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A Imunologia é uma ciência caracterizada como complexa e de difícil domínio, pois exige do discente um diálogo entre os diferentes saberes de forma multi, inter e transdisciplinar para fins de melhor compreensão e aplicabilidade. Nos currículos tradicionais, o ensino da Imunologia preconiza a memorização de conteúdos, sem aplicações práticas e sem significado para o cotidiano do discente. No entanto, a incorporação de estratégias inovadoras tem facilitado o processo de ensino-aprendizagem, potencializando a cognição do sujeito na perspectiva do aprender, mesmo que este esteja matriculado em um modelo de ensino tradicional. Por outro lado, as metodologias ativas de aprendizagem mostram-se mais promissoras na (re)construção dos conceitos e aplicações da Imunologia, pois permitiu a integralidade e interdisciplinaridade de seus significados e representações, notadamente por meio da incorporação dos aspectos imunológicos em situações-problema e/ou por meio de práticas que valorizem a educação científica e tecnológica na formação de cidadãos conscientes, críticos e reflexivos do papel da Imunologia no desenvolvimento da sociedade. A formação de profissionais médicos e de outras profissões da saúde deve convergir para o desenvolvendo habilidades conceituais, procedimentais e atitudinais, de modo a permitir um olhar holístico do sujeito e do processo saúde-doença, considerando seus significados e representações para uma formação profissional mais qualificada. &nbsp

Background: Staphylococcus aureus is one of the most frequently major mastitis pathogens that cause clinical and subclinical mastitis worldwide. Current antimicrobial treatments are usually ineffective, and the commercially available vaccines lack proven effectiveness. The immunological response elicited by the recombinant S. aureus-cure-associated proteins phosphoglycerate kinase (PGK), enolase (ENO), and elongation factor-G (EF-G) in combination with the granulocyte-macrophage colony-stimulating factor (GM-CSF) DNA vaccination was studied in this work. Methods: Here, twenty-three C57BL/6 mice were divided into four groups and vaccinated with: G1: none (control); G2: GM-CSF DNA plasmid DNA vaccine; G3: the combination of EF-G+ENO+PGK; and G4: the combinations of EF-G+ENO+PGK proteins plus GM-CSF plasmid DNA vaccine. After 44 days, spleen cells were collected for immunophenotyping and lymphocyte proliferation evaluation by flow cytometry upon S. aureus stimulus. Results: Immunization with the three S. aureus recombinant proteins alone resulted in a higher percentage of IL-17A+ cells among CD8+ T central memory cells, as well as the highest intensity of IL-17A production by overall lymphocytes indicating that the contribution of the combined lymphocyte populations is crucial to sustaining a type 3 cell immunity environment. Conclusion: The immunization with three S. aureus-cure-associated recombinant proteins triggered type 3 immunity, which is a highly interesting path to pursue an effective bovine S. aureus mastitis vaccine.

BackgroundWe previously reported inborn errors of TLR3- and TLR7-dependent type I interferon (IFN) immunity in 1-5% of unvaccinated patients with life-threatening COVID-19, and auto-antibodies against type I IFN in another 15-20% of cases.MethodsWe report here a genome-wide rare variant burden association analysis in 3,269 unvaccinated patients with life-threatening COVID-19 (1,301 previously reported and 1,968 new patients), and 1,373 unvaccinated SARS-CoV-2-infected individuals without pneumonia. A quarter of the patients tested had antibodies against type I IFN (234 of 928) and were excluded from the analysis.ResultsNo gene reached genome-wide significance. Under a recessive model, the most significant gene with at-risk variants wasTLR7, with an OR of 27.68 (95%CI:1.5-528.7,P=1.1×10−4), in analyses restricted to biochemically loss-of-function (bLOF) variants. We replicated the enrichment in rare predicted LOF (pLOF) variants at 13 influenza susceptibility loci involved in TLR3-dependent type I IFN immunity (OR=3.70 [95%CI:1.3-8.2],P=2.1×10−4). Adding the recently reportedTYK2COVID-19 locus strengthened this enrichment, particularly under a recessive model (OR=19.65 [95%CI:2.1-2635.4];P=3.4×10−3). When these 14 loci andTLR7were considered, all individuals hemizygous (n=20) or homozygous (n=5) for pLOF or bLOF variants were patients (OR=39.19 [95%CI:5.2-5037.0],P=4.7×10−7), who also showed an enrichment in heterozygous variants (OR=2.36 [95%CI:1.0-5.9],P=0.02). Finally, the patients with pLOF or bLOF variants at these 15 loci were significantly younger (mean age [SD]=43.3 [20.3] years) than the other patients (56.0 [17.3] years;P=1.68×10−5).ConclusionsRare variants of TLR3- and TLR7-dependent type I IFN immunity genes can underlie life-threatening COVID-19, particularly with recessive inheritance, in patients under 60 years old.

FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais A mucosa bucal é composta por diversos microrganismos como bactérias e leveduras, ao entrar em desequilíbrio neste microambiente podem causar infeções. Microrganismos patogênicos possuem a capacidade formar biofilme em superfície rígida como os dentes, que podem disseminar para outros órgãos através da corrente sanguínea, essas infecções são agravadas em imunodeprimidos e em pacientes hospitalizados. Ainda assim, alguns isolados fúngicos possuem a capacidade de produzirem fatores de virulência importantes que favorecem o processo infeccioso, como expressão de enzimas. Além disso, a utilização de antifúngicos por longos períodos podem induzir a resistência às drogas usuais e gerar falha terapêutica, além de alta toxicidade para o hospedeiro, que dificulta o tratamento. Nesse contexto, Artabotrys brachypetalus Benth. tem sido utilizada na medicina popular para tratamento de infecções bacterianas, malária, inchaço ganglionar, dentre outras, através do uso de infusões com cascas, raiz e folhas dessa planta. O uso de produtos naturais nos proporciona uma eficácia no tratamento de infecções com efeitos colaterais minimizados. O objetivo desse estudo foi avaliar o perfil químico e a atividade antimicrobiana, antibiofilme e antivirulência do extrato bruto e frações de A. brachypetalus frente a bactérias causadores de cárie, doença periodontal e leveduras do Candida spp., bem como sua toxicidade. Foram avaliadas a concentração inibitória mínima (CIM) e a concentração bactericida mínima (CBM), e concentração fungicida mínima de Candida spp. (CFM), a capacidade de inibir (CIMB50) e/ou erradicar (CEMB50) o biofilme pré-formados, a capacidade de reduzir e/ou inibir a expressão exoenzimática por Candida sp. Por fim, tratou-se da toxicidade das amostras em modelo in vivo de C. elgans. A análise de LC-MS das frações mais ativas revelou a presença de metabólitos como alcalóides, flavonóides, terpenos e ácidos graxos. O extrato etanólico da raiz apresentou os melhores resultados, sendo fungicida para C. glabrata com CIM e CFM de 375 µg/mL. Para inibição da formação de biofilme, CIMB50 e IC50 de 1,46 e 1,59 µg/mL foram obtidos para C. glabrata, enquanto a erradicação do biofilme apresentou resultado de IC50 de 0,00028 µg/mL frente a C. tropicalis. Ao promover a expressão de exoenzimas redutoras (½ MIC) das amostras, foi verificado, uma atividade hemolítica significativa de 42,7% (p ≤ 0,03) frente a C. albicans. Para fosfolipase uma redução de 15,03% (p ≤ 0,03) na fração diclorometano para C. albicans. Para proteinase, redução de 35,8% (p ≤ 0,03) frente a C. tropicalis. O extrato etanólico