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Vector-borne pathogens (VBPs) are primarily transmitted by arthropod vectors, but secondary ways of transmission have been described, including via venereal route. Nonetheless, there is still limited research on possible sexual transmission of VBPs in dogs. We molecularly investigated the presence of vector-borne pathogens in semen from dogs living in an area where these agents are endemic. Upon PCR testing, seven out of 22 (31.8%) semen samples tested positive for at least one VBP, whereas simultaneous positivity to two or more pathogens was detected in three (13.6%) dogs. Among pathogens detected in semen, Trypanosoma cruzi (n = 1) and Leishmania infantum (n = 3) were identified to species level by restriction fragment length polymorphism analysis. Attempts to sequence PCR products from other pathogens were unsuccessful, but coupled epidemiological and molecular data suggest the presence of Anaplasma platys (n = 5), Babesia vogeli (n = 1) and Ehrlichia canis (n = 1) in semen from dogs. Further experimental studies would be needed to confirm the sexual transmission hypothesis for these VBPs and also the possible implications of these findings for canine reproduction.

Background: Hemoparasitoses are extremely important in the clinical routine because they affect a large number of dogs. In spite of the abundance of studies on this topic, hormonal alterations caused by infection with these agents are still poorly known. Therefore, the goal of this work was to assess the serum levels of thyroid hormones of dogs infected with Ehrlichia canis ( E. canis ) alone, and dogs infected with E. canis and Babesia canis vogeli ( B. vogeli ) and/or Anaplasma platys ( A. platys ) before and after treatment with doxycycline chlorohydrate. This study also aimed at checking for presence of euthyroid sick syndrome (ESS) in these animals. Materials, Methods & Results: The concentrations of the thyroid hormones total triiodothyronine (TT3), total tetraiodothyronine (TT4), free tetraiodothyronine (FT4), and canine thyroid-stimulating hormone (cTSH) were assessed by chemiluminescence in 12 dogs. Nested polymerase chain reaction (nPCR) was used to confirm diagnoses. The dogs were divided into 2 groups: G1, which comprised animals infected by E. canis alone, and G2, which included animals simultaneously infected by E. canis and B. vogeli and/or A. platys . The serum concentrations of the thyroid hormones were measured at two time points: before (D1) and after (D2) the 28-day treatment with generic doxycycline chlorohydrate (DC) at a dose of 10 mg/kg SID. On D2, another nPCR was carried out to check the efficacy of the treatment. On D2, in both groups, all dogs became negative for E. canis ; however, 8 animals remained infected or were reinfected by other hemoparasites. On D1, 4 dogs in G1 exhibited low TT3 in conjunction with low TT4; one of the dogs had increased TT3 alone, and another dog had an increased TT3 accompanied by decreased TT4. In G2, on D1, one dog exhibited high TT3 accompanied by a decreased concentration of TT4; 2 dogs had decreased TT4; 2 dogs had increased TT3; and one dog had both TT3 and TT4 decreased. On D2, with only one exception, the animals in G1 that became negative for all hemoparasites under study exhibited normal serum levels of TT3 and TT4. Three dogs in G1, which were reinfected on D2, sustained decreased TT4 serum concentrations. Whereas, in G1 on D2, only one dog remained with a reduced serum TT4 concentration. Discussion: DC was effective at eliminating infection by E. canis in all dogs on D2. Even though this drug was unable to prevent reinfection of the animals by other hemoparasites, and in spite of divergent results on its efficacy at eliminating babesiosis and anaplasmosis, a clinical improvement was observed in all patients. A decrease in the serum concentrations of thyroid hormones (ESS) may occur in dogs with severe non-thyroid related diseases. Different authors have demonstrated the presence of ESS in dogs with hemoparasitoses; however, this is the first study to provide evidence on the existence of this syndrome in dogs with hemoparasitoses in Brazil, including dogs simultaneously infected by E. canis and B. vogeli and/or A. platys . We observed a reduction in TT3 and/or TT4 in dogs infected by E. canis , B. vogeli , and A. platys . We believe these results may help assessment of prognosis and patient follow-up, as TT4 concentrations returned to normal levels in all dogs that became negative for all hemoparasites after treatment; and only one dog in G1 sustained increased TT3, albeit lower than observed on D1. In animals of G1 that were reinfected after treatment started, TT3 returned to normal, even though TT4 levels remained decreased. In sum, all dogs in G1 and G2 exhibited TT3 and/or TT4 concentrations outside of the reference value ranges on D1, which indicates that alterations in the levels of thyroid hormones were due to infection by the hemoparasites. The animals infected by E. canis alone or simultaneously infected by B. vogeli and/or A. platys exhibited ESS.