neoplasm, followed by peripheral odontogenic fibroma (68/432, 15.7%), papilloma (63/432, 14.5%) and squamous cell carcinoma (SCC) (56/432, 12.9%). Non-neoplastic lesions also affected males predominantly, from 41 different breeds, with an average age of 8.9 years, mainly in the gums, lip, and tongue. These lesions were diagnosed as inflammatory (230/288, 79.8%), hyperplastic (47/288, 16.3%) and other lesions (11/288, 3.8%). RESUMO: Foram estudados 720 casos de lesões na cavidade oral em cães diagnosticados entre 2015 e 2020, no Distrito Federal. Dessas alterações, 432 (60%) foram neoplásicas e 288 (40%) não neoplásicas. Dentre os neoplasmas, 229 (53%) foram consideradas malignos e 203 (47%) benignos, acometendo principalmente machos, de 43 raças diferentes, com idade média 9,4 anos, afetando principalmente gengiva e lábio. Melanoma foi o neoplasma mais comumente diagnosticado (96/432; 22,2%), seguido do fibroma odontogênico periférico (68/432; 15,7%), papiloma (63/432; 14,5%) e carcinoma de células escamosas (56/432; 12,9%). As lesões não neoplásicas também acometeram predominantemente machos, de 41 raças diferentes, com idade média 8,9 anos, afetando principalmente gengiva, lábio e língua. Essas lesões foram diagnosticadas como inflamatórias (230/288; 79,8%), hiperplásicas (47/288; 16,3%) e como outras alterações (11/288; 3,8%).

As the bone marrow is one of the most organs affected by canine visceral leishmaniasis (CVL), samples from this are frequently taken for parasitological tests, with occurrence of myelodysplastic changes, with consequent anemia, leukopenia, and thrombocytopenia. Thus, this study aimed to investigate the histological and immunohistochemical changes in the bone marrow of the femur and sternal manubrium of dogs reactive for leishmaniasis by DPP® and ELISA tests. For this, thirteen canines from the epidemiological routine for CVL carried out by the Directorate of Zoonosis Surveillance of Goiânia (DVZ), GO, Brazil, were subjected to anatomopathological examination. 46.2% of bone marrow samples from the femur showed a higher proportion of the red series, and 53.9% of bone marrow of the sternal manubrium evidenced a higher proportion of the red series. Also, there were varied macrophage hyperplasia, hemosiderosis, and megakaryocytic emperipolesis. Amastigote forms of Leishmania spp. in the bone marrow of the femur and sternal manubrium to histopathological and immunohistochemical evaluations were observed, with good agreement them, but without difference in the parasite intensity between the bone marrow of these anatomical sites. It was concluded that bone marrow of the femur and sternal manubrium of dogs reactive for leishmaniasis by DPP® and ELISA tests has histological changes resulting from the disease, regardless of the parasite presence or intensity, with macrophage hyperplasia, hemosiderosis, and emperipolesis being the main medullary changes in these animals. Also, the bone marrow of the femur and sternal manubrium are useful anatomical sites for the diagnosis of CVL by direct methods. Resumo Como a medula óssea é um dos órgãos mais acometidos pela leishmaniose visceral canina (LVC), amostras desta são frequentemente colhidas para exames parasitológicos, sendo possível a ocorrência de alterações mielodisplásicas, com consequente anemia, leucopenia e trombocitopenia. Assim, este estudo teve como objetivo investigar alterações histológicas e imunoistoquímicas na medula óssea do fêmur e manúbrio esternal de cães reativos para leishmaniose aos testes DPP® e ELISA. Para isso, 13 caninos da rotina epidemiológica para LVC realizada pela Diretoria de Vigilância de Zoonoses de Goiânia (DVZ), GO, Brasil, foram submetidos ao exame anatomopatológico. 46,2% e 53,9% das amostras de medula óssea do fêmur e do manúbrio esternal apresentaram maior proporção da série vermelha, respectivamente. Além disso, havia variados graus de hiperplasia macrofágica, hemossiderose e emperipolese megacariocítica. Formas amastigotas de Leishmania spp. na medula óssea do fêmur e do manúbrio esternal às avaliações histopatológicas e imunoistoquímicas foram observadas, com boa concordância entre essas, mas sem diferença na intensidade parasitária entre a medula óssea desses sítios anatômicos. Conclui-se que a medula óssea do fêmur e do manúbrio esternal de cães reativos para leishmaniose aos testes DPP® e ELISA apresenta alterações histológicas decorrentes da doença, independente da presença ou intensidade do parasito, sendo hiperplasia de macrófagos, hemossiderose e emperipolese as principais alterações medulares nesses animais. Além disso, a medula óssea do fêmur e do manúbrio esternal compreendem sítios anatômicos úteis ao diagnóstico de LVC por métodos diretos.

A pesquisa faz uma leitura, a partir da sociologia da saúde, sobre a forma com que a problemática da Leishmaniose Visceral Canina é abordada em distintos contextos, e, em especial, no Uruguai, quando em comparação com estratégias desenvolvidas no Brasil. Pretende-se compreender e discutir os discursos que compõem a abordagem da Leishmaniose Visceral Canina em distintos âmbitos da ação política. Ainda, indaga-se de que forma os fatores sociais são considerados juntamente com fatores epidemiológicos no desenvolvimento de ações de controle e prevenção. Foram realizadas coletas e análises de materiais midiáticos, notícias e documentos institucionais, veiculados online, e entrevistas. A discussão recorre aos preceitos básicos de análise de conteúdo e análise de discurso. Identificam-se tanto convergências quanto tensões entre as medidas socioepidemiológicas institucionais, a comunicação da mídia e os aspectos sociopolíticos da realidade de populações vulneráveis e negligenciadas acometidas pela zoonose. As conclusões apontam para a necessidade de avaliação das políticas de controle da zoonose, que adotam abordagens majoritariamente administrativas, que parecem subestimar a interdependência multiespécie. A comunicação pública ilustra o privilégio das soluções técnicas sobre os aspectos relacionados ao caráter sociopolítico de relações ecológicas e dos ciclos zoonóticos.

Submitted by Mayara Larissa dos Santos Ribeiro (mayara.ribeiro@unesp.br) on 2022-07-15T20:32:54Z No. of bitstreams: 1 Dissertação Defesa Mayara Ribeiro.pdf: 1671610 bytes, checksum: 33f3711a1fef07659b51cb249ec8c508 (MD5) Rejected by Ederson Vasconcelos Pereira (edersonpereira@fmva.unesp.br), reason: Prezada Mestranda Mayara, Solicito que realize as seguintes correções em sua Dissertação: • Em todas as páginas ocorre um erro de configuração- formatação ( possivelmente ao editar o documento) deixando uma “mancha” ; - Solicito que exclua essa “mancha” nas páginas; • SUMÁRIO: ( VIDE PÁGINA 18 DA NORMALIZAÇÃO) - Corrigir a paginação; ( VIDE PÁGINA 26 DA NORMALIZAÇÃO) - Somente o título em negrito; - Todo alinhado à margem esquerda; - Elementos pós textuais ( REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS), não são numerados e são alinhados à margem esquerda; • PAGINAÇÃO: ( VIDE PÁGINA 26 DA NORMALIZAÇÃO) - Todas as folhas do trabalho, a partir da folha de rosto devem ser contadas sequencialmente, mas NÃO numeradas. 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No. of bitstreams: 1 ribeiro_mls_me_araca_int.pdf: 1661897 bytes, checksum: c476aedc8c00e903e7b76f9c100cf31f (MD5) Previous issue date: 2022-07-05 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A leishmaniose visceral canina é uma doença de caráter crônico, endêmica, mul¬tissistêmica e zoonótica. O cão infec¬tado pode desenvolver sintomatologia variada, afetando vários sistemas como o car¬diovascular. Assim, o presente estudo teve como objetivo identificar as principais alterações eletrocardiográficas e ecocardiográficas em cães naturalmente infectados por Leishmania spp. tratados com Miltefosina (Milteforan®). Foram utilizados 22 animais (n=22), sendo 13 fêmeas e 9 machos, todos sem raça definida, adultos, com pesos entre 6,4 a 15,1kg e positivos para Leishmania spp. Todos foram submetidos a exames eletrocardiográficos e ecocardiográficos e, posteriormente, divididos em 2 grupos: (1) grupo controle positivo (GC+), composto por 7 cães que receberam NaCL 0,9% na dose de 1 mL para cada 10 kg, uma vez ao dia durante 28 dias e; (2) grupo tratado (GT), composto por 15 cães que receberam tratamento com Miltefosina na dosagem de 2 mg/kg, uma vez ao dia durante 28 dias. Cães portadores de cardiopatias adquiridas ou congênitas foram excluídos. As avaliações cardiológicas foram realizadas em dois momentos (M1 e M2), sendo o M1 previamente ao tratamento com Miltefosina e o M2 imediatamente após o término dos 28 dias da terapia. A partir dos resultados do presente trabalho, foi possível demonstrar a ausência de interferências nas variáveis eletrocardiográficas quando comparadas aos momentos e grupos estudados. Contudo, no estudo ecocardiográfico foi observada diferença significativa na fração de ejeção pelo método de Simpson (p-valor=0.0000007) e no movimento anular sistólico mitral (p-valor=0.0353891) entre os momentos no GT, com aumento dessas variáveis, demonstrando uma melhora pós tratamento. Conclui-se, portanto, que os cães portadores de leishmaniose visceral apresentaram alterações na função sistólica e diastólica ventricular esquerda, com melhora significativa da função sistólica, após terapia a base de Miltefosina. Canine visceral leishmaniasis is a long-term, endemic, systemic and zoonotic disease. The infected dog can develop varied symptoms, affecting several systems such as the cardiovascular system. Thus, the present study aimed to identify the main electrocardiographic and echocardiographic changes in dogs naturally infected by Leishmania spp. treated with Miltefosine (Milteforan®). Twenty-two animals (n=22) were used, 13 females and 9 males, all mixed breed, adults, weighing between 6.4 and 15.1 kg and positive for Leishmania spp. All were submitted to electrocardiographic and echocardiographic examinations and, subsequently, divided into 2 groups: (1) positive control group (GC+), composed of 7 dogs that received 0.9% NaCL at a dose of 1 mL for every 10 kg, once a day for 28 days and; (2) treated group (TG), composed of 15 dogs that received treatment with Miltefosine at a dosage of 2 mg/kg, once a day for 28 days. Dogs with acquired or congenital heart disease were excluded. Cardiological assessments were performed in two moments (M1 and M2), being M1 prior to treatment with Miltefosine and M2 immediately after the end of the 28 days of therapy. Based on the results of the present study, it was possible to demonstrate the absence of interference in the electrocardiographic variables when compared to the moments and groups studied. However, in the echocardiographic study, a significant difference was observed in the ejection fraction by Simpson's method (p-value=0.0000007) and in the mitral systolic annular motion (p-value=0.0353891) between the moments in the GT, with an increase in these variables, demonstrating a improvement after treatment. It is concluded, therefore, that dogs with visceral leishmaniasis showed changes in left ventricular systolic and diastolic function, with significant improvement in systolic function, after Miltefosine-based therapy.