da raiz demonstrou sobrevivência acima de 50% em concentrações acima de 1000µg/mL para C. elegans. Podemos concluir com os extratos e frações de A. brachypetalus apresenta baixa toxicidade em ensaios realizados com C. elegans e alto potencial antifúngico, antibiofilme e antivirulência contra Candida sp. The oral mucosa is composed of several microorganisms such as bacteria and yeasts, when they get out of balance, these can cause infections. Pathogenic microorganisms have the ability to form biofilms on a hard surface like as teeth, causing inflammatory processes that can spread to other organs through the bloodstream, these infections are aggravated in immunocompromised and hospitalized patients. Still some isolates have the ability to produce important virulence factors that favor the infectious process and make treatment difficult, such as enzyme expression. This difficulty implies the use of drugs for long periods, inducing resistance to the usual drugs, in addition to high toxicity to the host, which makes treatment difficult. In this context, Artabotrys brachypetalus Benth. has been used in folk medicine for the treatment of some diseases such as bacterial infections, malaria, larvicide, lymph node swelling, among others through infusions with bark, root and leaves of the plant. The use of natural products provides us with an effectiveness in the treatment of infections with minimized. The objective of this study was to analyze the effectiveness of the root extract and fractions of A. brachypetalus against bacteria to causing caries and periodontal disease and Candida sp. Minimum inhibitory concentration (MIC) and minimum bactericidal concentration (MBC) and minimum fungicide concentrations (MFC) and the ability to inhibit and/or eradicate preformed biofilm in extracts with MIC < 100µg/mL and >1000µg/mL were evaluated. The ability to reduce and/or inhibit exoenzymatic expression by Candida sp. Finally, the toxicity of the samples was analyzed using the methodology of C. elgans. The L-CMS analysis of the most active fractions revealed the presence of metabolites such as alkaloids, flavonoids, terpenes and fatty acids. The ethanolic extract of the root showed the best results, being CFM fungicidal for C. glabrata with MIC and CFM of 375 µg/ml. For inhibition of biofilm formation, CIMB50 and IC50 of 1.46 and 1.59 µg/ml were obtained against C. glabrata, while biofilm eradication resulted in IC50 of 0.00028 µg/ml against C. tropicalis. By promoting the expression of reducing exoenzymes (½MIC) from the samples, or root extract, a significant hemolytic activity of 42.7% (p ≤0.03) against C. albicans. For phospholipase a 15.03% (p ≤ 0.03) reduction of phospholipase to dichloromethane against C. albicans. For proteinase, reduction of 35.8% (p ≤ 0.03) against C. tropicalis. The ethanolic extract of the root showed survival above 50% at concentrations above 1000µg/mL. We can conclude that the extracts and fractions of A. brachypetalus show low toxicity in assays performed with C. elegans and high antifungal, antibiofilm and antivirulence potential against Candida sp. Dissertação (Mestrado) 2024-10-01

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CAPÍTULO II, RESUMO: O carrapato do boi Rhipicephalus microplus é uma espécie amplamente distribuída em regiões tropicais e subtropicais do mundo responsável por prejuízos elevados à cadeia produtiva de bovinos. Diante disso, o conhecimento dos aspectos biológicos e ecológico desse carrapato em cada região de sua ocorrência são fundamentais para estabelecer estratégias de controle desse ectoparasito. O objetivo desse estudo foi descrever aspectos da biologia e ecologia desse carrapato na região do Triângulo Mineiro. Foi feita, por dois anos, a avaliação da fase não parasitária desse carrapato sob condições naturais em pasto e mata e sob condições controladas em laboratório (estufa BOD). E avaliação da fase parasitária através de contagens de carrapatos em novilhas mestiças Gir x Holandês naturalmente infestadas, por três anos consecutivos. No pasto as taxas médias de eclosão variaram de 1% a 99,4%, resultando em 31 a 3678,1 larvas produzidas por fêmea ingurgitada, o período de incubação variou entre 33,9 e 72,4 e a sobrevivência das larvas variou de 23,5 dias a 111,5 dias. Na mata, taxa de eclosão média foi de 15,8 % a 99,2%, número de larvas produzidos por fêmea foi entre 587,2 e 3640,8, com período de incubação variando entre 38,3 dias e 80,2 dias e sobrevivência larval de 59,5 dias a 130,5. Na BOD, os parâmetros foram mais constantes com a taxa de eclosão média variando de 89,7% a 99,7%, número de larvas produzidos por fêmea de 2206,2 a 3338,4, período de incubação de 20,6 a 21,5 e a sobrevivência de 81,8 dias a 91,0 dias. As condições ambientais mais favoráveis aos carrapatos foram observadas na primavera e no verão. Em contrapartida o período entre final de maio e início de setembro foram deletérios aos carrapatos evidenciados pelas baixas taxas de eclosão e consequente reduzido número de larvas produzidos por fêmea. O microambiente na mata forneceu certa proteção aos carrapatos quando as condições foram adversas, resultando em uma taxa de eclosão superior à aos dos carrapatos da mesma série no pasto. Com relação a infestação nos bovinos quando observadas as médias de infestação ao longo dos anos observou-se cinco picos de infestação, evidenciando cinco gerações de carrapato por ano reforçando o potencial de número de gerações anuais das observações da fase não parasitária. Os picos de infestação ocorreram no meio do verão (janeiro), início do outono (março/abril), final do outono (maio/junho), início da primavera (setembro) e no término da primavera (novembro). Com os dados obtidos propõe-se uma alternativa de controle estratégico iniciando uma série de tratamentos acaricidas com a entrada da primeira frente fria entre maio e junho. A hipótese a ser testada nesta proposta é uma eficácia superior no controle de carrapatos ao se atingir a última geração de carrapatos nos bovinos com acaricidas e submetendo os sobreviventes, fêmeas e posteriormente suas massas de ovos, ao ambiente mais inóspito (frio e seca crescentes) em um efeito aditivo, talvez sinérgico de controle. CAPÍTULO III, RESUMO: O carrapato Amblyomma sculptum é típico do Cerrado brasileiro e trata-se de uma das espécies brasileiras mais agressivas aos seres humanos. Essa espécie é importante na saúde pública por ser o vetor do agente causador da Febre Maculosa Brasileira para humanos. Diante da necessidade de conhecer os aspectos da biologia desse carrapato visando controle, o objetivo desse trabalho foi descrever e comparar aspectos da biologia das fases não parasitárias de A. sculptum em condições naturais e laboratoriais. Mensalmente larvas, ninfas e fêmeas ingurgitados foram alocados em três ambientes distintos, uma área de pasto de Brachiaria (Syn. Urochloa) decumbens, uma área de mata adjacente ao pasto e um ambiente controle em estufa BOD no laboratório. Em condições naturais os períodos de pré-ecdise mais prolongados referentes a larvas e ninfas ingurgitadas foram associados aos menores valores médios de temperatura ambiental e os mais curtos com o aumento da temperatura ambiental. Na época mais quente do ano o período pré-ovipostura e de incubação também foram acelerados em relação aos períodos mais frios nos dois ambientes naturais. Constatou-se que a sobrevida média de ninfas e adultos pode chegar a 274,6 dias e 491,6 dias, respectivamente, dependendo do local e mês e alocação dos instares ingurgitados no ambiente. A mata exerceu um efeito tampão contra os