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Introdução: Apesar da alta taxa de contaminação, o espectro clínico e sintomatológico da COVID-19 varia desde casos assintomáticos a casos de insuficiência respiratória aguda e morte. Nesse sentido, o estudo da patogênese do coronavírus SARS-Cov-2, especialmente as citocinas envolvidas, torna-se essencial para a compreensão da doença. No cenário da COVID-19, estudos clínicos indicaram que certo tempo após a infecção viral desenvolve-se uma grande liberação de citocinas, fatores tumorais (TNFs) e quimiocinas, atraindo uma elevada quantidade de células inflamatórias para o local de infecção A hipercitocinemia apresenta-se como um fator importante para o agravo clínico, já que a liberação excessiva de citocinas pelo paciente gera danos teciduais e a eficácia da resposta imunológica contra o patógeno é prejudicada. Objetivo: A presente revisão possui como objetivo analisar especificamente os níveis séricos das citocinas interferon-gama (IFN-γ), IL-4 e IL-8, levando em conta sua importância no desenvolvimento do quadro viral. Métodos: O presente trabalho trata-se de um estudo bibliográfico do tipo revisão integrativa da literatura de trabalhos publicados base de dados PubMed. Os filtros foram definidos para trabalhos de língua inglesa, com texto completo disponível e publicados a partir do ano de 2019 e até dezembro de 2021. Foram excluídos os artigos que não abordavam as citocinas selecionadas, apresentavam abordagem in vitro, relacionavam COVID-19 com outras patologias, não coletaram amostra do sangue, plasma ou soro, não compararam indivíduos saudáveis-infectados ou relação de severidade, analisavam tratamentos ou testes de reatividade, não apresentavam quantificação das citocinas foco ou eram trabalhos do tipo revisão, série de casos ou carta ao editor. Assim, 27 artigos foram aprovados pelos critérios de inclusão e exclusão supracitados e foram inclusos na presente revisão. Resultados: A análise da concentração sérica do IFN-γ demonstrou, consistentemente, a elevação dessa citocina em pacientes infectados em relação a indivíduos saudáveis, além de alguns trabalhos relacionarem o IFN-γ à severidade da doença e a morte. Já a IL-4 apresentou-se, na maioria dos casos, não relacionada a progressão da doença, entretanto, trabalhos encontraram níveis elevados de IL-4 na fase tardia da patologia do COVID-19, corroborando com o conhecimento da atuação dessa citocina na regeneração de danos e controle dos níveis de citocinas pró-inflamatórias. A análise dos níveis séricos da IL-8 demonstrou que esta citocina se apresentou consistentemente elevada em todos os pacientes com COVID-19, exibindo boa capacidade de predição da gravidade e da mortalidade em pacientes infectados pelo vírus. Conclusão: Conclui-se que o IFN-γ, a IL-4 e, em especial, a IL-8 influenciam na progressão da patologia da COVID-19, seja no desenvolvimento exacerbado da resposta inflamatória (IFN-γ e IL-8), seja nos processos de regeneração e modulação imunológica que ocorrem na fase tardia da doença (IL-4).

Background: Elevated levels of interferon-gamma (IFNγ) have been found in COVID-19 infection, however its role in this setting remains poorly understood. Cases of non-tuberculous mycobacterium (NTM) infections due to anti-IFNγ autoantibodies (Ab) were first reported in 2004. NTM and COVID-19 co-infection in a patient with acquired IFNγ deficiency has not previously been described. The impact of anti-IFNγ Ab on the severity of COVID-19 has not been previously explored. Objective: We report a case of COVID-19 infection in a patient hospitalised with NTM infection due to acquired IFNγ deficiency caused by anti-IFNγ Ab. We also explore effects of IFNγ Ab on the severity of COVID-19 infection. Methods: Detailed immunological investigations were performed. Bio-rad, Bio-Plex methodology was used to detect anti-IFNγ Ab, titration, IFNγ recovery assay and SARS-CoV-2 serology. Anti-IFNγ Ab were tested in patients with severe (COV-Pat) and health care workers with mild/asymptomatic COVID-19 infection (COV-Asx). Results: Mycobacterium avium intracellulare was diagnosed following bone marrow examination and culture. High titre anti-IFNγ Ab were detected in patient’s serum. The autoantibodies neutralized both endogenously produced and exogenously administered IFNγ. SARS-COV-2 infection was identified during routine inpatient testing. Despite prolonged SARS-COV-2 infection the patient showed only minimal additional symptoms, never developed any significant inflammatory complications and eventually mounted an adequate IgG antibody response to the SARS-COV-2 trimeric S-protein. Elevated titres of anti-IFNγ Ab were detected in COV-Pat and COV-Asx, compared to non-infected healthy controls. The titres were broadly similar between COV-Pat and COV-Asx groups, but much lower compared to patients with acquired IFNγ Ab deficiency. Conclusion: IFN-γ is known to play a central role in hyperinflammatory disease states such as macrophage activation syndrome This study illustrates the potential value of inhibiting IFNγ to prevent pathological inflammatory response to COVID-19.

Cilj istraživanja: Infekcija MCMV-om kod novookoćenih miševa inducira snažan upalni odgovor u mozgu koji dovodi do aktivacije mikroglije i infiltacije urođenih imunosnih stanica. Imunosne stanice luče proupalne citokine, poput TNFα, koji uzrokuje promjene u razvoju malog mozga. Tretman inficiranih miševa glukokortikoidima ili neutralizacija TNFα smanjuje upalu i korigira parametre postnatalnog razvoja malog mozga, što ukazuje da je upalni odgovori domaćina na infekciju MCMV-om, a ne citopatski učinak virusa odgovoran za opažene promjene u razvoju malog mozga. Naši preliminarni rezultati ukazuju na ulogu stanica NK u neuroinflamaciji nakon prirođene infekcije MCMV-om. Stoga je cilj ovog istraživanja odrediti ulogu stanica NK u aktivaciji mikroglije i promjenama u razvoju malog mozga. Materijali i metode: Kako bismo odredili utjecaj infekcije MCMV-om na mikrogliju, proveli smo RNA-seq analizu te analizu fenotipa navedenih stanica protočnom citometrijom. Dodatno, proveli smo imunohistokemijsku analizu kako bismo utvrdili može li MCMV inficirati mikrogliju. Kako bismo odredili ulogu stanica NK u neuroinflamaciji, prvo smo odredili kinetiku infiltracije stanica NK u mozak i izvršili analizu fenotipa navedenih stanica protočnom citometrijom te odredili njihovu tkivnu lokalizaciju imunohistokemijom. Također, utvrdili smo čimbenike odgovorne za privlačenje stanica NK u mozak. Kako bismo odredili ulogu stanica NK i IFN-γ u promijenjenom razvoju malog mozga, uklonili smo stanice NK ili smo neutralizirali IFN-γ in vivo ili koristili miševe kojima nedostaje receptor za IFN-γ na rezidentnim stanicama mozga i mjerili debljinu EGL-a te izražaj gena u signalnom putu SHH. Dodatno, koristili smo test virusnih čistina kako bismo utvrdili ulogu stanica NK i IFN-γ u kontroli infekcije MCMV-om u mozgu. Rezultati: Pokazali smo da aktivirane stanice NK/ILC1 ne sudjeluju u kontroli virusne replikacije u mozgu, već posreduju imunopatologiju. Imunopatologiji prethodi aktivacija mikroglije i proizvodnja CXCL9 i CXCL10, kemokina koji privlače stanice NK/ILC1 u mozak miševa na način ovisan o CXCR3. IFN-γ kojeg izlučuju aktivirane stanice NK/ILC1 glavni je čimbenik koji doprinosi promijenjenom razvoju malog mozga. Zaključak: Ovo istraživanje pokazalo je da nezrele stanice NK/ILC1 posreduju imunopatologiju u mozgu nakon prirođene infekcije MCMV-om. Stoga ovo istraživanje daje važan doprinos razumijevanju patogeneze prirođene infekcije HCMV-om, te se može iskoristiti za dizajniranje novih terapijskih ciljeva., Objectives: MCMV infection in newborn mice induces a strong inflammatory response which leads to the activation of microglia and infiltation of innate immune cells. These immune cells can further produce proinflammatory cytokines, such as TNFα which can then exacerbate cerebellar developmental problems. This is underscored by the finding that the treatment of infected animals with glucocorticoids or blocking of TNFα attenuates neuroinflammation and limits deficits in cerebellar development indicating that host inflammatory responses to MCMV infection, rather than the cytopathic effect of virus on infected cells, are important drivers of deficits in cerebellar development. The exact mechanisms and critical components involved are, however, largely unknown. Our preliminary results indicate the role of NK cells in neuroinflammation following congenital MCMV infection. Therefore, the aim of this study is to determine the role of NK cells in activation of microglia and altered cerebellar development. Material and methods: To gain more insight into the impact of MCMV infection on the microglia we performed RNA-seq and phenotype analysis of these cells by flow cytometry. In addition, we performed immunohistochemical analysis to determine whether microglia can be infected with MCMV. To determine the role of NK cells in neuroinflammation we first determined the kinetics of NK cell infiltration in the brain and performed phenotype analysis of these cells by flow cytometry and their tissue localization by immunohistochemistry. We also determined factors responsible for recruitment of NK cells to the brain. To determine the role of NK cells and IFN-γ in altered cerebellar development we depleted NK cells or neutralize IFN-γ in vivo or use mice that lack IFN-γ receptor on brain resident cells and measure EGL thickness and expression of genes in SHH pathway. In addition, we used the plaque assay to determine the role of NK cells and IFN-γ on the control of MCMV infection in the brain. Results: Here, we show that activated newborn NK and ILC1 cells mediate immunopathology instead of controlling the infection and limiting tissue damage. Immunopathology is preceded by activation of microglia and production of CXCL9 and CXCL10, chemokines that recruit NK/ILC1 cells to the brain of MCMV-infected newborns in a CXCR3-dependent manner. IFNγ released by highly activated, brain infiltrating NK/ILC1 cells is a major contributing factor to the altered cerebellar development. Conclusions: This study is the first to demonstrate the immune-pathogenic action of immature newborn NK/ILC1 cells in the brain following congnital MCMV infection. Thus, this study provides an important contribution to understanding the pathogenesis of cHCMV infection, which can be harnessed to design novel therapeutic targets.

Orientador: Antonio Condino Neto Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O sistema NADPH oxidase fagocítico humano possui um papel importante na defesa contra microorganismos intracelulares, incluindo micobactérias. Mutações nas subunidades deste sistema resultam na Doença Granulomatosa Crônica (DGC). O gene CYBB, localizado no cromossomo X, codifica a subunidade gp91phox, e mutações neste gene são responsáveis por cerca de 60% dos casos de DGC. Cerca de 40 anos depois da identificação de DGC, foi identificado o primeiro dos 13 defeitos genéticos associados à Susceptibilidade Mendeliana à Micobacteriose, participantes do eixo IL12/23-IFN-?. Baseado no fato de que ambas as doenças predispõem a infecções por micobactérias e que o IFN-? is é um importante ativador do gene CYBB os autores se propuseram a estudar as características clinicas de pacientes latino-americanos com DGC e o sistema NADPH oxidase e expressão do gene CYBB em pacientes com defeitos no eixo IL-12/23-IFN-?. Em relação às características clínicas: história familiar de infecções graves e/ou de repetição, bem como reação adversa à vacina BCG, linfadenopatia, abscessos de pele e profundos estavam associados à DGC, em comparação com não-DGC avaliados pelo laboratório. Defeitos nos receptores IFNGR1 e IFNGR2 e cadeia B1 do receptor de IL-12 podem apresentar expressão do gene CYBB e atividade do sistema NADPH oxidas e diminuída ou abolida, chegando a níveis comparáveis a um paciente com DGC. O IFN- ? e seus receptores são essenciais para o desenvolvimento e ativação do sistema NADPH oxidase, e pacientes com comprometimento da função deste sistema devem também ser avaliados para defeitos do eixo IL12/23-IFN-? afetando secundariamente o sistema NADPH oxidase. Abstract: The NADPH phagocytic oxidase system plays a crucial role in host defense against intracellular microorganisms, including mycobacteria. Mutations affecting subunits of this system result in Chronic Granulomatous Disease (CGD). The CYEE gene, located in the X chromosome, encodes gp91 phox, and mutations on this gene account for more than 60% of CGD cases. Almost 40 years after, the first of 13 different genetic disorders associated with Mendelian Susceptibility to Mycobacterial Diseases (MSMD), was identified. The genes responsible for MSMD are part of the IL12/23-IFN-? axis. Based on the fact that both the diseases predispose to mycobacterial infections and that IFN-? is an important activator of CYBB gene, the authors aimed to describe clinical aspects of Latin American CGD patients and investigate ifthe NADPH oxidase system function and gp91phox expression would be affected in patients with defects in the IL-12/23-IFN-? axis. Regarding clinical features familial history of recurrent and sever infections, as well as adverse reactions to BCG vaccine, lymphadenopathy, skin and profound abscess were associated to DGC when compared to clinical features of non-CGD evaluated in the laboratory. Defects of IFNGR1 and IFNGR2 and IL12RB1 may present diminish.ed or abolished gene expression of CYBB and activity of NADPH oxidase system ate levels of a CGD patient. Based on that, we can conclude that IFN- ? and its receptor are essential for development and activation 9f NADPH oxidase system. In addition, patients who present an impaired superoxide release and/or failure on expressing gp91phox should also be evaluated for IL12/23-IFN-? axis affecting secondarily the NADPH oxidase system. Doutorado Doutor em Farmacologia

