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Orientador: Sergio Luis Felisbino Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Insituto de Biologia Resumo: Finasterida (Fin), um inibidor da enzima 5a-redutase do tipo II e a Doxazosina (Dox), um inibidor do receptor a1-adrenérgico, tem sido amplamente utilizados no tratamento dos sintomas da Hiperplasia Prostática Benigna (HPB). Recentemente, dados clínicos demonstraram que a combinação destas drogas foi mais efetiva em prevenir o desenvolvimento de retenção urinária aguda. Além disso, tem sido demonstrado que tanto as drogas isoladas, como em associação também podem ser utilizadas na prevenção e tratamento do câncer de próstata, devido ao seu potencial de induzir apoptose em células epiteliais normais e tumorais. Apesar disso, pouco se conhece sobre os efeitos da Fin e da Dox administradas isoladas ou em associação sobre a morfofisiologia prostática, incluindo proliferação, morte celular, e indução de remodelação da matriz extracelular pelas metaloproteinases de matriz. Ratos wistar machos adultos (13 semanas) foram tratados com Dox (25mg/kg/dia) ou com a combinação de Fin+Dox (25mg/kg/dia). Após a eutanásia, os lobos prostáticos (ventral, dorsolateral e anterior) foram retirados, pesados e imersos em fixador para análises morfológicas ou congelados em nitrogênio líquido para posterior análises bioquímicas. Os resultados morfológicos e estereológicos demonstraram que o tratamento com a Dox isoladamente por 3 dias resultou em aumento do peso da próstata ventral, com acúmulo de secreção na luz glandular. Os pesos absoluto e relativo das próstatas dorsolateral e anterior não sofreram alteração neste período de tratamento. Entretanto, após 30 dias de tratamento, observou-se uma redução de aproximadamente 20% nos pesos absoluto e relativo de todos os lobos prostáticos e um aumento do volume glandular ocupado pelo colágeno no estroma nos três lobos prostáticos. O tratamento com doxazosina também reduziu o índice de proliferação celular e aumentou o índice apoptótico em todos os períodos analisados. A próstata ventral de ratos tratados com a combinação de Fin+Dox apresentou perda de peso após 30 dias de tratamento. Nos dois períodos de tratamento ocorreu diminuição do índice de proliferação celular, aumento de apoptose e do volume estromal de colágeno, mais evidentes quando comparados ao tratamento com as drogas isoladas. O tratamento combinado também provocou aumento da imunomarcação para o TGF-ß1 demonstrado por imunohistoquímica, principalmente no epitélio. A expressão dos RNAms para MMP-2, TIMPs-1 and - 2 dimunuiu após 30 dias de tratamento, enquanto o RNAm para a MMP-9 não foi detectado em nenhum grupo experimental. O tratamento com Fin+Dox por 30 dias promoveu uma diminuição na atividade gelatinolítica da MMP-2 e um aumento na atividade da MMP-9. Em conjunto, os resultados deste estudo demonstram que tanto o tratamento com doxazosina quanto o tratamento combinado de Fin+Dox induzem grandes alterações glandulares que levam a atrofia prostática, sendo ainda mais significativa com o tratamento combinado, possivelmente pela ação complementar destas duas drogas sobre o parênquima e o estroma glandulares. Nesta atrofia, a MMP-9 e o TGF-ß 1parecem desempenhar um papel importante. Desta forma, nossos resultados auxiliam o entendimento dos dados clínicos, demonstrando que a combinação dos dois fármacos pode ser mais eficaz no tratamento da HPB. Abstract: Finasteride (Fin), an inhibitor of type II 5-a reductase, and Doxazosin (Dox), an a1- adrenergic blocker, have been widely used in treatment of Benign Prostate Hyperplasia (BPH) symptoms. Recently, clinical data have demonstrated that the combined therapy with Fin+Dox reduced the long-term risk of acute urinary retention and the need for invasive therapies than either drug alone. Moreover, both drugs, alone or in combination have been suggested to be effective in the treatment of prostate cancer by inducing apoptosis in normal and tumoral cells. However, little is known about the effects of these drugs administrated alone or their combination on prostate tissue morphohysiology, including prostate morphology, cell proliferation, apoptosis and matrix metalloproteinases activities. Male adult Wistar rats (13 weeks old) were treated with doxazosin (25mg/kg/day) or with finasteride (25mg/kg/day) or with the combination of both drugs. The ventral (VP), dorsolateral (DLP) and anterior prostate (AP) were excised and processed for histochemical, morphometric and biochemical analysis. The results of morphological and stereological analyses demonstrate that Dox treatment for 3 day resulted in an increased in ventral prostate absolute and relative weight with secretion accumulation. The weight of dorsolateral and anterior prostate did not change in this period of treatment. However, after 30 days, the prostate exhibited an absolute and relative weight reduction of about 20% and an increase in collagen volume fraction in the stromal space in the three prostatic lobes. Dox also reduced epithelial cell proliferation and increased apoptosis in the three prostatic lobes in all periods of tretament. Rat VP treated with Fin+Dox also presented a reduction in absolute and relative weight, decrease in epithelial cell proliferation, increase in apoptosis and collagen volume fraction in the stroma in all periods analyzed, more than Dox alone. Fin+Dox treatment also increased the TGF-ß 1 immunoreaction in the epithelium and in the stroma of VP. The mRNA for MMP-2, TIMPs-1 and - 2 expression after 30 days of treatment were decreased. The mRNA for MMP-9 was not detected in any groups analyzed. Fin+Dox treatment for 30 days promoted a decrease in gelatinolitic activity of MMP-2 and an increase in MMP-9. Take together, these results demonstrated that both Dox alone or in combination with Fin induced changes in glandular histoarchitecture, leading to a prostate atrophy, being the combined treatment more effective in inducing glandular atrophy, possibly to the complementary action of the Fin and Dox on prostate parenchyma and stroma, respectively. In this process, the MMP-9 and TGF-ß1 appear to participate effectively. Our results contribute to a better understanding of the clinical data, demonstrating that the combined treatment can be more effective in the BPH treatment. Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Francisco Eduardo Martinez, Wellerson Rodrigo Scarano Texto em português e inglês Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O etanol provoca danos reprodutivos, diretamente nos tecidos ou indiretamente via eixo hipotalâmico-hiposário-gonadal. A próstata, hormônio-dependente, é susceptível aos efeitos do etanol. Evidências atribuem papel anti-inflamatório à testosterona, com crescente interesse na ação da terapia hormonal sobre o etanol. Assim, o presente trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos da terapia hormonal com testosterona sobre o consumo de etanol: 1) nas dosagens hormonais plasmátcas e tecidual, na histopatologia, proliferação celular e na localização e expressão de receptores hormonais (artigo I); 2) nas concentrações plasmáticas e expressão de citocinas pró e anti-inflamatórias (artigo II) no lobo ventral da próstata de ratos UChB. Ratos com 90 dias de idade foram divididos em dois grupos experimentais (n = 20/grupo): C, consumo de água ad libitum,e EtOH, consumo de etanol a 10% (v/v), > 2g de etanol/kg de peso corpóreo/dia, e água ad libitum. Aos 150 dias de idade, 10 ratos de cada grupo receberam injeções subcutâneas de cipionato de testosterona (5mg/kg de peso corpóreo) diluídos em olho de milho durante quatro semanas em dias alternados, T e EtOH+T, enquanto os restantes (10/grupo) receberam somente óleo de milho como veículo. Aos 180 dias de idade, os ratos foram eutanasiados por decapitação para coleta do sangue e as próstatas ventrais foram dissecadas, pesadas e processadas. Secções da próstata ventral foram coradas com hematoxilina e eosina, impregnação pela prata e azul de toluidina. Radioimunoensaio para avaliação das concentrações plasmáticas de testosterona, estradiol, diidrotestosterona (DHT) e testosterona intraprostática, imuno-histoquímica para Ki-67, AR, ER?, ER?, DACH-1,TGF-?1, pSmad 2, e-caderina e ?