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico O Brasil contabiliza aproximadamente 13,5 milhões de ovinos em estabelecimentos agropecuários, sendo que a ovinocultura leiteira brasileira se mostra em ascensão. Em busca de expandir o mercado e alcançar altos níveis de produção de leite, a manutenção da saúde do rebanho ovino por meio de um adequado manejo sanitário é imprescindível. Neste contexto, conhecer a prevalência das enfermidades no rebanho é fundamental, auxiliando na adoção de medidas corretivas e profiláticas. Assim, o objetivo deste trabalho foi realizar levantamento molecular de hemopatógenos e Neospora caninum e soroepidemiológico de Toxoplasma gondii, busca por ectoparasitos e levantamento dos fatores de risco associados a esses patógenos em propriedades comerciais de ovinos leiteiros do estado de Minas Gerais. O estudo foi realizado em três municípios: Glaura, Itapecerica e Jaboticatubas, totalizando quatro propriedades e 270 amostras sanguíneas. Para as análises moleculares foi realizada a Reação em Cadeia de Polimerase – PCR – e para as análises sorológicas o Ensaio de Imunoabsorção Enzimática – ELISA. Ademais, análises parasitológicas em amostras de sangue foram realizadas, como esfregaço sanguíneo periférico e de sangue total, buffy coat, técnica de Woo e mensuração do volume globular. Ainda, a contagem de ovos por grama de fezes – OPG – foi realizada em amostras de 197 animais a procura de ovos de tricostrongilídeos a fim de associar com a presença de anemia. A busca por ectoparasitos foi realizada por meio de catação manual e por puçá. Ainda, por meio do questionário zoosanitário aplicado nas propriedades, verificou-se quais os fatores de risco para as enfermidades estudadas neste trabalho. Os resultados foram expostos de acordo com a frequência de positividade, apresentados em percentual. Com os dados dos questionários, os resultados dos testes moleculares, sorológicos, VG, OPG e presença/ausência de ectoparasitos, as associações entre as variáveis foram realizadas por meio do teste estatístico Razão de Verossimilhança. Contudo, em situações onde frequência foi igual a zero, o teste utilizado foi utilizado o Teste Exato de Fischer. O nível de significância nas análises foi de 5% (p≤0,05). Apenas em uma propriedade foram encontrados ectoparasitos, sendo uma pulga (Ctenocephalides felis felis) e uma ninfa de carrapato (Amblyomma sp.). Por meio da PCR, resultados positivos foram obtidos para os hemopatógenos: Mycoplasma ovis (71,48%), Anaplasma spp. (4,07%), Anaplasma marginale (2,96%), Ehrlichia monocítica (2,96%), Babesia spp. (0,74%), e Ehrlichia/Anaplasma de granulócitos (0,38%). Todas as propriedades apresentaram coinfecções entre algum dos agentes estudados neste trabalho. A PCR para N. caninum apresentou 25,55% de positividade. A sororreatividade para T. gondii foi encontrada em 59 amostras (22,1%) com o índice de reatividade (I.R.) ≥1,0. Por meio da análise dos esfregaços sanguíneos, buffy coat e Técnica de Woo, não foi encontrado nenhum patógeno. Já a mensuração do volume globular demonstrou que 43,71% dos animais apresentavam-se anêmicos no momento da coleta. O resultado do OPG foi negativo em 42,13% (83/197) das amostras analisadas e contagem com valores inferiores a 500 ovos ocorreu em 20,81% (41/197) das amostras analisadas. Infecção grau leve (500-800 ovos) foi detectada em 6,59% (13/197) das amostras, grau moderado (800-1.500 ovos) em 4,56% (09/197) e grau elevado (24 meses de vida para N. caninum; e na sororreatividade para T. gondii a presença de gatos, fontes de água poço e nascente e a ocorrência de distúrbios reprodutivos. As hemoparasitoses estavam presentes em todos os rebanhos analisados devendo ser considerada um diagnóstico diferencial para ovinos anêmicos. Além disso, são indispensáveis o estabelecimento de medidas para o controle da toxoplasmose nos rebanhos e o maior entendimento do papel de N. caninum nos distúrbios reprodutivos desses animais.