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To evaluate the influence of preoperative mitomycin C (MMC) on the proliferative behavior of fibroblasts and fibrovascular tissue derived from the primary pterygium using the immunohistochemical method (Ki67 and CD34). Randomized clinical trial. Sixty-five patients with primary pterygium were randomly selected and divided into one of three groups. The control group had 29 patients that were only submitted to pterygium removal. The group that received the MMC injection a month before surgery had 16 patients, and the group that received the MMC 2 weeks before surgery had 20 patients. Each patient only had one eye operated on. Sixty-five patients were selected to undergo pterygium excision surgery. We randomly placed the patients into three groups: one without MMC (n = 29), one with MMC application 1 month before surgery (n = 16) and another with MMC application 2 weeks before surgery (n = 20). Subconjunctival injection was applied with 0.1 ml of 0.02% MMC in the pterygium body, and patients were followed for 2 years. Proliferative behavior of fibroblasts and fibrovascular tissue using the immunohistochemical method (Ki67 and CD34) comparing the three groups. Of the total 29 patients (44.6%) in the control group (without MMC application), 11 cases had recurrence (37.9%), of which seven (63.6%) were within 3 months of follow-up and four (36.3%) within 6 months of follow-up. The mean proliferation index of the recurrent cases was 4.5%, and of the cases without recurrence, it was 6.1%. There were 16 patients (24.6%) in the MMC application group 1 month before surgery, in which one case (6.25%) recurred at 6 months. In the group with MMC application 2 weeks before surgery, of the total of 20 patients (30.7%), there was one case of recurrence (5%) at 6 months. The proliferation index of the group that had MMC administered and did not have a recurrence was 7.2%, and in the group with recurrence, it was 6.4%. The CD34-labeled cell count was 5.8% among cases with recurrence and 5.6% in cases without recurrence. No side effects of MMC application were reported during the study follow-up period. MMC was efficient to reduce the recurrence index despite the absence of a direct relation with its antimitotic and antiangiogenic effect in the samples that were analyzed.

Assim como tecidos normais, tumores possuem uma demanda de nutrientes e oxigênio, suprida através da vasculatura a eles associada que resulta do processo de angiogênese. Fatores pró-angiogênicos são capazes de atrair monócitos, os quais se diferenciam em macrófagos associados a tumores (TAMs). TAMs comumente apresentam fenótipo M2, cujas características são consideradas pró-tumorais, como a promoção da angiogênese e a degradação de matriz extracelular. Estudos indicam que galectina-3 (gal-3), uma proteína pleiotrópica que se liga a ?-galactosídeos, participa do controle da angiogênese e da infiltração de macrófagos M2 na massa tumoral, mas pouco se sabe sobre os mecanismos envolvidos. No presente estudo, utilizamos um modelo de sarcoma induzido por carcinógeno em camundongos selvagens (WT) e knockout para gal-3 (Gal- 3 KO). Comparando os tumores de animais WT e Gal-3 KO, não observamos diferenças no padrão de crescimento tumoral, na área necrótica relativa, na proliferação celular e na quantificação de fibras de colágeno. Demonstramos que, embora ambos os grupos desenvolvam tumores, a angiogênese foi inibida em um microambiente desprovido de gal-3. Entretanto, não houve diferença na produção do fator de crescimento endotelial vascular (VEGF). As imagens obtidas in vivo indicaram que gal- 3 também influencia na formação estrutural de vasos adjacentes ao tumor. Além de mediar aspectos morfológicos relacionados à angiogênese, demonstramos que gal-3 também contribuiu para a funcionalidade vascular, pois houve uma redução na velocidade de fluxo sanguíneo nos vasos intratumorais de animais Gal-3 KO. Nossos dados sugeriram que há menos macrófagos no tumor que não expressa gal-3 e, dentre os TAMs, há mais M2 em comparação ao tumor gal-3-positivo. A análise do tecido onde o tumor se desenvolve, na fase inicial da tumorigênese, indicou que a ausência de gal-3 está relacionada a uma maior densidade de macrófagos M2. Considerando que a presença maior de macrófagos M2 nos sarcomas gal-3-negativos não resultou em maior produção de VEGF, mas sim na inibição da angiogênese, nossos resultados apontam para uma participação significativa de gal-3 na mediação da angiogênese pelos macrófagos As well as normal tissues, tumors require nutrients and oxygen, which are supplied by the associated vasculature that results from the process of angiogenesis. Pro-angiogenic factors are able to attract monocytes and they differentiate into tumor-associated macrophages (TAMs). TAMs commonly exhibit M2 phenotype, which has characteristics considered pro-tumoral, such as angiogenesis promotion and degradation of extracellular matrix. Studies show that galectin-3 (gal-3), a pleiotropic ?-galactosidebinding protein, participates in angiogenesis control and M2 macrophage infiltration into the tumor mass, but little is known about the mechanisms involved. In this work, we established a model of carcinogen-induced sarcoma in wild-type (WT) and gal-3 knockout (Gal-3 KO) mice. Comparing tumors from WT and Gal-3 KO animals, there were no differences in the pattern of tumor growth, relative necrotic area, cell proliferation and collagenous fibers. We demonstrated that, although both groups develop tumors, angiogenesis was inhibited in a microenvironment devoid of gal-3. However, there was no difference in the production of vascular endothelial growth factor (VEGF). The images obtained in vivo indicated that gal-3 also influenced the structural formation of vessels adjacent to the tumor. In addition to mediating morphological aspects related to angiogenesis, we demonstrated that gal-3 also contributes to vascular functionality, since there was a reduction in blood flow velocity in intratumoral vessels from Gal-3 KO animals. Our data suggested that there are fewer macrophages in tumors without gal-3 and, among TAMs, there are more M2 compared to gal-3-positive tumors. Analysis of the tissue where the tumor develops, in early stages of tumorigenesis, indicated that the lack of gal-3 is related to an increased density of M2 macrophages. Since the greater number of M2 macrophages in gal-3-negative fibrosarcomas did not result in increased VEGF production, but inhibited angiogenesis, our results suggest a significant role of gal-3 in regulation of angiogenesis by macrophages