extremos de temperatura e umidade, mais bem evidenciado pelas taxas de eclosão superiores em relação ao pasto. Tanto no pasto quanto mata a diapausa comportamental foi evidente, e as larvas eclodidas entre os meses de outubro a março permaneciam em diapausa até final de março ou início de abril. O maior período médio de diapausa observado nesse estudo foi de 180,0 dias, obtido por carrapatos alocados na mata. Foi também observado o comportamento de movimentação vertical das larvas infestantes e contatou-se que elas se moviam no sentido do topo do caule no período em que a umidade relativa do ar era mínima e a temperatura máxima e a dispersão dessas larvas ao longo da superfície horas após o início do aumento da temperatura e redução da umidade relativa. CAPÍTULO IV, RESUMO: Os carrapatos são um dos maiores entraves na cadeia produtiva de bovinos no Brasil, principalmente em rebanhos taurinos e seus cruzamentos. Para um controle adequado é necessário conhecer as variáveis populacionais dos carrapatos e de intercâmbio das espécies dos parasitas entre hospedeiros nas regiões de interesse uma vez que isso pode variar de local para local. Esse estudo teve como objetivo avaliar a infestação natural por carrapatos em bovinos leiteiros e equinos de seis fazendas produtoras de leite da região do Triângulo Mineiro, Minas Gerais e diagnosticar a resistência a acaricidas disponíveis comercialmente do carrapato do boi, Rhipicephalus microplus. Em duas dessas fazendas foram realizadas coletas mensais de carrapatos e nas outras quatro contagens sazonais (a cada três meses). Na fazenda experimental do Glória, foram 36 meses de avaliação, sendo realizadas 540 inspeções de bovinos e 48185 carrapatos coletados, sendo o R. microplus a única espécie encontrada. Na Fazenda do Instituto Federal do Triângulo Mineiro, foram feitas 315 inspeções de bovinos em 21 meses de coleta, sendo coletados 12570 (99,95%) R. microplus e seis (0,05%) Amblyomma sculptum. Na Fazenda Joinha, foram feitas 120 inspeções de bovinos em oito ocasiões e coletados 6515 R. microplus. Na Fazenda São Lucas foram feitas 95 inspeções de bovinos, em oito coletas, sendo obtidos 9382 (97,8%) R. microplus e 215 (2,2%) A. sculptum. Na Fazenda Morro da Mesa, foram feitas 22 inspeções de bovinos em cinco avaliações, sendo obtidos 1293 (99,5%) R. microplus e 7 (0,5%) A. sculptum. Na Fazenda Madrinha Medalha, foram feitas 13 inspeções de bovinos em quatro coletas, sendo obtidos 541 (99,6%) R. microplus e 2 (0,4%) A. sculptum. Nas contagens mensais de carrapatos realizadas na Fazenda Experimental do Glória pôde-se constatar que R. microplus pode ter até cinco picos anuais de infestação na região do Triângulo Mineiro. Foi detectada resistência do carrapato R. microplus a três dos cinco produtos acaricidas testados e, exclusivamente, na Fazenda Joinha, a todos os produtos testados. Esta resistência elevada na fazenda Joinha estava associada ao uso constante de acaricidas. Em cinco das fazendas foram realizadas 133 inspeções de equinos e encontrados três espécies de carrapatos, Dermacentor nitens, A. sculptum e R. microplus. Na Fazenda Experimental do Glória foram encontrados apenas carrapatos R. microplus, na Fazenda do Instituto Federal do Triângulo Mineiro R. microplus e A. sculptum. Nas fazendas restantes as três espécies de carrapatos foram encontradas. De maneira geral as infestações de equinos por carrapatos foram bem reduzidas. As infestações por A. sculptum em bovinos e equinos foram caracterizadas pela ocorrência sazonal dos diversos estágios, com larvas no outono, ninfas no outono e inverno e adultos na primavera e verão. CHAPTER II, ABSTRACT: The cattle tick Rhipicephalus microplus is widely distributed in tropical and subtropical regions of the world, responsible for high losses to the cattle production. Therefore, knowledge of the biological and ecological aspects of this tick in each region are essential to establish control strategies. The objective of this study was to describe biology and ecology aspects of this tick in the Triângulo Mineiro region. An evaluation of the non-parasitic phase of this tick was carried out for two years under natural conditions in pasture and forest and under controlled laboratory conditions. Additionally an evaluation of the parasitic phase through tick counts on naturally infested Gir x Holstein crossbred heifers, for three consecutive years was conducted. In pasture, the average egg hatching rates ranged from 1% to 99.4%, resulting in 31 to 3678.1 larvae produced per engorged female, the incubation period ranged from 33.9 to 72.4 days and the survival of the larvae ranged from 23.5 days to 111.5 days. In the forest, the average hatching rate was of 15.8% to 99.2%, the number of larvae produced per female was between 587.2 and 3640.8, with an incubation period ranging from 38.3 days to 80.2 days. and larval survival of from 59.5 to 130.5 days. In laboratory, the parameters were more constant with the average hatching rate varying from 89.7% to 99.7%, number of larvae produced per female from 2206.2 to 3338.4, incubation period from 20.6 to 21 .5 days and survival from 81.8 days to 91.0 days. The most favorable environmental conditions for ticks were observed in spring and summer. On the other hand, the period between late May and early September were deleterious to ticks, as shown by the low hatching rates and reduced number of larvae produced per female. The microenvironment in the forest provided some protection to ticks when conditions were adverse, resulting in a higher hatching rate than ticks of the same series in the pasture. Regarding infestation of cattle, five infestation peaks of infestation were observed per year, indicating five generations of ticks per year, reinforced by the the potential number of annual generations of the observations of the non-parasitic phase. Infestation peaks occurred in mid-summer (January), early autumn (March/April), late autumn (May/June), early spring (September) and late spring (November). With the data obtained, an alternative of strategic control is proposed, starting a series of acaricide treatments with the entrance of the first cold front between May and June. The hypothesis to be tested in this proposal is a superior efficacy in the control of ticks by hitting the last generation of ticks on cattle with acaricides and submitting the survivors, females and later their egg masses, to the most inhospitable environment (increasing cold and drought) in an additive, perhaps synergistic, control effect. CHAPTER III, ABSTRACT: The tick Amblyomma sculptum is typical to the Cerrado biome and one of the most aggressive Brazilian species to humans. This species is important for public health because it transmits the Brazilian Spotted Fever agent to humans. Therefore, there is the need to know aspects of the biology of this tick for control purposes. We herein describe and compare aspects of the biology of the non-parasitic phases of A. sculptum under natural and laboratory conditions. Monthly, engorged larvae, nymphs and females were allocated to three different environments, a Brachiaria (Syn. Urochloa) decumbens pasture area, a forested area adjacent to the pasture and a control environment in the laboratory. Under natural conditions, the longest pre-ecdysis periods for engorged larvae and nymphs were associated with the lowest means of environmental temperature and the shortest with increasing environmental temperature. In the hottest time of the year, the pre-oviposition and incubation period were also accelerated in relation to the coldest periods in both natural