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International audience; Although the jejunum is the main intestinal compartment responsible for lipid digestion and absorption, most of the studies assessing the impact of dietary lipids on the intestinal microbiota have been performed in the ileum, colon and faeces. This lack of interest in the jejunum is due to the much lower number of microbes present in this intestinal region and to the difficulty in accessing its lumen, which requires invasive methods. Recently, several recent publications highlighted that the whole jejunal microbiota or specific bacterial members are able to modulate lipid absorption and metabolism in enterocytes. This information reveals new strategies in the development of bacterial-and metabolite-based therapeutic interventions or nutraceutical recommendations to treat or prevent metabolic-related disorders, including obesity, cardiovascular diseases and malnutrition. This review is strictly focused on the following triad: dietary lipids, the jejunal epithelium and the jejunal microbiota. First, we will describe each member of the triad: the structure and functions of the jejunum, the composition of the jejunal microbiota, and dietary lipid handling by enterocytes and by microorganisms. Then, we will present the mechanisms leading to lipid malabsorption in small intestinal bacterial overgrowth (SIBO), a disease in which the jejunal microbiota is altered and which highlights the strong interactions among this triad. We will finally review the recent literature about the interactions among members of the triad, which should encourage research teams to further explore the mechanisms by which specific microbial strains or metabolites, alone or in concert, can mediate, control or modulate lipid absorption in the jejunum.

International audience; Mineralocorticoid receptor (MR) mediates the sodium-retaining action of aldosterone in the distal nephron. Herein, we decipher mechanisms by which hypotonicity increases MR expression in renal principal cells. We identify HuR (human antigen R), an mRNA-stabilizing protein, as an important posttranscriptional regulator of MR expression. Hypotonicity triggers a rapid and reversible nuclear export of HuR in renal KC3AC1 cells, as quantified by high-throughput microscopy. We also identify a key hairpin motif in the 3'-untranslated region of MR transcript, pivotal for the interaction with HuR and its stabilizing function. Next, we show that hypotonicity increases MR recruitment onto Sgk1 promoter, a well-known MR target gene, thereby enhancing aldosterone responsiveness. Our data shed new light on the crucial role of HuR as a stabilizing factor for the MR transcript and provide evidence for a short autoregulatory loop in which expression of a nuclear receptor transcriptionally regulating water and sodium balance is controlled by osmotic tone.

Menière's disease, clinically characterized by fluctuating, recurrent, and invalidating vertigo, hearing loss, and tinnitus, is linked to an increase in endolymph volume, the so-called endolymphatic hydrops. Since dysregulation of water transport could account for the generation of this hydrops, we investigated the role of aquaporin 3 (AQP3) in water transport into endolymph, the K-rich, hyperosmotic fluid that bathes the apical ciliated membrane of sensory cells, and we studied the regulatory effect of dexamethasone upon AQP3 expression and water fluxes. The different AQP subtypes were identified in inner ear by RT-PCR. AQP3 was localized in human utricle and mouse inner ear by immunohistochemistry and confocal microscopy. Unidirectional transepithelial water fluxes were studied by means of (3)H2O transport in murine EC5v vestibular cells cultured on filters, treated or not with dexamethasone (10(-7) M). The stimulatory effect of dexamethasone upon AQP3 expression was assessed in EC5v cells and in vivo in mice. AQP3 was unambiguously detected in human utricle and was highly expressed in both endolymph secretory structures of the mouse inner ear, and EC5v cells. We demonstrated that water reabsorption, from the apical (endolymphatic) to the basolateral (perilymphatic) compartments, was stimulated by dexamethasone in EC5v cells. This was accompanied by a glucocorticoid-dependent increase in AQP3 expression at both messenger RNA (mRNA) and protein level, presumably through glucocorticoid receptor-mediated AQP3 transcriptional activation. We show that glucocorticoids enhance AQP3 expression in human inner ear and stimulate endolymphatic water reabsorption. These findings should encourage further clinical trials evaluating glucocorticoids efficacy in Menière's disease.