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Amblyomma sculptum, carrapato da família Ixodidae, possui como principais hospedeiros os equinos, as capivaras e as antas. Estes hospedeiros não desenvolvem uma imunidade efetiva contra o carrapato e podem apresentar altas cargas parasitárias. Tendo em vista a necessidade de desenvolvimento de novas formas de combate aos carrapatos, a manutenção de colônias de A. sculptum em laboratório com uma quantidade suficiente de espécimes para a realização de experimentos é essencial. Entretanto, o uso de camundongos para a manutenção de colônias de A. sculptum ainda é pouco descrito na literatura. No presente estudo, o objetivo principal foi descrever os parâmetros biológicos do carrapato A. sculptum alimentado em diferentes linhagens de camundongos e avaliar o desenvolvimento de resposta imune pelos hospedeiros. Para isso, a alimentação de A. sculptum foi feita em camundongos C57BL/6, Swiss, BALB/c e BALB/c knockout para o receptor ST2 (kST2). Ninfas do carrapato-estrela também foram alimentadas em diferentes densidades parasitárias e em sucessivas infestações. O sangue de camundongos infestados foi coletado para avaliação de anticorpos. Os resultados mostraram que camundongos das linhagens BALB/c, C57BL/6 e Swiss podem ser utilizados para manter uma colônia de larvas e ninfas de A. sculptum em laboratório. Entretanto, as ninfas alimentadas em camundongos Swiss apresentaram peso após alimentação menor, 13,1 ± 4,3 mg, e tempo médio de muda maior, 17,1 ± 1,4 dias. As ninfas alimentadas em camundongos BALB/c knockout para o receptor ST2 (kST2) realizaram o repasto sanguíneo com eficiência semelhante às ninfas alimentadas em camundongos BALB/c. Porém, demoraram mais tempo para se alimentarem, 5,3 ± 1,4 dias. Ninfas de A. sculptum foram mais eficientes quando alimentadas em densidades parasitárias de 10 ninfas/camundongo. Quando cinco ninfas foram alimentadas no mesmo local no camundongo, o peso após a alimentação foi significativamente menor, 12,9 ± 5,3 mg em camundongos BALB/c e 12,9 ± 3,9 mg em camundongos kST2. As ninfas realizaram com sucesso a hematofagia nas três infestações sucessivas em camundongos BALB/c, kST2 e Swiss demonstrando que esses camundongos não desenvolveram uma resistência adquirida. O tempo de alimentação foi maior quando ninfas alimentaram em camundongos das linhagens BALB/c e kST2 previamente infestados por carrapatos, 7,5 ± 1,0 e 6,5 ± 1,3 dias, respectivamente. Já na linhagem Swiss, o tempo de alimentação e o tempo de muda foram menores, 4,7 ± 1,2 e 14,3 ± 0,4 dias, respectivamente. O soro dos camundongos Swiss parasitados apresentou anticorpos antissaliva crescentes após uma terceira infestação. Os anticorpos presentes no soro dos camundongos Swiss reconheceram, através de Western Blot, moléculas do extrato de glândula e da saliva do carrapato, essa última representada por duas bandas, o que indica que a saliva tem poucas proteínas imunogênicas. Nosso trabalho mostrou que camundongos são bons hospedeiros para o carrapato A. sculptum, podendo ser usados por até três infestações sem desenvolverem imunidade efetiva contra o parasitismo. Amblyomma sculptum, a tick of the family Ixodidae, has as main hosts equines, capybaras, and tapirs. These hosts do not develop effective immunity against the tick and may have high parasitic loads. Because of the need to develop new ways of combating ticks, the maintenance of A. sculptum colony in the laboratory with a sufficient number of specimens to carry out experiments is essential. However, the use of mice for the maintenance of A. sculptum colonies is still poorly described in the literature. In the present study, the main objective was to describe the biological parameters of the tick A. sculptum fed on different strains of mice and to evaluate the development of immune response by the hosts. For this, A. sculptum was fed on C57BL/6, Swiss, BALB/c, and BALB/c knockout mice for the ST2 (kST2) receptor. Star tick nymphs were also fed at different parasitic densities and successive infestations. Blood from infested mice was collected for antibody assessment. The results showed that BALB/c, C57BL/6, and Swiss mice can be used to maintain a colony of A. sculptum larvae and nymphs in the laboratory. However, nymphs fed on Swiss mice had lower weight after feeding, 13.1 ± 4.3 mg, and longer mean molting time, 17.1 ± 1.4 