-actina, western blot para AR, ER?, ER?, DACH-1, PAR4, IL-6 IL-10, TNF? e TGF-?1 e elisa para determinação das concentrações plasmáticas de IL-6, IL-10, TNF? e TGF-?1foram realizados. A terapia com testosterona aumentou o peso da próstata ventral. Houve diminuição do compartimento epitelial e aumento do luminal no EtOH com a terapia hormonal revertendo esses efeitos. O compartimento estromal do EtOH caracterizou-se pela presença de feixes de fibras reticulares delgados e esparsos, com ruptura da camada de células musculares lisas.Focos inflamatórios, metaplasia, atipia reativa inflamatória, perda de adesão entre as células epiteliais e aumento de mastócitos intactos e desgranulados foram frequentes no EtOH e ausentes no EtOH+T. Tanto testosterona como etanol não alteraram a taxa de proliferação celular, porém maior expressão de PAR4 foi observada no EtOH. Houve aumento da testosterona plasmática, intraprostática e DHT no T e EtOH+T e diminuição do estradiol plasmático no EtOH+T. Os T e EtOH+T também apresentaram níveis plasmáticos superiores de TNF? e TGF-?1, sem diferença em relação à IL-6 e IL-10. A expressão de AR, ER?, DACH-1 e IL-6 na próstata foi semelhante entre os grupos experimentais, diferentemente do que foi observado para ER?, TNF? e TGF-?1, que diminuíram após terapia hormonal.Nossos resultados indicam que o etanol foi capaz de induzir a emergência de focos inflamatórios, além de suprimir a imunorreatividade para e-caderina e ?-actina. A testosterona reverteu esses efeitos, reduzindo a expressão do ER?, TGF-?1, TNF? e NFR2, tornando-se um possível alvo a ser avaliado para as disordens causadas pelo etanol Abstract: Ethanol induces reproductive damages, directly in the tissues or indirectly by hormonal imbalance. Prostate, a hormone-dependent gland, is susceptible to effects caused by ethanol. Emerging evidences assign to testosterone an anti-inflammatory role, with growing interest in the action of hormone therapy on the effects of ethanol. Therefore, the current research aimed to assess the effects of hormone therapy with testosterone on the ethanol consumption: 1) in tissue and plasma hormone assays, histopathology and immunolocalization and expression of hormone receptors (manuscript I); plasma levels and expression of pro and anti-inflammatory cytokines (manuscript II) in the ventral prostate of UChB rats (ethanol-preferring rat). UChB rats aged 90 days were divided into two experimental groups (n=20): C: drinking water only and EtOH: drinking 10% (v/v) ethanol at > 2 g/kg body weight/day + water. At 150 days of age, 10 rats from each group received subcutaneous injections of testosterone cypionate (5mg/kg body weight) diluted in corn oil every other day during 4 weeks, constituting T and EtOH+T, while the remaining animals (10/group) received corn oil as vehicle. All animals were euthanized at 180 days old by decapitation. Blood was collected to obtain plasma hormone and cytokines concentrations and ventral prostate was dissected, weighted and processed. Prostate sections were stained with hematoxylin and eosin, Gomori¿s reticulin and toluidine blue. The following techniques were performed: radioimmunoassay to plasma concentrations of testosterone, dihydrotestosterone (DHT), estradiol and intraprostatic testosterone, immunohistochemistry to Ki-67, AR, ER?, ER?, DACH-1, TGF-?1, pSmad 2, e-cadherin e ?-actinin, western blot to AR, ER?, ER?, DACH-1, PAR4, IL-6 IL-10, TNF? and TGF-?1 and elisa to plasma concentrations of IL-6, IL-10, TNF-? and TGF-?1. Testosterone therapy increased the ventral prostate weight. There were reducing of epithelial compartment and increasing of luminal compartment in the EtOH and hormonal therapy was able to reverse this pattern. Stroma compartment of EtOH showed thin and sparse reticular fiber bundles with rupture of smooth muscle cell layer. Inflammatory foci metaplasia, inflammatory reactive atypia, loss of cell-cell adhesion and increasing of degranulated mast cells were frequent in EtOH and absent in EtOH+T. Testosterone and ethanol did not alter the proliferation rate, but high expression of PAR4 was shown in EtOH. There was increasing of plasma and intraprostatic testosterone and plasma DHT in T and EtOH+T and decreasing of estradiol in EtOH+T. The T and EtOH+T exhibited increasing of plasma TNF? and TGF-?1, without differences regarding to IL-6 and IL-10. AR, ER?, DACH-1 and IL-6 expressions were similar among the experimental groups, differently from ER?, TNF? and TGF-?1, which decreased after hormonal therapy. Our results show that ethanol was able to induce the emergence of inflammatory foci, besides suppress the immunorreactivity to e-cadherin and ?-actinin. Testosterone was able to reverse these effects, downregulating ER?, TGF-?1, TNF? and NFR2, showing to be promising in the treatment of alcohol-related disorders Doutorado Biologia Tecidual Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Sebastião Roberto Taboga Texto em português e inglês Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Pesquisas recentes tem mostrado que a predisposição às desordens prostáticas tem origem nos momentos iniciais da vida. Portanto, o entendimento detalhado da organogênese prostática e dos mecanismos envolvidos na predisposição à estas desordens são de fundamental importância para se compreender a etiologia das patologias prostáticas. Assim, o objetivo deste trabalho foi avaliar a organogênese prostática normal e a influência da exposição à testosterona durante a vida intrauterina e puberal sobre a próstata de fêmeas e machos senis do gerbilo da Mongólia. Para isto, o presente trabalho foi dividido em duas etapas. Na primeira, grupos de fêmeas grávidas de gerbilo receberam injeções subcutâneas de testosterona (500 µg/dose) 4 dias antes do parto (grupos TG e TG + T) e/ou durante a vida pós-natal (grupos C + T e TG + T). Os filhotes destas mães envelheceram até serem mortos com 1 ano de idade. Na segunda etapa, foi realizado um estudo normativo da organogênese do lobo ventral da próstata de machos. Para isto, fetos machos de 20 a 24 dias de gestação (E20 - E24), além de recém nascidos de 1 dia de idade (P1), foram empregados no estudo. Todos os fragmentos teciduais foram dissecados e fixados em metacarn ou paraformaldeído 4%, sendo processados para inclusão em parafina. Posteriormente, as seções teciduais foram submetidas à análises biométricas, morfológicas, estereológicas, imuno-histoquímicas, de imunofluorescência e de reconstrução tridimensional. Os resultados mostraram que somente os machos velhos do grupo TG + T foram acometidos por hiperplasia adenomatosa associada à inflamação, embora nos animais dos outros grupos experimentais também foram observados focos hiperplásicos na próstata. Já as fêmeas expostas à testosterona na fase pré-natal (grupos TG e TG + T) apresentaram uma maior heterogeneidade de alterações em decorrência do tratamento, que envolveram desde malformações do sistema reprodutor até a formação de tecido ectópico ao redor da vagina, além da presença de lesões prostáticas também caracterizadas por focos hiperplásicos adenomatosos. Estes resultados mostram que a exposição anormal à testosterona afeta a organogênese prostática tanto em machos quanto em fêmeas, alterando os processos normais do desenvolvimento e aumentando a suscetibilidade ao desenvolvimento de doenças ao longo do envelhecimento. Em relação ao estudo da organogênese prostática, foi observado que os brotos ventrais emergem do epitélio uretral entre o 20º e o 21º dia de vida pré-natal, atingindo o pé mesenquimal ventral (VMP) e iniciando o processo de morfogênese de ramificação no primeiro dia de vida pós-natal. Os achados também demonstraram que a camada de musculatura lisa parece ter um papel central neste processo, a qual pode atuar como uma barreira física à expansão dos brotos em direção ao VMP. Em relação aos receptores nucleares, o receptor de andrógeno apresentou uma expressiva imunomarcação no mesênquima periuretral, enquanto que células com marcação para receptor alfa de estrógeno foram identificadas tanto nos brotos como no mesênquima periuretral. Por fim, os resultados demonstram que a organogênese prostática, além de envolver uma série de eventos finamente regulados, é um processo extremamente sensível e determinante