environments. The average survival of nymphs and adults reached 274.6 days and 491.6 days, respectively, depending on the place and month and allocation of engorged instars in the environment. The forest exerted a buffering effect against extremes of temperature and humidity, best evidenced by the higher hatching rates compared to pasture. In both pasture and forest, behavioral diapause was evident, and the larvae hatched between October and March remained in diapause until late March or early April. The longest average period of diapause observed in this study was of 180.0 days, seen in ticks allocated in the forest. The vertical movement of the infesting larvae was also studies and it was found that they moved towards the top of the stem in the period when the relative humidity of the air was minimum and the temperature at the maximum of the day and the dispersion of these larvae along the surface occurred hours after the start of temperature increase and relative humidity decrease. CHAPTER IV, ABSTRACT: Ticks are one of the biggest constrains for the dairy production in Brazil, especially in taurine herds and their crosses. For adequate control, it is necessary to know the population variables of ticks and parasite species exchange of between hosts in the regions of interest since this can vary from place to place. This study aimed to evaluate the natural infestation by ticks in dairy cattle and horses from six dairy farms in the Triângulo Mineiro region, Minas Gerais, and to evaluate the resistance to commercially available acaricides of the cattle tick, Rhipicephalus microplus. In two of these farms, ticks were collected monthly and in the other four counts were seasonal (every three months). Counts of the Glória Experimental Farm lasted 36 months, with 540 inspections of cattle and 48,185 R. microplus ticks collected. At the Farm of the Instituto Federal do Triângulo Mineiro, 315 cattle inspections were carried out in 21 collections that resulted in 12570 (99.95%) R. microplus and six (0.05%) Amblyomma sculptum. At Joinha Farm, 120 cattle inspections were carried out on eight occasions and 6515 R. microplus were collected. At São Lucas Farm, 95 cattle inspections were carried out, in eight collections, with 9382 (97.8%) R. microplus and 215 (2.2%) A. sculptum collected. At Morro da Mesa Farm, 22 cattle inspections were carried out in five assessments, with 1293 (99.5%) R. microplus and 7 (0.5%) A. sculptum collected. At Madrinha Medalha Farm, 13 cattle inspections were carried out in four collections, with 541 (99.6%) R. microplus and 2 (0.4%) A. sculptum collected. The monthly tick counts at the Glória Experimental Farm showed that R. microplus can have up to five annual peaks of infestation in the Triângulo Mineiro region. Resistance of the tick R. microplus was detected to three of the five acaricide products tested and, exclusively, at Joinha Farm, to all products tested. This high resistance observed in the Joinha Farm was associated with the constant use of acaricides. In five of the farms, 133 equine inspections were carried out and three species of ticks were found, Dermacentor nitens, A. sculptum and R. microplus. In Glória Experimental Farm, only R. microplus ticks were found, in the Farm of the Federal Institute of the Triângulo Mineiro R. microplus and A. sculptum. On the remaining farm the three tick species were found. In general, equine tick infestations were very low. Infestations by A. sculptum in cattle and horses were characterized by the seasonal occurrence of different stages, with larvae in autumn, nymphs in autumn and winter and adults in spring and summer. Tese (Doutorado)

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEMIG - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de Minas Gerais FAPESP - Fundação de Amparo a Pesquisa do Estado de São Paulo O vírus Chikungunya (CHIKV), agente causador da febre Chikungunya, é transmitido principalmente pela picada de mosquitos hematófagos do gênero Aedes. A doença é caracterizada por sintomas como artralgias e poliartralgias debilitantes, as quais podem permanecer por meses ou anos. Até o momento, não existem medicamentos antivirais disponíveis para tratar as manifestações do CHIKV. Neste contexto, a Imidazolnaftiridina (RO8191) é um composto sintético com atividade antiviral previamente documentada contra o Hepacivirus C (HCV) e o Zika vírus (ZIKV), porém, a atividade anti-CHIKV do RO8191 ainda não foi elucidada. Portanto, este trabalho teve como objetivo avaliar os efeitos do RO8191 na infecção por CHIKV in vitro, utilizando o CHIKV-nanoluc, uma construção viral inserida de um gene reporter (-nanoluc), para infectar células de rim de hamster bebê (BHK-21). A análise de viabilidade celular foi avaliada por meio de ensaios de MTT e a taxa de infectividade pela quantificação de luminescência. Ensaios de adição do composto em diferentes estágios do ciclo replicativo do CHIKV foram realizados, bem como células BHK-CHIKV-NCT, que expressam proteínas não estruturais do CHIKV e os genes Renilla luciferase e EGFP, também foram utilizadas para avaliar o efeito do RO8191 na replicação viral. O RO8191 inibiu fortemente a replicação do CHIKV com um índice de seletividade (SI) de 12,3 e 18,7 em células BHK-21 e BHK-CHIKV-NCT, respetivamente. Além disso, o composto inibiu todos os estágios virais avaliados, com maiores taxas de inibição nas etapas viricida (75,4%) e pós-tratamento (87%). RO8191 é um agonista do IFN-α, e para avaliar o efeito independente dessa via, os ensaios também foram realizados em células VERO-E6, que não expressam os genes que codificam interferons tipo I (IFN-I-/-). Como resultado, RO8191 demonstrou um SI de 37,3 apresentando efeito em todas as etapas, principalmente na virucida (70,5%) e pós-tratamento (91,6%). Ensaios de espectroscopia de infravermelho (ATR-FTIR) e experimentos de ancoragem molecular foram realizados e demonstraram interações de RO8191 principalmente com as glicoproteínas do CHIKV. Os resultados aqui apresentados enfatizam o potencial anti-CHIKV do RO8191, o qual pode ser futuramente capitalizado como uma alternativa terapêutica para o tratamento da febre Chikungunya. The Chikungunya virus (CHIKV), the causative agent of Chikungunya fever, is transmitted mainly by the bite of hematophagous mosquitoes of the Aedes genus. The disease is characterized by symptoms such as disabling arthralgias and polyarthralgia, which can persistent for months or years. Up to date, there are no antiviral drugs available to treat CHIKV manifestations. In this context, Imidazolnaphtyridine (RO8191) is a compound with antiviral activity previously reported against the Hepacivirus C (HCV) and Zika virus (ZIKV), however, the anti-CHIKV activity of RO8191 has not yet been elucidated. Therefore, this work aimed to evaluate the effects of RO8191 on CHIKV infection in vitro, employing CHIKV-nanoluc, a viral construct inserted of a reporter gene (-nanoluc), to infect baby hamster kidney cells (BHK-21). Cell viability analysis was evaluated through MTT assays and infectivity rates through luminescence assays. We developed time of drug-addition assays in different stages of the CHIKV replicative cycle, as well as BHK-CHIKV-NCT cells, that express CHIKV non-structural proteins and Renilla luciferase and EGFP reporters, were also used to analyze the effects of RO8191 on viral replication. RO8191 strongly inhibits the CHIKV replication with a selectivity index (SI) of 12.3 and 18.7 in BHK-21 and BHK-CHIKV-NCT cells, respectively. Additionally, the compound inhibited all viral stages evaluated, with higher rates of inhibition in viricidal (75.4%) and post-treatment (87%). Due to the IFN-α agonism by RO8191, and to analyze an independent of this pathway effect, assays were also developed all employing VERO-E6 cells, which do not encode type I interferons (IFN-I-/-). As a result, RO8191 presented SI of 37.3 and had effects in all viral replication steps, but mainly in viricidal (70.5%) and post-treatment (91.6%) assays. Infrared spectroscopy assays (ATR-FTIR) and molecular docking experiments were carried out and demonstrated interactions mainly between RO8191 and CHIKV glycoproteins. Our data highlights the anti-CHIKV potential exerted by RO8191, that could be future capitalized as an alternative treatment against Chikungunya fever. Dissertação (Mestrado) 2024-10-10