days. Nymphs fed on BALB/c knockout mice to the ST2 receptor (kST2) performed blood meal with efficiency similar to nymphs fed on BALB/c mice. However, they took longer to feed, 5.3 ± 1.4 days. A. sculptum nymphs were more efficient when fed at parasitic densities of 10 nymphs/mice. When five nymphs were fed at the same location in the mouse, the weight after feeding was significantly lower, 12.9 ± 5.3 mg in BALB/c mice and 12.9 ± 3.9 mg in kST2 mice. The nymphs successfully performed hematophagy on the three successive infestations in BALB/c, kST2, and Swiss mice demonstrating that these mice did not develop acquired resistance. Feeding time was longer when nymphs fed on mice of the BALB/c and kST2 strains previously infested with ticks, 7.5 ± 1.0 and 6.5 ± 1.3 days, respectively. In the Swiss line, the feeding time and the seedling time were shorter, 4.7 ± 1.2 and 14.3 ± 0.4 days, respectively. The serum of the parasitized Swiss mice showed increasing antisaliva antibodies after a third infestation. The antibodies present in the serum of Swiss mice recognized, through Western Blot, molecules of the gland extract and the saliva of the tick, the latter represented by two bands, which indicates that the saliva has few immunogenic proteins. Our work showed that mice are good hosts for the A. sculptum tick, which can be used for up to three infestations without developing effective immunity against the parasitism.

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Algumas hemoparasitoses têm carrapatos como vetores e assumem elevada importância em medicina veterinária, além do potencial zoonótico de algumas dessas doenças. O objetivo deste trabalho foi detectar espécies de carrapatos presentes nos cães do município de Itabirito, Minas Gerais, uma área de transição de mata atlântica e cerrado, correlacionando com dados sanitários destes animais e detectar hemoparasitos em circulação nestes hospedeiros. Foram coletadas amostras de sangue e carrapatos de 100 cães, sendo nove cães domiciliados destinados à esterilização cirúrgica realizada no canil municipal, 20 cães de rua resgatados e encaminhados para o canil e 71 residentes no Bairro Portões – considerada uma região periurbana em contato com ambiente de mata e rural. Foi também realizado questionário com tutores de cães para levantar informações sanitárias de 78 animais. O teste de Qui-quadrado com significância de 5% foi realizado para correlacionar as respostas do questionário com os cães parasitados. As coletas foram realizadas entre os meses de outubro de 2017 a maio de 2018. Para a identificação dos carrapatos coletados, foi utilizado chaves taxonômicas de ixodídeos. Para a detecção de hemopatógenos dos gêneros Ehrlichia e Anaplasma foi realizada análise molecular em todas as amostras de sangue, por meio da reação em cadeia da polimerase nested (nPCR) e para os gêneros Hepatozoon, Babesia e Rangelia por meio da reação em cadeia da polimerase (PCR). Foi realizado sequenciamento nucleotídico para identificação específica dos agentes etiológicos encontrados. Além disso, o diagnóstico de Ehrlichia canis e Anaplasma phagocytophilum foi realizado por meio da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), não sendo realizado este método para outras espécies de hemopatógenos. Foram coletados 210 espécimes de carrapatos. Destes, foram encontrados, 47 fêmeas, 68 machos, 62 ninfas e três larvas de Rhipicephalus sanguineus s. l; três machos e cinco fêmeas de Amblyomma aureolatum; oito ninfas, quatro fêmeas e oito machos de Amblyomma sculptum; e duas fêmeas de Rhipicephalus microplus. O parasitismo ocorreu em 3/9 (33,33%) dos cães destinados à esterilização cirúrgica, 11/20 (55%) dos cães provenientes de captura – ambos grupos provenientes do canil municipal - e 48/71 (67,60%) dos cães examinados no bairro Portões. Quanto aos dados sanitários de 78 dos cães, foi relatado que 60,26% dos cães passeavam com os tutores, porém somente 6,08% destes sempre utilizavam coleira com guia. Sobre o confinamento destes animais, 43,59% dos cães não possuíam barreiras físicas de contenção e 5,12% viviam em contato com áreas de mata. Quanto ao contato com outros animais, foi possível identificar 75 cães com este perfil, sendo: 29 tinham contato com outros cães; 28 com outros animais domésticos; e 18 com animais domésticos e silvestres. Não houve diferença significativa na prevalência de infestação entre esses grupos de animais. O controle da infestação por carrapatos era realizado em 57 cães, sendo