para a saúde da glândula ao longo da vida Abstract: Recent researches have been shown that the predisposition to prostatic disorders has its origin during moments of early life. Therefore, the detailed understanding of prostate organogenesis and the mechanisms underlying in predisposing to these disorders are extremely important in order to highlight the etiology of prostatic pathologies. Thus, the aim of this work was to evaluate the normal prostate organogenesis and the influence of testosterone exposure during prenatal and pubertal life on the prostate of male and female Mongolian gerbil. To this, the present work was divided into two phases. First, groups of pregnant female received subcutaneous injections of testosterone (500 µg/dosage) four days before the parturition (groups TG and TG + T) and/or during postnatal life (groups C + T and TG + T). The offspring of these mothers aged, being killed with one-year-old. In a second moment, we realized a normative study of the organogenesis of male ventral prostate lobe. To this, male fetus with 20 and 24 (E20 - E24) days of gestation, besides newborn with one-day-old (P1), were employed in this study. All tissue fragments were dissected and fixed in methacarn or 4% paraformaldehyde, being processed for paraffin embedding. Following, tissue sections were submitted to biometrical, morphological, stereological, immunohistochemical, immunofluorescence and three dimensional reconstruction analyses. The results showed that only the old males of TG + T group were affected by adenomatous hyperplasia associated with inflammation, although in other male experimental groups we also observed hyperplastic foci in the prostate. The female exposed to testosterone during prenatal phase (TG and TG + groups) have demonstrated a higher heterogeneity of alterations due treatment, being characterized by reproductive system malformations, formation of ectopic prostatic tissue surrounding vaginal wall, besides the presence of prostatic lesions characterized by adenomatous hyperplasic foci. These findings show that abnormal prenatal exposure to testosterone affect the prostate morphogenesis in both male and female, disrupting normal developmental processes and increasing the susceptibility to the development of prostatic diseases during aging. Regarding the prostate organogenesis study, it was observed that the first ventral buds emerge from the ventral urethral epithelium between the 20th and 21th day of prenatal life, reaching the ventral mesenchymal pad (VMP) and initiating the branching process at the first day of postnatal life. We also noted that the smooth muscle layer seems to have a central play during this process, which may act as physical barrier to the buds heading to VMP. Regarding the nuclear receptors, the androgen presented a high immunomarking at the periurethral mesenchyme, whereas cells with positive marking for estrogen receptor alpha were identified either in the periurethral mesenchyme or in the buds. Finally, the results demonstrate that the prostate organogenesis, besides involving a series of events finely regulated, is an extremely sensitive and crucial to the health of the gland throughout the life Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: José Antônio Rocha Gontijo, Patrícia Aline Boer Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Programação fetal é a resposta de um embrião e um feto, durante um período crucial na gestação, em resposta a insultos do ambiente. A restrição proteica na dieta materna durante toda a gestação é associada com baixo peso ao nascer e alterações da programação morfológica e fisiológica dos rins. Estudos anteriores demonstraram que o Fator Induzido por Hipóxia (HIF-1?) é reconhecidamente essencial para a organogênese, ao regular a expressão de inúmeros fatores envolvidos na angiogênese, proliferação celular e apoptose; no entanto, nenhuma ligação direta entre restrição de proteína na dieta materna, expressão do HIF e prejuízo na nefrogênese foi estabelecida até agora. Portanto, no presente estudo, consideramos a modulação de fatores pró e anti apoptóticos durante a nefrogênese, uma vez que a organogênese depende de um delicado equilíbrio entre proliferação, diferenciação e morte celular. Já foi demonstrado que ratas prenhas submetidas a dieta hipoproteica durante a gestação dão origem a ninhadas com elevação da pressão arterial sustentada durante toda a vida, e que essa alteração é relacionada à diminuição do número de néfrons. Um dos fatores associados à redução do número de néfrons é a ativação da via de sinalização do HIF durante a nefrogênese, o que compromete não só o número absoluto total de néfrons, mas também a maturação das células tubulares. Ratos Wistar foram acasalados utilizando o sistema de harém, e a gestação foi confirmada pela presença de esperma no lavado vaginal. Uma vez confirmada a gestação, as ratas foram divididas em grupos de dietas isocalóricas com quantidade normal de proteína (grupo NP, 17% de proteína) ou com quantidade reduzida de proteína (grupo LP, 6% de proteína) durante a gestação. No 17º dia gestacional, os embriões machos foram coletados, e os rins embrionários foram avaliados por coloração de imunohistoquímica e expressão gênica por rt-PCR. Foi observado aumento da imunorreatividade do HIF-1? durante a nefrogênese, concentrações elevadas de proteínas da via de sinalização - HSP90, NOS2, - e diminuição do fator transcripcional elF-4. Dessa forma, acreditamos que o aumento da ativação da via de sinalização do HIF-1? está associado com a diminuição do número de néfrons e a redução da ramificação do broto ureteral em ratos submetidos a dieta hipoproteica durante o desenvolvimento embrionário, e, consequentemente, ao desenvolvimento de doenças na vida adulta, como hipertensão arterial. Aqui, nós hipotetizamos que um dos mecanismos pelo qual dietas hipoproteicas levam ao desenvolvimento de menor número de néfrons está relacionado ao aumento na concentração de HIF-1? não degradado e nas proteínas da via de sinalização, e com a diminuição do fator transcripcional elF-4, o que inibiriam a resposta adaptativa ao ambiente adverso; inibindo, consequentemente, a maturação das células renais e a divisão de células progenitoras nefrogênicas. O estudo atual corrobora a premissa de que ninhadas de ratas expostas a baixa concentração de proteína na dieta durante a gestação expressam altos níveis de HIF-1? durante a organogênese, o que deixaria os fetos vulneráveis ao desenvolvimento renal comprometido Abstract: Fetal programming is the response of an embryo and fetus during the crucial gestation period to environment insults, such as undernutrition that could promote permanent morphological and physiological changes in later life. Maternal dietary protein restriction during whole pregnancy is associated with low fetal birthweight and leads to programmed kidney morphological and physiological changes. Previous studies have demonstrated that HIF-1? (Hypoxia Induced Factor) is known to be essential for organogenesis by regulating the expression of numerous factors involved in angiogenesis, cellular proliferation, and apoptosis; however, no direct link between maternal protein-restriction, HIF expression and, impaired nephrogenesis has been established. Therefore, in the current study, we considered the modulation of pro-apoptotic and anti-apoptotic factors during nephrogenesis since organogenesis depends upon a tight balance between proliferation, differentiation, and cell death. Pregnant rats on a low protein diet during pregnancy are shown to produce offspring with high lifelong blood pressure related to a decreased number of nephrons. One of the factors associated with reduced nephron formation is the activation of the HIF signaling pathway during nephrogenesis, which compromises not only the absolute amount of nephrons but the maturation of tubular cells. Therefore, this study aimed to determine the HIF signaling pathway's evolution during the nephrogenesis of rats submitted to a protein-restricted diet during pregnancy. Wistar rats were matched using the harem system, and pregnancy was confirmed by the presence of sperm in the vaginal smear. Confirmed pregnancy, dams were submitted to isocaloric standard protein chow (NP group; 17% of