Este levantamento tem como objetivo apresentar laudos e outras informações dos mielogramas realizados nos anos de 2017 e 2018 no Hospital Veterinário da Universidade Anhembi Morumbi, com ênfase nos animais portadores de leishmaniose visceral canina (LVC), a fim de constatar e relatar a quantidade de pacientes que apresentam a infecção por Leishmania spp., analisando também os resultados de outros exames citológicos e sorológicos desses animais para comparação e pontuação da precisão diagnóstica e alterações laboratoriais séricas e microscópicas mais comuns causadas por esta enfermidade, respectivamente. Observaram-se alterações em hemograma e mielograma, porém animais com baixo grau de parasitismo não apresentaram Leishmania spp. em seus exames de medula óssea.

Human Visceral Leishmaniasis (VL) is expanding, and it is distributed in the five geographic regions of Brazil, with the Northeast being the region that presents the most significant number of registered cases. The main urban reservoir of the etiological agent of VL is the domestic dog, and it is known that canine cases precede human cases. One of the control actions of VL, recommended by the Ministry of Health, is performing the euthanasia of seropositive dogs. In 2013, in the municipality of Iguatama/MG, the first canine serological survey was carried out in the city, with a prevalence of 8.3% of seropositive dogs for Leishmania infantum. Of the seropositive animals for Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) in this survey, 84% were euthanized, and 16% died within two years after diagnosis. No other control measures for CVL were taken in the municipality. The objectives of the present study were to determine the current prevalence of seropositive dogs for CVL in the municipality of Iguatama and to observe the impact of euthanasia of seropositive dogs to VL as the only control measure performed in this municipality, which is considered an enzootic area of the disease. For this, a new canine epidemiological survey was carried out in the municipality of Iguatama, following the guidelines of the Manual of Surveillance and Control of Visceral Leishmaniasis. Blood samples were collected from 270 dogs and tested by DPP® immunochromatographic test and by Enzyme-Linked Immunosorbent Assay (ELISA). The animals that presented inconclusive results had new blood samples collected and analyzed. The only animal that showed a positive result in DPP® and undetermined in the ELISA, in the first evaluation, became seropositive four months later, so this study reinforces the recommendation of the Ministry of Health to reassess dogs that present inconclusive results for CVL. From a total of 270 samples, 21 (7.8%) were reagents in both tests. Thus, the prevalence of seropositive dogs for CVL, in 2017, in the urban area of the municipality of Iguatama was 7.8%. The Polymerase Chain Reaction-Restriction Fragment Length Polymorphism (PCR-RFLP) molecular technique confirmed infection by L. infantum in the ten dogs sampled with CVL-positive serology. The comparison between the current prevalence (after euthanasia) with that found in 2013 (8.3%), there was no significant difference (p=0.764). The prevalence of CVL in the urban area of the municipality of Iguatama is still high, making it possible to presume that the euthanasia of seropositive dogs for CVL, and the absence of monitoring or other interventions measures, did not contribute to decrease the transmission of the parasite and was not sufficient for the control of CVL in the municipality of Iguatama, an area considered as non-endemic to CVL until 2013. RESUMO: A Leishmaniose visceral humana (LV) está em franca expansão e distribuída nas cinco regiões geográficas do Brasil, o Nordeste sendo a região em que há o maior número de casos registrados. O principal reservatório urbano do agente etiológico da LV é o cão doméstico e sabe-se que casos caninos antecedem o aparecimento de casos humanos. Uma das ações de controle da LV, preconizada pelo Ministério da Saúde, é a eutanásia dos cães soro reagentes. Em 2013, no município de Iguatama/MG, foi realizado o primeiro inquérito sorológico canino na cidade, sendo constatada uma prevalência de 8,3% de cães soro reagentes para Leishmania infantum. Dos animais com sorologia positiva para Leishmaniose visceral canina (LVC), neste inquérito, 84% foram eutanasiados e 16% foram a óbito em, no máximo, dois anos após o diagnóstico. Nenhuma outra medida de controle para LVC foi realizada no município. Os objetivos deste estudo foram determinar a prevalência atual de cães soro reagentes para LVC no município de Iguatama e observar o impacto das eutanásias de cães soro reagentes para LV como única medida de controle realizada neste município, considerado área enzoótica para a doença. Para isso, foi realizado um novo inquérito epidemiológico canino no município de Iguatama, seguindo as normas do Manual de Vigilância e Controle da Leishmaniose Visceral. Foram colhidas amostras sanguíneas de 270 cães que foram examinadas pelo teste imunocromatográfico DPP® e pelo ensaio imunoenzimático (ELISA). Os animais que apresentaram resultados inconclusivos tiveram novas amostras de sangue coletadas e analisadas. O único animal que apresentou resultado positivo no DPP® e indeterminado no ELISA, na primeira avaliação, soro converteu quatro meses depois, o que reforça a recomendação do Ministério da Saúde de reavaliar os cães que apresentam resultado inconclusivo para LVC. Do total das 270 amostras, 21 foram reagentes nos dois testes. Portanto, a prevalência de cães soro reagentes para LVC, em 2017, na área urbana do município de Iguatama foi igual a 7,8%. A infecção pela espécie Leishmania infantum foi confirmada através da técnica molecular de PCR-RFLP em 10 cães amostrados com sorologia positiva para LVC. A comparação entre a prevalência atual (depois das eutanásias) com a encontrada em 2013 (8,3%), não mostrou diferença significativa (p=0,764). Uma vez que a soro prevalência de LVC na área urbana do município de Iguatama ainda é alta, pode-se supor que a eutanásia dos cães soro reagentes para LVC, somada à ausência de monitoramento e de outras medidas de intervenção, não contribuiu para a diminuição da transmissão do parasito, e não foi suficiente para o controle de LVC no município de Iguatama, uma área considerada, até 2013, indene para LVC.