o uso de banhos contendo antiparasitários o método mais comum. Em geral, os tratamentos não seguiam qualquer tipo de acompanhamento veterinário, sendo demonstrado que os cães expostos a tratamentos antiparasitários não diferiram estatisticamente em prevalência de infestação dos não expostos. Na análise molecular houve amplificação em 17/100 das amostras, com o gene alvo 16S rRNA para membros da família Anaplasmataceae com tropismo por granulócitos ou plaquetas (EG); em 9/100 das amostras para o gene de Piroplasma SSU rDNA; em 7/100 das amostras para o gene 18S rRNA de Hepatozoon spp.; em 5/100 das amostras para o gene dsb de Ehrlichia spp. e 1/100 amostra amplificou para o gene msp4 de A. phagocytophilum. Considerando os resultados do sequenciamento, foi possível identificar a circulação de E. canis, Anaplasma platys, Babesia vogeli e Hepatozoon canis. No diagnóstico sorológico utilizando a RIFI, foi possível detectar 19/100 amostras reativas para E. canis na diluição 1:40 e 6/100 para A. phagocytophilum, sendo: uma amostra na diluição 1:40, duas 1:80, duas 1:160 e uma 1:320. Conclui-se que há a circulação de hemopatógenos transmitidos por carrapatos na população de cães em Itabirito – MG e estes possuem contato com espécies domésticas e silvestres, o que predispõe a população humana ao contato com carrapatos de ambientes silvestres e possivelmente a hemoparasitoses carreadas por estes ixodídeos. Futuras pesquisas devem ser realizadas para definir com maior precisão a circulação de Rangelia vitalli e A. phagocytophilum. Além desses patógenos investigados nesta pesquisa, seria importante uma investigação sobre organismos do gênero Rickettsia, transmitidos por carrapatos e de grande importância em medicina veterinária e saúde pública. Some tickborne diseases play an important role in veterinary medicine in addition to the zoonotic potential of some of these diseases. This study aimed to detect the species of ticks present in dogs from Itabirito, Minas Gerais, a transition area of Atlantic forest and cerrado, connecting this with health data of these animals, and detect hemoparasites in these hosts. Blood samples and ticks were collected from 100 dogs. The origin of these animals were 9 domiciliated dogs which were sent to the castration program, 20 stray dogs rescue and sent to the municipal kennel of the county, and 71 domiciliated dogs in Portões, a neighborhood of Itabirito. The samples from these dogs were collected for convenience sampling. Also, were collected some health information about these dogs with a questionnaire direct to their tutors. In order to assess whether there was a statistical association between the data extract from questionnaire and tick infestation the chi-square test was applied with 5% confidence. The study collections were performed between October 2017 and May 2018. For the identification of the collected ticks, taxonomic keys of ixodids were used. For the detection of hemopathogens of the genera Ehrlichia and Anaplasma, molecular analysis was performed on all blood samples, using the nested polymerase chain reaction (nPCR) and for the genera Hepatozoon, Babesia and Rangelia using the polymerase chain reaction (PCR). Nucleotide sequencing was performed to specifically identify the etiologic agents found. In addition, the diagnosis of Ehrlichia canis and Anaplasma phagocytophilum was carried out through the indirect immunofluorescence reaction (RIFI), this method not being used for other species of hemopathogens. Were collected 210 tick specimens. From these, were found: 47 females, 68 males, 62 nymphs and three larvaes of the Rhipicephalus sanguineus s. l; three males and five females of the Amblyomma aureolatum; eight nymphs, four females and eight males of Amblyomma sculptum; and two females of Rhipicephalus microplus. The parasitism occurred in 3/9 (33.33%) refered for surgical sterilization, 11/20 (55%) dogs from capture – these both group of animals were analysed in municipality kennel - and 48/71 (67.60%) dogs examined in Portões neighborhood. About the 78 dogs health data, it was reported that 60.26% of the dogs walking with the tutors; however only 6.08% of these tutors always use leash and guide. Regarding the confinement of these animals, 43.59% of the dogs do not have any physical block barrier and 5.12% live in contact with forest area. Besides, other data reveal that 75 dogs had contact with others animals, as follow: 29 with others dogs; 28 with others domestic animals; and 