Os testes sorológicos para o diagnóstico da infecção por Toxoplasma gondii têm limitações para diferenciar a infecção aguda da infecção crônica, o que é importante para determinar o manejo clínico e o tratamento de mulheres grávidas e indivíduos imunocomprometidos com toxoplasmose. No presente estudo, foram realizadas análises in sílico para caracterizar epítopos imunogênicos das proteínas SAG1, SAG2A, GRA1, GRA2, GRA3, GRA5, GRA6, GRA7, MAG1, BSR4 e CCp5A, as quais podem emergir como novas alternativas para melhorar o diagnóstico da toxoplasmose. Uma vez que as sequências proteicas foram recuperadas do banco de dados Toxodb, diferentes parâmetros foram calculados, incluindo características físico-químicas, valores de acessibilidade e antigenicidade. Alinhamento de sequências múltiplas, modelagem de estrutura 3D, refinamento e validação também foram realizados entre todos os 11 peptídeos. Considerando os resultados obtidos da combinação de todos os parâmetros analisados, pode-se concluir que os peptídeos das proteínas SAG1, GRA3 e BSR4 foram considerados os mais promissores, por serem estáveis, hidrofílicos, com valores significativos de antigenicidade e acessibilidade na superfície da proteína. Portanto, a aplicação destes peptídeos pode ser caracterizada como boas alternativas para a padronização de novos ensaios de imunodiagnóstico para toxoplasmose. Serological tests for the diagnosis of Toxoplasma gondii infection have limitations in differentiating acute from chronic infection, which is important in determining the clinical management and treatment of pregnant women and immunocompromised individuals with toxoplasmosis. Here, an in silico analysis was performed to characterize immunogenic epitopes of SAG1, SAG2A, GRA1, GRA2, GRA3, GRA5, GRA6, GRA7, MAG1, BSR4, and CCp5A proteins that may emerge as alternatives to improve the diagnosis of toxoplasmosis. Once the protein sequences were retrieved from the Toxodb database, different parameters were calculated including physicochemical characteristics, accessibility values, and antigenicity. Multiple sequence alignment, 3D structure modeling, refinement, and validation were also performed among all 11 peptides. Considering the results from the combination of all parameters analyzed, it can be concluded that the peptides of SAG1, GRA3, and BSR4 proteins were found to be stable, hydrophilic, with significant antigenicity values, and accessibility on the protein surface. Thus, the use of these peptides may suggest alternative measures for the design and standardization of new immunodiagnostic assays for toxoplasmosis. Dissertação (Mestrado)

A low grade and persistent inflammation, which is the hallmark of obesity, requires the participation of NLRP3 and cell death. During Mycobacterium tuberculosis infection, NLRP3 signaling is important for bacterial killing by macrophages in vitro, but was shown to be dispensable for host protection in vivo. We hypothesized that during obesity-tuberculosis comorbidity, NLRP3 signaling might play a detrimental role by inducing excessive inflammation. We employed a model of high fat diet-induced obesity, followed by M. tuberculosis infection in C57BL/6 mice. Obese mice presented increased susceptibility to infection and pulmonary immunopathology compared to lean mice. Using treatment with NLRP3 antagonist and Nlrp3

CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O tratamento convencional da toxoplasmose congênita tem poucas opções eficazes, mas os mais usados são drogas baseia-se principalmente na combinação de sulfadiazina e pirimetamina. No entanto, a terapia com esses medicamentos está associada a efeitos colaterais graves e resistência, exigindo o estudo de novas estratégias terapêuticas. Atualmente, existem muitos estudos com produtos naturais, incluindo o óleo de Copaifera, mostrando ação contra alguns patógenos como Trypanosoma cruzi e Leishmania. No presente estudo, investigamos os efeitos do extrato etanólico das folhas e da oleorresina de Copaifera multijuga contra Toxoplasma gondii em células trofoblásticas vilosas humanas (BeWo) e extravilosas (HTR8/SVneo), bem como em explantes de vilosidades humanas de terceiro trimestre gestacional. Com este propósito, ambas as células e explantes vilosos foram infectados ou não com T. gondii, tratados com extrato etanólico ou oleorresina de C. multijuga e analisadas quanto à toxicidade celular, proliferação parasitária, produção de citocinas e ROS. Paralelamente, ambas as células foram infectadas por taquizoítos pré-tratados com extrato etanólico ou oleorresina, e observou-se adesão, invasão e replicação do parasito. Nossos resultados mostraram que o extrato e a oleorresina não desencadearam toxicidade em pequenas concentrações e foram capazes de reduzir a proliferação intracelular de T. gondii em células previamente infectadas. Além disso, extrato etanólico e oleorresina demonstraram ação antiparasitária irreversível em células BeWo e HTR8/SVneo. Em seguida, a adesão, invasão e replicação de T. gondii foram atenuadas quando células BeWo ou HTR8/SVneo foram infectadas com taquizoítos pré-tratados. Finalmente, células BeWo infectadas e tratadas regularam positivamente a IL-6 e modularam negativamente a IL-8, enquanto as células HTR8/SVneo não alteraram significativamente essas citocinas quando infectadas pelo parasito. Finalmente, o extrato etanólico e a oleorresina reduziram a proliferação de T. gondii em explantes de vilosidades humanas, e provavelmente esse efeito é um mecanismo de ação direta sobre os parasitos. Assim, compostos de C. multijuga apresentaram diferentes atividades antiparasitárias de forma dependente da população trofoblástica, sendo a ação direta sobre os taquizoítos um mecanismo comum operando em ambas as células. Considerando todos esses parâmetros, o extrato etanólico e a oleorresina de C. multijuga podem ser alvos para o estabelecimento de uma nova estratégia terapêutica para a toxoplasmose congênita. Conventional treatment of congenital toxoplasmosis has few effective options, but the most used are drugs based mainly on the combination of sulfadiazine and pyrimethamine. However, therapy with these drugs is associated with severe side effects and resistance, requiring the study of new therapeutic strategies. Currently, there are many studies with natural products, including Copaifera oil, showing action against some pathogens such as Trypanosoma cruzi and Leishmania. In the present study, we investigated the effects of ethanol extract from leaves and oleoresin of Copaifera multijuga against Toxoplasma gondii in human villous (BeWo) and extravillous (HTR8/SVneo) trophoblastic cells, as well as in third trimester human villous explants. For this purpose, both cells and villous explants were infected or not with T. gondii, treated with ethanol extract or oleoresin