protein) or low-protein chow (LP group; 6% of protein) throughout gestation. On the 17th gestational day, male embryos were collected, and embryonic kidneys were analyzed by immunostaining. Increased HIF-1? immunoreactivity was found during nephrogenesis and increased protein expression of HIF-1? signaling pathway - HSP90, NOS2, along with the decreased expression of the transcriptional factor elF-4. Thus, we believe that the increased activation of the HIF-1? signaling pathway is associated with a decrease in the number of nephrons and the reduction of ureteric bud branch in rats submitted to a low-protein diet and, consequently, the development of diseases in adulthood, such as hypertension. Here, we hypothesized that one of the mechanisms by which low-protein diets develop fewer nephrons is related to the increase of the non-degraded HIF-1? and the decrease of the transcriptional factor elF-4 along with decreased proteins expression of HIF-1? pathway. These would inhibit the adaptive response to the adverse environment: consequently, the renal cells' maturation and inhibition of the division of the nephrogenic progenitors cells. For the first time in the literature, we show an increased expression of HIF-1? level in offspring form dams exposed to low-protein diet, which induces fetus vulnerability to impaired renal development Mestrado Clínica Médica Mestra em Ciências

Orientadores: Hernandes Faustino Carvalho, Aline Mara dos Santos Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A próstata é uma glândula acessória do trato reprodutor masculino responsável pela produção e armazenamento do líquido prostático. Esta glândula é alvo de várias afecções como prostatite, hiperplasia e câncer, doenças que comprometem a saúde e bem-estar do homem e são responsáveis por grande número de mortes. A nível histológico podem ser identificados três compartimentos nesta glândula: o epitelio, o lúmen e o estroma. As células musculares lisas (CMLs) são o principal componente do estroma e apresentam uma modulação fenotípica dependendo de diferentes fatores, sendo que um deles é a matriz extracelular (MEC). Neste trabalho avaliamos o efeito de diferentes componentes de MEC (colágeno, fibrina e Matrigel) na adesão, morfologia, fenótipo e localização da quinase de adesão focal (FAK) nas CMLs de próstata. Os resultados preliminares nos levaram estudar a adesão das células no colágeno e o posterior bloqueio das proteínas Rho GTPases. Por último, estudamos o efeito do TGF'alfa' e TGF'beta' na migração celular. Os resultados mostram que o colágeno favorece uma rápida adesão das CMLs, que fibrina é degradada na presença destas e que no Matrigel elas se agrupam. No colágeno, o citoesqueleto de actina se organiza em grandes fibras de estresse, que não são observadas na fibrina nem no Matrigel. A FAK apresentou uma localização nuclear nas células semeadas no colágeno. Na fibrina e no Matrigel a marcação nuclear estava ausente e sua distribuição no citoplasma estava em forma de agregados. A forma fosforilada da FAK na tirosina 925 apresenta uma maior co-localização com a cadeia pesada da miosina (MYH11) no colágeno. As CMLs na fibrina e no Matrigel apresentaram diminuição nos marcadores do fenótipo contrátil, sugerindo que esses componentes de MEC favorecem o fenótipo sintético. Enquanto aos efeitos da inibição das proteínas Rho GTPases na adesão das CMLs sobre o colágeno, Rac1, Rac3 e Cdc42 são importantes para a adesão das células, enquanto a inibição de ROCK não inibiu a adesão das CMLs ao colágeno e, posteriormente, permitiu a migração ? evento que não acontecia quando as CMLs estavam somente sobre o colágeno. A exposição ao inibidor de ROCK nas CMLs desencadeou alterações na morfologia celular, no citoesqueleto de actina, na distribuição de ?-actinina e na diminuição da expressão de SM-actina e MYH11. Finalmente observamos que o TGF? estimula a migração das CMLs, mesmo em concentrações baixas. Os resultados aqui apresentados demostram que a MEC influencia o comportamento e o fenótipo das CMLs de próstata. As GTPases Rac e Cdc42 são importantes para a adesão das células enquanto que ROCK tem efeito na manutenção do fenótipo contrátil Abstract: The prostate is an accessory gland of the male reproductive tract and is responsible for the production and storage of prostate fluid. This gland is affected by numerous diseases such as prostatitis, hyperplasia and cancer. These diseases compromise men¿s health and well being and are responsible for a large number of deaths, worsening with the advanced age. At histological level three compartments can be identified: epithelium, lumen and stroma. Smooth muscle cells (SMCs) are the main component of the stroma and showing a phenotypic modulation depending on different factors, one of them being the extracellular matrix (ECM). In this work we evaluated the effect of different components of ECM (collagen, fibrin and Matrigel) on adhesion, morphology, phenotype and focal adhesion kinase (FAK) localization in prostate SMCs. Preliminary results led us to study cell adhesion in collagen and subsequent blockade of Rho GTPases proteins. Finally, we study the effect of TGF'alfa' and TGF'beta' on cell migration. The results show that collagen promote a fast adhesion of SMCs, whereas, fibrin is degraded by the cells and that on Matrigel they formed cell clusters. In collagen, the actin cytoskeleton organizes into large stress fibers, which are not observed in fibrin or Matrigel. FAK had a nuclear localization in the cells seeded on collagen. On fibrin and Matrigel nuclear labeling was absent and its distribution in the cytoplasm was in as aggregates. The phosphorylated form of FAK on tyrosine 925 shows a greater co-location with the myosin heavy chain (MYH11) on collagen. SMCs on fibrin and Matrigel decreased markers of contractile phenotype, suggesting that these components of ECM favor the synthetic phenotype. The effects of inhibition of Rho GTPases proteins on the adhesion of CMLs on collagen, Rac1, Rac3 and Cdc42 are important for cell adhesion, while ROCK inhibition did not inhibit adhesion of SMCs to collagen and subsequently allowed migration - an event that did not happen when SMCs were only on collagen. Exposure to ROCK inhibitor triggered changes in cell morphology, actin cytoskeleton, ?-actinin distribution, and decreased expression of SM-actin and MYH11. Finally, we observed that TGF? stimulates the migration of CMLs, even at low concentrations. The results presented here demonstrate that ECM influences the behavior and phenotype of prostate CMLs. Rac and Cdc42 GTPases are important for cell adhesion while ROCK has an effect on the maintenance of contractile phenotype Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural FAPESP 2015/03235-4 CAPES 001

Submitted by THAÍS DE SOUZA BOVI null (thaisbovi@yahoo.com.br) on 2017-05-17T20:08:42Z No. of bitstreams: 1 TeseFinal Bovi.pdf: 1763777 bytes, checksum: f01b8b106b7392a45f0950d86ff0faec (MD5) Approved for entry into archive by Luiz Galeffi (luizgaleffi@gmail.com) on 2017-05-17T20:15:03Z (GMT) No. of bitstreams: 1 bovi_ts_dr_bot_par.pdf: 522326 bytes, checksum: 18369c90270a7cb94e33bf6dd81f7a79 (MD5) Made available in DSpace on 2017-05-17T20:15:03Z (GMT). No. of bitstreams: 1 bovi_ts_dr_bot_par.pdf: 522326 bytes, checksum: 18369c90270a7cb94e33bf6dd81f7a79 (MD5) Previous issue date: 2017-04-28 Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) As glândulas hipofaringeanas das abelhas Apis mellifera L. possuem diversas funções importantes para o desenvolvimento das colônias, sendo a mais importante delas a produção da fase proteica da geleia real, a qual é o ponto de partida das diferentes rotas de desenvolvimento das abelhas. Desta forma, o presente trabalho teve por objetivos estudar possíveis variáveis que possam afetar, ao longo do tempo, a morfologia das glândulas hipofaringeanas (área e número de seus ácinos). Em vista disso, no Capítulo II, foram investigados se os nutrientes e origem botânica do pólen podem afetar o desenvolvimento das glândulas hipofaringeanas ao longo das estações do ano. A qualidade deste recurso floral é determinante para o crescimento das glândulas hipofaringeanas em abelhas operárias e, cada tipo polínico oferece aporte nutricional específico, o qual