18 with domestic and wild animals. There was no statitical significant difference in the prevalence of infestation between these groups of animals. The tick infestation control was performed in 57 dogs, and the most common method used was the bath with antiparasitic products. In general, the treatments of dogs did not follow any veterinary professional instructions and, it has been shown that dogs treated with antiparasitic drugs or other methods for tick control did not differ statistically in infestation prevalence when compared with the group without any treatment. In the molecular analysis 17% of samples were amplified using primers for 16S rRNA belongs to the granulocytic and trombocytic Anaplasmataceae members. For SSU rDNA gene from Piroplasm 9% of samples were amplified; 7% samples were amplified for the 18s rRNA gene for Hepatozoon spp.; 5% of samples were amplified for dsb gene from Ehrlichia spp., and 1% of samples were amplified using msp4 gene as target for A. phagocytophilum. By the serological diagnosis using IFAT were detected 19% reactive samples for E. canis in 1:40 dilution and 6% reactive samples for A. phagocytophilum in the following dilutions: 1 dog - 1:40; 2 dogs – 1:80; 2 dogs – 1:160; and 1 dog – 1:320. In conclusion, there was the circulation of tickborne diseases in this population of dogs in Itabirito – MG and these dogs have contact with wild and domestic species which predisposes the human population have contact with ticks from wild areas and possible to hemopathogens carried by these ticks. Future studies are need in order to better define the R. vitalli and A. phagocytophilum circulation. Beyond of these pathogens researched in this work, it will be necessary an investigation about Rickettsia genus organisms, because they represent great importance in veterinary medicine and public health.

FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais Trypanosoma vivax é um protozoário que causa graves prejuízos econômicos em bovinos. Originário da África, onde é transmitido pela mosca tsé-tsé, seu vetor biológico, o parasito adaptou-se à transmissão mecânica e espalhou-se por locais onde seu vetor não está presente, chegando até as Américas. No Brasil, relatos de graves surtos de T. vivax têm ocorrido em várias regiões, estando, em alguns casos, relacionados à transmissão iatrogênica, sobretudo em rebanhos leiteiros que fazem uso rotineiro de ocitocina intravenosa. Entre os métodos de diagnóstico diretos, a técnica de Woo se destaca; entretanto, sua realização requer o rápido processamento do sangue. Entre os métodos indiretos, merecem destaque no país o ELISA e a RIFI. Devido à importância econômica da tripanossomose bovina causada por T. vivax, este estudo objetivou avaliar a ação de conservantes com a finalidade de prolongar o tempo de realização da técnica de Woo; a ação de desinfetantes na viabilidade de T. vivax em seringas e agulhas; a viabilidade do parasito em soluções de ocitocina e validar a RIFI como método de diagnóstico. Os conservantes analisados foram Prolina, Prolina+Glicose, Glicose e PSG. A associação de Prolina+Glicose foi o conservante mais eficiente, entretanto, seu elevado custo, em relação ao benefício, não incentiva sua utilização. A adição de solução de ocitocina a amostras de sangue contaminado por T. vivax nas proporções 1:1 e 1:200, exerceu ação negativa na viabilidade do parasito, entretanto, permitiu sua a sobrevivência por até 30 minutos (1:1), sendo, portanto, um veículo apto a transmitir o parasito. Foi avaliada a ação de hipoclorito de sódio (0,5%), álcool (54ºGL) e cloreto de alquil dimetil benzil amônio (0,15%) na desinfecção de agulhas e seringas contaminadas, através de dois processos: aspirando-se/desprezando-se o desinfetante ou apenas imergindo-se a seringa/agulha na solução desinfetante por 30 minutos. Pelo primeiro processo todos os desinfetantes avaliados foram eficientes na eliminação de T. vivax. Pelo processo de imersão, entretanto, nenhum dos desinfetantes foi capaz de eliminar completamente o parasito, apesar de reduzirem sua viabilidade. No processo de validação, a técnica de RIFI foi otimizada, para definição do protocolo mais adequado. Sua repetibilidade e reprodutibilidade foram avaliadas e consideradas elevadas; a sensibilidade analítica foi baixa em relação ao ELISA, entretanto a especificidade analítica foi total, não havendo reações cruzada com outros hematozoários avaliados. Quanto às características diagnósticas, a técnica obteve 