Resumo Pterigios sao lesoes geralmente benignas que na maioria dos casos nao requer tratamento especifico. E um crescimento fibrovascular sobre a cornea, geralmente a partir do lado nasal. Sua causa ainda nao foi elucidada, mas parece estar relacionada a exposicao aos raios ultravioleta. Quando os sintomas nao sao controlados com tratamento conservador, a cirurgia e indicada, porem o indice de recidiva ainda e alto, e os esforcos tem sido no sentido de reduzir esse indice. A mitomicina C (MMC) e uma opcao de adjuvante a cirurgia por ser um inibidor da proliferacao de fibroblastos, diminuindo o risco de recorrencia do pterigio. Relatamos aqui um caso que descreve cirurgia de pterigio realizada em ambos os olhos de uma mesma paciente, sendo um com MMC e outro sem ela. Os resultados e o indice de proliferacao celular dos dois olhos foram comparados entre si.

Orientadores: Fábio Rogério, Roger Chammas Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Gliomas são as mais frequentes neoplasias primárias do sistema nervoso central e compõem um grupo heterogêneo, apresentando diferentes graus de malignidade. Glioblastomas (OMS grau IV) representam aproximadamente 50% dos tumores de origem glial e estão associados ao pior prognóstico, com sobrevida média de menos de um ano após o diagnóstico. O gliossarcoma, uma variante do glioblastoma, apresenta componente mesenquimal, além do componente glial. A linhagem celular de glioma utilizada no presente trabalho, NG97ht, é híbrida humano-murina e foi estabelecida a partir de células neoplásicas implantadas no dorso de camundongos nudes. Os tumores que se desenvolveram, por sua vez, são derivados de astrocitoma anaplásico (OMS grau III) ressecado de um paciente masculino de 66 anos. Realizou-se a caracterização morfológica e imunofenotípica de um modelo ortotópico de astrocitoma de alto grau e a análise do padrão de expressão de galectina-3 em tumores derivados da inoculação de células NG97ht. Através de cirurgia estereotáxica, foram inoculadas 5 x 105 células NG97ht no córtex cerebral de camundongos nude (imunodeprimidos) e BALB/c (imunocompetentes) com oito semanas de idade. Foi realizada ressecção dos tumores que se desenvolveram duas ou quatro semanas pós-implante. Análise morfológica e cálculo do índice mitótico foram realizados em cortes dos tumores incluídos em parafina, assim como coloração para detecção de fibras reticulínicas e reações imunoistoquímicas para GFAP, S-100, vimentina, PCNA, galectina-3, CD34, CD56/NCAM, 1A4, desmina, AE1AE3 e sinaptofisina. Além disso, foi realizada semiquantificação da expressão de galectina-3 através de Western Blotting. As características morfológicas e imunofenotípicas da neoplasia indicam um glioma de alto grau, particularmente o gliossarcoma. Os tumores apresentaram alta celularidade, presença de focos necróticos e exibem predominantemente células fusiformes com alto índice mitótico. A expressão de GFAP apresentou alta variabilidade, muitas vezes presente em agrupamentos de células neoplásicas. Foi observada imunopositividade citoplasmática para CD56 e 1A4, indicando diferenciação divergente neuroectodérmica e mesenquimal. Além disso, foi detectada rica e fina rede de fibras reticulínicas intercelulares. A localização da galectina-3 foi nuclear e/ou citoplasmática e sua expressão foi intensa, principalmente nos limites da lesão com o tecido normal adjacente. Não foi detectada diferença significativa na expressão de galectina-3 entre tumores obtidos duas e quatro semanas pós-implante. Em camundongos BALB/c não foi observado crescimento tumoral. Em conclusão, o implante ortotópico de células NG97ht representa uma interessante alternativa para investigações in vivo de gliossarcoma. Considerando-se a falta de estudos sobre o papel da galectina-3 em gliossarcomas e seu possível envolvimento com migração celular, angiogênese e quimiorresistência, a galectina-3 pode ser um potencial alvo para novas estratégias terapêuticas Abstract: Gliomas are the most frequent primary brain tumors and correspond to various histopathological types and malignancy grades. Glioblastomas (WHO grade IV) account for approximately 50% of glial tumors and are associated with the worst prognoses, with median survival rate of less than 1 year. Gliosarcoma is a rare variant of glioblastoma which displays distinct glial and mesenchymal components. NG97ht is a malignant murine and human hybrid cell line established from a human anaplastic astrocytomaderived tumor engrafted into nude mice. The aims of the present work were morphological and immunophenotypical characterization of an in vivo orthotopic glioma model and analysis of galectin-3 expression pattern in NG97ht cell line-derived tumors. 5 x 105 NG97ht cells were stereotactically inoculated into cerebral cortex of 8-week-old nude or BALB/c mice and tumors were resected after two or four weeks. Morphological analysis and calculation of mitotic index were made in paraffinembedded sections, as well as immunohistochemical reactions for GFAP, CD56, 1A4, AE1AE3 and galectin-3. Semi-quantification of galectin-3 expression was obtained through Western Blotting. The neoplastic features favour a high-grade glioma, particularly gliosarcoma. Tumors were predominantly constituted by spindle cells with high mitotic index and showed elevated cellular density and some necrotic areas. GFAP was expressed by groups of tumoral cells. Positivity for CD56 and 1A4 was cytoplasmic and indicates neuroectodermic and mesenchymal divergent differentiation. Localization of galectin-3 was nuclear and/or cytoplasmic and its expression was intense, mainly at tumor borders with adjacent tissue. There was no significant difference in galectin-3 expression between tumors resected after two or four weeks. Tumor growth was not detected in BALB/c mice. In conclusion, the orthotopic implant of NG97ht cells represents an interesting alternative for gliosarcoma in vivo studies. Considering the lack of investigation about the role of galectin-3 in gliosarcomas and the possible involvement of galectin-3 in cellular migration, angiogenesis and chemoresistance, it should be a potentially good target for new therapeutic strategies Mestrado Fisiologia Mestre em Biologia Funcional e Molecular