Dissertação de mestrado apresentada ao Programa de Pós-Graduaçãoem Biociências, do Instituto Latino-Americano de Ciências da Vida e da Natureza, da Universidade Federal da Integração Latino-Americana, como requisito parcial à obtenção do título de Mestre em Ciências, área de concentração Biociências. Atualmente a Leishmaniose Visceral (LV) é considerada a mais negligenciada de todas as doenças negligenciadas e sua prevalência excede 12 milhões de casos em todo o mundo. Além de endêmica, a LV encontra-se em franca expansão em várias regiões do Brasil e do mundo. Destaca-se o aparecimento da doença em países do Mercosul, considerados anteriormente como indenes para LV. Em relação à Leishmaniose Visceral Canina (LVC), recentemente o Ministério da Saúde, junto ao Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento (MAPA), publicou uma nota técnica liberando o tratamento da enfermidade canina com a miltefosina (MAPA/MS, 2016). Entretanto, o tratamento com esta droga ainda não é capaz de resolver o problema no cão, permanecendo o mesmo parasitado e necessitando repetir o mesmo protocolo terapêutico após alguns meses. Nesse contexto, a utilização da imunoterapia tem ganhado grande atenção na busca por protocolos terapêuticos mais efetivos, principalmente nas formas mais graves da LV e LVC. No presente estudo, foi realizada uma pesquisa com 9 animais naturalmente infectados por Leishmania infantum, grupo tratado com imunoterápico LaSap (Antígenos totais de L. amazonensis mais saponina), seguido da administração do Alopurinol (n= 4), obedecendo o protocolo do fabricante e grupo tratado unicamente com o imunoterápico LaSap (n= 5). Todos os animais melhoraram os sinais clínicos atribuídos a LVC, não demonstraram alteração em exames hematólógicos e o qPCR de medula e pele indicaram redução da carga parasitária na medula no grupo vacina em T0 (antes do início do tratamento) e T2 (após o tratamento) P=0,038 (36,6+10,0) e ente os grupos vacina + alopurinol em T2, P=0,01, (47,0+33,7). Na pele, não houve diferenças estatísticas ente os dois grupos em T2, somente no grupo vacina em T0 e T2 P=0,01 (14,8+12,7) e grupo vacina + alopurinol em T0 e T2, P=0,05 (19,8+19,1). Neste sentido, verificamos que ambas as estratégias de tratamento foram capazes de melhorar as condições clínicas, bem como reduzir a carga parasitária na pele e medula.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A leishmaniose visceral (LV), zoonose de transmissão vetorial, é um dos principais problemas de saúde pública no Brasil e outros países tropicais e subtropicais, tendo o cão como importante elemento no ciclo de transmissão. A detecção da infecção nesses animais é parte fundamental no monitoramento da doença. Entretanto, o diagnóstico da LV canina (LVC) é dificultado pela ampla variabilidade clínica e longo período de incubação. No intuito de elevar a acurácia do diagnóstico sorológico da LVC, diversos antígenos recombinantes de Leishmania sp têm sido desenvolvidos e estudados. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o desempenho diagnóstico das proteínas recombinantes rKLO8, rLb6H, 39r2 e 39r4 no diagnóstico da LVC, comparados aos antígenos de referência, rK28 e rK39. Primeiramente, os antígenos rK28, rKLO8, rLb6H e rK39 foram avaliados por IgG-ELISA quanto a sua capacidade de detectar e diferenciar cães positivos para TR-DPP® e EIE L.major-like® (grupo CVL), controles negativos de área endêmica (negativos para o teste TR-DPP® - grupo CE), ambos provenientes da cidade de Governador Valadares (MG) e cães que foram imunizados contra LVC (Leish-Tec® - grupo VAC), provenientes da cidade de Belo Horizonte (MG). A reatividade de IgG contra os antígenos rK28, rKLO8, rK39 e rLb6H foi elevada nos soros do grupo LVC, com o maior valor de sensibilidade obtido com rK28 (84%), seguido por rK39 (82%), rKLO8 (75-77%) e rLb6H (52-57%). Os antígenos rK28 e rKLO8 foram mais específicos (95-100% e 93-100%, respectivamente), seguidos de rK39 (86-95%) e rLb6H (95%). Além disso, para todos os antígenos houve reatividade com soro de cães vacinados, embora em números variáveis, sendo maior para rLb6H (25%), seguido por rKLO8 e rK39 (13%) e menor (4,5%) para o antígeno de referência, rK28. Em seguida, os antígenos acima citados, e outras duas novas proteínas recombinantes com 2 ou 4 cópias da repetição de 39 aminoácidos (39r2 e 39r4), foram estudadas utilizando amostras de soro de cães negativos para o teste RIFI (grupo SAE) e cães com infecção por Leishmania confirmada parasitologicamente, assintomáticos (AD), oligossintomáticos (OD) e sintomáticos (SD), provenientes de Belo Horizonte (MG). A reatividade de anticorpos IgG e IgG2 foi maior em todos os grupos clínicos, em comparação ao grupo negativo, para todos os antígenos. Embora IgG1 se apresente elevado (p< 0,05) somente no grupo sintomático para os antígenos rK28, 39r2, 39r4 e rK39, níveis séricos de IgG, IgG1 e IgG2 se correlacionaram com o status clínico para todos os antígenos. Adicionalmente, nossos resultados mostram que rLb6H e rKLO8 se destacaram na detecção de cães assintomáticos (100% e 81,81%, respectivamente), com valores maiores de sensibilidade para rK28 e rLb6H (91,43%), seguidos por rKLO8 (85,71%), 39r2 e 39r4 (ambos, 80%). Em relação ao antígeno rK39, os valores de sensibilidade foram similares nas duas etapas experimentais (82% e 82,86%, respectivamente). Curiosamente, os cães sintomáticos com a maior reatividade de IgG para rK28 tiveram baixa reatividade para rLb6H. Em relação a especificidade, o valor máximo (100%) foi detectado para rK28, 39r2, 39r4 e rK39, provenientes de sequências homólogas entre L. infantum e L. donovani, seguidos por rKLO8 (85,71%) e rLb6H (71,43%). Os resultados mostram características importantes dos antígenos rKLO8, rLb6H, 39r2 e 39r4 para o diagnóstico da LVC, por apresentarem desempenho elevado e comparável aos antígenos de referência rK28 e rK39, permitindo ainda, o aprimoramento da detecção da LVC nos grupos de maior dificuldade diagnóstica (assintomáticos e oligossintomáticos). A lei Visceral leishmaniasis (VL), a vector-borne zoonosis, is one of the major public health problems in Brazil and other tropical and subtropical countries. Since dogs represent an important element in transmission cycle, detection of infected dogs is an essential part of monitoring the disease. However, canine VL diagnosis (CVL) is hampered by the wide clinical variability and long incubation period. In order to increase the accuracy of CVL serological diagnosis, several recombinant Leishmania sp antigens have been developed and studied. The present study aimed to evaluate the diagnostic performance of rKLO8, rLb6H, 39r2 and 39r4 recombinant proteins in CVL diagnosis, compared to the reference antigens, rK28 and rK39. First, rK28, rKLO8, rLb6H and rK39 antigens were evaluated by IgG-ELISA for their ability to detect and differentiate TR-DPP® and EIE L.major-like® positive dogs (CVL group), TR-DPP® negative dogs (endemic control - CE group), both from Governador Valadares city (MG) and anti CVL vaccinated dogs (Leish-Tec® - VAC group), from Belo Horizonte city (MG). IgG reactivity against rK28, rKLO8, rK39 and rLb6H antigens was higher in sera from CVL group, with the highest sensitivity value obtained by rK28 (84%), followed by rK39 (82%), rKLO8 (75-77%) and rLb6H (52-57%). The most specific antigens were rK28 and rKLO8 (95-100% and 93- 100%, respectively), followed by rK39 (86-95%) and rLb6H (95%). In addition, vaccinated dogs sera reacted to all antigens, although in variable numbers, being higher for rLb6H (25%), followed by rKLO8 and rK39 (13%) and lower (4.5%) for the reference antigen, rK28. Then, the aforementioned antigens, and two other new recombinant proteins with 2 or 4 copies of the 39 amino acid repeat (39r2 and 39r4), were studied using serum samples from RIFI-negative dogs (SAE group) and dogs with parasitological confirmed Leishmania infection, asymptomatic (AD), oligosymptomatic (OD) and symptomatic (SD), from Belo Horizonte (MG). For all antigens, IgG and IgG2 antibody reactivity was higher in all clinical groups compared to the negative group. Although IgG1 was elevated (p

