Piper amalago L. is a medicinal plant traditionally used as a healing agent for wounds, burns, abscesses, boils, and insect bites. The current study aimed to evaluate the possible effects of the aqueous crude extract obtained from P. amalago leaves, in different concentrations and in different incubation times, using the in vitro model of mouse fibroblasts (3T3). The extract was tested in different concentrations at the 24 h incubation time for analysis of cell viability, cytotoxicity, proliferation, cell morphology, immunostaining, adhesion and cell spreading assays, as well as to determine the hydroxyproline concentration and activity of the metalloproteinase MMP2. Morphologically, after exposure to the concentrations of 15 and 150 µg/mL, the cells maintained the morphology, yet a greater number of cells with more expansions of the cell body and larger than the control cells were observed. The treated cell culture also showed a greater number of cells, larger cells, a greater expansion of the cell body, adherent cells spread over the substrate, and a more juxtaposed, central and spherical nucleus. The treatment induced greater cell adhesion to the polymer, fibronectin, and collagen I. Biochemical results showed a significant increase in the hydroxyproline amino acid after exposure for 96 h. The extract did not induce loss of cell viability until the concentration reached 150 µg/mL, positively modulating proliferation, morphology, adhesion, degree of spreading, and organization of microfilaments. The extract also promoted a significant increase in the hydroxyproline amino acid. Piper amalago L. es una planta medicinal utilizada tradicionalmente como agente cicatrizante de heridas, quemaduras, abscesos, furúnculos y picaduras de insectos. El presente estudio tuvo como objetivo evaluar los posibles efectos del extracto crudo acuoso obtenido de las hojas de P. amalago, en diferentes concentraciones y en diferentes tiempos de incubación, utilizando el modelo in vitro de fibroblastos de ratón (3T3). El extracto se probó a diferentes concentraciones en el tiempo de incubación de 24 horas para el análisis de viabilidad celular, citotoxicidad, proliferación, morfología celular, inmunotinción, ensayos de adhesión y propagación celular, así como para determinar la concentración de hidroxiprolina y la actividad metaloproteinasa de MMP2. Morfológicamente, tras la exposición a concentraciones de 15 y 150 µg/mL, las células mantuvieron su morfología, pero se observó un mayor número de células con más expansiones del cuerpo celular y más grandes que las células control. El cultivo celular tratado también mostró un mayor número de células, células más grandes, mayor expansión del cuerpo celular, células adherentes difundidas sobre el sustrato y núcleos más yuxtapuestos, centrales y esféricos. El tratamiento indujo una mayor adhesión celular al polímero, fibronectina y colágeno I. Los resultados bioquímicos mostraron un aumento significativo en el aminoácido hidroxiprolina después de 96 h de exposición. El extracto no indujo pérdida de viabilidad celular hasta que la concentración alcanzó 150 µg/mL, modulando positivamente la proliferación, morfología, adhesión, grado de diseminación y organización de los microfilamentos. El extracto también promovió un aumento significativo del aminoácido hidroxiprolina. Piper amalago L. é uma planta medicinal tradicionalmente usada como agente de cura para feridas, queimaduras, abcessos, furúnculos e picadas de insetos. O presente estudo teve como objetivo avaliar os possíveis efeitos do extrato bruto aquoso obtido das folhas de P. amalago, em diferentes concentrações e em diferentes tempos de incubação, utilizando o modelo in vitro de fibroblastos de camundongo (3T3). O extrato foi testado em diferentes concentrações no tempo de incubação de 24 horas para análise de viabilidade celular, citotoxicidade, proliferação, morfologia celular, imunomarcação, adesão e ensaios de propagação celular, bem como para determinar a concentração de hidroxiprolina e atividade da metaloproteinase MMP2. Morfologicamente, após exposição às concentrações de 15 e 150 µg/mL, as células mantiveram a morfologia, porém foi observado um número maior de células com mais expansões do corpo celular e maiores que as células controle. A cultura celular tratada também apresentou maior número de células, células maiores, maior expansão do corpo celular, células aderentes espalhadas pelo substrato e núcleo mais justaposto, central e esférico. O tratamento induziu maior adesão celular ao polímero, fibronectina e colágeno I. Os resultados bioquímicos mostraram um aumento significativo no aminoácido hidroxiprolina após exposição por 96 h. O extrato não induziu perda de viabilidade celular até a concentração atingir 150 µg/mL, modulando positivamente a proliferação, morfologia, adesão, grau de disseminação e organização dos microfilamentos. O extrato também promoveu um aumento significativo no aminoácido hidroxiprolina.