Galectin-3 (gal-3) is a β-galactoside binding protein related to many tumoral aspects, e.g. angiogenesis, cell growth and motility and resistance to cell death. Evidence has shown its upregulation upon hypoxia, a common feature in solid tumors such as glioblastoma multiformes (GBM). This tumor presents a unique feature described as pseudopalisading cells, which accumulate large amounts of gal-3. Tumor cells far from hypoxic/nutrient deprived areas express little, if any gal-3. Here, we have shown that the hybrid glioma cell line, NG97ht, recapitulates GBM growth forming gal-3 positive pseudopalisades even when cells are grafted subcutaneously in nude mice. In vitro experiments were performed exposing these cells to conditions mimicking tumor areas that display oxygen and nutrient deprivation. Results indicated that gal-3 transcription under hypoxic conditions requires previous protein synthesis and is triggered in a HIF-1α and NF-κB dependent manner. In addition, a significant proportion of cells die only when exposed simultaneously to hypoxia and nutrient deprivation and demonstrate ROS induction. Inhibition of gal-3 expression using siRNA led to protein knockdown followed by a 1.7-2.2 fold increase in cell death. Similar results were also found in a human GBM cell line, T98G. In vivo, U87MG gal-3 knockdown cells inoculated subcutaneously in nude mice demonstrated decreased tumor growth and increased time for tumor engraftment. These results indicate that gal-3 protected cells from cell death under hypoxia and nutrient deprivation in vitro and that gal-3 is a key factor in tumor growth and engraftment in hypoxic and nutrient-deprived microenvironments. Overexpression of gal-3, thus, is part of an adaptive program leading to tumor cell survival under these stressing conditions.

Resumo Pterígios são lesões geralmente benignas que na maioria dos casos não requer tratamento específico. É um crescimento fibrovascular sobre a córnea, geralmente a partir do lado nasal. Sua causa ainda não foi elucidada, mas parece estar relacionada à exposição aos raios ultravioleta. Quando os sintomas não são controlados com tratamento conservador, a cirurgia é indicada, porém o índice de recidiva ainda é alto, e os esforços têm sido no sentido de reduzir esse índice. A mitomicina C (MMC) é uma opção de adjuvante à cirurgia por ser um inibidor da proliferação de fibroblastos, diminuindo o risco de recorrência do pterígio. Relatamos aqui um caso que descreve cirurgia de pterígio realizada em ambos os olhos de uma mesma paciente, sendo um com MMC e outro sem ela. Os resultados e o índice de proliferação celular dos dois olhos foram comparados entre si.