pode variar de acordo com a origem botânica dos vegetais estações do ano. Dessa maneira, foi realizado estudo morfológico das glândulas hipofaringeanas de abelhas com seis dias de idade ao longo de um ano. O “pão de abelhas” foi colhido durante um ano e, foram feitas análises de proteína total, cinzas, flavonoides totais, compostos fenólicos e análises palinológicas. Verificou-se que a GH teve maior área e número de ácinos na estação do verão (P < 0,05). O teor de proteína bruta e cinzas não mostraram variações ao longo do ano. O teor de flavonoides totais do pólen foi maior no verão (P < 0,05). Foram identificados três grupos de compostos fenólicos e polifenólicos no pólen: ácidos fenólicos, flavonóis e flavonas; os quais apareceram predominantemente no inverno, verão e outono, respectivamente. Os grãos de pólen das famílias botânicas Poaceae, Rubiaceae, Myrtaceae e Asteraceae foram encontrados em todas as estações do ano. Conclui-se que a glândula hipofaringeana teve maior desenvolvimento durante a estação do verão, e sugere-se que o teor de flavonoides do pólen pode ter influenciado este resultado. No Capítulo III, estudou-se se a colheita de apitoxina pode afetar as mesmas estruturas das glândulas. Este manejo é considerado estressante para as abelhas Apis mellifera L, devido à liberação de ferômonios de alarme que alteram a comunicação e comportamento, modificando suas atividades, e, consequentemente, pode interferir em sua fisiologia, como por exemplo, no desenvolvimento das glândulas hipofaringeanas. Esta questão foi abordada neste trabalho. Durante três meses (outubro, novembro e dezembro) a apitoxina foi colhida de cinco colmeias, por meio de coletor elétrico, outras cinco foram mantidas como controle. Mensalmente, foram realizadas análises morfológicas das glândulas hipofaringeanas de abelhas com seis dias de idade e, verificou-se que aquelas abelhas que passaram pelo manejo de colheita de apitoxina apresentaram menor área e número de ácinos em todos os meses analisados (P < 0,05). Assim, o Capítulo III mostrou que a colheita de apitoxina prejudica o desenvolvimento das glândulas hipofaringeanas de abelhas Apis mellifera com seis dias de idade. FAPESP: 2013/25942-9

Submitted by Ana Carolina Lima Camargo null (carolgalah@gmail.com) on 2017-03-09T14:04:23Z No. of bitstreams: 1 Dissertação mestrado final.pdf: 3262610 bytes, checksum: 379cf922bb219702f8ba9920b8a74a27 (MD5) Rejected by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br), reason: Solicitado pela autora. on 2017-03-09T14:22:41Z (GMT) Submitted by Ana Carolina Lima Camargo null (carolgalah@gmail.com) on 2017-03-09T14:36:06Z No. of bitstreams: 1 Dissertação mestrado final.pdf: 3498438 bytes, checksum: c66d7e59f9c0a64828d5a04ceb102678 (MD5) Approved for entry into archive by LUIZA DE MENEZES ROMANETTO (luizamenezes@reitoria.unesp.br) on 2017-03-10T16:50:01Z (GMT) No. of bitstreams: 1 camargo_acl_me_bot_parc.pdf: 845645 bytes, checksum: 9ffcb3ab611c04861f854697dc5994d5 (MD5) Made available in DSpace on 2017-03-10T16:50:01Z (GMT). No. of bitstreams: 1 camargo_acl_me_bot_parc.pdf: 845645 bytes, checksum: 9ffcb3ab611c04861f854697dc5994d5 (MD5) Previous issue date: 2017-02-22 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) A próstata é uma glândula acessória do sistema genital masculino e, além da dependência androgênica para o seu desenvolvimento e homeostasia, é influenciada por hormônios não esteróides, entre eles a prolactina (PRL). Estudos em modelos animais demonstraram que a PRL pode atuar com efeito anabólico sobre a glândula prostática. Assim, nosso objetivo foi investigar os efeitos da modulação de PRL sobre o desenvolvimento e maturação da próstata ventral (PV) de ratos. Foram utilizados ratos machos Sprague Dawley (DPN 90) divididos em 6 grupos (n=6): Grupo controle (CT): receberam solução salina; Prolactina (PRL): Prolactina (0,3mg/kg); Bromocriptiona (BR): inibidor de PRL (0,4mg/kg). Todos os animais foram submetidos diariamente (via subcutânea) do dia pós-natal 12 (DPN12) até os DPN 21 ou 35. Os animais foram anestesiados, pesados e posteriormente foram eutanasiados. O sangue e os lobos da PV foram coletados, pesados e processados para análises morfológicas, de western blot (WB) e RT qPCR. O tratamento com PRL induziu aumento de peso corpóreo dos animais no DPN35 comparado aos outros grupos. Histologicamente houve maior acumulo de screção no lúmen e diminuição do compartimento epitelial nos grupos PRL e BR comparados ao CT no DPN35. A reação imunohistoquímica para Ki67 demonstrou aumento de células proliferativas nos grupos tratados com PRL. A quantificação de PCNA confirmou estes dados, com aumento significante no grupo PRL35. A intensidade de reação imunohistoquímica para AR foi maior no grupo PRL35. A quantificação de AR por WB confirmou esses dados. A expressão gênica do PRLR aumento no DPN21, enquanto que no DPN35 os grupos PRL e BR diminuíram, em Stat3 aumento nos grupos BR no DPN21 e 35, enquanto que Stat5 não houve diferença nos diferentes grupos. A expressão proteica de PRL aumentou no PRL21, no DPN35 diminuiu em PRL e BR, o PRLR não teve diferença entre os grupos experimentais. A quantificação proteica de STAT3 aumento nos grupos PRL e BR em ambas as idades, no STAT5 AB e prostateína aumentou nos grupos PRL em relação aos outros dois grupos no DPN35. A expressão proteica de CK18 aumentou nos grupos tratados com BR no DPN21 e 35, em NKX3.1 o aumento no PRL em relação aos outro grupo no DPN21. Nossos resultados demonstram que a modulação de PRL interfere com a morfofisiologia prostática, aumentando a resposta proliferativa e atividade secretora, em especial nos animais tratados por período prolongado. Estes dados revelam o importante papel da PRL sobre o desenvolvimento prostático. The prostate gland is an accessory gland of the male genital system and, in addition to androgenic dependence for its development and homeostasis, is influenced by non-steroidal hormones, among them the prolactin (PRL). Studies in animal models have shown that PRL can act with an anabolic effect on the prostate gland. Thus, our objective was to investigate the effects of PRL modulation on the development and maturation of the ventral prostate (VP) of rats. Male Sprague Dawley rats (PND 90) were divided in 6 groups (n= 6): Control group (CT) that received saline solution; Prolactin group (PRL) that received Prolactin (0.3mg/kg); Bromocriptiona group (BR) that received PRL inhibitor (0.4mg/kg). All animals were submitted daily (subcutaneously) from postnatal day 12 (PND12) to PND 21 or 35. The animals were anesthetized, weighed and euthanized. Blood and VP lobes were collected, weighed and processed for morphological analyzes, western blot (WB) and RT qPCR. Treatment with PRL induced body weight gain in PND35 compared to the other groups. Histologically, there was an increase in the luminal compartment and a decrease in the epithelial compartment in the PRL and BR groups compared with CT on PND35. The immunohistochemical reaction for Ki67 demonstrated proliferation of proliferative cells in the groups treated with PRL on PND35. The PCNA quantification confirmed these data, with a significant increase in the PRL35 group. The intensity of reaction for AR was higher in the PRL35 group. Quantification of AR by WB confirmed these data. The gene expression of the PRLR increased in the PND21, whereas on PND35 the PRL and BR groups decreased, in Stat3 increased in the BR groups on PND21 and 35, whereas in the Stat5 groups there was no difference in the different groups. Protein expression of PRL increased in PRL21, on PND35 decreased in PRL and BR, PRLR had no difference between the experimental groups. The protein quantification of STAT3 increased in the PRL and BR groups in both ages, STAT5 AB and prostatein increased in the PRL groups compared with other two groups on PND35. Protein expression of CK18 increased in the groups treated with BR on PND21 and 35, on NKX3.1 the increase in PRL compared to other groups on PND21. Our results demonstrate that PRL modulation interferes with prostate morphophysiology, increasing the proliferative response and secretory activity, especially in animals treated for a long period. These data reveal the relevant role of PRL in prostate development.