International audience; The mineralocorticoid receptor (MR) mediates the Na(+)-retaining action of aldosterone. MR is highly expressed in the distal nephron, which is submitted to intense variations in extracellular fluid tonicity generated by the corticopapillary gradient. We previously showed that post-transcriptional events control renal MR abundance. Here, we report that hypertonicity increases expression of the mRNA-destabilizing protein Tis11b, a member of the tristetraprolin/ZFP36 family, and thereby, decreases MR expression in renal KC3AC1 cells. The 3'-untranslated regions (3'-UTRs) of human and mouse MR mRNA, containing several highly conserved adenylate/uridylate-rich elements (AREs), were cloned downstream of a reporter gene. Luciferase activities of full-length or truncated MR Luc-3'-UTR mutants decreased drastically when cotransfected with Tis11b plasmid, correlating with an approximately 50% shorter half-life of ARE-containing transcripts. Using site-directed mutagenesis and RNA immunoprecipitation, we identified a crucial ARE motif within the MR 3'-UTR, to which Tis11b must bind for destabilizing activity. Coimmunoprecipitation experiments suggested that endogenous Tis11b physically interacts with MR mRNA in KC3AC1 cells, and Tis11b knockdown prevented hypertonicity-elicited repression of MR. Moreover, hypertonicity blunted aldosterone-stimulated expression of glucocorticoid-induced leucine-zipper protein and the α-subunit of the epithelial Na(+) channel, supporting impaired MR signaling. Challenging the renal osmotic gradient by submitting mice to water deprivation, diuretic administration, or high-Na(+) diet increased renal Tis11b and decreased MR expression, particularly in the cortex, thus establishing a mechanistic pathway for osmotic regulation of MR expression in vivo. Altogether, we uncovered a mechanism by which renal MR expression is regulated through mRNA turnover, a post-transcriptional control that seems physiologically relevant.

La balance hydrosodee est regulee par l’aldosterone et le recepteur mineralocorticoide (MR), un facteur de transcription dont l’expression est alteree dans certaines pathologies humaines. Nous venons de montrer que les variations de tonicite extracellulaire controlent l’expression renale du MR in vitro et in vivo. L’hypertonicite reprime son expression alors que l’hypotonicite l’augmente par des mecanismes post-transcriptionnels impliquant des proteines de liaison a l’ARN. Nous montrons maintenant que certains microARN (miARN) dont les sites de liaison ont ete identifies dans la region 3′-non traduite du transcrit MR peuvent agir comme regulateurs post-transcriptionnels, accelerant la degradation ou reprimant la traduction de transcrits cibles. L’approche haut debit « TaqMan low density array » a permis d’identifier plusieurs miARN dont l’expression est regulee par la tonicite. L’expression du miR-324-5p, mesuree par RT-PCR quantitative, est significativement augmentee ( × 1,5) dans les cellules renales KC3AC1 en reponse a l’hypertonicite et dans les reins de souris (× 4) dans des conditions mimant l’hypertonicite (restriction hydrique, diuretiques de l’anse). Nous etudions les mecanismes moleculaires regulateurs impliques et testons les consequences fonctionnelles de la contre-expression ou de la surexpression du miR-324-5p par transfection de molecules AntagomiR ou Pre-miR. Il est egalement possible de quantifier l’expression de ce miARN dans le plasma et l’urine, il pourrait potentiellement nous servir de biomarqueur representant ainsi un nouvel outil diagnostique ou predictif en pathologie humaine. L’identification de ces mecanismes inedits pourrait deboucher sur de nouvelles perspectives pharmacologiques de modulation de la signalisation mineralocorticoide dans la prise en charge des pathologies en rapport avec un hypermineralocorticisme.

International audience; Context: The neonatal period, notably in preterm infants, is characterized by high sodium wasting, implying that aldosterone, the main hormone regulating sodium reabsorption, is unable to maintain sodium homeostasis. Objective: This study sought to assess aldosterone secretion and action in neonates according to gestational age (GA). DesignandSetting: Thiswasamulticenter prospective study(NCT01176162)conductedbetween2011and 2014 at five neonatology departments in France. Infants were followed during their first 3 months. Participants: The 155 newborns included were classified into three groups: Group 1 (n = 46 patients)

International audience; DNA replication ensures the accurate duplication of the genome at each cell cycle. It begins at specific sites called replication origins. Genome-wide studies in vertebrates have recently identified a consensus G-rich motif potentially able to form G-quadruplexes (G4) in most replication origins. However, there is no experimental evidence to demonstrate that G4 are actually required for replication initiation. We show here, with two model origins, that G4 motifs are required for replication initiation. Two G4 motifs cooperate in one of our model origins. The other contains only one critical G4, and its orientation determines the precise position of the replication start site. Point mutations affecting the stability of this G4 in vitro also impair origin function. Finally, this G4 is not sufficient for origin activity and must cooperate with a 200-bp cis-regulatory element. In conclusion, our study strongly supports the predicted essential role of G4 in replication initiation.