82,9% de sensibilidade e 100% especificidade; sendo adequada à realização de estudos epidemiológicos de T. vivax. Trypanosoma vivax is a protozoan that causes severe economic damage in cattle. Originating in Africa, where it is transmitted by the tsetse fly, its biological vector, the parasite has adapted to the mechanical transmission and has spread to places where its vector is not present, reaching the Americas. In Brazil, reports of severe outbreaks of T. vivax have occurred in several regions, and in some cases are related to iatrogenic transmission, especially in dairy herds that routinely use intravenous oxytocin. Among the direct diagnostic methods, the Woo technique stands out; however, its accomplishment requires rapid processing of blood. Among the indirect methods, the ELISA and the IFAT are worth highlighting. Due to the economic importance of bovine trypanosomiasis caused by T. vivax, this study aimed to evaluate the action of preservatives as a way to prolong the time of the Woo method; the action of disinfectants on the viability of T. vivax in syringes and needles; the viability of the parasite in oxytocin solutions and to validate IFAT as a diagnostic method. The preservatives analyzed were Proline, Proline+Glucose, Glucose and PSG. The combination of Proline+Glucose was the most efficient preservative, however, its high cost in relation to the benefit verified, does not encourage its use. The addition of oxytocin solution to samples of T. vivax-contaminated blood in 1:1 and 1:200 ratios exerted a negative effect on the viability of the parasite. However, it allowed survival for up to 30 minutes (1:1) therefore, a vehicle capable of transmitting the parasite. The action of sodium hypochlorite (0.5%), alcohol (54°GL) and alkyl dimethyl benzyl ammonium chloride (0.15%) was evaluated in the disinfection of contaminated needles and syringes, through two processes: aspirating/despising the disinfectant or just immersing the syringe/needle in the disinfectant solution for 30 minutes. By the first process all the disinfectants evaluated were efficient in the elimination of T. vivax. Through the immersion process, however, none of the disinfectants was able to completely eliminate the parasite, even though they reduced its viability. In the validation process, the IFAT technique was optimized, to define the most adequate protocol. Its repeatability and reproducibility were evaluated and considered high; the analytical sensitivity was low in relation to the ELISA, however the analytical specificity was total, and there were no cross reactions with other hematozoan evaluated. Regarding the diagnostic characteristics, the technique obtained 82.9% sensitivity and 100% specificity; being adequate for the accomplishment of epidemiological studies of T. vivax infection.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de Minas Gerais CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Os animais silvestres vêm sendo reconhecidos como potenciais reservatórios de patógenos transmitidos por vetores. A proximidade desses animais com a área urbana aumenta a necessidade de conhecer quais são esses patógenos e se estes podem acometer os animais domésticos e o ser humano. No Parque Municipal das Mangabeiras, Belo Horizonte, Minas Gerais, há quatis da espécie Nasua nasua que apresentam uma grande proximidade com a área urbana, principalmente com moradores e animais domésticos da comunidade Vila Marçola, adjacente ao parque. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi detectar, através de métodos diretos e moleculares, a presença de ecto e hemoparasitos que possam estar acometendo os quatis do Parque das Mangabeiras. Foram encontrados espécimes de carrapatos (Amblyomma sp., A. ovale, A. sculptum e Rhipicephalus microplus), piolhos (Neotrichodectes pallidus) e pulgas (Rhopallopsyllus lutzi lutzi e Ctenocephalides felis felis) e foram detectadas infecções por Hepatozoon sp., Babesia sp., Sarcocystis neurona, Trypanosoma evansi e microfilárias. As amostras foram negativas para os primers utilizados para detecção de T. cruzi, E. canis/A. platys e Ehrlichia granulocítica, mostrando que alguns agentes zoonóticos não estão acometendo os quatis, contudo outros parasitos ainda devem ser pesquisados. Assim, foi possível mostrar que no parque há uma grande variedade de patógenos acometendo os quatis. São agentes que podem acometer uma grande diversidade de espécie animal, tanto silvestres quanto domésticos, mostrando a necessidade