The objective of this study was to estimate the prevalence of canine visceral leishmaniasis (CVL) and to identify the differences in associated factors to its occurrence in urban area and countrysides in the municipality of Santa Luzia located in the semi-arid region of Paraíba. In the years 2015 and 2016, 779 blood samples from dogs were collected. The prevalence was determined by three serological techniques, ELISA-S7® Kit, DPP® Rapid Test and EIE-LVC® Kit, considering positive the samples that reacted in at least two assays. Associated factors were determined by univariate and multivariate analyzes of the guardians’ responses to the epidemiological questionnaire. The prevalence of anti-Leishmania infantum antibodies in the studied municipality was 15.00% (117/779), being higher in the urban area (15.20%) than in the countryside (13.60%). The neighborhood with the highest prevalence was Frei Damião with 26.40% (33/125), being considered a hotspot (OR 1.245, p=0.007). Other associated factors were the semi-domiciliary breeding (OR 1.798, p=0.025), in the urban area, and hunting dog (OR 18.505, p=0.016), contact with cattle (OR 17.298, p=0.022) and environment where the dog is raised (OR 4.802, p=0.024) in the countryside. In the municipality of Santa Luzia, the prevalence of canine visceral leishmaniasis is high and the disease is widely distributed. Epidemiological differences between urban area and the countryside could be observed demonstrating the need for more adequate control measures for each locality and proving the urbanization process. RESUMO: O objetivo desta pesquisa foi estimar a prevalência da leishmaniose visceral canina (LVC) e identificar as diferenças nos fatores relacionados à sua ocorrência nas zonas urbana e rural do município de Santa Luzia, localizado no semiárido paraibano. Nos anos de 2015 e 2016, coletaram-se 779 amostras de sangue de cães. A prevalência foi determinada através de três técnicas sorológicas, Kit ELISA-S7®, teste rápido DPP® e Kit EIE-LVC®, considerando positivas as amostras que reagiram em, pelo menos, dois ensaios. Os fatores relacionados foram determinados por meio das análises estatísticas uni e multivariada das respostas dos tutores ao questionário epidemiológico. A prevalência de anticorpos anti-Leishmania infantum encontrada no município estudado foi de 15,00% (117/779), sendo maior na zona urbana (15,20%) do que na rural (13,60%). O bairro que apresentou maior prevalência foi o Frei Damião com 26,40% (33/125), sendo considerado um hotspot (OR 1,245; p=0,007). Outros fatores relacionados encontrados foram a criação semidomiciliar (OR 1,798; p=0,025), na zorna urbana, e cão de caça (OR 18,505; p=0,016), contato com bovinos (OR 17,298; p=0,022) e ambiente onde o cão é criado (OR 4,802; p=0,024), na zona rural. Verifica-se a elevada prevalência da leishmaniose visceral canina e a sua ampla distribuição no município de Santa Luzia. Diferenças epidemiológicas entre as zonas urbana e rural puderam ser observadas, demonstrando a necessidade de medidas de controle mais adequadas para cada localidade e comprovando o processo de urbanização.

Visceral leishmaniasis is the most severe form of a human and animal disease complex entitled leishmaniasis, which is endemic to 70 countries. It is imperative to develop and offer technologies capable of increasing the resolution ability of control programs of this zoonosis. In the search for technological innovations in health, especially in environmental surveillance, the objective is to develop a mobile application (App) for smartphones in order to facilitate and systematize the notification of positive cases of canine visceral leishmaniasis (CVL) by veterinarians working in clinics for assisting the municipal health surveillance in the management of this zoonosis. Thus, we developed an App, C7 LVC - Canine Visceral Leishmaniasis Notification System, with formatting based on the CR Campeiro 7® software. The technology created enables the filling of important gaps in information systems, facilitating the transmission of data and the use of this data by public management bodies to take CVL prevention and control actions. RESUMO: A leishmaniose visceral é a forma mais grave de um complexo de doenças humanas e animais, denominado leishmaniose, endêmica em 70 países. É imprescindível desenvolver e oferecer tecnologias capazes de aumentar a capacidade de resolução dos programas de controle desta zoonose. Na busca por inovações tecnológicas em saúde, principalmente na vigilância ambiental, o objetivo é desenvolver um aplicativo móvel (App) para smartphones a fim de facilitar e sistematizar a notificação de casos positivos de leishmaniose visceral canina (LVC) por médicos veterinários que atuam em clínicas auxiliando a vigilância sanitária municipal, na gestão desta zoonose. Para tanto, foi desenvolvido um App, C7 LVC - Sistema de Notificação da Leishmaniose Visceral Canina, com formatação baseada no software CR Campeiro 7®. A tecnologia criada possibilita o preenchimento de lacunas importantes nos sistemas de informação, facilitando a transmissão de dados e a utilização desses dados pelos órgãos da gestão pública para a tomada de ações de prevenção e controle da LVC.

Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a zoonotic disease of high lethality caused by Leishmania infantum in the Americas. In the infected dog, the amastigotes are scarce in blood, especially in the late phase of the disease. This study aimed to report a rare case of L. infantum amastigotes found in neutrophils from peripheral blood of a naturally infected dog in terminal phase of CVL, also describing its clinical status before and after treatment with miltefosine 2%. The dog, which presented as polysymptomatic and with classical signs and symptoms of CVL was submitted to the following tests: Dual Path Platform (DPP) rapid test, ELISA and parasitological examination of peripheral blood. Hematological and biochemical parameters were obtained before and after treatment. All diagnostic tests were positive for CVL. The identification of L. infantum amastigotes inside neutrophils from peripheral blood was confirmed through microscopy, and the species was confirmed by molecular analysis. At the end of the treatment, peripheral parasitemia was not detected, and improvements were observed in clinical and laboratorial parameters. Finally, this atypical finding can be used as example to raise discussions about the real immunological role of neutrophils in late phases of CVL and its clinical/therapeutic implications. Resumo A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma doença zoonótica de alta letalidade causada por Leishmania infantum nas Américas. No cão infectado, as formas amastigotas são escassas no sangue, principalmente na fase tardia da doença. Este estudo teve como objetivo relatar um caso raro de amastigotas de L. infantum encontradas em neutrófilos do sangue periférico de um cão naturalmente infectado e terminal da LVC, descrevendo também seu estado clínico antes e após o tratamento com miltefosina a 2%. O cão, que se apresentou como polissintomático e com sinais e sintomas clássicos da LVC foi submetido aos seguintes testes: teste rápido Dual Path Platform (DPP), ELISA e exame parasitológico de sangue periférico. Os parâmetros hematológicos e bioquímicos foram obtidos antes e após o tratamento. Todos os testes diagnósticos foram positivos para LVC. A identificação de formas amastigotas de L. infantum, dentro de neutrófilos do sangue periférico foi confirmada por microscopia, e a espécie foi confirmada por análise molecular. Ao final do tratamento, não foi detectada parasitemia periférica, observando-se melhora dos parâmetros clínicos e laboratoriais. Por fim, esse achado atípico pode ser usado como exemplo para levantar discussões sobre o real papel imunológico dos neutrófilos nas fases tardias da LVC e suas implicações clínicas/terapêuticas.