But de la presentation La physiopathologie de la secretion d’endolymphe et donc de ses desordres, en particulier, l’hydrops endolymphatique, substratum histologique de la maladie de Meniere, est encore tres mal connue de nos jours. Il existe au cours d’un hydrops experimental une diminution de l’osmolarite et de la concentration en potassium endolymphatique. Ces donnees suggerent qu’une alteration de la regulation du potassium et/ou du transport d’eau de la perilymphe vers l’endolymphe pourraient constituer les determinants moleculaires impliques dans la pathogenese de l’hydrops endolymphatique. Nous avons donc etudie le role dans l’oreille interne des aquaporines qui sont des canaux membranaires permettant a l’eau de passer la membrane cellulaire. Materiel et methodes Nous avons utilise comme modeles cellulaires : une lignee immortalisee murine de cellules sombres du vestibules, les EC5 v, et des cellules vestibulaires humaines prelevees lors d’intervention oto-neurochirurgicale. A l’aide de techniques de PCR quantitative et de western blot nous avons etudie le niveau d’expression de certaines aquaporines. Nous avons ensuite explore les transports d’eau tritiee au travers d’une monocouche de cellules EC5 v cultivees sur filtre. Ensuite nous avons rechercher la presence de ces aquaporines au sein de l’oreille de souris in vivo, en completant les techniques par de l’immunohistochimie. Enfin, nous avons realise des injections de dexamethasone chez des souris mâles d’âges differents et rechercher les variations d’expression des transcrits de ces aquaporines. Resultats Dans les modeles cellulaires, nous avons mis en evidence une augmentation par la dexamethasone de l’expression du transcrit et de la proteine de l’aquaporine 3, inhibee par le RU486 et le DRB montrant un mecanisme transcriptionnel dependant du recepteur des glucocorticoides. Nous avons egalement mis en evidence une augmentation des transports d’eau du pole apical des cellules vers le pole basal en presence de dexamethasone en condition de culture asymetrique. Chez les souris, l’injection de dexamethasone entraine une augmentation de l’expression du transcrit de l’aquaporine 3 dans l’oreille interne. Conclusion Nous demontrons donc clairement et pour la premiere fois dans ce modele cellulaire que la dexamethasone stimule le flux transepithelial du compartiment endolymphatique vers le compartiment perilymphatiques. Cet effet est associe a une activation de l’expression de l’aquaporine 3 au niveau de l’ARNm et de la proteine in vivo chez la souris et in vitro dans des cellules humaines. L’ensemble de ces resultats permet donc de faire l’hypothese que les glucocorticoides seraient un bon traitement de la maladie de Meniere.

Contexte Il existe en periode neonatale un desequilibre de la balance hydrosodee, due a une resistance physiologique renale a l’aldosterone chez le nouveau-ne a terme. Une etude detaillee chez le premature n’a jamais ete realisee. Objectif/methodes Evaluation (PHRC NCT01176162 ) de la sensibilite renale mineralocorticoide en fonction de l’âge gestationnel a la naissance et durant la premiere annee de vie, par mesure de l’aldosteronurie et sa correlation au rapport Na/K urinaire. Resultats Inclusion de 155 nouveau-nes repartis en trois groupes : inferieur a 33 SA (46 patients), 33–36 SA (67 patients), superieur a 37 SA (42 patients). L’aldosterone plasmatique au sang de cordon, tres elevee chez les nouveau-nes a terme (1038 ± 101 pg/mL), diminue chez les prematures et grands prematures (585 ± 50 et 368 ± 55 pg/mL). Ceci est inversement correle a un hyperreninisme, suggerant un defaut de biosynthese/secretion d’aldosterone chez les prematures. L’aldosteronurie est correlee significativement a l’aldosteronemie dans tous les groupes ( p 37 SA a l’âge de 1 mois ( p = 0,02) alors que le rein des prematures reste insensible a l’action de l’aldosterone jusqu’a 3 mois. Discussion Ces resultats revelent les mecanismes responsables des pertes sodees chez les prematures et ouvrent sur de nouvelles perspectives therapeutiques basees sur la mesure de l’aldosteronurie.