Orientador: Ricardo Della Coletta Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: Miofibroblastos são células especializadas que exercem funções importantes em processos fibróticos através da síntese elevada de macromoléculas da matriz extracelular, proteases e citocinas. O exato mecanismo do surgimento (transdiferenciação) dos miofibroblastos permanece desconhecido, porém inúmeros estudos sugerem que o fator de crescimento transformante-'beta'1 (TGF-'beta'1) exerça um papel importante neste processo via ativação do fator de crescimento de tecido conjuntivo (CTGF). Em oposição aos efeitos de TGF-'beta'1, algumas citocinas inflamatórias, incluindo interferon 'gama' (IFN'gama'), parecem inibir a transdiferenciação dos miofibroblastos. O uso da droga imunossupressora ciclosporina A (CsA) é freqüentemente associada a inúmeros efeitos colaterais, sendo o aumento gengival fibrótico o de maior interesse para a área odontológica. Linhagens celulares de fibroblastos de gengiva normal tratadas com CsA expressam níveis elevados de TGF-'gama'1 e colágeno, que são intrínsecos do fenótipo miofibroblástico. Os objetivos deste estudo foram compreender a participação de TGF-'beta'1 e IFN'gama' na transdiferenciação dos fibroblastos gengivais em miofibroblastos e entender os mecanismos de ação destes fatores neste processo. Adicionalmente, nós verificamos a presença de miofibroblastos em aumentos gengivais induzidos por CsA. Nossos resultados demonstraram, através de 4 diferentes ensaios: transcriptase reversa-reação em cadeia da polimerase (RTPCR), western blot, imunofluorescência e citometria de fluxo, que TGF-'beta'1 induz e FNg bloqueia a transdiferenciação dos fibroblastos gengivais em miofibroblastos metabolicamente ativos em uma maneira dependente da dose e tempo. Nas células onde a expressão de CTGF foi significantemente reduzida por seqüências específicas de RNA de interferência, TGF-'beta'1 não foi capaz de promover a transdiferenciação dos miofibroblastos, revelando que TGF-'beta'1 é dependente da ativação de CTGF para induzir a transdiferenciação dos fibroblastos gengivais em miofibroblastos. IFN'gama' bloqueou a transdiferenciação dos miofibroblastos por estimular a expressão de Smad 7, uma proteína que regula negativamente a atividade de TGF-'beta'1. Interessantemente, miofibroblastos não foram associados aos aumentos gengivais induzidos por CsA, como revelado pelos modelos in vivo de injeções diárias de CsA em ratos Wistar e in vitro de tratamento de fibroblastos gengivais com CsA. Embora CsA tenha induzido a expressão de TGF-'beta'1, não demonstrou nenhum efeito na modulação dos níveis de CTGF. Nossos resultados demonstram que a indução da transdiferenciação dos miofibroblastos por TGF-'beta'1 é dependente da estimulação de CTGF. Adicionalmente, este estudo sugere que IFN'gama' pode ser clinicamente efetivo no tratamento de alterações fibróticas associadas à presença de miofibroblastos, pois atenua a excessiva produção de colágeno tipo I por estas células Abstract: Myofibroblasts are the main cellular type involved in extracellular matrix deposition in fibrotic diseases. Relatively little is known about the underlying mechanisms that regulate myofibroblast emergence (transdifferentiation), however the regulatory cytokine transforming growth factor-beta 1 (TGF-'beta'1) has been traditionally considered an inducer of the myofibroblastic phenotype via activation of connective tissue growth factor (CTGF)-dependent pathway. Some inflammatory cytokines, particularly interferon g (IFN'gama'), show opposite effects to TGF-'beta'1, inhibiting myofibroblast transdifferentiation. Cyclosporin A (CsA) is a widely used immunosuppressant drug that causes significant side effects such as gingival overgrowth. Normal gingival fibroblast cell lines treated with CsA express high levels of TGF-'beta'1 and collagen, which are intrinsic of myofibroblasts. In the present study we examined whether TGF-'beta'1 and IFN'gama' can modulate transdifferentiation of gingival fibroblasts into myofibroblasts, and the biologic mechanisms behind those factors in this process. Additionally, we have analyzed the presence of myofibroblasts in CsA-induced gingival overgrowth. Our results demonstrated throughout a modality of experiments that included reverse trancriptasepolymerase chain reaction (RT-PCR), western blot, immunofluorescence and flow citometry analysis, that TGF-'beta'1 induces and IFN'gama' blocks fibroblast-myofibroblast transdifferentiation in a dose- and time-dependent manner. In fibroblasts with CTGF levels know-down by specific small interference RNA, TGF-'beta'1 effect on transdifferentiation was significantly reduced, revealing that CTGF plays a crucial role in mediating TGF-'beta'1 myofibroblast transdifferentiation. IFN'gama' blocked myofibroblast transdifferentiation by stimulating Smad 7 levels, a protein that negatively regulates TGF-'beta'1 signaling. Interestingly, myofibroblasts were not found in CsA-induced gingival overgrowth, as revealed by the in vivo model of daily injections of CsA in Wistar rats and by the in vitro model of gingival fibroblast cultures treated with CsA. Although CsA treatment stimulated TGF-'beta'1 expression by NG fibroblasts, it lacked to induce CTGF levels. Our results demonstrate that TGF-'beta'1 induction of transdifferentiation of gingival fibroblasts to myofibroblasts occurs via a CTGF dependent pathway. Additionally, this study suggests that IFN'gama' may be clinically effective in the treatment of fibrotic diseases associate with myofibroblast Mestrado Patologia Mestre em Estomatopatologia

Orientador: Carlos Alberto Flores Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: Este trabalho descreve os efeitos do IFN-'gama' sobre a atividade migratória de neutrófilos e monócitos para a cavidade peritoneal de camundongos; descreve também a relação espécie-específica entre os IFNs-'gama' recombinantes humano e murino, in vitro, bem como seu efeito modulador sobre a atividade quimiotática para neutrófilos induzida por LPS, in vivo, e sobre a liberação de fatores quimiotáticos para essas células, por macrófagos peritoneais estimulados, in vitro, pela endotoxina. Tanto o rmulFN-'gama' (150-1350 Ul/animal) quanto o rhulFN-'gama' (150 Ul/animal) nâo foram capazes de induzir migração de neutrófilos ou de monócitos para a cavidade de camundongos, avaliada 12 e 96 horas após a injeção dos estímulos e comparadas ao controle LPS (200 ng/animal) e tioglicolato 3% (1,5 ml/animal), respectivamente. Observou-se também, que em ratos, nenhum dos rlFN-? (humano ou murino) foi capaz de induzir migração de neutrófilos ou monócitos para a cavidade peritoneal desses animais. Os macrófagos peritoneais murinos, in vitro, quando estimulados simultaneamente com rmulFN-'gama' e LPS liberaram em torno de 30 µM de NO2- e esta liberação foi quase totalmente inibida com nitroarginina (NARG, 500 µM). Por outro lado, a estimulação desses macrófagos com rhulFN-'gama' e LPS não causou liberação significativa de NO, mesmo em doses de até 500 ui/ml. A estimulação de células mononucleares humanas com rhulFN-'gama' (20-500 Ul/ml) causou uma liberação dose-dependente de ânions superóxido, entretanto tal efeito não foi observado quando a célula estudada foi o neutrófilo. O rhulFN-'gama' potenciou a liberação desses ânions tanto em células mononucleares como em neutrófilos estimulados por PMA (3 nM), porém, quando o estímulo foi o zimosam, o efeito da potenciação não foi observado. Quando os estudos foram realizados utilizando-se rmulFN-'gama', esta citocina por si só, não causou liberação de ânions superóxido e não foi capaz de potenciar a liberação induzida por PMA ou zimosam, nos dois tipos celulares analisados. Macrófagos em cultura foram capazes de liberar no sobrenadante, após estimulação com LPS (5 µg/ml), um fator que induziu migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal de camundongos. A injeção do sobrenadante de macrófagos estimulados por rmulFN-'gama' e LPS causou uma migração de neutrófilos para a cavidade peritoneal de camundongos cerca de 50% menor do que a induzida pelo sobrenadante obtido de macrófagos apenas estimulados com LPS. A dosagem de TNF-'alfa' no sobrenadante de cultura de macrófagos murinos estimulados com LPS (5 µg/ml) ou rmulFN-'gama' (20 Ul/ml), apresentaram valores semelhantes: 3,67 e 3,61 ng TNF/ml, respectivamente. O nível de TNF-'alfa' presente no sobrenadante de cultura de macrófagos estimulados com LPS e rmulFN-'gama' foi cerca de 3,5 vezes maior (12 ng TNF/ml). A administração simultânea de rmulFN-'gama' (150 Ul/animal) foi capaz de, dependendo da dose de LPS ou TNF-'alfa' utilizada, potenciar (1 ng de LPS ou 0,5 ng de TNF-'alfa'/animal) ou inibir (10,100 ng de LPS ou 100 ng de TNF-a/animal) a migração de neutrófilos induzida por esses estímulos, para a cavidade peritoneal de camundongos. Estes resultados mostram que IFN-'gama' não é quimiotático para neutrófilos ou monócitos e seus efeitos são espécie-específicos. O IFN-'gama' possue uma importante função moduladora sobre as atividades citotóxíca e liberadora de citocinas e/ou fatores quimiotáticos por macrófagos e não deve estar participando das etapas iniciais do processo inflamatório e sim na manutenção do mesmo. Abstract: This thesis describes the effects of IFN-'gama' on the migration of monocytes and neutrophils into the peritoneal cavity of mice and also examines the species specificity of the in vitro actions of human and murine recombinant IFN-'gama' (rhulFN-'gama' and rmulFN-'gama', respectively). In addition, the effects of IFN-'gama' on the chemotactic activity of E. coli lipopolysaccharide (LPS)-induced neutrophils in vivo and on the release of chemotactic factors for these cells by peritoneal macrophages stimulated with LPS in vitro are also examined. Neither rmulFN-'gama' (150-1350 lU/animal) or rhulFN-'gama' (150 lU/animal) were able to induce monocyte or neutrophil migration into the peritoneal cavity of mice when compared with the response caused by LPS (200 ng/animal) and 3% thioglycollate (1,5 ml/animal) 12 and 96 h after injection, respectively. Both recombinant IFN-y were also unable to stimulate cell migration in rats. The simultaneous stimulation of murine peritoneal macrophages in vitro with rmulFN-'gama' and LPS caused the release of NO2" (30 µM) which could be almost totally inhibited by nitroargininr (NARG, 500 µM). When rhulFN-'gama' was replaced with rmulFN-'gama' in the above experiments, no formation of NO2" was detected even at interferon doses of up to 500 lU/ml. The exposure of human monocytes, but not neutrophils, to rhulFN-'gama' (20-500 Ul/ml) resulted in a dose-dependent release of superoxide anions. Furthermore, in both monocytes and neutrophils, the formation of superoxide anions in the presence of phorbol myristic acid (PMA, 3nM), but not zymosan, was potentiated by rhulFN-'gama'. In contrast to these results, rmulFN-'gama' was unable to stimulate superoxide anion formation in these cells and was also unable to potentiate the release in the presence of PMA or zymosam. Upon stimulation with LPS (5 µg/ml), macrophages in culture released a factor which induced the migration of neutrophils when injected into the peritoneal cavity of mice. This migration was inhibited by approximately 50% when the macrophages were co-stimulated with rmulFN and LPS. The levels of TNF-'alfa' in the culture medium of murine macrophages stimulated with either LPS (5 µg/ml) or rmulFN-'gama' (20 lU/ml) were very similar (3,67 vs 3,61 ng TNF/ml, respectively) but were about 3,5 fold lower than the levels observed in macrophages stimulated with LPS and IFN-'gama' (12 ng TNF/ml) of rmulFN-'gama' (150 lU/animal) either potentiated or inhibited the migration of neutrophils into the mouse peritoneal cavity induced by these agents; potentiation occured at LPS and TNF doses of 1 ng and 0,5 ng/animal, respectively, while inhibition was observed at LPS and TNF doses of 10-100 ng and 100 ng/animal, respectively. These results demonstrate that IFN-'gama' is not chemotactic for monocytes and neutrophils and that its effects are species-specific. Furthermore, IFN-'gama' has an important modulatory influence on the cytotoxic and mediator-releasing activities of cytokines and/or of the chemotactic factors liberated by macrophages. IFN-'gama' therefore seems to have a minimal role in the initial stages of the inflammatory reaction but is important in maintaining this process. Mestrado Mestre em Farmacologia

Orientador: Helena Zerlotti Wolf Grotto Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciencias Medicas Resumo: O papel da inflamação na fisiopatologia da anemia falciforme tem sido alvo de recentes investigações. O processo obstrutivo que ocorre na microcirculação, causado pelo acúmulo de células falcizadas, leva à lesão do endotélio, com migração e adesão de leucócitos, liberação de radicais oxigênio, liberação e ativação de citocinas inflamatórias. É reconhecida a participação de diversas citocinas na eritropoiese, estimulando ou inibindo a produção de células eritróides pela medula óssea, em especial na anemia que acompanha as doenças inflamatórias/infecciosas crônicas. É reconhecida a ação inibitória do interferon gama (IFN-?) sobre as células progenitoras da medula óssea, além de sua participação nos distúrbios do metabolismo do ferro (Fe), presentes na anemia de doença crônica. A Neopterina (NP) é um marcador associado à imunidade celular produzido pelos monócitos/macrófagos quando estimulados pelo IFN-?. Os dados sobre a participação do IFN-? no processo inflamatório que acompanha a Doença Falciforme são contraditórios e se restringem à Anemia Falciforme (Hb SS). O objetivo deste trabalho foi estudar a participação da Interleucina-3 (IL-3), do IFN -? e da NP em pacientes com Hb SS e hemoglobinopatia SC (Hb SC) na fase estável da doença, a fim de verificar a possível ação dessas citocinas e da NP sobre o metabolismo do Fe e da hematopoiese. Nossos resultados mostraram que as concentrações de IL-3 foram mais altas nos grupos SS e SC em relação ao controle, enquanto as determinações de IFN-? não mostraram diferenças entre os grupos. Pacientes SS com hemoglobina Fetal (Hb F) > 8,5% mostraram valores de IL-3 significativamente mais elevados do que aqueles com Hb F < 8,5% (p= 0,0338). Não foi observada correlação entre os parâmetros inflamatórios e do metabolismo do Fe. Uma correlação direta foi observada somente nos pacientes SS entre os níveis de IL-3 e hemoglobina (Hb) (r= 0,4633, p= 0,0457), IL-3 e Hb F (r= 0,6011, p= 0,0065). Os níveis de NP foram significativamente mais elevados nos pacientes SS e SC do que nos controles, mas não houve diferença entre os 2 grupos de pacientes. Não houve correlação entre NP e os parâmetros relacionados ao metabolismo de Fe. Esses dados sugerem que a IL-3 tem ação estimulante sobre a produção de Hb F e que pacientes com Hb SS, mesmo na fase estável da doença apresentam um certo grau de ativação do sistema monócito/macrófago, representado pelos altos níveis de NP, o que provavelmente contribui para a condição inflamatória crônica desses pacientes Abstract: Sickle cell disease (SCD) has been recognized as a chronic inflammatory condition. Cytokines are released in response to stress or pathological situations and have influence on hematopoiesis. The aim of this study was to evaluate Interleukin-3 (IL-3), Interferon-? (IFN-?) and neopterin (NP) levels in steady state patients with sickle cell anemia (SS) (n= 38) and SC hemoglobinopathy (n= 17), in order to verify the possible action of those cytokines and NP on iron metabolism and hematopoiesis. Serum IL-3 concentration was higher in SS and SC groups than in controls, whereas IFN-? determinations were not different among groups. SS patients presenting HbF= 8.5% showed IL-3 levels significantly higher than those with HbF< 8.5% (p= 0.0167). No correlation was observed among inflammatory and iron metabolism parameters. It was observed a significant correlation between IL-3 and Hb levels (r= 0.4201, p= 0.0086) and a negative correlation between IL-3 and reticulocyte counting (r= - 0.4019, p= 0.0124) only in SS group. NP levels were significantly higher in SS group than in control (p< 0.0001), but not different between SSxSC and SCxControl. No correlation was observed between NP and iron metabolism parameters. In conclusion, it was confirmed that IL-3 stimulates hematopoiesis and that SS patients, even in steady-state, presenting macrophage/monocyte activation, represented by high levels of NP, that probably contributes to chronic inflammatory condition Mestrado Ciências Biomédicas Mestre em Ciências Médicas