Orientador: Rejane Maira Góes Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Dados experimentais indicam que a dieta hiperlipídica (HFD) afeta a atividade proliferativa e a saúde prostática. Entretanto, as consequências da obesidade materna e do ambiente obesogênico (AO) por excesso de lipídeos na dieta, para a próstata, ainda permanecem inconclusivos. Esse estudo investigou os efeitos do AO, em diferentes fases do desenvolvimento de ratos Wistar, sobre a morfofisiologia da próstata na vida adulta e as possíveis correlações com o estado metabólico e a regulação por esteróides sexuais. Ratos com 19 semanas de idade (n=15 por grupo) foram subdivididos em: grupo controle (C) ¿ alimentado com dieta balanceada (3% lipídeos, 3,5Kcal/g) e grupos expostos ao AO por consumo de HFD (20% lipídeos, 4,9kcal/g) durante a gestação (G), gestação e lactação (GL), do desmame a idade adulta (DA), da lactação à idade adulta (LA) e da gestação à vida adulta (GA). O AO na gestação incluiu indução prévia da obesidade materna pela alimentação por 15 semanas com HFD. O AO levou à resistência à insulina em todos os grupos, sobrepeso em GL, obesidade e queda de testosterona circulante nos grupos DA, LA e GA e aumento dos níveis de estrógeno em GA. Além disso, houve aumento nos níveis de triglicérides e diminuição de HDL nos grupos obesos. Independente da fase do desenvolvimento, o AO leva à hipertrofia do lobo ventral da próstata, o qual, a exceção do grupo G, também exibiu aumento da atividade proliferativa epitelial. O aumento da proliferação celular nesses grupos foi concomitante com a diminuição das células imunopositivas para o receptor de andrógeno, receptor de estrógeno ? e receptor X do fígado ?, além de aumento na frequência do receptor de estrógeno ? e receptor de ativação da proliferação dos peroxissomos ?. Portanto, o aumento da proliferação celular induzido pelo AO independe da sinalização de receptor de andrógenos. O AO aumentou a morte celular por descamação, no epitélio acinar do lobo ventral, nos grupos expostos na gestação ou gestação/lactação e em maior grau no exposto por toda vida. As alterações morfológicas que caracterizam as etapas iniciais, intermediárias e finais desse tipo de morte na próstata foram estabelecidas. A perda do AR tem papel fundamental nesse processo. A exposição ao AO, antes do desmame, aumentou os focos de lesões atróficas no lobo ventral e, em períodos após o desmame, aumentou os focos de hiperplasia e neoplasia intraepitelial, conforme indicado pela análise da multiplicidade de lesões. Quanto maior o período de exposição ao AO, mais graves as lesões encontradas no lobo ventral. O AO não promoveu alterações pronunciadas na histologia dos lobos dorsal e lateral, conforme indicado pela análise microscópica e estereológica. Tampouco alterou a frequência dos receptores de andrógenos, mostrando que esses lobos são menos suscetíveis ao AO e à queda androgênica, em comparação com o lobo ventral. Conclui-se que o AO em diferentes fases da vida interfere na morfofisiologia da próstata ventral de modo proporcional ao comprometimento metabólico e à queda androgênica, levando a um estado hipertrófico e hiperproliferativo associado ao aumento de lesões patológicas e a perda coletiva de células por descamação. O ambiente obesogênico na gestação/lactação é tão prejudicial para as taxas de proliferação na próstata ventral quanto à exposição por toda a vida Abstract: Experimental data indicate that the high-fat diet (HFD) affects the proliferative activity and prostate health. However, the consequences of maternal obesity and obesogenic environment (OE) by lipids excess in the diet for the prostate remain inconclusive. This study investigated the effects of the exposure to OE at different developmental phases on prostate morphophysiology of Wistar rats at adulthood and the possible correlations with the metabolic status and regulation by sex steroids. Male Wistar rats (19 weeks-old; n=15) were fed with balanced chow (C; 3% fat, 3.5Kcal/g) or HFD (20% fat, 4.9Kcal/g) during gestation (G), gestation and lactation (GL), from post-weaning to adulthood (WA), from lactation to adulthood (LA) and from gestation to adulthood (GA). The OE during pregnancy included previous induction of maternal obesity by feeding with HFD for 15 weeks. OE led to insulin resistance in all groups, overweight in GL, obesity and decrease in circulating testosterone levels in the WA, LA and GA groups and increased estrogen levels in GA. Moreover, there was an increase in triglycerides and decrease in HDL levels in the obese groups. Regardless the developmental phase, the OE leads to ventral prostate hypertrophy which, except for the G group, also presented an increase in epithelial proliferation activity. The increase in cell proliferation in these groups was concurrent with the decrease in immunopositive cells frequency of androgen receptor, estrogen receptor ? and liver X receptor ? and increase in estrogen receptor ? and peroxisome proliferator-activated receptor ?. Therefore, the increase in cell proliferation induced by the OE is independent of the androgen receptor signaling. The OE increases cell death by desquamation, in acinar epithelium of ventral prostate, in the groups exposed during gestation and/or lactation and to a greater degree in the group exposed throughout life. The morphological changes in the prostate that characterize the earliest, intermediate and final stages of this kind of death were established. Loss of epithelial AR plays a key role in this process. OE exposure before weaning, increased atrophic lesions foci on the ventral prostate, and the exposure after weaning, increased hyperplasia and intraepithelial neoplasia foci, as indicated by the lesions multiplicity analysis. The longer the exposure period to OE, more serious were the lesions found in the ventral lobe. The OE did not promote pronounced alterations on the dorsal and lateral prostate histology, as indicated by microscopic and stereological analyses. Nor alters the androgen receptor frequency, showing that these lobes are less susceptible to the OE exposure and androgen fall, as compared with the ventral lobes. In conclusion, the OE exposure at different developmental phases interferes with ventral prostate morphophysiology proportionally with metabolic impairment and androgen decline, leading to a hypertrophic and hyperproliferative state associated with increased pathological lesions and collective loss of cells by desquamation. The exposure to OE during pregnancy/lactation is as harmful to the ventral prostate proliferation rates as the exposure for a lifetime Doutorado Biologia Celular Doutora em Biologia Celular e Estrutural FAPESP 2011/03596-6 CAPES

Orientador: Sebastião Roberto Taboga Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A próstata, glândula do sistema genital que tem origem embrionária a partir do seio urogenital, não é exclusiva do sistema reprodutor masculino, sendo também encontrada em fêmeas de vários mamíferos, incluindo humanos e roedores. No macho ela pode apresentar-se altamente desenvolvida em razão da maior quantidade do hormônio testosterona, e, apesar de pouco desenvolvida em fêmeas, devido à baixa quantidade desse mesmo tipo hormonal, é uma glândula funcional. Em fêmeas adultas de gerbilos, a próstata possui uma localização parauretral, exibindo íntimo contato com a parede proximal e medial da uretra, a qual é homóloga a próstata ventral de roedores machos. Embora se conheça a influência da progesterona na fisiologia do sistema reprodutor feminino e masculino, poucos estudos exploram a sua influência, especificamente, sobre a glândula prostática. Desta forma, este trabalho avaliou os aspectos morfofuncionais da glândula prostática masculina e feminina, resultantes da influência da progesterona, e de suas interações com o estradiol e a testosterona. Para isso, gerbilos machos e fêmeas foram castrados cirurgicamente no início do período puberal, aos 45 dias de idade. Ao completarem 90 dias de idade, os gerbilos receberam doses subcutâneas de progesterona ou desse somado a estradiol e testosterona, durante 14 dias. Nos animais castrados de ambos os sexos a próstata mostrou uma morfologia regredida, com uma redução significativa na sua capacidade de secreção, da quantidade de células receptoras de androgênio (AR) e receptoras de estrógeno ? (ER?), porém sem alterar a marcação para receptor de estrógeno ? (ER?). Dessa forma, a castração cirúrgica foi bastante importante, uma vez que permitiu mimetizar de forma satisfatória um ambiente prostático com baixos níveis hormonais. Nos dois sexos, a administração de progesterona isoladamente conseguiu reverter alguns desses efeitos, com uma melhora considerável no padrão secretório da glândula, porém estruturalmente essas mudanças ocorreram de forma moderada. Nesses animais, foi observado um aumento expressivo dos ERs ? e ?, além da presença de células receptoras de progesterona (PR). Em relação aos ARs foi evidenciado que a progesterona pode apresentar características indutoras ou inibitórias dependendo da sua concentração. O tratamento, simultâneo com a