La balance hydrosodee et la pression arterielle sont regulees par l’aldosterone et le recepteur mineralocorticoide (MR), un facteur de transcription dont l’expression renale est alteree dans certaines nephropathies et au cours du developpement. Nous avons montre que la tonicite extracellulaire controle l’expression du MR dans les cellules renales par des mecanismes post-transcriptionnels. L’hypertonicite (500 mOsm/L) induit l’expression de Tis11b, une proteine de liaison a l’ARN, qui accelere la degradation du transcrit MR et reduit la signalisation dependante des mineralocorticoides. Chez la souris, l’augmentation urinaire du flux sode par une restriction hydrique ou des diuretiques entraine une repression du MR, associee a une induction de Tis11b. A l’inverse, l’hypotonicite (150 mOsm/L) augmente fortement l’expression du MR (messager et proteine) de facon independante de la transcription. L’extinction de la proteine stabilisatrice des ARNm HuR par siRNA previent l’augmentation d’expression du MR induite par l’hypotonicite. L’analyse par microscopie haut debit de la localisation subcellulaire de HuR sous hypotonicite a revele sa redistribution rapide (2 min) et reversible du noyau vers le cytoplasme. L’interaction physique entre HuR et le transcrit MR est en cours d’investigation. Enfin, la surexpression du MR retentit fonctionnellement sur l’expression des genes cibles. La relevance physiopathologique de ces modulations post-transcriptionnelles de l’expression du MR sera exploree en soumettant des souris a une hypotonicite extracellulaire (gavage hydrique ou antagoniste du V2R). L’identification de ces mecanismes inedits, regulant l’action renale du MR, devrait ameliorer notre comprehension de la physiopathologie de la signalisation mineralocorticoide, et pourrait deboucher sur de nouvelles strategies therapeutiques.

Introduction La balance hydrosodee et la pression arterielle sont regulees par l’aldosterone et le recepteur mineralocorticoide (MR), un facteur de transcription dont l’expression renale varie au cours du developpement et est alteree dans certaines nephropathies. Nous venons de montrer que les variations de tonicite controlent l’expression renale du MR par des mecanismes post-transcriptionnels [1] . L’hypertonicite (500 mOsm/L) induit l’expression de Tis11b, une proteine de liaison a l’ARN, qui accelere la degradation du transcrit MR et reduit la signalisation relayee par le MR. Nous avons aussi demontre que l’augmentation urinaire du flux sode par restriction hydrique ou diuretiques chez la souris reprime l’expression renale de MR [2] . Materiels et methodes Les etudes sont realisees dans les cellules tubulaires renales KC3AC1. Resultats Nous montrons que l’hypotonicite extracellulaire (150 mOsm/L) stimule (×4) l’expression du MR (messager et proteine) grâce au recrutement d’une autre proteine de liaison a l’ARN, HuR, sur des motifs riches en adenosines et uraciles (ARE) presents dans la region 3′-UTR du transcrit MR. La contre-expression de la proteine HuR par des siRNA, previent l’augmentation d’expression du MR induite par l’hypotonicite, suggerant que HuR stabilise le transcrit MR. L’analyse par microscopie haut debit de la localisation subcellulaire de HuR a mis en evidence une redistribution rapide (2 min), transitoire et reversible de HuR dans le compartiment cytoplasmique en reponse a l’hypotonicite. Les interactions moleculaires de HuR avec la region 3′-UTR du MR et les consequences fonctionnelles de la surexpression renale de MR sont en cours de caracterisation. Nous explorerons aussi la relevance physiopathologique de ces modulations de l’expression renale du MR in vivo en soumettant des souris a des conditions mimant une hypotonicite extracellulaire (gavage hydrique ou traitement par un antagoniste selectif du recepteur V2R responsable d’un diabete insipide nephrogenique). Discussion et conclusion L’identification de ces mecanismes de regulation post-transcriptionnelle d’un recepteur steroidien, modulant selectivement la signalisation mineralocorticoide devrait ameliorer notre comprehension de la physiopathologie des maladies renales, de l’hypertension ou des resistances mineralocorticoides. Ce travail pourrait deboucher sur la mise en œuvre de nouvelles strategies therapeutiques.