Orientador: Alexandre Leite Rodrigues de Oliveira Tese (doutorado) - Universidade Estadual de Campinas, Instituto de Biologia Resumo: Na medula espinal, o estabelecimento das sinapses é, provavelmente, coordenado pelos próprios neurônios. Contudo, as células da glia circunjacentes e o microambiente formado entre neurônios/glia, desempenham papel importante na modulação da excitabilidade neural, influenciando na transmissão e plasticidade sináptica. Em situações de injúria ou inflamação, há um aumento da reatividade glial e mudança do estado funcional dos neurônios, levando a uma consequente cascata de eventos visando a homeostase do tecido. Neste sentido, o IFN? está envolvido na regulação da expressão do MHC I, o qual tem recentemente mostrado exercer um papel importante nos processos de plasticidade sináptica após axotomia. Além disso, existem evidências de que o IFN? pode interferir na diferenciação e sobrevivência das células neurais. No entanto, pouco se sabe sobre os efeitos da ausência do IFN? nos neurônios espinais após lesão. Portanto, o objetivo deste trabalho foi investigar os fenômenos de plasticidade sináptica e da reatividade glial em camundongos mutantes para IFN?, a fim de analisar a dinâmica das sinapses na medula após a lesão do nervo isquiático em animais incapazes de regular a expressão de MHC I pela produção de IFN?. Para isso, camundongos mutantes para IFN? e do tipo selvagem C57BL/6J foram submetidos à transecção ou esmagamento unilateral do nervo isquiático (5animais/grupo/experimento) e o material foi processado para imunohistoquímica, Western blotting, microscopia de luz e de transmissão (MET). Além disso, a avaliação motora dos animais também foi investigada por meio do índice funcional do nervo isquiático. Secções da medula espinal de camundongos sem lesão foram também utilizados para análise de sobrevivência neuronal e presença de apoptose por TUNEL e imunomarcação para caspase 3. Camundongos neonatos foram utilizados para os experimentos com cultura primária de astrócitos. A ausência do IFN? nos animais mutantes levou à redução da expressão de MHC I após uma semana de lesão. Os motoneurônios encontrados no corno ventral destes animais exibiram menor tamanho do soma e maior número de células degeneradas comparado aos animais selvagens. A perda neuronal não foi agravada pela axotomia do nervo isquiático nos animais mutantes. A morte por apoptose foi sugerida baseado nos resultados positivos para TUNEL e caspase 3. A análise ultraestrutural mostrou menor retração de terminais sinápticos nos animais mutantes uma semana após lesão periférica. Além disso, a ausência do IFN? não prejudicou a recuperação motora dos animais mutantes. Em cultura, os astrócitos dos animais mutantes mostraram um atraso na taxa de proliferação provavelmente em razão da ausência do IFN?. Com base nestes resultados, sugerimos que o IFN? pode exercer um papel neuroprotetor e que sua ausência resulta na morte neuronal, a qual não é agravada pela lesão periférica. Abstract: In the spinal cord, the establishment of synapses is probably coordinated by the neurons. However, the glial cells and surrounding microenvironment formed between neurons/glia play an important role in modulating neural excitability, influencing the transmission and synaptic plasticity. In situations of injury or inflammation, there is an increase in glial reactivity and changes in functional status of neurons, with a consequent cascade of events aimed at restoration of homeostasis. In this regard, IFN? is involved in regulating the expression of MHC I, which has recently been shown to play an important role in the synaptic plasticity processes following axotomy. Also, there is evidence that IFN? absence on spinal cord neurons after injury. The aim of this study was to investigate the phenomena of synaptic plasticity and glial reactivity in mice mutant for IFN? in order to analyze the dynamics of spinal synapses after injury of the sciatic nerve in animals unable to regulate the expression of MHC I due the absence of IFN?. In this sense, mutant mice for IFN? and wild type C57BL/6J were subjected to unilateral transection or crushing of the sciatic nerve (5animals/group/experiment), and the specimens were processed for immunohistochemistry, Western blotting, light and transmission electron microscopy (TEM). In addition, the motor evaluation of the mice was investigated by the sciatic functional index. Spinal cord sections from non-lesioned animals were also used to investigate neuronal survival and the presence of apoptosis with TUNEL and caspase 3 immunostaining. Astrocytes from mutant and wild type newborn mice were also investigated in primary cell culture. The absence of IFN? in the mutant animals produced reduced expression of MHC I after one week from injury. Motoneurons in the lower lumbar ventral horn exhibited a smaller soma size and increased number of degenerated cells?when compared to wild type mice. Sciatic nerve axotomy did not further aggravate the neuronal loss in the mutant mice. Apoptotic death is suggested on TUNEL and caspase 3 positive immunostaining. The electron microscopy showed a smaller retraction of pre-synaptic terminals apposing to motoneurons in mutant mice one week after lesion. The absence of IFN? did not impair motor recovery of the mutant animals. In culture, astrocytes from mutant animals showed a delay in the rate of proliferation probably due to the absence of IFN?. Altogether, these results suggest that IFN? may be neuroprotective and its absence results in neuronal death, which is not further increased by peripheral axotomy. Doutorado Biologia Celular Doutor em Biologia Celular e Estrutural

Orientador: Mary Luci de Souza Queiroz Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: O modelo experimental de infecção por Listeria monocytogenes tem provado ser útil na investigação dos efeitos de novos compostos na resposta imunológica primária contra bactérias intracelulares. Em particular, o número de células hematopoéticas na medula óssea e baço é de fundamental importância na resistência a esta infecção. No presente estudo, investigamos o efeito da solução hidro alcoólica de própolis (SHAP), sobre o crescimento e diferenciação de precursores hematopoéticos para granulócitos e macrófagos (CFU-GM) da medula óssea e do baço de animais infectados com Listeria monocytogenes. Além disso, quantificamos os níveis de fatores estimuladores de colônias (CSFs). A eficácia da SHAP frente a uma dose letal da bactéria também foi avaliada. Demonstramos que a SHAP protegeu os animais contra uma dose letal de L. monocytogenes, quando administrada profilaticamente na dose de 4 mg/kg durante 10 dias, com aumento de 20% na sobrevida. Este tratamento também preveniu a mielossupressão e hematopoese extramedular causadas por uma dose subletal de L. monocytogenes, devido a um aumento no número de CFU-GM na medula óssea. Além disso, observamos que os animais somente tratados (não infectados) não apresentaram diferenças significativas em relação ao grupo controle. Adicionalmente, a investigação da produção de fatores estimuladores de colônias no soro dos animais revelou um aumento de CSA nos grupos infectados após 48 e 72h pré-tratados com SHAP, sugerindo que a estimulação da mielopoese pelo produto seja mediada pela produção de fatores de crescimento. Além disso, observamos o aumento da citocinas interferon- gamma IFN-g no grupo infectado/tratado com o produto nas 48 e 72h. Abstract: Infection with Listeria monocytogenes has proven to be a useful model to investigate early effects of new compounds on the immune response to intracellular bacteria. In particular, the number of hematopoietic cells in the bone marrow and spleen is critically important to resistance to this infection. In this study, we demonstrated the protective effects of hydro alcoholic solution of propolis in mice infected with a lethal dose of Listeria monocytogenes, when administered prophylactically at 4mg/kg for 10 days, with survival rates up to 20%. This dose also prevented the myelosuppression and the splenomegaly caused by a sublethal infection with Listeria monocytogenes, due to the maintenance of granulocytemacrophage progenitors (CFU-GM) numbers in the bone marrow. Non-infected mice treated with hydro alcoholic solution of propolis presented similar numbers of CFU-GM in the bone marrow when compared to the controls. Furthermore, investigation of the production of colony-stimulating factors (CSF) revealed increased colony-stimulating activity (CSA) in the serum of infected mice pre-treated with hydro alcoholic solution of propolis 48 and 72 hours after the infection, suggesting that its effects on the production of growth factors mediate stimulation of myelopoiesis by hydro alcoholic solution of propolis. Moreover, we observed increased level of IFN-g in infected/treated mice. These results sustain our proposal of hydro alcoholic solution of propolis use as an adjuvant agent in the prophylaxis of opportunistic infections and reduction of side effects caused by immunosuppressive therapies. Mestrado Farmacologia Mestre em Farmacologia

Biallelic mutations in SLC29A3 cause histiocytosis-lymphadenopathy plus syndrome, also known as H syndrome (HS). HS is a complex disorder, with ~ 25% of patients developing autoinflammatory complications consisting of unexplained fevers, persistently elevated inflammatory markers, and unusual lymphadenopathies, with infiltrating CD68+, S100+, and CD1a− histiocytes, resembling the immunophenotype found in Rosai-Dorfman disease (RDD). We investigated the transcriptomic profiles of monocytes, non-activated (M0), classically activated (M1), and alternatively activated macrophages (M2) in two patients with HS, one without autoinflammatory (HS1) and one with autoinflammatory complications (HS2). RNA sequencing revealed a dysregulated transcriptomic profile in both HS patients compared to healthy controls (HC). HS2, when compared to HS1, had several differentially expressed genes, including genes associated with lymphocytic-histiocytic predominance (e.g. NINL) and chronic immune activation (e.g. B2M). The transcriptomic and cytokine profiles of HS patients were comparable to patients with SAID with high levels of TNF. SERPINA1 gene expression was found to be upregulated in all patients studied. Moreover, higher levels of IFNγ were found in the serum of both HS patients when compared to HC. Gene ontology (GO) enrichment analysis of the DEGs in HS patients revealed the terms “type I IFN,” “IFNγ signaling pathway,” and “immune responses” as the top 3 most significant terms for monocytes. Gene expression analysis of lymph node biopsies from sporadic and H syndrome-associated RDD suggests common underlying pathological process. In conclusion, monocytes and macrophages from both HS patients showed transcriptomic profiles similar to SAIDs and also uniquely upregulated IFNγ signature. These findings may help find better therapeutic options for this rare disorder.

This work was supported by the Brazilian National Council for Sci-entific and Technological Development (CNPQ Nos. 480128/2013-8, 301869/2017-0 and 312979/2018-5) and by the Federal University of Par ?a (PROPESP/PAPQ/2020) Federal University of Par?. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Virology. Bel?m, PA, Brasil / Minist?rio da Sa?de. Secretaria de Vigil?ncia em Sa?de. Instituto Evandro Chagas. Ananindeua, PA, Brasil. Federal University of Par?. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Virology. Bel?m, Par?, Brazil. Federal University of Par?. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Virology. Bel?m, Par?, Brazil. Federal University of Par?. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Virology. Bel?m, Par?, Brazil. Federal University of Par?. Jo?o de Barros Barreto Hospital. Bel?m, Par?, Brazil / Federal University of Par?. Institute of Health Sciences. School of Medicine. Bel?m, Par?, Brazil. Federal University of Par?. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Human Genetics. Bel?m, Par?, Brazil. Federal University of Par?. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Virology. Bel?m, Par?, Brazil. Federal University of Par?. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Virology. Bel?m, Par?, Brazil. Federal University of Par?. Institute of Biological Sciences. Laboratory of Virology. Bel?m, Par?, Brazil. The IFN-? and TGF-?1 cytokines perform antagonistic activities in the immune response, and polymorphisms in these genes may induce changes in their plasma levels and influence the course of chronic Hepacivirus C (HCV) infection. The present study evaluated the IFNG +874A/T and TGFB1 -509 C/T polymorphisms in 99 samples from patients with chronic hepatitis C and in 300 samples from healthy donors, and the present study also investigated the association of cytokine plasma level with disease stage. Polymorphisms were identified by real-time PCR, and cytokine levels were measured by enzyme-linked immunosorbent assay. The frequency of the IFNG +874A/T polymorphic allele was not associated with susceptibility to HCV infection, but it was associated with lower inflammatory activity (p = 0.0432). The frequency of the TGFB1 -509C/T polymorphic (TT) genotype was associated with HCV infection (p = 0.0062) and a higher risk of infection (OR = 2.0465; p = 0.0091). Plasma levels of IFN-? were higher in TT genotype carriers among the control (p = 0.0012) and HCV groups (p = 0.0064) as well as in patients with fibrosis (p = 0.0346) and patients with a high degree of inflammatory activity (p = 0.0381). The highest TGF-?1 levels were found in HCV-infected (p = 0.0329) individuals and in TT genotype carriers. Patients with cirrhosis had higher TGF-?1 (p = 0.0400). IFN-? and TGF-?1 levels showed a negative correlation (p = 0.0001). In conclusion, the TGFB1 -509C > T polymorphism is associated with a risk of developing chronic hepatitis C, leading to increased TGF-?1, which inhibits IFN-? production, contributing to the progression to cirrhosis

A bronquiolite aguda causada pelo v?rus sincicial respirat?rio desencadeia uma resposta inflamat?ria com a produ??o e libera??o de v?rias citocinas pr?inflamat?rias, entre elas o Fator de Necrose Tumoral Alfa (TNF-a) e o Interferon Gama (IFN-g). Evid?ncias sugerem que os n?veis destas est?o associados com a gravidade da infec??o. Esta revis?o sistem?tica e metan?lise tem como objetivo avaliar se os n?veis de TNF-a e IFN-g est?o associados com a gravidade da bronquiolite viral aguda. Foram pesquisados os bancos de dados das bibliotecas MEDLINE (via PUBMED), EMBASE, Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL), Scientific Electronic Library Online (SciELO), Latin American Caribbean Health Sciences Literature (LILACS), Cumulative Index to Nursing and Allied Health Literature (CINAHL), Web of Science, e literatura cinzenta at? abril de 2020. Modelos de efeito rand?mico foram utilizados para an?lise geral e de subgrupos. No total, seis estudos foram inclu?dos com um total de 744 participantes. A m?dia dos n?veis de TNF-a entre o grupo grave n?o se diferenciou do grupo controle 0,14 (IC 95%: -0,53 a 0,82, I2 = 91%, p < 0,01) e a heterogeneidade foi alta. Os resultados permaneceram n?o significativos quando as an?lises foram realizadas incluindo apenas os estudos com alta qualidade 0,25 (IC 95%: -0,46 a 0,96, I2 = 92%, p < 0,01) I2 = 95%, p = 0,815), quando a dosagem do TNF-a foi nasal 0,60 (IC 95%: -0,49 a 1,69), I2 = 94%, p < 0,01) ou s?rico -0,08 (IC 95%: -0,48 a 0,31), I2 = 29%, p = 0,24). Na an?lise dos estudos onde o IFN-g foi medido tamb?m n?o houve signific?ncia -0,67 (IC 95%: -1,56 a 0,22, I2 = 76%, p = 0,04). Concluindo, a presente metan?lise sugere que os pacientes mais graves n?o apresentam valores m?dios de TNF-a e IFN-g diferentes do que os pacientes com doen?a leve, por?m a heterogeneidade dos estudos foi alta. Sendo assim, torna-se necess?ria a realiza??o de mais estudos com metodologias padronizadas para concluirmos o papel do TNF-a e do IFN-g na gravidade da bronquiolite aguda. Acute bronchiolitis caused by the respiratory syncytial virus triggers an inflammatory response with the production and release of several proinflammatory cytokines including the tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and interferon gamma (IFN-g). Evidence suggests that their levels are associated with the severity of the infection. This systematic review and meta-analysis aim to assess whether the levels of TNF-a and IFN-g are associated with the severity of acute viral bronchiolitis. We searched MEDLINE libraries (via PUBMED), EMBASE, Cochrane Central Register of Controlled Trials (CENTRAL), Scientific Electronic Library Online (SciELO), Latin American Caribbean Health Sciences Literature (LILACS), Cumulative Index to Nursing and Allied Health Literature (CINAHL), Web of Science, and the gray literature through April 2020. Random effect models were used for general and subgroup analysis. In total, six studies were included with a total of 744 participants. The mean TNF-a levels between the severe group did not differ from the control group 0.14 (95% CI: -0.53 to 0.82, I2 = 91%, p