progesterona, de estradiol e testosterona desencadeou uma reestruturação glandular mais intensa nos machos e fêmeas, resultando em hipertrofia e hiperplasia do epitélio e do estroma glandular, recuperação do padrão de secreção e amplitude alveolar. Essas características, no entanto, foram acompanhadas pelo surgimento de lesões prostáticas como neoplasias intraepiteliais e o surgimento de debris celulares. A interação da progesterona com o estradiol também regulou positivamente os AR, ER? e ER?, porém não apresentou qualquer efeito sobre os PRs quando comparado aos animais tratados somente com progesterona. Em adição, nesses animais houve um aumento acentuado da proliferação celular, o qual foi contrabalanceado pelo aumento também do índice de morte celular. Nos animais tratados com progesterona e testosterona, a próstata também se desenvolveu e mostrou um aumento das células AR-positivas e do índice apoptótico, havendo, entretanto uma redução dos ER?, ER? e PR. Dessa forma, é razoável concluir que a próstata feminina e masculina comporta-se de forma bastante semelhante frente à ação dos hormônios progesterona, estradiol e testosterona. Ademais, embora a progesterona apresente efeitos estruturais razoáveis na glândula prostática, a sua interação com o estrógeno e a testosterona é capaz de promover uma intensificação desses efeitos, sem recriar, porém um ambiente homeostático semelhante aos dos animais intactos. A progesterona também mostrou ser um fator regulador em potencial da atividade proliferativa e apoptótica prostática, opondo-se aos efeitos da testosterona e do estradiol. Outro fator importante é a descoberta de que a progesterona pode induzir ou inibir a presença de células AR-positivas na glândula, e que esse dualismo funcional é resultado do efeito dose-dependente desse hormônio sobre a próstata Abstract: The prostate is a gland of reproductive system that arises from the urogenital sinus, being located around the urethra below the bladder. The existence of this gland is not exclusive of the male reproductive system, being found in females of various species, including rodents and humans. In the male, it can be highly developed due to the increased amount of the testosterone, and although poorly developed in females, due to the low quantity of this hormone, it is a functional gland. The prostate of female gerbils has a paraurethral location, showing a closer contact with the proximal and medial urethra wall, being homologous to the ventral prostate of male rats. This study evaluates the morphofunctional aspects of the prostate gland in males and females, regarding the influence of progesterone, and their interactions with estradiol and testosterone. For this, male and female gerbils were surgically castrated in early pubertal period, at 45 days of age. At 90 days of age, the gerbils received subcutaneous doses of progesterone alone or associated to testosterone or estradiol during 14 days. In castrated animals of both sexes, prostate showed a regressed morphology, with a significant reduction in its secretion capacity, the amount of androgen receptor cells (AR) and estrogen receptor ? (ER?), but without changing the labeling for estrogen receptor ? (ER?). Thereby, surgical castration was very important, since it allowed mimetize a prostatic environment with low hormone levels. In both sexes, the administration of progesterone alone could reverse some of these effects with a considerable secretion improvement, but structurally these changes occurred in a moderate way. In these animals, we observed a significant increase of ER ? and ?, besides the presence of progesterone receptor (PR) cells. Regarding ARs, it was shown that progesterone can have inductor or inhibitory characteristics depending on its concentration. The treatment with progesterone plus estradiol and progesterone plus testosterone triggered a more intense prostate restructuration in male and female, resulting however in a hypertrophy and hyperplasia of the glandular epithelium and stroma, besides recovery of the alveoli amplitude and pattern of cellular secretion. These characteristics, however, were followed by the development of prostatic lesions like intraepithelial neoplasia and cellular desquamation. The progesterone and estradiol interaction also upregulated the AR, ER? and ER?, however had no effect on the PRs when compared to the animals treated with progesterone alone. In addition, in these animals there was a marked increase in cellular proliferation, which was counterbalanced by increased cell death. In animals of either sex treated with progesterone and testosterone, the prostate also became developed and showed an increase of AR-positive cells and apoptotic index, although there was a reduction of ER?, ER? and PR. Thus, it is reasonable to conclude that the female and male prostate behaves similarly after the progesterone, estradiol and testosterone administration. Moreover, although the progesterone has reasonable structural effects on the prostate gland, its interaction with estrogen and testosterone can intensificate these effects, but do not recover a homeostatic environment similar to that of intact animals. The progesterone also proved to be a potential regulatory factor of the proliferative and apoptotic activity, opposing the effects of testosterone and estradiol. Another important finding is that progesterone can induce or inhibit the presence of ARpositive cells in the gland, and this functional dualism is the result of dose-dependent effect of this hormone on the prostate Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcântara dos Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: O resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital quando liberada Abstract: The abstract is available with the full electronic document when available Mestrado Biologia Celular Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientadores: Sebastião Roberto Taboga, Fernanda Cristina Alcântara Santos Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A próstata feminina é uma glândula funcionalmente ativa encontrada em diversas espécies de mamíferos, incluindo humanos e roedores. Em fêmeas adultas de gerbilos, a próstata apresenta localização parauretral, exibindo íntimo contato com a parede da uretra média e distal. Esta glândula é homóloga a próstata ventral de roedores machos, sendo formada por um conjunto de glândulas e ductos inseridos em um estroma fibromuscular. O estudo da morfofisiologia prostática nas fases do ciclo estral tem demonstrado que a próstata feminina é influenciada pelas oscilações nos níveis séricos de estradiol e progesterona. Assim, tornam-se necessários estudos que avaliem o efeito da exposição ao estradiol em longo prazo, com o objetivo de observar como este esteróide atua no desenvolvimento de lesões prostáticas. Além disso, de igual importância é avaliar a interação dos estrógenos com outros esteróides circulantes, a fim de se avaliar quais associações hormonais são necessárias para manter o equilíbrio homeostático da próstata feminina do gerbilo. A partir do proposto, o objetivo deste estudo foi avaliar o efeito da administração prolongada de estradiol, e de estradiol + testosterona, sobre a próstata de fêmeas ovariectomizadas. Para isso, as fêmeas adultas foram submetidas à intervenção cirúrgica para remoção dos ovários e, após 10 dias de recuperação, foram submetidas à administração de estradiol, e de estradiol + testosterona. Após trinta dias de tratamento, os animais foram sacrificados e as glândulas prostáticas submetidas a análises morfológicas, morfométrico-estereológicas e sorológicas. Alterações morfológicas e fisiológicas foram observadas em todos os grupos experimentais. A restrição hormonal resultante da ovariectomia causou grande regressão glandular e diminuição da atividade secretora, aspectos revertidos pela exposição dos animais ao estrógeno isolado e conjugado à testosterona. Entretanto, esses hormônios não foram capazes de reestabelecer a histoarquitetura normal do tecido. Foram observadas, inclusive, algumas lesões presentes principalmente nos grupos tratados, tais como inflamações e neoplasias intraepiteliais. A imunorreação para o ER-? foi reduzida nos núcleos do estroma prostático após castração e foi recuperado com os tratamentos. Já a localização de ER-? no núcleo das células epiteliais mostrou-se muito semelhante em todos os grupos. Sugere-se, ainda, uma atuação do estradiol na regulação dos níveis séricos de prosgesterona e testosterona. Sendo assim, conclui-se que a histoarquitetura normal da glândula nas fêmeas está relacionada ao equilíbrio entre os hormônios ovarianos e que, dentre eles, o estradiol e a testosterona desepenham papel importante na homeostasia prostática desses animais Abstract: The female prostate is a functional gland found in several mammal species, including humans and rodents. In adult female gerbils, the prostate shows paraurethral localization, exhibiting intimate contact with medial and distal urethra wall. This gland is homologous to ventral prostate in male rodents, composed by a group of acini and ducts inserted into a