from C. multijuga and analyzed for cellular toxicity, parasite proliferation, cytokine and ROS production. In parallel, both cells were infected by tachyzoites pre-treated with ethanol extract or oleoresin, and adhesion, invasion and parasite replication were observed. Our results showed that the extract and oleoresin did not trigger toxicity at low concentrations and were able to reduce intracellular proliferation of T. gondii in previously infected cells. In addition, ethanol extract and oleoresin demonstrated irreversible antiparasitic action on BeWo and HTR8/SVneo cells. Then, T. gondii adhesion, invasion and replication were attenuated when BeWo or HTR8/SVneo cells were infected with pre-treated tachyzoites. Finally, infected and treated BeWo cells up-regulated IL-6 and down-modulated IL-8, while HTR8/SVneo cells did not significantly alter these cytokines when infected by the parasite. Finally, the ethanol extract and oleoresin reduced the proliferation of T. gondii in human villi explants, and this effect is probably a direct mechanism of action on the parasites. Thus, compounds from C. multijuga showed different antiparasitic activities in a trophoblastic population-dependent manner, with the direct action on tachyzoites being a common mechanism operating in both cells. Considering all these parameters, the ethanolic extract and the oleoresin from C. multijuga can be targets for the establishment of a new therapeutic strategy for congenital toxoplasmosis. Dissertação (Mestrado)

O v?rus sincicial respirat?rio (VSR) ? considerado a principal causa de infec??es respirat?rias na inf?ncia. A secre??o de citocinas pr?-inflamat?rias pode contribuir para o dano das vias a?reas causado pela infec??o por VSR. Portanto, apesar dos macr?fagos terem um papel importante contra os pat?genos inalados, eles tamb?m desempenham um papel crucial no desenvolvimento de doen?as graves durante a infec??o das vias a?reas. Estudos mostram que a necrose pode apresentar regula??o, por meio de vias de sinaliza??o e mecanismos enzim?ticos mediados pelo TNF, quando a apoptose ? inibida. Desta forma, este tipo de morte celular vem a ser conhecida como necrose programada ou necroptose, caracterizando-se por ser um processo regulado induzido pela ativa??o de receptores de morte e depende da ativa??o de um complexo constitu?do pelas prote?nas RIPK1, RIPK3 e MLKL. Conhecendo esses estudos, a hip?tese deste trabalho ? que durante a infec??o pelo VSR, o v?rus estimule a secre??o de TNF por macr?fagos e que, de maneira aut?crina, o TNF induza a morte por necrose programada destes macr?fagos via sinaliza??o de RIPK1, RIPK3 e MLKL. Desta forma, a destrui??o celular excessiva produzida pelo v?rus, pela resposta do hospedeiro, ou ambas, al?m de amplificar a inflama??o. Para testar nossa hip?tese, inicialmente mostramos que o VSR ? capaz de induzir a morte por necrose de macr?fagos alveolares e peritoneais. Este efeito depende da concentra??o do v?rus e do tempo de infec??o, bem como da capacidade do v?rus se replicar. O VSR isolado de lavado nasal de pacientes tamb?m foi capaz de induzir necrose em macr?fagos e mon?citos. O v?rus estimulou a produ??o de TNF, esta citocina rec?m sintetizada pelos macr?fagos foi necess?ria para o efeito na morte celular. O tratamento de macr?fagos com anticorpo neutralizante anti-TNF reduziu significativamente a necrose induzida por VSR e os macr?fagos TNFR1 KO foram resistentes ? necrose induzida por VSR. O tratamento de c?lulas com NEC-1, GW e NSA, inibidores espec?ficos de RIPK1, RIPK3 e MLKL, respectivamente, reduziu o efeito do VSR na necrose de macr?fagos, indicando ser necroptose. Al?m disso, a deple??o de macr?fagos alveolares diminuiu a perda de peso e a carga viral no pulm?o de animais infectados com VSR. Alternativamente, medimos o TNF no lavado nasal de pacientes pedi?tricos hospitalizados por bronquiolite viral. Observamos que os pacientes VSR positivos apresentaram aumento da secre??o de TNF quando comparados aos infectados por outros v?rus respirat?rios. Com esses dados, demonstramos que a morte de macr?fagos induzida por VSR foi mediada pela secre??o de TNF e que depende da ativa??o de RIPK1, RIPK3 e MLKL. Respiratory syncytial virus (RSV) is considered the main cause of respiratory infections during childhood. The secretion of pro-inflammatory cytokines may contribute to the damage of airways caused by RSV infection. Although macrophages have a sentinel role against inhaled pathogens, it seems that they also play a crucial role in the development of severe disease during airway infection. Previous studies have shown that necrosis may be regulated through the activation of signaling pathways mediated by TNF when apoptosis is inhibited. Therefore, programmed necrosis (or necroptosis), is a regulated process induced by the activation of death receptors and it depends on the activation of a complex consisting of RIPK1, RIPK3 and MLKL proteins. Therefore, the hypothesis of this study is that during RSV infection, the virus stimulates TNF secretion by macrophages and that, in an autocrine manner, TNF induces programmed necrosis by macrophages via RIPK1, RIPK3 and MLKL signaling. Here we showed that RSV is capable of inducing death by necrosis of alveolar and peritoneal macrophages. This effect is dependent on virus concentration and time of infection, as well as replicative activity of RSV. RSV stimulates TNF production by macrophages and TNF secretion is necessary for the effect of RSV on cell death. Treatment of macrophages with neutralizing anti-TNF antibody significantly reduced necrosis induced by RSV. Likewise, TNFR1 KO macrophages were resistant to RSV-induced necrosis. Treatment of cells with the selective necroptosis inhibitors NEC-1, GW-42X and NSA, suppressed RSV effect on macrophage necrosis, indicating that RSV triggers macrophage necroptosis. In addition, depletion of alveolar macrophages decreased weight loss and viral load in the lung of animals infected with RSV. Also, we measured TNF in the nasal wash of pediatric patients hospitalized for RSV bronchiolitis. We observed that RSV-positive patients presented higher levels of TNF in their nasal washes when compared to those infected by other respiratory viruses. With these data, we demonstrate that RSV-induced macrophage necroptosis was mediated by autocrine TNF and was dependent on the activation of RIPK1, RIPK3 and MLKL. Moreover, macrophage necroptosis plays a detrimental role during RSV infection in vivo. Coordena??o de Aperfei?oamento de Pessoal de N?vel Superior - CAPES