A doença de Chagas é uma infecção causada pelo Trypanosoma cruzi, atualmente milhares de pessoas encontram-se em áreas de risco de contaminação. A doença apresenta duas fases clínicas, a fase aguda caracterizada por alta parasitemia, intensa inflamação e ausência de sintomas específicos e a fase crônica que pode apresentar as formas indeterminada, cardíaca, digestiva ou cardiodigestiva, sendo a forma cardíaca a mais frequente entre os pacientes sintomáticos. Acredita-se que a evolução da doença depende do equilíbrio entre o parasita e o hospedeiro, no qual é caracterizado pelo tipo de resposta imune apresentada contra o T. cruzi. A homeostase imunológica é caracterizada pelo equilíbrio da resposta inflamatória com predomínio de citocinas pró-inflamatórias e grânulos citotóxicos, através da participação de citocinas anti-inflamatórias como IL-10 que controla a intensidade da resposta inflamatória. Dessa forma, o objetivo do presente estudo foi avaliar os níveis de IL-10, IFN-γ e Granzima B nos diferentes graus de acometimento cardíaco de pacientes portadores da infecção chagásica. Foram incluídos 43 pacientes no estudo, onde 19 apresentaram a forma indeterminada (IND), 14 a forma cardíaca leve (CARD 1) e 10 a forma cardíaca severa (CARD 2), em seguida foram feitas dosagens nos sobrenadantes de cultura de PBMC com diferentes estímulos através da técnica Cytometric Bead Array (CBA). Nossos resultados apontam que não houve diferença estatística na expressão de IL-10 em nenhum dos grupos, entretanto IFN-γ houve diferença nos grupos IND (p 0,0347 e p 0,0205) e CARD 1 (0,0169 e 0,0092) em relação ao grupo CARD 2 em ausência de estímulo e com presença do antígeno EPI respectivamente, e Granzima B houve diferença nos grupos IND (p 0,0368 e p 0,0193) em relação ao grupo CARD 2 em ausência de estímulo e com presença do antígeno EPI respectivamente, nossos achados apontam que houve uma inversão no perfil de resposta inflamatória dentro dos grupos estudados, em que uma possibilidade possa ser a presença de uma cepa de T. cruzi que não seja característica em nossa região. Chagas disease is an infection caused by Trypanosoma cruzi, currently thousands of people are living in areas at risk of contamination. The disease presents two clinical phases: acute phase characterized by high parasitemia, intense infection and absence of symptoms and chronic phase that may exhibit indeterminate cardiac, digestive or cardiodigestive forms, being a more frequent cardiac form among symptomatic patients. Believe that the evolution of the disease depends on the balance between the parasite and the host, characterized by the type of immune response against T. cruzi. An immunological homeostasis is characterized by the balance of the inflammatory response with predominance of proinflammatory cytokines and cytotoxic granules, through the participation of anti-inflammatory cytokines such as IL-10, which controls the intensity of the inflammatory response. Thus, the aim of the present study was to evaluate the levels of IL-10, IFN-γ and Granzyme B in different degrees of cardiac involvement of patients with chronic infection. Forty-three patients were included in the study, where 19 had indeterminate form (IND), 14 mild cardiac form (CARD 1) and 10 severe cardiac form (CARD 2), then supernatant dosages of PBMC culture with different stimuli were made through the Cytometric Bead Array (CBA) technique. Our results indicate that there was no statistical difference in IL-10 expression in any of the groups, although IFN-γ differed in the IND (SE, p 0.0347 and EPI, p 0.0205) and CARD 1 (SE, p 0.0169 and EPI, p 0.0092) groups in relation to the CARD 2 group in absence of stimulus and presence of EPI antigen and Granzyme B there was a difference in the IND groups (SE, p 0.0368 and EPI, p 0.0193) in relation to the CARD 2 group in absence of stimulus and presence From the former EPI group, our findings indicated that there was an inversion in the inflammatory response profile within the studied groups and that it might be possible to have a T. cruzi strain that is not the characteristic in our region.

Meningiomas are the most common intracranial tumors in adults, accounting for approximately 35% of primary tumors of the central nervous system (CNS). One of the mechanisms used by tumor cells to escape death by immune cells is to interfere with immunological checkpoints, thereby preventing the establishment of adequate immune response. Following this concept, a promising target for an immunomodulatory therapy is programmed cell death block 1 (PD-1) / programmed cell death ligand 1 (PD-L1), which is known to be crucial for immune escape mechanisms. Interferon gamma (IFN-γ) is related to the expression of PD-L1, being produced by active T cells and may promote hyper-regulation of PD-L1 expression in tumor cells. The present work proposes to evaluate the expression of PD-L1 and IFN-γ and its relation with progression-free time and tumor recurrence in meningiomas, and to analyze the correlation between clinical and morphological aspects with the immunoexpression of these markers. The study was a cross-sectional retrospective cohort that analyzed 93 patients diagnosed with meningioma of varying degrees. Paraffin blocks containing samples from all tumors were made using the TMA - tissue micro array technique, and immunohistochemical reactions of PD - L1 and IFN - γ proteins were performed. The study confirmed that several clinical and morphological variables are related to a worse prognosis with higher rates of recurrence and reduction of progression-free time of the disease. This study did not detect PD-L1 immunoexpression in any of the 93 analyzed cases and showed that patients with IFN-γ immunoexpression had lower rates of tumor recurrence and longer disease progression free time, absence of pleomorphism, better differentiation and lower tumor grade. The expression of PDL1 in meningioma cells and their potential role in local immunosuppression is not fully established and their indication of anti-PD-L1 therapy as an alternative treatment for menin-giomas is still controversial. Patients with IFN-γ immunoexpression had lower rates of tumor recurrence, longer disease-free survival time. The IFN-γ immunoexpression was also related to the absence of pleomorphism in the tumor cells and lower tumor degree. Os meningiomas são os tumores intracranianos mais comuns em adultos, repre-sentam, aproximadamente, 35% dos tumores primários do sistema nervoso central (SNC). Um dos mecanismos utilizados por células tumorais para escapar da morte por células imunes é interferir em checkpoints imunológicos, impedindo, assim, o estabelecimento de resposta i-mune adequada. Seguindo este conceito, um alvo promissor para uma terapia imunomodula-dora é o bloqueio do eixo morte celular programada 1 (PD-1) / ligante de morte celular pro-gramada 1 (PD-L1), que é conhecido por ser crucial para mecanismos de escape imune. O interferon gama (IFN-γ) se relaciona com a expressão de PD-L1, sendo produzido por células T ativadas e podendo promover a hiper-regulação da expressão de PD-L1 em células tumorais. Este estudo avaliou a expressão de PD-L1 e IFN-γ e sua relação com o tempo livre de progressão de doença no período do estudo e recidiva tumoral em meningiomas, além de ter analisado a correlação entre aspectos clínicos e morfológicos com a imunoexpressão destes marcadores.O estudo foi um coorte transversal retrospectivo, que estudou93 pacientes diag-nosticados com meningioma de diversos graus. Foram confeccionados blocos de parafina contendo amostras de todos os tumores utilizando a técnica de TMA –tissue micro-array, sendo realizadas reações imuno-histoquímicas das proteínas PD-L1 e do IFN-γ. O estudo con-firmou que diversas variáveis clínicas e morfológicas relacionam-se a um pior prognóstico com maiores taxas de recidiva e redução do tempo livre de progressão da doença. Este estudo não detectou imunoexpressão de PD-L1 em nenhum dos 93 casos analisados, e mostrou que os pacientes com imunoexpressão de IFN-γ tiveram menores taxas de recidiva tumoral e maior tempo livre de progressão de doença, constatando-se ainda relação com ausência de pleo-morfismo, melhor diferenciação e menor grau tumoral. Constatou-se ainda uma diferença da imunoexpressão deste maçador em relação ao sexo do paciente, mulheres apresentaram maior expressão de IFN-γ que homens, e maior expressão em meningiomas localizados em lobos cerebrais. A expressão de PDL1 em células de meningioma e seu papel potencial na imunos-supressão local não estão totalmente estabelecida e sua indicação de terapia anti-PD-L1 como tratamento alternativo para meningiomas ainda é controversa. O IFN-γ parece ser um biomar-cador em meningiomas, tendo em vista diversas publicações, relatórios e ensaios clínicos que propõe a utilização do interferon como alternativa terapêutica.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq Os tratamentos dos carcinomas epidermoides orais tem avançado nos últimos anos e o entendimento dos mecanimos moleculares tem sido fundamentais. O estudo de marcadores como o T-bet, que é um fator de transcrição célula específica do sistema imunológico, e o IFN-γ, que é uma citocina participante da resposta imune inata e da imunidade específica, encontram-se com promissores na literatura para a melhor compreensão do comportamento dos carcinomas. Nesta pesquisa, foram avaliados 57 casos de CEOs, sendo 27 de lábio inferior e 30 de língua oral do Serviço de Patologia Oral da Universidade Federal do Rio Grande do Norte, sendo classificados de acordo com a gradação histológica de malignidade da Organização Mundial de Saúde (OMS) e posteriormente submetidos ao processo de imuno-histoquímica sendo o T-Bet avaliado quantitativamente e o IFN-γ avaliado semi-quantitativamente tanto no parênquima como no estroma dos CEOs. Verificamos que os CELI foram classificados em sua maioria como bem diferenciados, enquanto os CELO moderadamente diferenciados foram os mais evidenciados. A análise imunohistoquímica revelou uma forte marcação citoplasmática e nuclear para T-Bet e IFN-γ tanto no parênquima quanto no estroma dos CEOs. Nesta pesquisa, a expressão imuno-histoquímica para o T-Bet foi maior nos CELO em relação aos CELI apresentando um valor de p = 0.001 quando avaliado o T-bet no parênquima separadamente e no parênquima e no estroma. Já o percentual de imunorreatividade para o IFN-γ foi maior nos CELI em relação aos CELO com valores de p = 0.049 e p = 0.040 quando avaliado no estroma separadamente e no parênquima e no estroma, respecticamente. Os CELI apresentaram uma indução na resposta Th1 mais eficiente em relação aos CELO, corroborando o comportamento distinto dessas lesões, sendo maior agressividade evidente nos CELO. The treatment of oral squamous cell carcinomas (OSCC) has advanced in recent years and the understanding of molecular mechanisms has been fundamental. The study of markers such as T-bet, which is a specific cell transcription factor of the immune system, and IFN-γ, which is a cytokine participating in the innate immune response and specific immunity, are promising in the literature for better understanding of carcinoma behavior. In this research, 57 cases of OSCC were evaluated, 27 of them with lower lip and 30 with oral tongue of the Oral Pathology Service of the Federal University of Rio Grande do Norte, being classified according to the histological grading of malignancy of the World Health Organization (WHO) and subsequently subjected to immunohistochemistry and T-Bet was evaluated quantitatively and IFN-γ evaluated semi-quantitatively in both the parenchyma and stroma of the OSCC. We found that the LLSCC were classified mostly as well differentiated, while the moderately differentiated CEL were the most evidenced. Immunohistochemical analysis revealed strong cytoplasmic and nuclear labeling for T-Bet and IFN-γ in both the parenchyma and stroma of the OSCC. In this research, the immunohistochemical expression for T-Bet was higher in OTSCC compared to LLSCC showing a value of p = 0.001 when evaluating T-bet in the parenchyma separately and in the parenchyma and stroma. Already the percentage of immunoreactivity for IFN-γ was higher in LLSCC in relation to OTSCC with values of p = 0.049 and p = 0.040 when evaluated in stroma separately and parenchyma and stroma, respectively. The LLSCC showed a more efficient induction of Th1 response than the OTSCC, corroborating the distinct behavior of these lesions, with greater aggressiveness evident in the OTSCC.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-05T19:39:33Z No. of bitstreams: 1 Renata Fernandes de Amorim Dissertacao completa.pdf: 1568324 bytes, checksum: 6fcdfb98d7897310032242c3cadcd9c0 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-05T19:39:33Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Renata Fernandes de Amorim Dissertacao completa.pdf: 1568324 bytes, checksum: 6fcdfb98d7897310032242c3cadcd9c0 (MD5) Previous issue date: 2019-07-05 Fundação Carlos Chagas Filho de Amparo a Pesquisa do Estado do Rio de Janeiro Some patients with inflammatory bowel disease (IBD) are treated with anti-TNFɑ for a better control and maintenance of the disease. Anti-TNFɑ therapy increases the risk of reactivation of tuberculosis and therefore all IBD patients require screening for latent tuberculosis (LTBI) before therapy. In Brazil, the screening methods for LTBI are chest X-ray and tuberculin skin test (TST). However, TST could have false negative results, mainly in patients with immunosuppression therapy, who have a high chance of developing tuberculosis. Another available method, interferon gamma release assay (IGRA), measures ex vivo the peripheral blood gamma interferon of patients when they are exposed to tuberculosis mycobacterium-specific antigens. The objective of this study was: (i) to evaluate the agreement between PT and IGRA in the screening of LTBI in naïve patients; (ii) to evaluate the need to repeat screening tests after the beginning of anti-TNF therapy; (iii) to evaluate whether screening tests are influenced by immunosuppression. TST was performed by a certified nurse and IGRA was performed in the pathology sector of the Faculty of Medical Sciences (FMS) of the University of the State of Rio de Janeiro-UERJ. As a result, 89 patients with Crohn's disease (CD), 21 patients with idiopathic ulcerative colitis (UC) and 64 controls participated in the study. The agreement between TST and IGRA was poor regarding diagnosis (kappa: control=0.318; UC=0.202; and CD=-0.093), anti-TNFɑ therapy (kappa: w/o anti-TNFɑ: -0.123; with anti-TNFɑ: 0.150), and the use of immunosuppressant (IS) (kappa: w/o IS: 0.146; with IS: -0.088). Considering IGRA as criterion Standard, TST showed a very low overall sensitivity of 19.05% and a PPV of 21.05%. However, a remarkable relative increase in the detection of LTBI occurred when IGRA was added to TST (sensitivity of 80.95% and a PPV of 53.13%). Although TST does not appear to be significantly affected by the use of immunosuppressant or other clinical variables, patients with CD showed the lowest sensitivity and a PPV of 0.0% and 0.0%. Among these patients, when IGRA was analyzed as an add-on sequential test to TST, results remarkably improved (sensitivity of 66.67% and a PPV of 61.54%). IGRA alone was more effective to detect LTBI than TST alone which had an added value of ~60% as an add-on sequential test, particularly important in CD patients. Although the cost-effectiveness of these strategies remains to be evaluated, IGRA appears to be justified in CD prior to and during anti-TNFɑ therapy, in endemic areas for Mtb where BCG is universally applied to the population. Alguns pacientes portadores de doença inflamatória intestinal (DII) necessitam de tratamento com medicamentos anti-TNFɑ para melhor controle e manutenção da doença. A terapia biológica anti-TNFɑ aumenta o risco de reativação da tuberculose (TB) e por isso todos os pacientes que farão uso desta medicação devem fazer rastreio para tuberculose latente (ILTB). Hoje no Brasil, os métodos aprovados para este fim, são a radiografia de tórax e o derivado proteico purificado (PT), entretanto devido ao uso prévio de medicamentos imunossupressores e à desnutrição, alguns pacientes apresentam resultados falsos negativos com posterior manifestação clínica da TB. Outro método disponível, o ensaio de produção do interferon gamma (IGRA) mede o interferon gama no sangue periférico dos pacientes, ex vivo , quando este é exposto aos antígenos específicos da micobactéria da TB. Os objetivos deste estudo foram: (i) avaliar a concordância entre PT e IGRA no rastreio da ILTB nos pacientes virgens de anti-TNFɑ; (ii) avaliar a necessidade de repetir os testes de rastreio nos pacientes já em uso de anti-TNFɑ; (iii) avaliar se os testes de rastreio sofrem a influência da imunossupressão. O PT foi realizado por uma enfermeira certificada para realização do método e o IGRA foi realizado na disciplina de Patologia da Faculdade de Ciências Médicas (FCM) da Universidade do Estado do Rio de Janeiro-UERJ. Como resultados, 174 pacientes participaram do estudo sendo 89 portadores de doença de Crohn (DC), 21 portadores de retocolite ulcerativa idiopática (RCUi) e 64 controles. A concordância entre o PT e o IGRA foi baixa em relação ao diagnóstico (kappa: controle = 0,318; UC = 0,202; e CD = -0,093), terapia anti-TNFɑ (kappa: sem anti-TNFɑ: -0,1123; com anti-TNFɑ: 0,150) e uso de imunossupressor (IS) (kappa: sem IS: 0,146; com IS: -0,088). Considerando o IGRA como padrão ouro, o PT mostrou uma sensibilidade geral muito baixa de19,05% e VPP de 21,05%. No entanto, um notável aumento na detecção de ILTB ocorreu quando o IGRA foi adicionado ao PT (sensibilidade de 80,95% e VPP de 53,13%). Pacientes com DC apresentaram menor sensibilidade e VPP (0,0% e 0,0%). Entre esses pacientes, quando o IGRA foi analisado como um teste sequencial adicional ao PT, os resultados notavelmente melhoraram (sensibilidade de 66,67% e VPP de 61,54%). Conclui-se que o IGRA foi mais eficaz para detectar ILTB do que o PT e teve um valor agregado de 60% como um teste sequencial adicional, principalmente nos pacientes com DC. Embora o custo-efetividade dessa estratégia ainda deva ser avaliada, o IGRA parece ser justificado na DC antes e durante a terapia anti-TNFɑ, em áreas endêmicas para o Micobacterium tuberculosis (Mtb), onde o BCG é universalmente aplicado à população.

