O vírus herpes simplex (HSV) possui grande importância médica e social com elevada soroprevalência na população mundial, causando infecções, normalmente benignas, além de permanecer latente no hospedeiro. No entanto, a patogenia e a severidade dos casos dependem de alguns fatores como, idade e condições do sistema imune. Cepas resistentes ao medicamento de referência, o aciclovir (ACV), vem sendo amplamente relatada, demonstrando a importância pela busca de alternativas antivirais. O gênero Cucumis destaca-se por apresentar diversas atividades medico-biológicas. Desta forma, o presente trabalho avaliou a ação de pectinas ácida (PACm) e sulfatada (PSCm), da espécie C. melo var. acidullus na infecção in vitro e in vivo pelo HSV. A citotoxicidade dos compostos foi avaliada pelo método de MTT, em células Vero, a atividade antiviral in vitro por ensaio de redução de plaque (ERP) e in vivo em camundongos BALB/c. As concentrações citotóxicas 50% (CC50) da PACm e PSCm foram, respectivamente, >2000 μg/mL e 1440 μg/mL. As concentrações inibitórias 50% (CI50) para as cepas de HSV-1, KOS e AR, respectivamente, sensível e resistente ao ACV, foram de 90 μg/mL e 86.5 μg/mL para PACm. Para o PSCm, as CI50 foram de 6 μg/mL e 12 μg/mL, respetivamente, para as cepas KOS e AR. O melhor índice de seletividade (IS) foi demonstrado para PSCm (240) e para PACm superior a 20. A PSCm demonstrou inibição em diferentes estágios de replicação da cepa KOS, especialmente nas etapas iniciais, com repercussão na inibição das sínteses proteica e de DNA viral. In vivo, a PSCm retardou a evolução das lesões das cepas AR e KOS, porém, com maior intensidade na primeira, quando comparada aos grupos infectado e sem tratamento. O nosso trabalho demonstrou que a PSCm é um potencial candidato no desenvolvimento de drogas para o controle da infecção pelo HSV. The herpes simplex virus (HSV) is an important medical and social problem with a high seroprevalence in the population worldwide. The agent usually causes benign infections in human, however, the pathogenesis and severity of the disease depend on the profile of the patients, such as, the age and immune system conditions. The resistant strain to the reference medicine, acyclovir (ACV), are reported, demonstrating the importance for the search of alternative antiviral. In this context, the plant genus Cucumis is shown to present several medicinal and biological activities. The aim of this study was to investigate the activity of the Cucumis melo pectin in the in vitro and in vivo HSV-1 infection, for KOS and AR strains, respectively, sensitive and resistant to ACV. The pectin cytotoxicity was determined by the MTT assay in Vero cell cultures, the antiviral activity was carried out by plaque reduction assayed (PRA) and the in vivo study performed in BALB/c mouse. The cytotoxic concentrations (CC50) for the acid (APCm) and sulfated (SPCm) forms of the pectin were, respectively, >2000 μg/mL and 1440 μg/mL. The inhibitory concentrations (IC50) for KOS and AR strains were, respectively, 90 μg/mL and 86.5 μg/mL for APCm, and, 6 μg/mL and 12 μg/mL for SPCm. The highest selectivity index (IS) was found for SPCm (240). The in vivo analysis also demonstrated that SPCm delayed the lesions evolution for both strains, in comparison to control group. We demonstrated that SPCm inhibited HSV-1 infection in different steps of replication, especially in the initial stages. These results were strengthened by the inhibition of viral DNA and protein syntheses and the protective effect in mice. Therefore, C. melo pectin presents a potential quality as a candidate for the development of drug for the control of HSV-1 infection.