Introduction: Canine Visceral Leishmaniasis (CVL) is a severe systemic zoonosis that has the dog as the main reservoir for human disease. As it is a neglected tropical disease, there are gaps in its aspects, especially in regional terms. In this sense, the aim was to evaluate the profile of infected animals and identify the prevalent species in canine infection in the macro-region of Mucuri Valley, Minas Gerais, Brazil, through the polymerase chain reaction (PCR-RFLP-ITS1). Methodology: Cross-sectional observational study carried out between August/2019 and February/2020 at the San Francisco Veterinary Clinic and the Municipal Dog Kennel. Positive animals to the DPP® were selected and biological samples were collected: venous blood (SNAP); ear skin fragment (imprint); and bone marrow aspirate to smear slides, isolation in culture environment, and molecular diagnosis. All animals underwent clinical examination and data collection: provenance, symptoms, fur, age, sex. Results: In 88 of the 132 samples, the presence of Leishmania’s DNA was detected and in 87.3% the species L. infantum was identified. Of these 88 animals, 69 had symptoms; 45 were males; 73 with short fur. The highest frequency of positive PCR occurred between 2-5 years (55 animals). 91.67% were SNAP test positive. Conclusions: The present study made it possible to understand aspects of CVL in the evaluated samples and to identify the etiological agent most prevalent in the area, allowing the establishment of efficient strategies to control the disease in dogs and to prevent human infection in the region. Introducción: La Leishmaniasis Visceral Canina (LVV) es una grave zoonosis sistémica que tiene al perro como principal reservorio de la enfermedad humana. Al ser una enfermedad tropical desatendida, existen vacíos en cuanto a sus aspectos, especialmente en el carácter regional. En ese sentido, el objetivo fue evaluar el perfil de animales infectados e identificar las especies prevalentes en la infección canina en la macrorregión Vale do Mucuri, Minas Gerais, Brasil, por medio de la reacción en cadena de la polimerasa (PCR-RFLP ITS1). Metodología: Estudio observacional transversal realizado entre agosto/2019 y febrero/2020 en la Clínica Veterinária São Francisco y en el Canil Municipal. Los animales positivos al Test Rápido DPP®/Biomanguinhos fueron seleccionados por medio de extracción de sangre venosa (SNAP); fragmento de piel de oreja (impresión por aposición); y aspirado de médula ósea para frotis en lámina, aislamiento en medio de cultivo y diagnóstico molecular. Todos los animales fueron sometidos a examen clínico y recogida de datos: procedencia, pelaje, edad, sexo. Resultados: De 132 muestras, 88 (66,7%) identificaron la presencia de Leishmania por PCR-RFLP ITS1 y la identificada en el 87,3% de estas fue L. infantum. De estos 88, 69 eran sintomáticos; 43 mujeres, 45 hombres; 73 con pelo corto. Por edad, la mayor frecuencia de PCR se presentó entre los 2-5 años (55 animales). El 91,67% resultó positivo a la prueba serológica SNAP, mientras que las pruebas parasitológicas fueron en su mayoría negativas, a pesar de la presencia de síntomas. Conclusiones: El presente estudio permitió conocer aspectos de la LVC en la muestra evaluada e identificar la etiológica prevalente en la zona de origen, permitiendo establecer esquemas eficientes en el control del agente en perros. Introdução: A Leishmaniose Visceral Canina (LVC) é uma zoonose sistêmica grave que tem o cão como principal reservatório para a doença humana. Sendo uma doença tropical negligenciada, há lacunas sobre seus aspectos, sobretudo em caráter regional. Neste sentido, objetivou-se avaliar o perfil dos animais infectados e identificar as espécies prevalentes na infecção canina na macrorregião do Vale do Mucuri, Minas Gerais, Brasil, por meio da reação em cadeia de polimerase (PCR-RFLP ITS1). Metodologia: Estudo observacional transversal realizado entre agosto/2019 e fevereiro/2020 na Clínica Veterinária São Francisco e no Canil Municipal. Foram selecionados animais positivos ao Teste Rápido DPP®/Biomanguinhos, por meio da coleta de sangue venoso (SNAP); fragmento de pele de orelha (imprint por aposição); e aspirado de medula óssea para esfregaço em lâminas, isolamento em meio de cultura e diagnóstico molecular. Todos os animais passaram por exame clínico e coleta de dados: procedência, clínica, pelagem, idade, sexo. Resultados: Dentre 132 amostras, 88 (66,7%) identificaram a presença de Leishmania ao PCR-RFLP ITS1 e a identificada em 87,3% destes foi a L. infantum. Destes 88, 69 eram sintomáticos; 43 fêmeas, 45 machos; 73 com pelo curto. À idade, a maior frequência de PCR positivos ocorreu entre 2-5 anos (55 animais). 91,67% foram positivas ao teste sorológico SNAP, enquanto os parasitológicos foram majoritariamente negativos, apesar da presença de sintomas. Conclusões: O presente estudo possibilitou conhecer aspectos da LVC na amostra avaliada e identificar o agente etiológico prevalente na área de procedência, permitindo estabelecer estratégias eficientes no controle da enfermidade nos cães da região.

Orientador: Ingrid Menz Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A incidência das leishmanioses tegumentar (LTA) e visceral americanas (LVA) em hospedeiros caninos e humanos encontra-se em crescente expansão no Brasil. Para a vigilância epidemiológica dessas endemias, é fundamental o conhecimento da distribuição das diferentes espécies vetoras de flebotomíneos e, para a LVA, o conhecimento de parâmetros epidemiológicos como a prevalência, incidência, período de incubação e potencial de transmissibilidade de Leishmania infantum chagasi no cão, seu principal reservatório. Objetivou-se assim esclarecer alguns aspectos epidemiológicos das infecções caninas, incluindo-se levantamento entomológico no município de Monte Mor, situado na região centro-leste do estado de São Paulo, além da obtenção de parâmetros epidemiológicos da LVA por estudo longitudinal de 105 cães em área endêmica para a doença em Campo Grande, Mato Grosso do Sul, por dois anos. Em Monte Mor, 319 amostras de soro canino foram avaliadas por ELISA e RIFI, sendo todas negativas para anticorpos anti-Leishmania, identificou-se sete espécies de flebotomíneos, com predomínio de Nyssomyia neivai (48,84%) considerada a principal transmissora do agente causador da LTA no interior paulista, além do diagnóstico de dois casos caninos de LTA, com sorologia reagente para ELISA FML e infecção por L. (Viannia) braziliensis. No estudo longitudinal dos 105 cães acompanhados por meio de avaliações clínicas, exames sorológicos (ELISA L. major-like, FML e S7) e parasitológicos diretos (esfregaços e PCR de aspirados de medula óssea e linfonodo e imunoistoquímica de pele) obteve-se prevalência sorológica inicial de 30,40% (145/477) no ELISA L. major-like e 26,28% (97/369) no ELISA FML. A prevalência da doença clínica (sintomáticos) foi de 7,13% (62/870), sendo que 24,53% (117/477) foram soropositivos no ELISA L. major-like, mas sem sintomas de leishmaniose visceral canina (LVC), demonstrando quantidade elevada de cães infectados assintomáticos na área. Ao final de 24 meses não se observou associação estatística significativa nas variáveis ambientais avaliadas no início do estudo e a ocorrência de casos de LVC, como a ocorrência prévia de LVA e/ou LVC no entorno ou na casa do proprietário, a existência de outras espécies animais na casa, o hábito intra ou peridomiciliar, o temperamento, a idade e o sexo do cão. A incidência de novas infecções variou de 11,76% (8/68), 11,76% (8/68) e 18,18% (12/66) respectivamente entre o Dia -30 e Zero, Dia Zero e Mês 12 por sorologia e Dia Zero e Mês 12 para os métodos diretos. A mortalidade natural e induzida via eutanásia de animais doentes e/ou infectados foi de 28,57% (30/105). O período de incubação médio foi de 6,46 meses. Alguns animais infectados com resultados positivos em prova diagnóstica de PCR e/ou prova de sorologia no início do estudo não apresentaram novos resultados positivos após 12 meses, indicando possível cura ou não estabelecimento da infecção. Observaram-se alguns animais com provas diretas positivas mostrando infecção assintomática por período de 24 meses. Obteve-se baixa prevalência de amastigotas em pele saudável, presente apenas em animais sintomáticos, enquanto que a ausência de amastigotas observada em cães portadores assintomáticos indica que os mesmos podem não ter papel importante na transmissão de parasitas ao flebotomíneo vetor Abstract: Cutaneous (ACL) and visceral american leishmaniasis (AVL) incidences in human and canine hosts are increasing and expanding in Brazil. In order to perform an adequate vigilance of these diseases, the knowledge regarding distribution of different sandfly vector species is mandatory, besides of precising epidemiological parameters like prevalence, incidence, incubation period and potential of transmissibility in the dog, the main reservoir for the AVL etiologic agent. This way, the objectives of this study were to clarify some epidemiological aspects of canine leishmaniases, including entomological surveillance in the county of Monte Mor, central east region of São Paulo state and performance of a longitudinal study in an AVL endemic area located in Campo Grande, Mato Grosso do Sul state, including 105 dogs in order to evaluate epidemiological data during two years. In Monte Mor county, 319 sera samples were analysed through in house developed ELISA and IFA methods. No seropositive result was found, seven different sandfly species were identified, prevailing Nyssomyia neivai (48.84%) considered the main vector for the ACL etiologic agent in São Paulo state countryside, and two dogs were diagnosed with ACL symptoms, presenting seropositivity through ELISA FML and positive identification of L. (Viannia) braziliensis infection using PCR. The longitudinal study was performed using clinical examination, serology (ELISA L. major-like, FML and S7) and direct diagnostic techniques (bone marrow and lymph node smears and PCR and immunohistochemistry in skin tissues) on dogs. A seroprevalence of 30.40% (145/477) at ELISA L. major-like and 26.28% (97/369) at ELISA FML was obtained at the pre-initial phase. Clinical disease prevalence was 7.13% (62/870), and 24.53% (117/477) dogs were seropositive at ELISA L. major-like, but asymptomatic, showing the high amount of infected healthy carriers. At the end of the 24 months period no significant association was found between visceral leishmaniasis (VL) canine cases with environmental variables evaluated at Day Zero like previous registration of human or canine VL on the study house or neighborhood, other domestic animal species at the backyard, intra or peridomiciliar, aggressive behavior, age or sex of the study dog. Incidence of infections varied from 11.76% (8/68), 11.76% (8/68) e 18.18% (12/66) respectively between Day -30 and Zero, Day Zero and Month 12 using serology and Day Zero and Month 12 for direct diagnostic methods. Natural and induced mortality through euthanasia of sick/infected dogs was 28.57% (30/105). The mean disease incubation period was 6.46 months. Some of the infected animals with positive diagnosis at the beggining of the study had no other positive results after 12 months, indicating a possible cure or an absence of infection establishment, while others had positive diagnosis at the beginning and at month 12 with asymptomatic condition for more than 24 months. A low Leishmania amastigotes prevalence at healthy skin was obtained and positive results were observed only in symptomatic animals. Absence of parasites in skin of asymptomatic carriers may indicate they have no important role on the transmission of Leishmania to competent vectors Doutorado Parasitologia Doutor em Parasitologia