Orientador: Maria Heloisa de Souza Lima Blotta Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Ciências Médicas Resumo: As células T CD8+ são caracterizadas pela sua capacidade citotóxica, mediada pela liberação de grânulos citotóxicos ou por meio da ligação da molécula FasL, que resulta na apoptose da célula alvo. Além da função citotóxica, essas células também secretam citocinas, principalmente IFN-g e TNF-a, que contribuem para a ativação de células efetoras capazes de eliminar patógenos. As células T CD8+ foram recentemente classificadas em subpopulações, de acordo com as citocinas que produzem, a saber IFN-g (Tc1), IL-4 (Tc2), IL-10 (Tc10), IL-17 (Tc17), IL-21 (Tc21) e IL-22 (Tc22). Com o objetivo de avaliar a participação das subpopulações de células T CD8+ na paracoccidioidomicose (PCM) humana determinamos a frequência e o perfil destas células em pacientes com as formas aguda (FA) e crônica (FC) da doença. Além disso, verificamos a capacidade de leveduras de P. brasiliensis em induzir a diferenciação de subpopulações de células T CD8+ in vitro. Foi realizada a coleta do sangue periférico de pacientes com PCM e controles saudáveis, seguida do isolamento das células mononucleares, estimulação in vitro para ativação/expansão dos linfócitos e posterior análise fenotípica em citômetro de fluxo. O plasma dos doadores foi utilizado para dosagem de citocinas pela técnica de ELISA. Para os experimentos in vitro realizamos ensaios de cocultura com células dendríticas obtidas a partir de monócitos do sangue periférico de doadores saudáveis, pulsadas in vitro com leveduras de P. brasiliensis e posteriormente cocultivadas com linfócitos T autólogos. A avaliação da polarização das células T CD8+ foi realizada por citometria de fluxo e as citocinas no sobrenadante foram quantificadas por ELISA. As análises realizadas mostraram uma maior frequência de células Tc1 e Tc10 no sangue periférico de pacientes com a FA da PCM. Por outro lado, em pacientes com a FC encontramos uma maior frequência de células T CD8+IFN-g+ (Tc1) e CD8+IL-21+(Tc21). Não foram observadas diferenças quanto a expressão de grânulos citotóxicos entre pacientes e controles. A quantificação das citocinas no plasma, mostrou maiores concentrações de TNF-a e IL-10 em pacientes com a FA em comparação aos controles e pacientes com a FC. Por outro lado, os pacientes com a FC apresentaram menores níveis de IL-22. Nos experimentos de polarização in vitro verificamos que células dendríticas pulsadas com P. brasiliensis foram capazes de induzir subpopulações de células T CD8+ produtoras de IL-17 e IL-22. Além disso, a análise das citocinas no sobrenadante mostrou um aumento na concentração de IFN-g acompanhada de uma diminuição de IL-4 em resposta a estimulação com o fungo. Em conjunto os resultados obtidos indicam que na paracoccidioidomicose, a maior contribuição das T CD8+ fica no âmbito da produção de citocinas, com um perfil misto Tc1/Tc10 na FA e Tc1/Tc21 na FC. Embora componham uma população minoritária em relação às células T CD4+, as células T CD8+ com fenótipo Tc10 poderiam ter, juntamente com as células Th2, uma participação na inibição da resposta celular observada nos pacientes com a forma aguda da PCM. Por outro lado, o perfil Tc1/Tc21 também está de acordo com o padrão predominante da resposta Th1/Th17 em pacientes com a forma crônica da PCM, que representam mais de 90% dos casos da doença. Na mesma linha, os ensaios in vitro evidenciaram que leveduras de P. brasiliensis são capazes de induzir a polarização de subpopulações Tc17/Tc22. Desta forma, podemos presumir que a disponibilidade de células T CD8+ capazes de responder prontamente a estímulos antigênicos com a produção de citocinas contribui para resposta mediada por células T CD4+, além de conferir ao hospedeiro um sistema de defesa alternativo para situações de depleção ou incapacidade das células T CD4+ como ocorre na AIDS e outros quadros de imunodeficiência Abstract: CD8+ T cells are characterized by their cytotoxic capacity, mediated by the release of cytotoxic granules or by the binding of FasL, which results in target cell apoptosis. In addition to cytotoxic function, these cells also secrete cytokines, mainly IFN?g and TNF-a, which contribute to the activation of effector cells capable of eliminating pathogens. CD8+ T cells have recently been classified into subpopulations, according to the cytokines they produce, as IFN-g (Tc1), IL-4 (Tc2), IL-10 (Tc10), IL-17 (Tc17), IL-21 (Tc21) and IL-22 (Tc22). Our work aimed to determine the frequency and the profile of CD8+ T cells subpopulations in patients with acute form (AF) and chronic form (CF) of paracoccidioidomycosis (PCM), Furthermore, we intended to verify the capacity of P. brasiliensis yeasts cells to induce the polarization of CD8+ T cells subpopulation in vitro. For that, we collected peripheral blood from patients and healthy donors, isolated the mononuclear cells, stimulated them to activate and expand the lymphocytes and subsequently assessed their phenotype by flow cytometry. The plasma from patients and healthy donor¿s was used for cytokine determination by ELISA. For in vitro experiments we performed a coculture assay with monocytes-derived dendritic cells from healthy donors, pulsed in vitro with yeasts of P. brasiliensis and later cocultivated with autologous T lymphocytes. The polarization of the cells stimulated in vitro was analyzed by flow cytometry and the cytokine production in the supernatant was quantified by ELISA. Our data showed a higher frequency of Tc1 and Tc10 cells in the peripheral blood of patients with the AF of PCM. On the other hand, in patients with the CF we found a higher frequency of CD8+ T cells IFN-a+ (Tc1) and CD8+ IL-21+ (Tc21). No differences were found between patients and healthy donors in relation to the expression of cytotoxic granules. The quantification of cytokines in plasma showed an increase of TNF-a and IL-10 in patients with AF and a decrease in the concentration of IL-22 in patients with CF. The in vitro polarization experiments showed that dendritic cells pulsed with P. brasiliensis were able to induce the polarization of the CD8+ T cells producing IL-17 and IL-22. We also detected higher concentrations of IFN-? in addition to lower concentration of IL-4 in the supernatants of the cultures. All together our results showed that in paracoccidioidomycosis the CD8+ T cells have a major contribution in cytokines production, with mixed profile Tc1/Tc10 in AF and Tc1/Tc21 in CF. In despite of being a small population when compared to CD4+ T cells, CD8+ T cells with Tc10 phenotype could, along with Th2 cells, have a role in inhibiting the cellular response observed in patients with the acute form of PCM. Contrarily, the Tc1 / Tc21 profile are in accordance with the predominant pattern Th1/Th17 seen in patients with the chronic form of PCM, which represent more than 90% of the cases of the disease. Similarly, the in vitro assays showed that P. brasiliensis yeasts are able to induce the polarization of Tc17/Tc22 subpopulations. Based on the results we may assume that the availability of CD8+ T cells capable of promptly respond to antigenic stimuli with cytokine production contributes to a CD4+ T cell-mediated response. Moreover these cells may confer to the host an alternative defense system for situations of depletion or incapacity of CD4+ T cells as in AIDS and other immunodeficiency conditions Mestrado Patologia Clínica Mestra em Ciências CNPQ 165822/2017-1

