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Objectives Chlamydia trachomatis (CT) and Neisseria gonorrhoeae (GC) infections still represent an increasing problem of public health, worldwide. Although unsafe anal and pharyngeal intercourses are common part of sexual repertoires and different cases of extragenital CT/GC infections are reported, extragenital specimens have not been cleared yet for nucleic acid amplification testing (NAAT). For that reason, many laboratories have performed their own validation studies in order to provide results for the clinical management. In this study, Versant CT/GC DNA 1.0 Assay (Siemens) performances were evaluated by testing rectal and pharyngeal swabs collected from a high STD-risk population. Methods From February 2013 to October 2013, urine samples, pharyngeal and anorectal swabs were collected from patients attending the STD Outpatients Clinic of St. Orsola Hospital, Bologna. The patients were enrolled because of a history of unsafe anal and/or oral intercourses. Swabs and urine specimens were tested by Versant CT/GC 1.0 Assay. GC positive results were confirmed using a “home made’ PCR assay targeting PorA gene. CT positive samples were further genotyped by RFLP analysis. Moreover, microbiological investigations for the main STDs (syphilis, HIV, HCV, HBV) were performed. Finally, Chi2 test and Student’s t test were performed and a P value

INTRODUZIONE Nonostante lo screening per le infezioni rettali e faringee da Chlamydia trachomatis e Neisseria gonorrhoeae sia una componente essenziale del management delle infezioni a trasmissione sessuale, nessun sistema per la determinazione degli acidi nucleici ha ricevuto fino ad oggi la marcatura CE per le analisi di tamponi raccolti da tali siti anatomici. Per questo motivo, negli ultimi anni molti laboratori hanno condotto prove di validazione interna. In questo studio riportiamo la validazione, condotta presso la Microbiologia del Policlinico S. Orsola-Malpighi di Bologna, del test VERSANT® CT/GC DNA 1.0 Assay, Siemens, per la contemporanea determinazione del DNA di clamidia e gonococco. Inoltre è stata effettuata una valutazione dell’idoneità di due diversi sistemi di raccolta per i tamponi: E-SwabTM e eNATTM, Copan. METODI La soglia di sensibilità (limit of detection=LOD) del test VERSANT® su tamponi faringei e rettali è stata determinata analizzando in triplicato un serie di concentrazioni note di DNA di C. trachomatis e N. gonorrhoeae (da 102 a 10-1 copie/ml), appartenenti al programma di controllo qualità QCMD 2013. Per simulare campioni clinici, i diversi DNA sono stati diluiti in un pool di 10 tamponi di origine rettale e altrettanti di origine faringea, raccolti in doppio con E-Swab e con eNAT, da soggetti sani, testati per escludere i più comuni patogeni a trasmissione sessuale, delle vie respiratorie e gastrointestinali e che dichiaravano di non aver avuto rapporti a rischio. Inoltre, come controllo per escludere una eventuale presenza nei liquidi di raccolta di agenti interferenti, sono stati testate concentrazioni note di DNA di clamidia e gonococco, diluite in un pool di 10 sospensioni di liquido di trasporto, rispettivamente per tamponi E-Swab e eNAT. Tutti i campioni sono stati processati per estrazione e successiva amplificazione sul sistema VERSANT®. L’estratto di DNA refluo è stato utilizzato per metodiche di PCR home-made che avevano come bersaglio il gene omp1 e porA, rispettivamente per clamidia e gonococco, al fine di valutare i LOD anche di queste due metodiche. RISULTATI Il LOD per C. trachomatis del test VERSANT®, sia su tamponi clinici simulati che su terreni di trasporto, è risultato pari a 10 copie/ml, mentre quello per N. gonorrhoeae era pari 1 copia/ml. Le metodiche di PCR home-made hanno invece mostrato LOD lievemente più alti: 50 copie/ml per clamidia e 5 copie/ml per gonococco. Non sono state notate differenze significative né riguardo alle sedi di prelievo dei campioni clinici simulati, né per quanto riguarda il tipo di sistema di raccolta (E-Swab o eNAT). CONCLUSIONI Il test VERSANT® CT/GC DNA 1.0 Assay ha mostrato ottimi livelli di sensibilità per la determinazione del DNA di C. trachomatis e N. gonorrhoeae, sia su tamponi faringei che rettali. I LOD estremamente bassi permettono di escludere l’ipotesi di eventuali risultati falsamente negativi dovuti alla presenza di inibitori presenti in sede faringea o rettale. Inoltre, entrambi i sistemi di raccolta (E-Swab o eNAT) sono risultati idonei per essere processati sul sistema VERSANT®.

Introduzione. Il linfogranuloma venereo (LGV) è una malattia a trasmissione sessuale (MTS), sostenuta dai sierotipi L1, L2, L3 di Chlamydia trachomatis (CT). L’infezione sta riemergendo nei Paesi industrializzati in uomini omosessuali (MSM) e tende a manifestarsi con sintomi ano-rettali. Nel presente studio riportiamo i dati epidemiologici dell’infezione da LGV in una popolazione ad alto rischio afferente all’ambulatorio MTS del Policlinico Sant’Orsola-Malpighi, Bologna. Metodi. Da gennaio 2012, a tutti i pazienti con sintomi ano-rettali o che riportavano rapporti anali non protetti, è stato offerto uno screening per LGV. Un campione di urina e un tampone rettale sono stati analizzati con il kit Versant CT/GC DNA 1.0 (Siemens) e in caso di positività per CT, la corrispondente genotipizzazione è stata eseguita con metodica RFLP per il gene omp1. Risultati. Sono stati arruolati 108 pazienti, di cui 99 MSM e 9 donne. Dei 23 tamponi rettali positivi per CT, 13 (12%) sono stati identificati come L2 grazie alla tipizzazione molecolare. Nessun campione di urina ha mostrato positività per genotipi L. Tutti i casi di proctite da LGV erano sintomatici e sono stati identificati in MSM con multipli partner sessuali. In 12 di loro è stata confermata la presenza di altre MTS. L’analisi statistica ha rivelato una differenza significativa fra i pazienti LGV-positivi e LGV-negativi per quanto riguarda la presenza di sintomi (100% vs. 20%), l’età media (43 vs. 34 anni) e la coinfezione da HIV (69,2% vs. 10,5%), sifilide (69,2% vs. 16,8%) e HBV (30,8% vs. 3%). All’analisi multivariata, HIV e sifilide sono risultati fattori di rischio per infezione da LGV. Conclusioni. Le caratteristiche dell’infezione da LGV nella popolazione studiata sono in linea con la letteratura internazionale. I nostri dati suggeriscono di eseguire uno screening per infezione da LGV in tutti gli MSM positivi a HIV o sifilide, in presenza di sintomi ano-rettali.