Orientador: Silmara Marques Allegretti Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A Leishmaniose Visceral Canina, doença grave e fatal, tem o cão como o principal reservatório do seu agente etiológico no meio urbano. Devido ao alto parasitismo cutâneo nestes animais, da quantidade de cães infectados, e do próximo convívio com o homem, as ações desenvolvidas pelo Programa Brasileiro de Controle da Leishmaniose Visceral são centradas no reservatório canino, através da identificação e eutanásia dos animais soropositivos. Sendo assim, a adoção de ações profiláticas, com a utilização de vacinas nos cães, constituiria uma importante ferramenta para a diminuição da doença nestes animais, e consequentemente, da infecção do vetor e da transmissão do agente. Além disso, a adoção de medidas profiláticas, como o uso de coleiras impregnadas com deltametrina, repelentes de uso tópico e vacinas, são as únicas alternativas disponíveis atualmente para os cães, pois no Brasil, o tratamento de cães está proibido desde a publicação da Portaria Interministerial nº 1.426, de 11 de julho de 2008. Apesar de disponível desde 2004, a vacina Leishmune® ainda não é amplamente utilizada no Brasil, principalmente devido à possibilidade dos cães vacinados apresentarem sorologia positiva em inquéritos epidemiológicos, não sendo possível diferenciá-los dos infectados. Este trabalho foi realizado com o objetivo de avaliar o perfil sorológico de cães vacinados e saudáveis que residem em áreas endêmicas, e de cães naturalmente infectados por Leishmania infantum/ chagasi, e avaliar a possibilidade de diferenciação sorológica a partir dos métodos utilizados atualmente nos inquéritos epidemiológicos oficiais e nos laboratórios de diagnóstico particulares: ELISA e RIFI com antígenos L. major-like, produzidos pelo Laboratório Bio-Manguinhos e ELISA S7, produzido pelo Laboratório Biogene. Todos os soros de cães foram testados nos três métodos, e os resultados demonstraram que nenhum cão vacinado apresentou resultado positivo em mais de um teste. Apenas um cão vacinado (1/39) apresentou resultado de 1:40 na RIFI, e quatro cães (4/39) apresentaram resultado positivo no ELISA L. major-like. Nenhum soro de cão vacinado apresentou resultado positivo no ELISA S7. O único resultado positivo na RIFI foi negativo nos outros dois métodos, e os quatro soros positivos no ELISA L. major-like foram negativos tanto na RIFI quanto no ELISA S7. Estes resultados sugerem reações falso-positivas, e demonstram que, de acordo com o Manual de Vigilância Epidemiológica, se os soros de cães vacinados forem testados em dois métodos (ELISA e RIFI), a possibilidade de um cão vacinado apresentar resultado positivo será remota. Desta maneira, a vacinação da população canina não dificultaria as ações atualmente empregadas para o controle da Leishmaniose Visceral, mas poderia, no futuro, ser somada as medidas já adotadas, evitando assim a eutanásia de cães Abstract: Canine Visceral Leishmaniasis, serious and fatal disease, has the dog as main reservoir of the agent Leishmania infantum in urban environment. The control actions developed by the Brazilian Program of Visceral Leishmaniasis Control are focused on the canine reservoir through identification and euthanasia of seropositive animals, due to high cutaneous parasitism in these animals, the amount of infected dogs and the closeness to the human being. Therefore, the adoption of prophylactic measures like dog vaccination would be an important tool to reduce the number of infected dogs and consequently the vector infection and the disease transmission. Besides that, the adoption of prophylactic measures in these animals, like the usage of deltametrin embedded collars, topic usage repellent and vaccines are the only available alternatives for these animals, since dogs treatment has been forbidden by law in Brazil since 2008. Although it has been available since 2004, the Leishmune® vaccine is not widely used in Brazil yet, especially due to the possibility of vaccinated dogs showing positive serology, being impossible to differentiate them from infected dogs. The objective of this work was to evaluate the serologic profile of healthy and vaccinated dogs who live in endemic areas and of naturally infected dogs with Leishmania Infantum/ chagasi, and also evaluate the possibility of serologic differentiation using the same methods nowadays adopted by official epidemiological surveys and in private diagnosis laboratories: ELISA and IFA with L. major-like antigens, produced by Bio-Manguinhos Laboratory and ELISA S7, produced by Biogene Laboratory. All the dogs sera were tested in the three methods, and the results showed that no vaccinated dog presented a positive result in more than one test. Only a vaccinated dog (1/39), presented 1:40 in IFA, and 4 dogs (4/39) presented a ELISA L. major-like positive result. No vaccinated dog sera presented positive result in ELISA S7. The only IFA positive result was negative in the other two methods and the four positive sera in ELISA L. major-like were negative either in IFA, as in ELISA S7. These results suggest false positive reactions and demonstrate that according to the Epidemiological Surveillance Manual, if the vaccinated dogs sera are tested in two methods (ELISA and IFA), the possibility of a vaccinated dog to present a positive result is remote. Thus, the vaccination of a big quantity of dogs would not disturb the presently adopted actions for Visceral Leishmaniasis control, but could in the future be added to the already adopted measures, therefore avoiding the dog's euthanasia Mestrado Parasitologia Mestre em Parasitologia

Orientadores: Hyun Mo Yang, Roberta Regina Delboni Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Matemática, Estatística e Computação Científica Resumo: A Leishmaniose é considerada pela Organização Mundial da Saúde (OMS) como uma das principais doenças negligenciadas no mundo. Sua transmissão se dá no momento da regurgitação sanguínea de uma flebotomíneo fêmea infectada pelo protozoário do gênero Leishmania. No meio urbano, os principais reservatórios do protozoário são os cachorros domésticos. Nesse sentido, o Ministério da Saúde do Brasil tem como propósito combater a doença, tanto no homem quanto no cachorro. O órgão estatal aponta algumas estratégias para o controle e para a prevenção da doença, como: o uso de coleiras impregnadas a 4% de deltametrina; a vacinação; a aplicação de eutanásia em cachorros assintomáticos e sintomáticos e o tratamento medicamentoso. Neste trabalho, elaboramos um modelo matemático de equações diferenciais ordinárias não lineares para investigar os efeitos das medidas de controle e prevenção, apontadas anteriormente, na transmissão da Leishmaniose Visceral entre as populações de cachorros e flebótomos. A partir disso, foram determinados os pontos de equilíbrio e as suas estabilidades. Obtivemos o $R_0$, o número de reprodutibilidade basal, e o $R_*$, o número de reprodutibilidade basal quando se é aplicado medidas de controle e prevenção. Para confirmar as propriedades dos pontos de equilíbrio e do efeito das medidas de controle e prevenção no $R_0$, foram realizadas simulações numéricas no sistema de equações e estudou-se a influência da variação dos parâmetros na variação total de limiares importantes como no $R_0$ e no $R_*$ Abstract: Leishmaniasis is considered by the World Health Organization (WHO) as one of the main neglected diseases in the world. Its transmission occurs at the moment of blood regurgitation from a female sandfly infected by the protozoan of the genus Leishmania. In urban areas, the main reservoirs of the protozoan parasite are domestic dogs. In this sense, the Brazilian Ministry of Health aims to combat the disease in humans and dogs. The state agency points out some strategies for controlling and preventing the disease, such as the use of collars impregnated with 4% deltamethrin; vaccination; euthanasia in asymptomatic and symptomatic dogs; and drug treatment. In this paper, we developed a mathematical model composed of nonlinear ordinary differential equations to investigate the effects of the control and prevention measures on the transmission of visceral leishmaniasis between dog and phlebotomine populations. The equilibrium points and their stabilities were determined. We obtained the threshold $R_0$, which represents the basic reproduction number without control and prevention measures, and the threshold $R_*$, which means the basic reproduction number applying control and prevention measures. In order to confirm the properties of the equilibrium points and the effect of control and prevention measures on the thresholds, numerical simulations and sensitivity analyses were performed Mestrado Matemática Aplicada Mestra em Matemática Aplicada CAPES 001