Orientador: Prof.ª Dr.ª Eliane Gasparino Coorientador: Prof.ª Dr.ª Ana Paula Del Vesco Tese (doutorado em Zootecnia) - Universidade Estadual de Maringá, 2019 Resumo: O crescimento do animal é dependente, de diversos fatores, dentre estes, a obtenção adequada de nutrientes pelo intestino, uma vez que, o máximo potencial de crescimento é limitado pela taxa de nutrientes disponíveis no organismo. A coccidiose é uma doença infecciosa comum na avicultura mundial, causada por protozoários do gênero Eimeria, e é caracterizada por causar vários danos no intestino delgado e ceco das aves, com prejuízos sobre os processos de digestão e absorção dos nutrientes, e por afetar o desempenho animal. O fornecimento de rações com nutrientes essenciais como, por exemplo, a metionina, quando suplementada em níveis adequados pode ser útil para aliviar os efeitos negativos produzidos por esses agentes patogênicos. Nesse sentido, este trabalho teve como principal objetivo avaliar os efeitos do desafio por Eimeria spp. e da suplementação de metionina na forma de aminoácido livre (DL-Met) e de dipeptídeo (DL-MMet) sobre o desempenho, peso relativo de órgãos, estado redox, expressão de genes envolvidos com o transporte de aminoácidos e peptídeos, genes envolvidos no sistema defesa antioxidante e imune, genes relacionados com a produção de mucina, apoptose e proliferação celular no jejuno, bem como parâmetros morfométricos do jejuno e parâmetros sanguíneos. Para isto, frangos de corte machos de 10 dias de idade, foram divididos em seis tratamentos referentes ao desafio por Eimeria spp. (aves desafiadas: EC; ou aves não desafiadas: UC) e suplementação de metionina (sem suplementação de metionina: NS, suplementação de metionina na forma de aminoácido livre: DL-Met, e suplementação de metionina na forma de dipeptídeo: DL-MMet). Aos 14 dias de idade, os animais pertencentes ao grupo experimental EC receberam por via oral 1 mL de solução contendo oocistos esporulados de Eimeria spp. (E. acervulina, E. maxima, E. praecox e E. mitis). O restante dos animais (UC) receberam por via oral 1 mL de solução salina. Os animais foram abatidos por deslocamento cervical seis dias depois da inoculação (6 dpi), aos 20 dias de idade. Capítulo IV: Neste experimento, os frangos foram desafiados com quatro espécies de Eimeria (E. acervulina, E. maxima, E. praecox e E. mitis). Seis dias depois da inoculação, os animais foram abatidos e o jejuno foi coletado. Foi avaliado o desempenho dos animais, peso relativo dos órgãos, o estado redox do jejuno e a expressão de genes relacionados ao processo de absorção de aminoácidos e peptídeos, sistema antioxidante e imune no jejuno. Foi observado que os frangos EC apresentaram uma redução de 13% no consumo de ração, (CR), 37% de redução no ganho de peso (GP) e um aumento de 39% na taxa de conversão alimentar (CA). Com relação à suplementação de metionina, os frangos, consumindo a dieta DL-Met, apresentaram maior GP (aproximadamente 12% maior) e melhor CA (aproximadamente 12% menor), do que os frangos alimentados com a dieta NS. Frangos EC também apresentaram menor peso relativo da bursa de Fabricius (51,8%) e maiores pesos relativos do baço e do intestino total (delgado e grosso) (53,6% e 26,3%, respectivamente) do que os frangos UC. O desafio por Eimeria spp. causou um aumento nos níveis de nitrito e substâncias reativas ao ácido tiobarbitúrico (TBARS) no jejuno de frangos 6 dpi. Entre os frangos UC, aqueles, consumindo a dieta DL-Met, apresentaram maior capacidade antioxidante total (TAC) e menor atividade das enzimas antioxidantes catalase (CAT) e superóxido dismutase (SOD). Frangos EC, consumindo a dieta NS, também apresentaram maior teor de proteína carbonilada (CP) no jejuno 6 dpi. Adicionalmente, foi observado que os frangos alimentados com as dietas DL-Met e DL-MMet apresentaram menor teor de nitrito. O desafio por Eimeria spp. suprimiu a expressão dos genes catalase (CAT), superóxido dismutase 1 (SOD1), transportador de aminoácido neutros 1 (B0AT1), transportador de peptídeos 1 (PEPT1), receptor toll like 5 (TLR5), interleucina 2 (IL2), e ocludina (OCLN). O desafio por Eimeria spp. aumentou a expressão dos genes transportador de aminoácidos catiônicos 1 (CAT - 1) e interferon gama (INFG) no jejuno 6 dpi. O maior nível de expressão de PEPT1 foi observado em frangos alimentados com a dieta DL-MMet, e o menor nível de expressão do TLR5 foi observado em frangos consumindo a dieta NS. Capítulo V: Neste experimento, os frangos foram desafiados com Eimeria spp. (E. acervulina, E. maxima, E. praecox e E. mitis), e seis dias depois da inoculação, os animais foram abatidos para a coleta de sangue e do jejuno. Foi avaliado o desempenho dos animais, a morfometria do jejuno, a quantificação de células caliciformes neutras e ácidas, e os linfócitos intraepiteliais (LIEs) no jejuno. Também foi avaliada no jejuno a expressão de genes relacionados à produção de mucina e genes envolvidos nas vias de apoptose e proliferação celular. Adicionalmente, foi avaliada a atividade das enzimas aspartato aminotransferase (AST) e creatina quinase (CK), e o conteúdo de ácido úrico (AU) e creatinina (Cr) no plasma sanguíneo. No soro sanguíneo, foi avaliado o conteúdo de mucoproteínas (MUCO) e proteínas totais (PT). Foi observado que os animais desafiados por Eimeria spp. apresentaram pior desempenho independentemente da dieta consumida. Com relação à suplementação de metionina, os animais, recebendo a dieta DL-Met, apresentaram maior GP e menor CA. Os animais do grupo EC recebendo dieta NS, apresentaram vilosidades mais baixas e mais largas, com maior valor de profundidade de cripta, menor relação vilo:cripta, menor quantidade de células caliciformes neutras e menor expressão do gene mucina 2 (MUC2). Além disso, os animais EC, consumindo a dieta NS, apresentaram também a menor área de superfície de absorção do jejuno. Os animais EC, consumindo a dieta DL-MMet, apresentaram maior altura dos enterócitos, e também observamos que os animais EC apresentaram maior largura da lâmina própria que os animais UC. Houve efeito da dieta sobre a largura da lâmina própria: animais consumindo a dieta DL-MMet apresentaram menor valor de largura da lâmina própria. Animais UC, consumindo a dieta DL-Met, apresentaram maior quantidade de células caliciformes ácidas, e os animais EC, recebendo a dieta DL-MMet, apresentaram a maior quantidade de LIEs. Os animais EC apresentaram menor expressão dos genes caspase 3 (CASP3), linfoma de células B2 (BCL2), alvo mecanicista da rapamicina (MTOR) e proteína ribossomal quinase B1 (RPS6KB1) do que os animais UC. A atividade das enzimas AST e CK também foi influenciada pela presença do patógeno com maiores valores em animais EC e NS. Os animais EC apresentaram menor conteúdo de AU. A produção de MUCO foi maior nas aves EC, e o menor conteúdo de PT foi observado nas aves EC, consumindo a dieta DL-MMet. Em resumo, esses resultados confirmam que o desafio por Eimeria spp. prejudica o desempenho dos animais. Possivelmente, como consequência da indução da resposta imune e do estresse oxidativo, que junto com a progressão da coccidiose, causa a destruição celular do jejuno, afetando negativamente a expressão de importantes genes que codificam proteínas transportadoras de nutrientes. A maior parte dos resultados são inéditos, e mostram que a suplementação com metionina como aminoácido livre ou dipeptídeo ajuda a proteger as células intestinais de frangos de corte sob condição de desafio por Eimeria spp., contra o dano oxidativo principalmente através da sua função antioxidante. Foi possível concluir ainda, que a suplementação de metionina na forma de dipeptídeo nas dietas de frangos, sobretudo em condições de desafios sanitários, poderia funcionar como um importante elemento capaz de manter a morfologia e função das células intestinais Abstract: The growth of the animal is dependent of several factors, among them, the adequate obtaining of nutrients by the intestine, since, the maximum potential of growth is limited by the rate of available nutrients in the organism. Coccidiosis is a common infectious disease in poultry farming worldwide, caused by protozoa of the genus Eimeria, and it is characterized by causing various damages to the small intestine and cecum of birds, impairing the processes of digestion and absorption of nutrients, and by affecting performance animal. The provision of feed with essential nutrients such as methionine when supplemented at appropriate levels may be useful to alleviate the negative effects produced by such pathogens. In this sense, this work had as main objective to evaluate the effects of the challenge by Eimeria spp. and methionine supplementation in the form of free amino acid (DL-Met) and dipeptide (DL-MMet) on performance, relative weight of organs, redox state, expression of genes involved in the transport of amino acids and peptides, genes involved in the antioxidant and immune defense system, genes related to mucin production and cell proliferation in the jejunum, as well as morphometric parameters of the jejunum and blood parameters. For this, male broilers from 10 days of age were divided in six treatments related to the challenge by Eimeria spp. (challenged birds: EC, or unchallenged birds: UC), and methionine supplementation (non-supplemented: NS, methionine supplementation in free amino acid form: DL-Met, and methionine supplementation in the form of dipeptide: DL-MMet). At 14 days of age the animals belonging to the experimental group EC received orally 1 mL of solution containing sporulated oocysts of Eimeria spp. (E. acervulina, E. maximus, E. praecox and E. mitis). The rest of the animals (UC) received orally 1 mL of saline solution. The animals were slaughtered by cervical dislocation six days after inoculation (6 dpi) at 20 days of age. Chapter IV: In this experiment the broilers were challenged with four species of Eimeria (E. acervulina, E. maxima, E. praecox and E. mitis). Six days after inoculation the animals were slaughtered and the jejunum was collected. The performance of the animals, relative weight of organs, the redox state of the jejunum, and the expression of genes related to the process of amino acid and peptides absorption, antioxidant and immune system in the jejunum were evaluated. It was observed that EC chickens presented a 13% reduction in feed intake (FI), 37% reduction in body weight gain (BWG) and a 39% increase in feed conversion rate (FCR). With regard to methionine supplementation, chickens consuming the DL-Met diet presented higher WG (about 12% higher) and better FCR (about 12% lower) than chickens fed the NS diet. EC broilers also had lower relative weight of Fabricius bursa (51.8%), higher relative weights of the spleen and whole intestine (53.6% and 26.3%, respectively) than UC broilers. The challenge for Eimeria spp. caused an increase in the levels of nitrite and thiobarbituric acid reactive substances (TBARS) in the chicken jejunum 6 dpi. Among the UC chickens, those consuming the DL-Met diet presented higher total antioxidant capacity (TAC) and lower activity of antioxidant catalase (CAT) and superoxide dismutase (SOD) enzymes. EC chickens consuming the NS diet, also presented higher carbonylated protein (CP) content in the jejunum 6 dpi. Additionally, it was observed that the broilers fed the DL-Met and DL-MMet diets presented lower levels of nitrite. The challenge for Eimeria spp. suppressed the expression of the catalase (CAT), superoxide dismutase 1 (SOD1), neutral amino acid transporter (B0AT1), peptide transporter 1 (PEPT1), toll like receptor 5 (TLR5), interleukin 2 (IL2), and occludin (OCLN) genes. The challenge for Eimeria spp. increased expression of the cationic amino acid 1 transporter (CAT - 1) and interferon gamma (INFG) genes in the jejunum 6 dpi. The highest level of PEPT1 expression was observed in broilers fed the DL-MMet diet, and the lowest level of TLR5 expression was observed in chickens consuming the NS diet. Chapter V: In this experiment the chickens were challenged with Eimeria spp. (E. acervulina, E. maxima, E. praecox and E. mitis), and six days after inoculation the animals were slaughtered for blood and jejunum collection. The performance of the animals, jejunum morphometry, quantification of neutral and acidic goblet cells, and intraepithelial lymphocytes (LIEs) in the jejunum were evaluated. The expression of genes related to the production of mucin, and genes involved in apoptosis and cell proliferation pathways were also evaluated in the jejunum. Additionally the activity of the enzymes aspartate aminotransferase (AST) and creatine kinase (CK), and the content of uric acid (AU) and creatinine (Cr) in blood plasma were evaluated. In the blood serum the content of mucoproteins (MUCO) and total proteins (PT) were evaluated. It was observed that the animals challenged by Eimeria spp. presented worse performance independently of the diet consumed. With respect to methionine supplementation, animals receiving the DL-Met diet presented higher WG and lower FCR. The animals of the EC group receiving NS diet had lower and wider villi, with a greater value of crypt depth, lower villus:crypt ratio, less amount of neutral goblet cells and lower expression of the mucin gene 2 (MUC2). In addition, EC animals consuming the NS diet also had the smallest surface area of jejunum absorption. The EC animals consuming the DL-MMet diet showed higher height of the enterocytes, and we also observed that the EC animals showed a greater width of the lamina propria than the UC animals. There was diet effect on the width of the lamina propria: animals consuming the diet DL-MMet showed lower width value of the lamina propria. UC animals consuming the DL-Met diet presented higher amount of acidic goblet cells, and the EC animals receiving the DL-MMet diet had the highest number of LIEs. EC animals showed lower expression of caspase 3 (CASP3), B2-cell lymphoma (BCL2), mechanistic rapamycin target (MTOR) and ribosomal protein B1 (RPS6KB1) than UC animals. The activity of AST and CK enzymes was also influenced by the presence of the pathogen; with higher values in EC and NS animals. EC animals presented lower AU content. MUCO production was higher in EC birds, and lower PT content was observed in UC birds consuming the DL-MMet diet. In summary these results confirm that the challenge by Eimeria spp. impairs the performance of the animals. Possibly as a consequence of the induction of immune response and oxidative stress, which together with the progression of coccidiosis cause the cellular destruction of the jejunum, negatively affecting the expression of important genes encoding nutrient transport proteins. Most of the results are unpublished, and show that methionine supplementation as a free or dipeptide amino acid helps to protect intestinal cells from broiler chickens challenged by Eimeria spp. against oxidative damage mainly through its antioxidant function. It was also possible to conclude that methionine supplementation in the dipeptide form in broiler diets, especially under conditions of health challenges, could function as an important element capable of maintaining the morphology and function of intestinal cells

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Os eosinófilos são leucócitos do sistema imune inato, capazes se secretar inúmeras moléculas que são armazenadas pré-formadas dentro de seus grânulos secretores (específicos). Essa secreção pode ocorrer por: (i) desgranulação por piecemeal (PMD), mediada por vesículas, principalmente carreadores de grande porte conhecidos como vesículas sombrero (EoSVs) que brotam dos grânulos e levam os produtos até a superfície celular; (ii) exocitose clássica, caracterizada por fusão de grânulos individuais com a membrana plasmática; (iii) exocitose composta, quando há fusão grânulo-grânulo antes da liberação extracelular e (iv) citólise, deposição de grânulos intactos após a lise celular. Considerando que a atividade funcional dos eosinófilos depende de sua capacidade secretora, o estudo dos mecanismos de secreção, bem como das proteínas envolvidas e de seu tráfego intracelular são importantes para o entendimento das respostas de eosinófilos durante doenças alérgicas e inflamatórias. Uma proteína relacionada com secreção de eosinófilos é o CD63, molécula da família das tetraespaninas, enquanto a sintaxina-17 (STX17) é uma proteína SNARE envolvida na fusão de vesículas durante a secreção constitutiva e potencialmente no transporte de cargas especificas em células especializadas. A molécula de interferon-gama (IFN-γ) é encontrada em grande quantidade em eosinófilos, com papel importante na resposta inflamatória. Entretanto, o tráfego intracelular dessas proteínas e seu envolvimento nos mecanismos de secreção de eosinófilos é desconhecido. Neste trabalho, foram investigados a localização ultraestrutural e o tráfego intracelular das moléculas de CD63, STX17 e IFN-γ em eosinófilos humanos estimulados ou não com os mediadores inflamatórios CC-chemokine ligand 11- CCL11 e fator de necrose tumoral -TNF-α). Em paralelo, foi verificada se eosinófilos humanos secretam vesículas extracelulares (VEs), que podem estar associadas com respostas imunes. Técnicas de microscopia eletrônica (convencional e imunomarcação ultraestrutural/pre-embedding immunonanogold), além de citometria de fluxo e western blotting foram utilizadas para responder essas questões. Primeiramente foi demonstrado que a STX17 se localiza em grânulos e EoSVs em eosinófilos humanos, as quais são estruturas fundamentais na secreção de eosinófilos. Foi evidenciado também que o CD63 está fortemente associado com os processos de secreção de eosinófilos (PMD e exocitose composta) e que as EoSVs atuam translocando o CD63 de/para grânulos secretores. Em outras análises, demonstrouse que o IFN-γ é localizado em grânulos secretores de eosinófilos humanos e pode ser transportado em EoSVs para a periferia celular após a estimulação das células. Interessantemente, verificou-se que eosinófilos humanos produzem microvesículas (VEs produzidas diretamente da membrana plasmática) que essa produção é aumentada quando estas células respondem a estímulos inflamatórios. Em conclusão, nossos resultados levaram a importantes descobertas sobre a atividade secretora de eosinófilos e de moléculas associadas à mesma, contribuindo para o entendimento sobre as reações mediadas por eosinófilos frente a ambientes inflamatórios. Eosinophils are able to release numerous mediators that are pre-synthesized and stored within their cytoplasmic specific (secretory) granules. Secretion can occur by: (i) piecemeal degranulation (PMD), characterized by vesicle-mediated transport of products from granules to cell surface, involving mainly large carriers termed Eosinophil Sombrero Vesicles (EoSVs); (ii) classical exocytosis, characterized by fusion of individual granules with the plasma membrane; (iii) compound exocytosis, characterized by large channels formed by granule–granule fusions before granule content release and (iv) cytolysis, characterized by release of intact granules after cell lysis. Considering that the functional activity of eosinophils is based on their secretory capacity, the study of the molecules involved in eosinophil secretion, as well as their intracellular trafficking is important to understand eosinophil responses during allergic and inflammatory diseases. CD63, a tetraspanin family member, has been associated to eosinophil granules and secretion. Syntaxin 17 (STX17), a SNARE family molecule, is involved with vesicle fusion during constitutive secretion and potentially in cargo transport within specialized cells. High levels of interferongamma (IFN-γ), an important inflammatory cytokine, are constitutively expressed in human eosinophils. However, the intracellular trafficking of these molecules and their association with eosinophil secretory mechanisms remain to be established. In this work, we investigated the ultrastructural localization and the intracellular trafficking of CD63, STX17 and IFN-γ in human eosinophils stimulated or not with inflammatory mediators (CC-chemokine ligand 11- CCL11 - e tumor necrosis fator alpha -TNF-α-). Moreover, we investigated if human eosinophils can secrete extracellular vesicles (EVs), that might be involved in inflammatory responses. Pre-embedding immunonanogold and conventional transmission electron microscopy (TEM), flow cytometer and western blotting techniques were used to investigate these questions. First, our results showed that STX17 is localized on granules and EoSVs, important structures involved in eosinophil secretory mechanisms. The data also demonstrated that CD63 is strongly associated with eosinophil secretory processes (piecemeal degranulation and compound exocytosis) and EoSVs are translocating CD63 to/from granules. Results demonstrated that IFN-γ is localized on secretory granules and can be translocated to cell periphery by EoSVs after eosinophil stimulation. In addition, we demonstrated that human eosinophils can produce microvesicles and the number of these extracellular vesicles increased after stimulation with CCL11 or TNF-a. Altogether, our results shed light to eosinophil secretory mechanisms and their associated molecules, leading to new insights to understand how eosinophil respond to inflammatory conditions through vesicular trafficking of their granule contents secretion.