de uma vigilância mais ativa dos animais que vivem no parque e dos animais domésticos que vivem em seu entorno. The wild animals have been recognized as potential reservoirs of vector-borne pathogens. The proximity of these animals with urban areas increases the need to know which pathogens are these and if they can infect domestic animals and human beings. In the park Parque Municipal das Mangabeiras, Belo Horizonte, Minas Gerais, there are coatis of the species Nasua nasua that live very close to the urban areas, which is mainly composed by residents and domestic animals from Vila Marçola, a neighborhood adjacent to the park. Accordingly, the objective of this study was to detect, through molecular and direct methods, the presence of ectoparasites and hemoparasites that might be infecting the coatis from Parque das Mangabeiras. There were found species of ticks (Ambyomma sp., A. ovale, A. sculptum and Rhipicephalus microplus), louses (Neotrichodectes pallidus) and fleas (Rhopallopsyllus lutzi lutzi and Ctenocephalides felis felis) and there were detected infections by Hepatozoon sp., Babesia sp., Sarcocystis neurona, Trypanosoma evansi and microfilariae. The samples were tested negative for the primers used for the detection of T. cruzi, E. canis/A. platys e Ehrlichia granulocitica, showing that some of these zoonotic agents are not infecting the coatis, though other parasites still must be researched. Consequently, it was possible to demonstrate that there is a wide variety of pathogens infecting the coatis in the park. These are parasites that can infect a wide diversity of animals, both wild and domestic, showing the need of active surveillance of the wild animals that live in the park, and of the domestic animals that live in the surrounding areas.

Objetivou-se com o presente estudo avaliar os efeitos pós-vacinais e a proteção conferida pela inoculação de amostras vivas de A. marginale de baixa virulência (UFMG1 e UFMG3) em bovinos desafiados à campo. 68 bezerras da raça holandesa com 17 dias de idade em média foram divididas aleatoriamente em quatro grupos. Os grupos receberam duas aplicações subcutâneas intervaladas de 40 dias, na dosagem de 2x106 eritrócitos infectados dos seguintes protocolos: grupo 1 (UFMG 1 + UFMG 1); grupo 2 (UFMG 3 + UFMG 3); grupo 3 (UFMG 1 + UFMG 3); O grupo 4 (controle experimental). A cada dois dias os animais foram avaliados por termometria retal, hematócrito e esfregaço sanguíneo. Antes das inoculações e do desafio e ao final do monitoramento foram colhidas amostras sanguíneas utilizadas na técnica de nPCR e RIFI. Em média a temperatura retal e o volume globular se mantiveram nos limites de referência, sem alterações consideráveis causadas pelos inóculos. Após 40 dias da segunda inoculação 90%, 84,62% e 90,9% dos animais dos grupos 1, 2 e 3 respectivamente estavam positivos na nPCR. A riquetsemia foi de baixa intensidade nos dias avaliados, mas em todos os grupos alguns animais necessitaram de medicação para controlar os efeitos pós-vacinais. Durante o desafio houve proteção de 86,7% e 73,7% dos animais nos grupos 1 e 2 respectivamente, enquanto que, 58,8% dos animais controle adoeceram. In order to evaluate the post-vaccination effects and the protection afforded by the inoculation of live samples of low virulence A. marginale (UFMG1 and UFMG3) in cattle challenged in the field. 68 calves Holstein with 17 days old on average were randomly divided into four groups. The groups received two subcutaneous applications with intervals of 40 days, having a dose of 2x106 infected erythrocytes of the following protocols: group 1 (UFMG 1 + UFMG 1); group 2 (UFMG 3 + UFMG 3); group 3 (UFMG 1 + UFMG 3); group 4 (experimental control). Every two days, the animals were evaluated by rectal thermometry, hematocrit and blood film. Before inoculations and challenge and at the end of the challenge, blood samples were collected and used to perform IFA technique and nPCR. On average, the rectal temperature and the packed cell volume remained within the limits of reference and without considerable changes. 40 days after the second inoculation 90%, 84.62% and 90.9% of the animals in groups 1, 2 and 3 respectively were positive in nPCR. The rickettsemia was of low intensity but some animals of all groups required medication to control post-vaccination effects. During the challenge 86.7% and 73.7% of the animals was protected in groups 1 and 2 respectively, whereas 58.8% of the control animals became sick.