Tese (doutorado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Agronomia e Medicina Veterinária, Programa de Pós-Graduação em Saúde Animal, 2020. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES). Foram estudados 720 casos de lesões na cavidade oral em cães diagnosticados entre 2015-2020, no Distrito Federal, Brasil. Dessas alterações, 432 (60%) foram neoplásicas e 288 (40%) não neoplásicas. Das neoplasias, 229 (53%) foram consideradas malignas e 203 (47%) benignas, acometendo principalmente machos, de 43 raças diferentes, com idade média 9,4 anos, afetando principalmente gengiva e lábio. As principais neoplasmas foram melanoma (96/432 [22,2%]), fibroma odontogênico periférico (68/432 [15,7%]), papiloma (63/432 [14,5%]) e carcinoma de células escamosas (56/432 [12,9%]). As lesões não neoplásicas também acometeram predominantemente machos, de 41 raças diferentes, com idade média 8,9 anos, afetando principalmente gengiva, lábio e língua. Essas lesões foram diagnosticadas como inflamatórias (230/288 [79,8%]), hiperplásicas (47/288 [16,3%]) e como outras alterações (11/288 [3,8%]). Dentre as inflamações, destacam-se seis casos incomuns de leishmaniose visceral com manifestação exclusivamente oral, que foram confirmados pela histopatologia, imuno-histoquímica e PCR. A total of 720 cases of oral cavity lesions were studied in dogs diagnosed between 2015-2020 in Distrito Federal, Brazil. Four-hundred and thirty-two (60%) lesions were neoplastic and 288 (40%) were non-neoplastic. Of the neoplasms, 229 (53%) were considered malignant and 203 (47%) benign, affecting mainly males, of 43 different breeds, with an average age of 9.4 years, affecting mainly the gum and lip. The main neoplasms included melanoma (96/432 [22.2%]), peripheral odontogenic fibroma (68/432 [15.7%]), papilloma (63/432 [14.5%]) and squamous cell carcinoma (CCE) (56/432 [12.9%]). Non-neoplastic lesions also affected males predominantly, from 41 different breeds, with an average age of 8.9 years, affecting mainly the gums, lip and tongue. These lesions were diagnosed as inflammatory (230/288 [79.8%]), hyperplastic (47/288 [16.3%]) and other lesions (11/288 [3.8%]). Also, six uncommon cases of visceral leishmaniosis with an exclusively oral manifestation were confirmed by histopathology, immunohistochemistry and PCR.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A leishmaniose visceral canina (LVC) é uma zoonose causada comumente por Leishmania (Leishmania) infatum, afetando no contexto urbano principalmente cães domésticos. Esses reservatórios apresentam intenso parasitismo visceral e cutâneo, o que favoreceria a infecção dos vetores. A enzootia canina, regularmente, precede a ocorrência da LV em humanos. A presente pesquisa tem os objetivos de caracterizar clinicamente os animais; diagnosticar a LVC; identificar as espécies de protozoários do gênero Leishmania causando LVC e caracterizar molecularmente isolados obtidos a partir de aspirados de medula óssea. O estudo foi realizado na cidade de Januária, localizada na região norte do Estado de Minas Gerais, Brasil. Foram coletadas amostras de soro, fragmentos de baço, pele de orelha e aspirados de medula óssea de 100 animais infectados em dois momentos e áreas: 2017, zona urbana e 2019 zona rural. O diagnóstico foi confirmado por meio de sorologia (DPP, RIFI e ELISA) e também por PCR-ITS1 em amostras de pele, baço e medula óssea. Para identificação da espécie foi realizada a RFLP nas amostras PCR positivas. Amostras de aspirados de medula óssea foram colocados em meio de cultura NNN/LIT para obtenção de isolados. DNA dos isolados (n=27) foi extraído, purificado, amplificado e sequenciado. Todos os animais desse estudo apresentaram sinais clínicos sugestivos de LVC, cuja pontuação observada através de confecção de escore foi de 2-17 pontos (0-19), caracterizando a população amostral como clinicamente sintomática e permitindo inferências de presença de correlação com a titulação de anticorpos (RIFI). A confirmação diagnóstica de LVC foi evidenciada em 100% dos cães, em pelo menos uma das técnicas citadas. Por PCR-RFLP foi feita a identificação de L. (L.) infantum em 72% dos animais, não tendo sido identificada outra espécie. Foram isoladas 27 cepas, das quais 20 tiveram os genomas completos sequenciados (SGC) que foram analisados juntamente com o genoma de referência de L. infantum (JPCM5). Alterações de ploidia foram detectadas independente de localização (urbana ou rural) e/ou temporalidade (2017 ou 2019). Todos os genomas sequenciados exibiram polissomia do cromossomo 31, bem como, os isolados urbanos/2017 poliploida do cromossomo 23. As análises de enriquecimento funcional por GO no cromossomo 23 revelaram enriquecimentos gênicos envolvidos em processos enzimáticos de conversão de acetato em acetil-Coa mediado por AceCS para síntese de lipídeos e em degradação de Heme, importante para limitar a produção de radicais livre em macrófagos parasitados. Tanto as análises de ploidia, como de SNVs (PCA) revelaram a existência de 2 clusters principais: 1º) Cluster urbano- constituído de todas os genomas urbanos isolados em 2017; 2°) Cluster rural: formado por todas as cepas rurais isoladas em 2019. Análises de SNVs evidenciaram entre 814 e 987 variantes em cada genoma e 99,99% de identidade entre os 20 genomas. Em suma, os 2 clusters principais formados foram caracterizados por temporalidade ou ano de coleta das espécimes clínicas (2017 e 2019) e/ou localização geográfica (urbana e rural), sendo o primeiro cluster, urbano/2017 e o segundo rural/2019, sugerindo interferências espaciais e/ou temporais nos processos evolutivos genômicos desse organismo. Canine visceral leishmaniasis (CVL) is a zoonosis commonly caused by Leishmania (Leishmania) infatum, affecting mainly domestic dogs in the urban context. These hosts have intense visceral and cutaneous parasitism, which would facilitate infection of the vectors. Canine enzooty regularly precedes the occurrence of VL in humans. The present research aims to clinically characterize the animals; diagnose CVL; to identify the protozoan species of the genus Leishmania causing CVL and to characterize molecularly isolates obtained from bone marrow aspirates. The study was carried out in the city of Januária, located in the northern region of the State of Minas Gerais, Brazil. Serum samples, spleen fragments, ear skin and bone marrow aspirates were collected from 100 infected animals in two moments and areas: 2017 urban area and 2019 rural area. The diagnosis was confirmed by serology (DPP, RIFI and ELISA) and also by PCR-ITS1 in samples of skin, spleen and bone marrow. For species identification, RFLP was performed on PCR positive samples. Samples of bone marrow aspirates were placed in NNN / LIT culture medium to obtain isolates. DNA from the isolates (n = 27) was extracted, purified, amplified and sequenced. All animals in this study showed clinical signs suggestive of CVL, that the score observed was 2-17 points (0-19), characterizing the sample population as clinically symptomatic and allowing inferences of correlation with antibody titers (RIFI). The diagnostic confirmation of CVL was evidenced in 100% of the dogs, in at least one of the techniques mentioned. By PCR-RFLP, L. (L.) infantum was identified in 72% of the animals, with no other species identified. 27 strains were isolated, of which 20 had the sequenced genomes that were analyzed together with the reference genome of L. infantum (JPCM5). Ploidy alteration were detected regardless of location (urban or rural) and / or temporality (2017 or 2019). All sequenced genomes exhibited polysomy of chromosome 31, as well as urban isolates / 2017 polyploid of chromosome 23. Analyzes of functional enrichment by GO revealed gene enrichments involved in enzymatic processes of conversion of acetate to acetyl-Coa mediated by AceCS for lipid synthesis (Figure 13) and Heme degradation, to limit the production of free radicals in macrophages parasitized. Both ploidy and SNVs (PCA) analyzes revealed the existence of 2 main clusters: 1st) Urban cluster - consisting of all urban genomes isolated in 2017; 2 °) Rural cluster: formed by all isolated rural strains in 2019. Analysis of SNVs showed between 814 and 987 variants in each genome and 99.99% identity among the 20 genomes. In short, the 2 main clusters formed were characterized by temporality or year of collection of clinical specimens (2017 and 2019) and / or geographic location (urban and rural), with the first cluster, urbano / 2017 and the second rural / 2019, suggesting spatial and / or temporal interferences in the genomic evolutionary processes of this organism.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Os cães são os reservatórios primários dos parasitos do gênero Leishmania. A resposta imunológica induzida por Leishmania infantum é importante para a resistência à infecção e para a patogenia nestes animais. As metaloproteinases de matriz (MMPs) são uma família de enzimas proteolíticas que desempenham múltiplos papeis na resposta imunológica e no remodelamento tecidual. Entretanto, a ação destas enzimas pode levar à imunopatogênese em um processo infeccioso, que causa morbidade ou mortalidade do hospedeiro. Poucos estudos demonstram a correlação entre a expressão de MMPs e as manifestações clínicas dos animais portadores de leishmaniose visceral canina (LVC). Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a expressão de MMPs em cães infectados naturalmente por Leishmania infantum e correlaciona-los aos quadros de manifestações clínicas da doença (assintomáticos, oligossintomáticos, sintomáticos). Para isso, a expressão relativa das MMPs, seus inibidores teciduais (TIMPs) e as citocinas, IL-10 e TNF-α, foi analisada no tecido hepático dos cães por meio de PCR em tempo real. O processo inflamatório e a citoestrutura do tecido hepático foi mensurado usando a coloração de hematoxilina-eosina. Cães infectados por L. infantum apresentaram aumento na expressão de MMPs (2, 3, 9, 11 e 13) e TIMPs (1 e 4) em tecido hepático, quando comparado a animais não infectados. Ademais, animais sintomáticos e oligossintomáticos apresentaram maior expressão de MMP-2 e IL-10, quando comparado ao grupo de cães assintomáticos. Cães oligossintomáticos apresentaram infiltrado inflamatório hepático maior e mais difuso, quando comparado a cães assintomáticos e sintomáticos. Os resultados indicam que a elevada expressão de MMPs (MMP2, MMP3, MMP9, MMP11 e MMP13) e TIMPs (TIMP1 e TIMP4) está correlacionada positivamente a expressão das citocinas TNF-α e IL-10 em cães naturalmente infectados por L. infantum, podendo contribuir para a destruição do parênquima hepático e para a evolução clínica da leishmaniose visceral nos animais. Dogs are the primary reservoir of Leishmania parasites. The immune response induced by Leishmania infantum is important for resistance to infection and pathogenesis in these animals. Matrix metalloproteinases (MMPs) are a family of proteolytic enzymes that play multiple roles in immune response and matrix remodeling. However, the enzyme action may lead to immunopathology in an infectious process that causes host morbidity or mortality and favors the the pathogen spread and its persistence. Few studies demonstrate the correlation between MMPs expression and clinical manifestations of animals with canine visceral leishmaniasis (CVL). The aim of the study was to evaluate matrix metalloproteinases expression in dogs naturally infected with Leishmania infantum and correlate them to the clinical manifestations of the disease (asymptomatic, oligosymptomatic, symptomatic). The relative expression levels of MMPs, their tissue inhibitors (TIMPs) and the cytokines, IL-10 and TNF-α, were analyzed in liver tissues of dogs by real time PCR. The inflammatory process and cytostructure of liver tissue were measured using hematoxylin-eosin staining. Dogs infected with L. infantum showed increased expression of MMPs (2, 3, 9, 11 and 13) and TIMPs (1 and 4) in liver tissue, when compared to uninfected animals. In addition, symptomatic and oligosymptomatic animals showed higher expression of MMP-2 and IL-10, when compared to the group of asymptomatic dogs. Oligosymptomatic dogs showed larger and more diffuse hepatic inflammatory infiltrate when compared to asymptomatic and symptomatic dogs. The results indicate that the high expression of MMPs (MMP2, MMP3, MMP9, MMP11 and MMP13) and TIMPs (TIMP1 and TIMP4) is positively correlated with the expression of the cytokines TNF-α and IL-10 in dogs naturally infected by L. infantum, which may contribute to the destruction of the liver parenchyma and to the clinical evolution of visceral leishmaniasis in animals.