Submitted by Boris Flegr (boris@uerj.br) on 2021-01-07T15:13:30Z No. of bitstreams: 1 Fabio Christiane de Oliveira Felix Cachem Tese completa.pdf: 2599294 bytes, checksum: cdc214924856bae820d1cd395b8d7711 (MD5) Made available in DSpace on 2021-01-07T15:13:30Z (GMT). No. of bitstreams: 1 Fabio Christiane de Oliveira Felix Cachem Tese completa.pdf: 2599294 bytes, checksum: cdc214924856bae820d1cd395b8d7711 (MD5) Previous issue date: 2018-05-24 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Chronic hepatitis C (CHC) is often associated with liver fibrosis, which can lead to cirrhosis and hepatocellular carcinoma. Many studies have suggested that immunological activity in response to HCV antigens is strongly related to liver fibrosis. The role of different IL-17 secreting CD4+ (Th17) and CD8+ (Tc17) T cells in CHCis not fully understood. In our study, elevated plasma levels of IL-1β, IL-6 and IL-17 were positively correlated with fibrosis and alanine transaminase (ALT) rates in patients with CHC. In addition, these cytokines, secreted by peripheral blood mononuclear cell (PBMC) cultures in response to core antigen from virus, were also correlated to advanced liver injury. While the percentage of IL-17 producing Th17/Tc17 cells in association with IFN-γ or IL-21 was higher in patients with lower liver damage, accumulation of single IL-17-producing T lymphocytes was correlated with liver fibrosis. Interestingly, core protein favored the expansion of Th17/Tc17 cell subtypes related to disease progression, identified by production of IL-17 alone or IL-17 in association with IL-6. Further, although the percentage of Tregs FoxP3+CD25+CD4+) was higher in CHC patients with more advanced disease, the proportions of both TregsCD39+or Treg17 (IL-17+ IL-10 +) subsets were significantly lower in these individuals. Addition of HCV core protein to the PBMC cultures elevated the percentage of CD39-Tregs cells. In addition, the percentage of exhausted (PD-1+ CD28+) and senescent (CD28-CD57+) T cells were not only higher in patients with advanced hepatic fibrosis, but also their proportion were elevated by core antigen. Finally, we believe that the presence of a persistent and pro-fibrotic inflammatory state is facilitated by an elevated bacterial translocation, since, in the present study, plasma levels of sCD14 were not only higher in patients with worse prognosis, but their concentrations were directly correlated with the systemic levels of IL-1β, IL-6 and IL-17, as well as the percentage of Th17 / Tc17 cells negatives for IL-21 and IFN-γ. In summary, although preliminary, our results suggest that the expansion of different Th17 / Tc17 and Tregs cell subsets may influence the evolution of liver disease in patients with CHC, and reveals that the core antigen may exert adverse effects by amplifying the imbalance among these different subtypes of these T cells. In addition, inflammatory events favoring the expansion of different Th17/Tc17 cells implicated in hepatic fibrosis may be favored by greater intestinal microbial translocation. A hepatite C crônica (HCC) é frequentemente associada à fibrose hepática, o que pode levar a cirrose e ao carcinoma hepatocelular. Muitos estudos têm sugerido que a atividade imunológica em resposta aos antígenos do HCV está fortemente relacionada à fibrose hepática. O papel de diferentes células T CD4+ (Th17) e CD8+ (Tc17) secretoras da IL-17 na HCC não está completamente esclarecido. Em nosso estudo, níveis plasmáticos elevados de IL-1β, IL-6 e IL-17 foram positivamente correlacionados com a fibrose e também com as taxas de alanina transaminase (ALT) nos pacientes com HCC. Além disso, essas citocinas, secretadas por culturas de células mononucleares do sangue periférico (PBMC) em resposta ao antígeno core viral, também foram correlacionadas à lesão hepática avançada. Enquanto a percentagem de células Th17/Tc17 produtoras de IL-17 em associação com o IFN-γ ou com IL-21 foi maior nos pacientes com menor dano hepático, acúmulo desses linfócitos capazes de produzir apenas IL-17 foi correlacionada à fibrose do fígado. De forma interessante, a proteína core favoreceu a expansão de subtipos de células Th17/Tc17 relacionadas ao avanço da doença, identificadas pela produção apenas de IL-17 ou IL-17 em associação com IL-6. Ademais, apesar do percentual das células Tregs (CD4+FoxP3+CD25+) ter sido maior nos pacientes HCC mais avançada, as proporções tanto dos subtipos TregsCD39+ou Treg17 (IL-17+IL-10+) foram significativamente inferiores nesses indivíduos. A adição da proteína core do HCV às culturas de PBMC elevou a percentagem das células Tregs CD39-. Ademais, uma maior percentagem de células T exauridas (PD-1+CD28+) e senescentes (CD28- CD57+) não apenas foram maiores nos pacientes com fibrose hepática acentuada, como também a proporção desses linfócitos foram elevados após adição do antígeno core. Finalmente, acreditamos que a presença de um estado inflamatório persistente e pró-fibrótico é facilitado pela maior translocação bacteriana, desde que, nos presentes estudos, os níveis plasmáticos de sCD14 não apenas foram maiores nos pacientes com pior prognóstico, como também suas concentrações foram diretamente correlacionadas aos níveis sistêmicos de IL-1β, IL-6 e IL-17, assim como ao percentual de células Th17/Tc17 negativas para IL-21 e IFN-γ. Em resumo, apesar de preliminares, nossos resultados sugerem que a expansão de diferentes subtipos de células Th17/Tc17 e de Tregs pode influenciar a evolução da doença hepática nos pacientes com HCC, e revela que o antígeno core pode exercer efeitos adversos por amplificar o desequilíbrio entre esses diferentes subtipos de células T. Ademais, eventos inflamatórios que favorecem a expansão de subtipos de células Th17/Tc17 implicados na fibrose hepática podem ser favorecidos pela maior translocação microbiana intestinal.

Introdução: As reações hansênicas caracterizam-se por eventos imunológicos agudos que ocorrem antes, durante ou após a Poliquimioterapia da hanseníase, sendo desencadeadas principalmente pela interação entre os antígenos do Mycobaterium leprae, PGL-1 e LAM, com os componentes da imunidade do hospedeiro, TLR1 e TLR2, que consequentemente induzem outras células a sintetizar citocinas que favorecem o controle ou disseminação bacilar. Objetivos: Estabelecer e quantificar as relações causais entre os antígenos de M. leprae (PGL-1 e LAM) e os receptores TLR1, TLR2 e seus efeitos na expressão de citocinas IFN-γ e IL-10 nas reações hansênicas. Material e métodos: Por meio da sorologia ELISA foi possível dosar os níveis de IgM anti-PGL-1 e IgG anti-LAM e com emprego da RT-qPCR procedeu-se a análise da expressão gênica de TLR1, TLR2, IFN-γ e IL-10 utilizando amostras do sangue de 17 pacientes com reação hansênica e 17 sem reação (caso-controle) que posteriormente foram subdivididos em 4 grupos. Na comparação entre as médias das variáveis nos diferentes grupos, utilizou-se a análise de variância (ANOVA) e na avaliação do grau de associação entre as principais variáveis, a matriz de correlação de Pearson. Ao final, elaborou-se a análise de trilha para verificar relações causais envolvendo os antígenos e receptores do tipo Toll tendo como efeitos direto e indireto a expressão de citocinas. Resultados: Do total de 34 pacientes, 76,4% (26/34) eram MB e 23,6% PB, sendo que 100% (17/17) dos casos reacionais eram MB e dos controles 53% (9/17). Analisando o grupo reacional, 41,2% (7/17) apresentaram reação tipo 1, enquanto que 58,8% (10/17) tiveram reação tipo 2, destacando que na reação tipo 1, 57,1% (4/7) dos pacientes tiveram reação antes do tratamento (downgrading), 14,2% (1/7) durante e 28,8% (2/7) após PQT. Na reação tipo 2, todos desenvolveram reação após alta. Os níveis de anti-PGl-1 estiveram elevados na reação tipo 1 e na reação tipo 2, com diferença significativa entre as médias desses grupos quando comparados aos controles PB (F=6,42; p=0,002). Em relação ao anti-LAM, esse esteve associado a reação do tipo 2, grupo cujas médias foram mais elevadas, e apresentaram diferenças significativas quando comparado aos demais grupos (F=15,27; p

We report a rare case in a female infant (age, 3.5 months) with primary immunodeficiency (IFN-γ/IL-12 pathway defect) who presented with suppurative lymphadenitis after Mycobacterium bovis BCG vaccination. The strain of M. bovis BCG identified was found to be resistant to isoniazid and rifampin. The patient was treated with a special pharmacological regimen involving isoniazid (in a limited, strategic manner), ethambutol, streptomycin, and IFN-γ, after which there was complete resolution of the lesions.

OBJECTIVE: In individuals with asthma, obesity induces the production of leptin and is associated with disease severity. Our objective was to evaluate the levels of serum leptin and their effect on Th1/Th2 balance in obese and non-obese children with asthma, as well as to investigate the association between serum leptin levels and clinical outcomes. METHODS: We evaluated 50 atopic children with physician-diagnosed moderate-to-severe persistent asthma and 20 controls. The children with asthma were divided into two groups, by body mass index percentile: obese (n = 25) and non-obese (n = 25). From all subjects, we collected peripheral blood samples in order to determine the levels of leptin, IFN-γ, and IL-4. Asthma severity was assessed by an asthma symptom score, and the results were correlated with the parameters studied. RESULTS: Serum leptin levels were significantly higher in the obese asthma group than in the non-obese asthma group, as well as being significantly higher in the children with asthma than in the controls, whereas IFN-γ levels were significantly higher and IL-4 levels were significantly lower in the obese asthma group than in the non-obese asthma group. In addition, the obese asthma group showed higher asthma symptom scores and significantly lower FEV1 (% of predicted) than did the non-obese asthma group. There was a significant positive correlation between leptin and IFN-γ levels only in the obese asthma group. CONCLUSIONS: Although leptin is involved in the pathogenesis of asthma in obese and non-obese children, its effect is more pronounced in the former. In the presence of high leptin levels, only obese children with asthma exhibited Th1 polarization, with higher IFN-γ levels and greater asthma severity.

Objective: To evaluate the frequency of and factors associated with indeterminate interferon-gamma release assay (IGRA) results in people living with HIV/AIDS (PLWHA). Methods: We tested 81 PLWHA in the central-west region of Brazil, using the tuberculin skin test and an IGRA. Information on sociodemographic and clinical variables was gathered through the use of questionnaires and from medical records. The association of those variables with indeterminate results was analyzed by calculating the adjusted ORs in a multivariate logistic regression model. Concordance was evaluated by determining the kappa statistic. Results: Among the 81 patients evaluated, the tuberculin skin test results were positive in 18 (22.2%) of the patients, and the IGRA results were positive in 10 (12.3%), with a kappa of 0.62. The IGRA results were indeterminate in 22 (27.1%) of the patients (95% CI: 17.8-38.1%). The odds of obtaining indeterminate results were significantly higher in smokers (adjusted OR = 6.0; 95% CI: 1.4-26.7) and in samples stored for less than 35 days (adjusted OR = 14.0; 95% CI: 3.1-64.2). Patients with advanced immunosuppression (CD4+ T-cell count < 200 cells/mm3) were at a higher risk for indeterminate results (OR adjusted for smoking and inadequate duration of sample storage = 4.7; 95% CI: 0.91-24.0), although the difference was not significant. Conclusions: The high prevalence of indeterminate results can be a major limitation for the routine use of IGRAs in PLWHA. The need to repeat the test increases its costs and should be taken into account in cost-effectiveness studies. The processing of samples can significantly alter the results. RESUMO Objetivo: Avaliar a frequência de resultados indeterminados de um interferon-gamma release assay (IGRA, ensaio de liberação de interferon-gama) e os fatores relacionados com esses resultados em pessoas vivendo com HIV/AIDS (PVHA). Métodos: Foram avaliadas 81 PVHA na região Centro-Oeste do Brasil, por meio do teste tuberculínico e de um IGRA. Informações a respeito de variáveis sociodemográficas e clínicas foram obtidas por meio de questionários e prontuários médicos. A relação entre essas variáveis e os resultados indeterminados foi avaliada por meio do cálculo da OR ajustada em um modelo de regressão logística multivariada. A concordância foi avaliada por meio do coeficiente kappa. Resultados: Os resultados do teste tuberculínico e do IGRA foram positivos em 18 (22,2%) e 10 (12,3%), respectivamente, dos 81 pacientes avaliados (κ = 0,62). O resultado do IGRA foi indeterminado em 22 (27,1%) dos pacientes (IC95%: 17,8-38,1%). A chance de resultados indeterminados foi significativamente maior em fumantes (OR ajustada = 6,0; IC95%: 1,4-26,7) e em amostras armazenadas durante menos de 35 dias (OR ajustada = 14,0; IC95%: 3,1-64,2). Pacientes com imunossupressão avançada (contagem de células T CD4+ < 200 células/mm3) apresentaram maior risco de resultados indeterminados (OR ajustada para tabagismo e tempo inadequado de armazenamento das amostras = 4,7; IC95%: 0,91-24,0), embora a diferença não tenha sido significativa. Conclusões: A alta prevalência de resultados indeterminados pode ser um grande obstáculo ao uso rotineiro de IGRAs em PVHA. A necessidade de repetir o teste aumenta seu custo e deve ser levada em conta em estudos da relação entre custo e eficácia. O processamento das amostras pode alterar significativamente os resultados.

Trabalho Final do Curso de Mestrado Integrado em Medicina, Faculdade de Medicina, Universidade de Lisboa, 2016 Submitted by Biblioteca da Faculdade de Medicina da Universidade de Lisboa (repositorio@medicina.ulisboa.pt) on 2017-07-18T11:57:13Z No. of bitstreams: 1 RitaSPinheiro.pdf: 479678 bytes, checksum: b435a7111a12db4b2daaf142e98d5e10 (MD5) Made available in DSpace on 2017-10-26T13:33:54Z (GMT). No. of bitstreams: 1 RitaSPinheiro.pdf: 479678 bytes, checksum: b435a7111a12db4b2daaf142e98d5e10 (MD5) Previous issue date: 2016

This study aimed to evaluate the interference of tuberculin test on the gamma-interferon (INFg) assay, to estimate the sensitivity and specificity of the INFg assay in Brazilian conditions, and to simulate multiple testing using the comparative tuberculin test and the INFg assay. Three hundred-fifty cattle from two TB-free and two TB-infected herds were submitted to the comparative tuberculin test and the INFg assay. The comparative tuberculin test was performed using avian and bovine PPD. The INFg assay was performed by the BovigamTM kit (CSL Veterinary, Australia), according to the manufacturer's specifications. Sensitivity and specificity of the INFg assay were assessed by a Bayesian latent class model. These diagnostic parameters were also estimate for multiple testing. The results of INFg assay on D0 and D3 after the comparative tuberculin test were compared by the McNemar's test and kappa statistics. Results of mean optical density from INFg assay on both days were similar. Sensitivity and specificity of the INFg assay showed results varying (95% confidence intervals) from 72 to 100% and 74 to 100% respectively. Sensitivity of parallel testing was over 97.5%, while specificity of serial testing was over 99.7%. The INFg assay proved to be a very useful diagnostic method. O presente estudo avalia a interferência do teste de tuberculinização no teste do interferon gama (INFg), estima a sensibilidade e a especificidade do INFg em condições brasileiras e simula a utilização dos testes múltiplos usando a tuberculinização comparada e o teste do INFg. Trezentos e cinquenta animais oriundos de dois rebanhos livres e dois rebanhos positivos foram submetidos à tuberculinização comparada e ao teste de INFg. A tuberculinização comparada foi realizada utilizando PPD aviária e bovina. O teste de INFg foi realizado utilizando o kit Bovigam® (CSL Veterinary, Austrália) de acordo com as especificações do fabricante. A sensibilidade e especificidade do teste de INFg foram calculadas pelo Modelo Bayesiano de Classe Latente. Esses parâmetros foram também estimados para os testes múltiplos. Os resultados do teste de INFg no D0 e D3 após o teste de tuberculinização foram comparados pelos testes estatísticos de McNemar e kappa. Os resultados das médias de densidade ótica do teste de INFg em ambos os dias foram similares. A sensibilidade e a especificidade do teste de INFg apresentaram resultados variando (95% intervalo de confiança) de 72 a 100% e 74 a 100%, respectivamente. A sensibilidade do teste em paralelo foi acima de 97,5% enquanto a especificidade do teste em série foi acima de 99,7%. O teste do INFg provou ser um método de diagnóstico muito útil.

Introduction All kidney transplant recipients (KTRs) require immunosuppression, the net level of which is difficult to assess. Current practice in assessing immune reactivity is to monitor levels of some immunosuppressive drugs. QuantiFERON Monitor® (QFM) is an in vitro diagnostic test that detects interferon-γ (IFN-γ) release in peripheral blood. Its clinical utility in assessment of the net state of immunosuppression in KTRs has not been well studied. The aim of our study was to evaluate the discriminating value of QFM testing results for infection and rejection in a single- centre cohort of KTRs. Methods Ninety adult KTRs from a tertiary transplant centre were recruited for this observational cohort pilot study. They were divided into three groups by indication for undertaking the QFM test: control (n=59), rejection (n=11) and infection (n=20). The inclusion criteria into the infection group were clinical signs, or symptoms of an infection with elevated CRP (>20mg/L). Recipients in the rejection group had biopsy-proven kidney rejection. The control group consisted of stable KTRs at various times post-transplant. QFM (Qiagen, Hilden, Germany) was performed according to the manufacturer instructions. Results Fifty- nine patients were male and 31 female. The mean age was 52.5±1.4 years and mean time after transplantation was 2.6±0.4 years. In the entire cohort age, gender, time after transplantation, serum creatinine concentration, tacrolimus concentration, mycophenolate dose and steroid dose showed no statistically significant association with QFM results. Mean QFM results were 136.24±27.85 IU/mL, 24.84±5.71 IU/mL and 69.44±25.19 IU/mL in the control, infection and rejection group (p=0.04, by analysis of variance), respectively (Figure 1). Post-hoc LSD test revealed a significant difference in QFM results between the control and infection groups (p=0.01, Figure 1), with area under the curve in ROC analysis of 0.72±0.06 (p=0.004, Figure 2). There was no statistically significant difference in QFM results between viral and bacterial infections Discussion A recent study involving pre-transplant liver cirrhosis patients showed lowered QFM values in patients with infective complications, which corroborates our results[1]. However, unlike another study in liver transplant patients, our study did not demonstrate an increase in QFM values in late post-transplant period[2]. Conclusion QFM results are lower in KTRs presenting with infections. QFM may be used to detect patients at risk for infective complications, but further prospective studies are required.