fibromuscular stroma. Prostate morphophysiology estudies during estrous cycle have shown that female prostate is influenced by estradiol and progesterone serum levels oscillations. Thus, studies which evaluate the effect of long-term exposure to estradiol become necessary, in order to observe the way this steroid acts by on prostate lesions development. Furthermore, it is also important to evaluate hormonal interaction among estradiol and other serum steroids with the aim of evaluating which hormonal associations are necessary to maintain the homeostatic balance of gerbil female prostate. Hence, this study role was to evaluate the effect of estradiol and estradiol plus testosterone long-term exposure on the prostate of ovariectomized females. To make it possible, adult females underwent to surgical intervention to remove both ovaries and, after 10 days recovering, they received estradiol or estradiol plus testosterone doses. After 30 days of treatment, the animals were euthanized and de prostate glands were submitted to morphological, morphometric-estereological and serological analysis. Morphological and physiological alterations were observed in all experimental groups. Hormonal deprivation caused by castration brought glandular atrophy and decreased secretory activity. These aspects were reverted by animals exposure to isolated estrogen and estrogen plus testosterone conjugation. However, these hormones were not able to reestablish the tissue normal histoarchitecture. Some lesions were even observed mainly in tratment groups, like inflammations and intraepithelial neoplasias. The imunoreaction for ER-? decreased in prostate stroma nuclei after castration and was restablished with treatments. On the other hand, the epithelium ER-? expression was similar in all groups. It also seems that there is a role played by estradiol in testosterone and progesterone serum levels regulation. In conclusion, normal histoarchitecture of gerbil female prostate is related to ovarian hormones balance and estradiol and testosterone play an important role in prostatic homeostasis in these animals Mestrado Histologia Mestre em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Valéria Helena Alves Cagnon Quitete Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: A reposição androgênica representa uma alternativa para minimizar os efeitos prejudiciais do desequilíbrio hormonal em homens senis, embora seus efeitos sobre o desenvolvimento de doenças prostáticas ainda seja assunto controvertido. Assim, o objetivo deste estudo foi caracterizar aspectos estruturais e moleculares do lobo ventral da próstata de ratos senis frente à reposição de hormônios esteróides, relacionando as alterações decorrentes da terapia hormonal a possíveis condições de lesões prostáticas. Ratos machos (Sprague- Dawley) foram divididos em um grupo Jovem (JOV) (4 meses), que recebeu óleo de amendoim (5 mL/Kg, s.c.), e grupos senis (10 meses), submetidos aos tratamentos: grupo Senil (SEN): óleo de amendoim (5 mL/Kg, s.c.); grupo Testosterona (TEST): cipionato de testosterona (5 mg/Kg, s.c.); grupo Estrógeno (EST): 17?-estradiol (25 ?g/Kg, s.c.); grupo Castrado (CAS): castração cirúrgica; grupo Castrado-Testosterona (CT): castração e após 30 dias tratamento similar ao grupo TEST; grupo Castrado-Estrógeno (CE): castração e após 30 dias tratamento similar ao grupo EST. Após 30 dias de tratamento, foram coletadas amostras de sangue, para dosagens hormonais séricas, e do lobo ventral, para análises em microscopias de luz e eletrônica de transmissão, morfométricas, imunohistoquímicas e Western Blotting. As moléculas investigadas foram: distroglicanas ? e ? (?-DG e ?-DG), receptor do fator de crescimento homólogo à insulina tipo I (IGFR-1), metaloproteinase-9 de matriz (MMP-9), fator de crescimento do endotélio vascular (VEGF) e endostatina. Redução dos níveis séricos de testosterona foi verificada na senescência, com aumento destes após a reposição hormonal no grupo TEST. O estroma do grupo SEN apresentou hipertrofia e células inflamatórias. Após a reposição hormonal na senescência ou frente à castração, verificou-se atrofia no epitélio, células epiteliais com halo citoplasmático claro ao redor do núcleo, microácinos e manutenção do estroma hipertrófico com células inflamatórias. Diminuição dos níveis das DGs foi verificada na senescência, sendo que após a terapia hormonal ocorreu aumento dos níveis protéicos dessas moléculas, especialmente nos grupos que receberam estradiol. Aumento do IGFR-1 e da MMP-9, bem como distribuição diferencial dessas moléculas no compartimento epitelial, foram observados nos grupos submetidos à reposição hormonal e no grupo CAS. O grupo SEN caracterizou acréscimo dos níveis de VEGF, sendo o inverso observado para a endostatina. A terapia hormonal e a castração levaram à elevação dos níveis de VEGF, sobretudo nos grupos EST, CAS e CE. Em oposição, a endostatina demonstrou-se aumentada especialmente nos grupos submetidos à reposição de testosterona. Os presentes resultados sugeriram que o desequilíbrio entre andrógenos e estrógenos verificado na senescência foi acentuado após a terapia hormonal e a castração, potencializando as alterações estruturais associadas a esse período e rompendo o equilíbrio das sinalizações parácrinas prostáticas, com aumento simultâneo de IGFR-1 e MMP-9 e geração de fatores pró e anti-angiogênicos em resposta ao tratamento com estrógenos e andrógenos, respectivamente. Assim, concluiu-se que a terapia hormonal, apesar de seus efeitos positivos sobre as DGs, gerou microambiente prostático reativo, caracterizado por aumento de um fator mitogênico e da remodelação tecidual bem como por desequilíbrio da angiogênese, o que possivelmente comprometeu a função do órgão e o predispôs a desordens glandulares Abstract: Androgen replacement is an alternative to minimize the harmful effects of hormonal imbalance in elderly men, even though its influence on the development of prostatic diseases is unclear. Thus, the aim herewith was to characterize structural and molecular features of the ventral prostate of senile rats submitted to steroid hormone replacement, relating the alterations resulting from hormonal therapy to possible prostatic lesions. Male rats (Sprague-Dawley) were divided into Young group (YNG) (4 months old rats), which received peanut oil (5 mL/Kg, s.c.), and senile groups (10 months old rats), submitted to the treatments: Senile group (SEN): peanut oil (5 mL/Kg, s.c.); Testosterone group (TEST): testosterone cipionate (5 mg/Kg, s.c.); Estrogen group (EST): 17?-estradiol (25 ?g/Kg, s.c.); Castrated group (CAS): surgical castration; Castrated-Testosterone group (CT): castration and after 30 days treatment similar to TEST group; Castrated-Estrogen group (CE): castration and after 30 days treatment similar to EST group. After 30 days treatment, blood samples were collected for hormonal analysis and ventral prostate samples were processed for light and transmission electronic microscopies, morphometric, immunohistochemical and Western Blotting analysis. The investigated molecules were alfa and beta dystroglycans (?DG and ?DG), insulin-like growth factor receptor-1 (IGFR-1), matrix metalloproteinase-9 (MMP-9), vascular endothelial growth factor (VEGF) and endostatin. Decreased serum testosterone levels were verified in senescence, with an increase after hormonal replacement in the TEST group. Hypertrophied stroma with inflammatory cells was seen in the SEN group. After hormonal therapy in the senescence or following castration, atrophic and pale cytoplasmatic epithelial cells, microacini and hypertrophied stroma were observed. Decreased DG levels were verified in senescence, but there was an increase of these levels following hormonal therapy, especially in the groups treated with estradiol. Increased IGFR- 1 and MMP-9 protein levels and differential distribution of these molecules were observed in epithelial compartment in those groups which received hormone replacement and in the CAS group. SEN group showed increased VEGF levels in contrast to decreased endostatin levels. Hormonal therapy and castration led to raised VEGF levels, mainly in EST, CAS and CE groups. On the other hand, endostatin was increased especially in those groups submitted to testosterone replacement. The present results suggested that the imbalance between androgens and estrogens in senescence was enhanced after hormone replacement and castration, intensifying structural changes associated with this period. Also, there was a disruption of prostatic paracrine signaling balance, with simultaneous increase of IGFR-1 and MMP-9 and generation of pro and anti-angiogenic factors in response to treatment with estrogens and androgens, respectively. Thus, it could be concluded that despite its positive effects on DGs levels, hormonal therapy created a reactive prostatic microenvironment, characterized by increase of a mitogenic factor and tissue remodelling as well as prostatic angiogenesis imbalance, which could compromise glandular functions and lead to the emergence of prostatic lesions Mestrado Anatomia Mestre em Biologia Celular e Estrutural