Dissertação (mestrado)—Universidade de Brasília, Faculdade de Medicina, Pós-graduação em Medicina Tropical, 2020. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoas de Nível Superior (CAPES); Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Fundação de Apoio e Pesquisa do Distrito Federal (FAP-DF) A Leishmaniose é uma zoonose, transmitida por vetor (gênero Lutzomyia), pertencente ao grupo de doenças tropicais negligenciadas. A Leishmaniose Visceral (LV) é considerada a forma mais perigosa da doença, apresentando risco de morte quando não tratada. A LV acomete humanos e outras espécies de mamíferos, sendo o cão infectado considerado o principal reservatório doméstico do parasito. No Brasil, a leishmaniose visceral canina (LVC) é em geral causada pela espécie L. infantum e manifesta-se num amplo espectro clínico, desde a forma assintomática até a forma sintomática da doença, com intenso comprometimento de órgãos internos. Para o curso clínico da doença, a resposta imune celular tem um importante papel, porém, há poucos estudos caracterizando detalhadamente a expressão de moléculas de superfície em leucócitos caninos diferenciando sintomáticos de assintomáticos. Assim, o objetivo deste estudo foi avaliar a expressão de marcadores celulares fenotípicos em leucócitos de cães infectados, sintomáticos e assintomáticos. Neste trabalho, 15 cães do DF foram distribuídos em três grupos: cães não infectados (NI), cães infectados assintomáticos (IAS) e cães infectados sintomáticos (IS). Foram analisados em contexto ex vivo, os fenótipos celulares de monócitos (CD14+MHC-II+), linfócitos T (CD3+, CD4+, CD25+, CD8+), linfócitos B (CD19+CD25+) e a viabilidade celular, em PBMCs. Adicionalmente, foi realizada a análise, in vitro, empregando-se antígenos de L. infantum, solúvel e recombinante (ADF/Cofilina e RAB1-GTPase), como tratamentos para as células citadas acima. Os resultados indicam menor freqüência de monócitos (CD14+MHC- II+) circulantes, assim como baixa expressão de CD44 no grupo IS, sugerindo comprometimento da função de apresentação de antígenos em monócitos desse grupo. Ainda, a maior expressão de CD4 em linfócitos de cães IS em relação aos cães IAS é um resultado que deve ser melhor estudado para compreensão de seu impacto na resposta imune celular dos indivíduos IS. Na avaliação de morte celular demonstrou-se a modulação desta pelo parasito em cães com LVC, sugerindo sua utilização como estratégia de evasão do parasito ao sistema imune. Alguns biomarcadores baseados na expressão de moléculas e porcentagem de monócitos e linfócitos, descritos nesse estudo, podem ser utilizados para identificar o perfil de suceptibilidade ou resistência do hospedeiro. As proteínas recombinantes utilizadas neste trabalho demandam estudos complementares para avaliação do seu potencial imunogênico e possível utilização em métodos diagnósticos. Leishmaniasis is a vector-borne zoonosis, belonging to the group of neglected tropical diseases. Visceral Leishmaniasis (VL) is considered the most dangerous form of the disease, presenting a risk of death when left untreated. VL affects humans and other mammal species, being the infected dogs considered the main domestic reservoir of the parasite. In Brazil, Canine Visceral Leishmaniasis (LVC) is generally caused by the species L. infantum, and manifests a broad clinical spectrum, from asymptomatic to symptomatic form of the disease, with intense involvement of internal organs. For the clinical course of the disease, the cellular immune response has an important role, however, there are few studies characterizing in detail the expression of surface molecules in canine leukocytes, mainly differentiating symptomatic from asymptomatic. Therefore, the aim of this study was to characterize the percentage and phenotype of monocytes and lymphocytes of dogs with LVC, symptomatic and asymptomatic. In this study, 15 dogs from the Distrito Federal (Brazil), naturally infected, were distributed in three groups: uninfected dogs (NI), asymptomatic infected dogs (IAS) and symptomatic infected dogs (IS). Cellular phenotypes of monocytes (CD14 + MHC-II +) T lymphocytes (CD3 +, CD4 +, CD25 +, CD8 +), B lymphocytes (CD19 + CD25 +) and the induction of cell death by the parasite in PBMCs were analyzed, in an Ex vivo context. Additionally, the analysis In vitro was performed using antigens from L. infantum, soluble and recombinant (ADF/Cofilina and RAB1-GTPase), as treatments for the cells mentioned above. The results indicate a lower frequency of circulating monocytes (CD14 + MHC-II +), as well as low expression of CD44, in the IS group, suggesting that the function of antigen presentation in monocyte was compromised. Also, the higher expression of CD4 in lymphocytes of IS dogs compared to IAS dogs is a result that should be better studied to understand its impact on the cellular immune response of IS. In the evaluation of cell death, its modulation by the parasite was demonstrated in dogs with LVC, this strategy was used as to evade the immune system. Some biomarkers based on the expression of molecules and percentage of monocytes and lymphocytes, described in this study, can be used to identify the host's susceptibility or resistance profile. The recombinant proteins used in the study need to be better understood to identify their immunogenic potential and possible use in diagnostic methods.