INTRODUÇÃO: durante o tratamento ortodôntico, um processo inflamatório é induzido, desencadeando uma série de eventos bioquímicos que resultam na movimentação dentária. Estímulos como a hipóxia e a deformação mecânica são os principais fatores responsáveis pela quebra da homeostasia celular, resultando em estresse e liberação de diversos mediadores importantes para o movimento do dente. Para que a remodelação óssea ocorra durante o tratamento ortodôntico, fatores reguladores,como subprodutos do ácido araquidônico e citocinas,são liberados.Ao interferon gama (INF-γ , uma citocina principal liberada após a indução da resposta imune adaptativa, é atribuída a função de atrair os macrófagos, que auxiliam na remoção de restos celulares e promovem a cicatrização e reorganização das áreas com inflamação. OBJETIVO: visto que alguns aspectos biológicos que permeiam a movimentação dentária ainda não estão totalmente esclarecidos, procurou-se, neste trabalho, verificar a expressão do INF-γ por células do periodonto de ratos submetidos à movimentação ortodôntica. MÉTODOS: a amostra foi constituída por nove ratos, cujos primeiros molares superiores direitos foram movimentados com uma força de 0,5N, por 3, 7 e 14 dias. Os molares esquerdos desempenharam o papel de grupo controle. RESULTADOS: através da imunohistoquímica, foi verificada a ausência de expressão de INF-γ na quase totalidade dos tecidos estudados,tanto no lado de pressão quanto no lado de tração.INTRODUCTION: During the orthodontic treatment, an inflammatory process is induced, triggering series of biochemical events that results in dental movement. Stimuli such as hypoxia and mechanical deformation are the main factors responsible for the breaking of cell homeostasis, resulting in stress and liberation of several important mediators for tooth movement. To occur osseous remodeling during orthodontic treatments, regulating factors such as sub products of arachidonic acid and cytokines are released. To interferon-gamma (INF-γ ), a main cytokine released after induction of adaptive immune response, is attributed the function of attracting the macrophages, which aids in removing cell rests and promote healing and reorganization of the inflamed areas. AIM: Given that some biological aspects that permeate dental movement are not yet fully clear, we aimed in this study to investigate INF-γ expression in the periodontium of rats under orthodontic movement. METHODS: The sample was composed of 9 rats, whose first upper right molars were moved with a force of 0,5N, for 3, 7 and 14 days. The left molars were used as controls. RESULTS: Through immunohistochemistry, we verified the absence of INF-γ expression in almost all the studied tissues, in both the traction and pressure sides.

INTRODUÇÃO: durante o tratamento ortodôntico, um processo inflamatório é induzido, desencadeando uma série de eventos bioquímicos que resultam na movimentação dentária. Estímulos como a hipóxia e a deformação mecânica são os principais fatores responsáveis pela quebra da homeostasia celular, resultando em estresse e liberação de diversos mediadores importantes para o movimento do dente. Para que a remodelação óssea ocorra durante o tratamento ortodôntico, fatores reguladores,como subprodutos do ácido araquidônico e citocinas,são liberados.Ao interferon gama (INF-γ , uma citocina principal liberada após a indução da resposta imune adaptativa, é atribuída a função de atrair os macrófagos, que auxiliam na remoção de restos celulares e promovem a cicatrização e reorganização das áreas com inflamação. OBJETIVO: visto que alguns aspectos biológicos que permeiam a movimentação dentária ainda não estão totalmente esclarecidos, procurou-se, neste trabalho, verificar a expressão do INF-γ por células do periodonto de ratos submetidos à movimentação ortodôntica. MÉTODOS: a amostra foi constituída por nove ratos, cujos primeiros molares superiores direitos foram movimentados com uma força de 0,5N, por 3, 7 e 14 dias. Os molares esquerdos desempenharam o papel de grupo controle. RESULTADOS: através da imunohistoquímica, foi verificada a ausência de expressão de INF-γ na quase totalidade dos tecidos estudados,tanto no lado de pressão quanto no lado de tração. INTRODUCTION: During the orthodontic treatment, an inflammatory process is induced, triggering series of biochemical events that results in dental movement. Stimuli such as hypoxia and mechanical deformation are the main factors responsible for the breaking of cell homeostasis, resulting in stress and liberation of several important mediators for tooth movement. To occur osseous remodeling during orthodontic treatments, regulating factors such as sub products of arachidonic acid and cytokines are released. To interferon-gamma (INF-γ ), a main cytokine released after induction of adaptive immune response, is attributed the function of attracting the macrophages, which aids in removing cell rests and promote healing and reorganization of the inflamed areas. AIM: Given that some biological aspects that permeate dental movement are not yet fully clear, we aimed in this study to investigate INF-γ expression in the periodontium of rats under orthodontic movement. METHODS: The sample was composed of 9 rats, whose first upper right molars were moved with a force of 0,5N, for 3, 7 and 14 days. The left molars were used as controls. RESULTS: Through immunohistochemistry, we verified the absence of INF-γ expression in almost all the studied tissues, in both the traction and pressure sides.

Submitted by Elizabete Silva (elizabete.silva@ufes.br) on 2015-11-09T18:30:12Z No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) AVALIAÇÃO DA CONCORDÂNCIA ENTRE OS TESTES.pdf: 9729341 bytes, checksum: 5ce0a10c9bab80b9be2c1cd61a5aca56 (MD5) Approved for entry into archive by Morgana Andrade (morgana.andrade@ufes.br) on 2015-11-23T18:20:37Z (GMT) No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) AVALIAÇÃO DA CONCORDÂNCIA ENTRE OS TESTES.pdf: 9729341 bytes, checksum: 5ce0a10c9bab80b9be2c1cd61a5aca56 (MD5) Made available in DSpace on 2015-11-23T18:20:37Z (GMT). No. of bitstreams: 2 license_rdf: 23148 bytes, checksum: 9da0b6dfac957114c6a7714714b86306 (MD5) AVALIAÇÃO DA CONCORDÂNCIA ENTRE OS TESTES.pdf: 9729341 bytes, checksum: 5ce0a10c9bab80b9be2c1cd61a5aca56 (MD5) Previous issue date: 2015 Introdução: Uma das principais características do M. tuberculosis (Mtb) refere-se a sua capacidade de produzir infecção latente. A Organização Mundial de Saúde (OMS) estima que dois bilhões de pessoas estejam infectadas pelo bacilo da tuberculose, e que, somente 10% dessas, desenvolvem doença ativa. Até recentemente o único exame laboratorial disponível para o diagnóstico da infecção latente pelo Mtb era a prova tuberculínica (PT). Entretanto, algumas de suas limitações estimularam o desenvolvimento de ensaios de liberação de interferongama por linfócitos T em resposta ao desafio de antígenos sintéticos específicos do Mtb (ESAT-6, CFP-10 e TB7.7). O objetivo do nosso estudo foi avaliar a concordância entre a prova tuberculínica e o teste QuantiFERON®-TB Gold in tube, no diagnóstico da infecção latente pelo Mtb, em crianças e adolescentes, contatos domiciliares de casos índices com doença pulmonar bacilífera. Métodos: Estudo comparativo, conduzido na Região Metropolitana de Vitória-ES, no período de Março de 2008 a Outubro de 2013. Dados clínicos, demográficos e epidemiológicos foram coletados de todos os participantes. A infecção latente pelo Mtb foi mensurada através da PT e do QFT-GIT. Definiu-se latência através da positividade da PT (induração ≥ 10mm) e do QFT-GIT (controle negativo ≤8.0 UI/mL, Antígeno TB menos controle negativo ≥0.35 UI/ml e ≥25% do valor do controle negativo). Os voluntários da pesquisa foram avaliados pelos dois testes entre oito a dez semanas após a identificação dos respectivos casos índices. O teste Kappa foi utilizado na comparação dos resultados dos testes para avaliação da concordância entre eles. Os fatores associados com a positividade de ambos os testes na análise bivariada (p ≤0,30) foram incluídos no modelo multivariado (regressão logística), sendo calculadas as razões de chance (OR) e os IC95%. Resultados: Foram arrolados 291 participantes. A concordância global entre os resultados da PT e do QFT-GIT foi elevada (87,6%) - k 0,75 [IC 95%: 0,63-0,86]. Nos indivíduos com idade ≤ 5 anos a concordância foi ainda maior (93,65%) - κ 0,87 [IC 95%: 0,63-1,12]. Não houve associação estatisticamente significativa entre a presença de cicatriz ao BCG e a positividade dos dois testes. Houve uma correlação positiva entre o tamanho da induração da PT e probabilidade de positividade do QFT-GIT. Conclusão: Não há vantagem na utilização do QFT-GIT em relação à PT. O segundo mês após a identificação do caso índice seria o tempo recomendado para a realização dos testes em questão. Background: One of the main characteristics of M. tuberculosis (Mtb) is its capacity to produce latent infection. The World Health Organization (WHO) estimates that 2 billion people are infected by this bacillus, only 10% of whom develop active disease. Until recently the tuberculin skin test (TST) was the only test available for the diagnosis of latent infection. However, because of its potential limitations an effort was made to develop a more accurate method to diagnose latent tuberculosis. The interferon-gamma release assays (IGRA’s) were the result. These tests measure the interferon-gamma production by T-lymphocytes in response to a challenge of three synthetic antigens, specific for Mtb (ESAT-6, CFP-10 e TB7.7). The objective of our study was to evaluate the performance of the TST and the QuantiFERON®-TB Gold assay-in-tube (QFT-GIT), for the diagnostic of latent Mtb infection in children and adolescents identified as household contacts of smear positive pulmonary Mtb index cases. Methods: This was a comparative study conducted in the Metropolitan area of Vitória, Espírito Santo, Brazil from March 2008 through October 2013. Clinical, demographic and epidemiological data were collect from all participants. We defined latency as a positive TST (induration ≥ 10mm) or a positive QFT-GIT test (Nil ≤8.0 IU/ml, TB Antigen minus Nil ≥0.35 IU/ml and ≥25% of Nil value). Both tests were performed in each volunteer between eight and ten weeks after the identification of the respective index cases. Concordance, as defined by kappa testing, was used to compare the results of the two methods of diagnosing latency. The factors associated with positivity of both tests in bivariate analysis (p ≤0.30) were included in the multivariate model (logistic regression), and the odds ratios (OR) and 95%CI were calculated. Results: 291 subjects were enrolled in the study. The global concordance between TST and QFT-GIT was high (87,6%) - k 0.75 [CI 95%: 0.63- 0.86]. However in children age ≤ 5 years the concordance was even higher (93.65%) - κ 0.87 [CI 95%: 0,63-1,12]. The presence of BCG scar was not statistically associated with tests positivity. There was a positive correlation between the size of TST induration and the probability of a positive QFT-GIT. Conclusion: There was no advantage in the use of QFT-GIT in relation to the TST. We recommend the twomonth timeframe after the identification of the index case to perform the tests in the household contacts.

Cilj: Otkrivanje latentne tuberkuloze sukladno nacionalnim smjernicama uključuje procjenu rizika, radiografsku pretragu, izvođenje tuberkulinskog kožnog / PPD testa (PPD – purificirani proteinski derivat) i/ili novijeg ex vivo testa otpuštanja interferona gama (engl. Interferon Gamma Release Assay – IGRA). U radu je analizirana dinamika izvođenja i rezultati dobiveni dijagnostičkom primjenom imunoenzimske IGRA pretrage na M. tuberculosis. Metode: Izvršena je retrospektivna analiza rezultata Quantiferon-TB Gold In-Tube (QFT-GIT) testiranja provedenih u Laboratoriju za dijagnostiku tuberkuloze Nastavnog zavoda za javno zdravstvo Primorsko-goranske županije (Hrvatska). Rezultati: U sedmogodišnjem razdoblju (2007. – 2013.) u Laboratoriju za dijagnostiku tuberkuloze primjenom QFT-GIT testa analizirano je 2.110 uzoraka krvi pacijenata koji su pripadali različitim dobnim skupinama (od dobi od mjesec dana do 95 godina; x̄ = 41,9 godina; SD = 29,1; mod 56 godina). Rezultati analize su bili pozitivni u 585 (27,7 %), negativni u 1.498 (71 %) uzoraka, a u 27 (1,3 %) izvršenih pretraga su bili neodredivi. Pozitivni nalazi podjednako su zastupljeni u pretragama izvršenim za muškarce (29 % od 1.058 pretraga) i žene (26 % od 1.052 pretrage). Veća zastupljenost pozitivnih nalaza zabilježena je u osoba starijih od 56 godina, napose u dobnoj skupini od 81 do 85 godina (61 % od 44 pretrage). Prema uputnoj dijagnozi pozitivni nalazi su zastupljeniji kod hiperreaktora (40,5 % od 84 analize), TB kontakata (35,1 % od 464 analize) i zdravstvenih radnika (34,9 % od 43 analize). Rasprava i zaključci: Primjena in vitro IGRA QFT-GIT testa u kombinaciji s konvencionalnim metodama danas je prepoznata kao dijagnostički postupak koji ima značajnu ulogu u otkrivanju LTB-a, što predstavlja važan korak u prevenciji tuberkuloze, posebice kod rizičnih skupina., Aim: Tuberculosis (TB) remains a major global public health problem. Screening for latent tuberculosis infection (LTB) usually involves risk assessment, chest X-ray, the tuberculin skin/PPD (Purified Protein Derivate) test, and/or interferon-gamma release assay (IGRA), according to country-specific guidelines. This paper describes the frequency of application and the results obtained by enzyme-linked immunosorbent IGRA assay for M. tuberculosis. Methods: We conducted a retrospective analysis of the results obtained using Quantiferon-TB Gold In-Tube (QFT-GIT) analysis at the Laboratory for the diagnosis of tuberculosis – Teaching Institute of Public Health County Primorsko-goranska (Croatia). Results: In the seven-year period (2007–2013) QFT-GIT analysis were processed in 2110 blood samples of patients from different age groups (aged 1 month-95 years; x̄ = 41.9 years; SD = 29.1; mode 56 years). Results were positive in 585 (27.7 %) samples, whereas negative results were found in 1498 (71 %) cases, and in 27 (1.3 %) samples the results were indeterminate. Positive results were distributed equally among males (29 % of 1058 samples) and females (26 % of 1052 samples). Higher incidence of positive results was observed in people over the age of 56, especially in the age group between 81-85 years (61 % of 44 tests). Positive results were most common in the group of hyperreactors (40.5 % of 84 tests) then in TB contacts (35.1 % of 464 tests), as well as health workers (34.9 % of 43 tests). Discussion and Conclusions: Applying in vitro IGRA QFT-GIT test in combination with conventional methods is recognized as a diagnostic method that plays an important role in uncovering LTB and as such represents an important step in prevention of tuberculosis, especially in high-risk groups.

Orientador: Márcio Zaffalon Casati Dissertação (mestrado) - Universidade Estadual de Campinas, Faculdade de Odontologia de Piracicaba Resumo: O Resumo poderá ser visualizado no texto completo da tese digital Abstract: The Abstract is available with the full electronic digital document. Mestrado Periodontia Mestra em Clínica Odontológica