This study addresses the Mansonellas which are among the most common causes of blood parasites and are widely distributed throughout Africa and Latin America. Given this context, this work aims to discuss the immunomodulation produced by mansonellosis and its implication in the immune reaction against different vaccine antigens. In order to achieve this objective, a methodology was used for the bibliographic research with the help of the websites Biblioteca Virtual de Saúde, Scielo – Scientific Electronic Library Online, Lilacs – Centro Latino-Americano e do Caribe de Informação em Ciências da Saúde and NIH. -NCBI-Pubmed – National Center for Biotechnology Information – National Library of Medicine. The following descriptors were used on these sites: Filaria, Immunology, Mansonelas and Vaccine. Immunomodulation produced by filarial nematodes predisposes them to spread to other non-filarial antigens. Thus, filarial infection may have a profound implication in the immune reaction against other antigens, be they vaccines, environmental allergens or other infections. Thus, immunosuppression seems to be the key in chronic filarial infections, where different highly effective mechanisms are used by the parasites to promote their survival. As a result, these infections end up presenting an extremely relevant characteristic, which is their propensity to induce regulatory effects on a variety of immune responses, including responses to vaccines and other infectious agents. Este estudio aborda las Mansonellas, que se encuentran entre las causas más comunes de parásitos sanguíneos y están ampliamente distribuidas en África y América Latina. En este contexto, este trabajo tiene como objetivo discutir la inmunomodulación producida por la mansonelosis y su implicación en la reacción inmune frente a diferentes antígenos vacunales. Para lograr este objetivo, se utilizó una metodología para la investigación bibliográfica con la ayuda de los sitios web Biblioteca Virtual de Saúde, Scielo – Scientific Electronic Library Online, Lilacs – Centro Latino-Americano e do Caribe de Informação em Ciências da Saúde y NIH -NCBI-Pubmed – Centro Nacional de Información Biotecnológica – Biblioteca Nacional de Medicina. En estos sitios se utilizaron los siguientes descriptores: Filaria, Inmunología, Mansonelas y Vacuna. La inmunomodulación producida por los nematodos filariales los predispone a propagarse a otros antígenos no filariales. Por tanto, la infección por filarias puede tener una profunda implicación en la reacción inmunitaria frente a otros antígenos, ya sean vacunas, alérgenos ambientales u otras infecciones. Así, la inmunosupresión parece ser la clave en las infecciones crónicas por filarias, donde los parásitos utilizan diferentes mecanismos altamente efectivos para promover su supervivencia. Como resultado, estas infecciones terminan presentando una característica sumamente relevante, que es su propensión a inducir efectos reguladores sobre una variedad de respuestas inmunes, incluidas las respuestas a vacunas y otros agentes infecciosos. Este estudo aborda as Mansonellas que estão entre as causas mais comuns de parasitoses sanguíneas e encontram-se amplamente distribuídas em toda a África e América Latina. Diante deste contexto, este trabalho tem como objetivo dissertar sobre a imunomodulação produzida por mansonelose e sua implicação na reação imune contra diferentes antígenos vacinais. Para que fosse possível o alcance deste objetivo, foi utilizada a metodologia para a pesquisa bibliográfica com auxílio dos sites Biblioteca Virtual de Saúde, Scielo – Scientific Electronic Library Online, Lilacs – Centro Latino-Americano e do Caribe de Informação em Ciências da Saúde e NIH-NCBI-Pubmed – Centro Nacional de Informação Biotecnológica – Biblioteca Nacional de Medicina. Nestes sites foram utilizados os descritores: Filárias, Imunologia, Mansonelas e Vacina. A imunomodulação produzida por nematoides filariais predispõe a que se estenda a outros antígenos não-filariais. Assim, a infecção filarial pode ter profunda implicação na reação imune contra outros antígenos, sejam eles vacinas, alérgenos ambientais ou outras infecções. Desta forma, a imunossupressão parece ser a chave nas infecções crônicas por filárias, onde diferentes mecanismos altamente eficazes são utilizados pelos parasitos para promover sua sobrevivência. Com isso, essas infecções acabam apresentando uma característica extremamente relevante que é sua propensão em induzir efeitos regulatórios a uma variedade de respostas imunes, incluindo respostas a vacinas e outros agentes infecciosos.

Learning about the immune system adds skills enabling the student to acquire scientific literacy that promotes competence in exercising his citizenship and promoting health. The theme has a high level of abstraction required for demonstration and understanding of immunological processes, structures, and components. This abstraction can often compromise teaching and learning if the teacher does not seek the most efficient didactic ways to develop this theme. Through teaching by analogy with an investigative approach, one can seek to soften abstraction and promote the development of relevant skills that are consistent with the theme. Thus, this research aimed to develop an investigative didactic sequence (SDI) with the theme of the immune system through analogies with the production of a comic book (HQ). The target audience were students from the 3rd grade of high school at the Escola Estadual Professor Paulo Freire, in the city of Baía Formosa-RN. The research was carried out from July to August 2021. The SDI consisted of 11 stages, considering the study on defense cells and their actions against the new coronavirus (SARS-CoV-2) in analogy to the HQ of the League of Justice. The application was remote, through Google Meet, given the suspension of classes due to the COVID-19 pandemic. As products of this research, there is the comic, produced by the students, from the script, the creation of characters, structuring and editing, thus having an active role. In addition, a methodological guide was prepared, to record the didactic steps of using the HQ in the proposal presented here. The survey results were collected through questionnaires applied before and after the survey. Based on these results, it is concluded that the research objectives were achieved and that, therefore, the use of analogy, with the production of comics and the students being the protagonists, has a promising teaching-learning process for learning and development. Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Aprender sobre o sistema imunológico agrega habilidades possibilitando ao estudante uma alfabetização científica que o promova competente em exercer sua cidadania e a promoção à saúde. O tema possui um elevado nível de abstração exigido para demonstração e compreensão dos processos, estruturas e componentes imunológicos. Essa abstração, muitas vezes, pode comprometer o ensino e aprendizagem, caso o docente não busque os caminhos didáticos mais eficientes para desenvolver essa temática. Através do ensino por analogia com abordagem investigativa pode- se buscar amenizar a abstração e promover o desenvolvimento de habilidades relevantes e condizentes ao tema. Assim, esta pesquisa teve como objetivo desenvolver uma sequência didática investigativa (SDI) com a temática do sistema imunológico através de analogias com a produção de uma história em quadrinhos (HQ). O público-alvo foram estudantes da 3ª série do Ensino Médio da Escola Estadual Professor Paulo Freire, no município de Baía Formosa-RN. A pesquisa foi realizada no período de julho a agosto de 2021. A SDI constituiu-se de 11 etapas, considerando o estudo sobre as células de defesa e suas ações frente ao novo coronavírus (SARS-CoV-2) em analogia à HQ da Liga da Justiça. A aplicação foi remota, através do Google Meet, visto à suspensão das aulas devido à pandemia da COVID-19. Como produtos dessa pesquisa, tem-se a HQ, produzida pelas estudantes, desde o roteiro, a criação dos personagens, estruturação e edição, tendo-se assim um protagonismo atuante. Além, foi elaborado um guia metodológico, com o intuito de registrar os passos didáticos de uso da HQ na proposta aqui apresentada. Os resultados da pesquisa foram coletados através de questionários aplicados antes e depois da pesquisa. Com base nesses resultados, conclui-se que os objetivos da pesquisa foram alcançados e que, portanto, o uso de analogia, com produção de HQ e os estudantes sendo os protagonistas, tem-se um processo de ensino-aprendizagem promissor ao aprendizado e desenvolvimento de habilidades.

CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Zika vírus (ZIKV) é o agente etiológico da febre Zika, uma infecção transmitida por mosquitos, de disseminação global, e previamente associada a casos de microcefalia. Potenciais novos surtos por ZIKV são problemas prioritários para os órgãos governamentais, visto que as arboviroses são infecções facilmente disseminadas em regiões tropicais como o Brasil. De acordo com o Ministério da Saúde, o ZIKV representa um problema de saúde pública mundial, resultando em impactos social, econômico e no sistema público de saúde (SUS) significativos, uma vez que não há tratamento antiviral eficaz ou vacinas licenciadas. Nesse contexto, compostos naturais apresentam diversas atividades biológicas reportadas, como antioxidante, antiparasitária, antibacteriana e antiviral, bem com toxinas isoladas de serpentes têm demonstrado atividade contra diversos vírus. Neste trabalho, a atividade anti-ZIKV das Bothropstoxinas-I e II (BthTX-I e II) isoladas do veneno de Bothrops jararacussu foi investigada contra o ZIKV in vitro. Células Vero E6 foram infectadas com ZIKVPE243 na presença dos compostos por 72 horas, quando os focos de infecção foram quantificados. Os resultados demonstraram que BthTX-I e II apresentaram potente inibição dose-dependente da infecção pelo ZIKV, com índice de seletividade de 149,1 e 1,44 x 105, respectivamente. Essas toxinas inibiram principalmente os estágios iniciais do ciclo replicativo do vírus, como a entrada do ZIKV nas células hospedeiras, demonstrado pelo potente efeito virucida, sugerindo a ação dessas toxinas sobre as partículas virais. Adicionalmente, BthTX-I e II apresentaram atividade significativa nos estágios tardios do ciclo replicativo do ZIKV. Análises de docking molecular mostraram que BthTX-I e II potencialmente interagem com a proteína do Envelope do ZIKV através de ligações de hidrogênio e interações hidrofóbicas. Nossos dados demostram que essas toxinas podem ser usadas como modelos úteis para o desenvolvimento de futuros antivirais contra a febre Zika. Zika virus (ZIKV) is the etiologic agent of Zika fever, a globally spreading mosquito-borne infection, previously associated with cases of microcephaly. Potential new outbreaks of ZIKV are priority problems for the governments since arboviruses are infections that are easily spread in tropical regions such as Brazil. According to the Ministry of Health, ZIKV represents a worldwide public health problem, resulting in social, economic, and public health system (SUS) significant impacts, since there is no effective antiviral treatment and licensed vaccines. In this context, natural compounds have several biological reported activities, such as antioxidant, antiparasitic, antibacterial, and antiviral, as well as toxins isolated from the venom of snakes have shown activity against several viruses. Here the anti-ZIKV activity of Bothropstoxins-I and II (BthTX-I and II) isolated from Bothrops jararacussu venom was investigated. Vero E6 cells were infected with ZIKVPE243 in the presence of compounds for 72 hours, when virus titers were quantified. The results demonstrated that BthTX-I and II presented strong dose-dependent inhibition, with a selective index of 149.1 and 1.44 x 105, respectively. These toxins mainly inhibited the early stages of the replicative cycle, such as during the entry of ZIKV into host cells, as shown by the potent virucidal effect, suggesting the action of these toxins on the virus particles. Moreover, BthTX-I and II presented significant activity towards the post‑entry stages of the ZIKV replicative cycle. Molecular docking analyses showed that BthTX-I and II potentially interact with ZIKV Envelope protein through hydrogen bonds and hydrophobic interactions. Our findings show that these toxins could be used as useful templates for the development of future antiviral candidate drugs against Zika fever. Dissertação (Mestrado) 2024-07-13

Objective The present article seeks to consolidate existing knowledge on breastfeeding during the SARS-CoV-2 pandemic. Data source Articles from 2020 and 2021 collected from the PubMed, CAPES, Virtual Health Library, Google Scholar, SciELO, and UpToDate databases were analyzed. Books and government documents published in the last decade (2010-2020) were also consulted. Study Selection Sixteen works were used in the present study. The date of publication and discussion of SARS-CoV-2 transmission through breastmilk were the inclusion criteria. Thus, articles containing repeated information or with no relevance to add to the production were excluded. Data collection comprised critical reading and synthesis of the main information obtained on the subject, which were performed for the preparation of the present study. The research took place in the period from March 27 to April 2, 2021. Synthesis of the data Breast milk has diverse benefits for both the nursing mother and the infant. The presence of viral RNA by real-time polymerase chain reaction (RTPCR) in milk from disease-positive mothers has been detected in a few cases, and infant infections in these conditions suggest oral transmission of maternal or third-party origin. The virulence of the novel coronavirus in human milk is not confirmed, while significant amounts of exclusive antibodies are. Conclusion Lactation in the context of COVID-19 has shown greater benefits than risks of vertical transmission. Therefore, it should be encouraged when possible. Resumo Objetivo O presente artigo procura consolidar os conhecimentos existentes sobre o aleitamento materno durante a pandemia do SARS-CoV-2. Fonte de dados Foram analisados os artigos de 2020 e 2021 recolhidos dos bancos de dados PubMed, CAPES, Biblioteca Virtual de Saúde, Google Scholar, SciELO e bases de dados UpToDate. Livros e documentos governamentais publicados na última década (2010-2020) também foram consultados. Seleção de estudos Dezesseis obras foram utilizadas no presente estudo. A data de publicação e discussão sobre a transmissão do SARS-CoV-2 através do leite materno foram os critérios de inclusão. Assim, foram excluídos os artigos que continham informações repetidas ou sem relevância para a produção. Coleta de dados Para a preparação do presente estudo, foram realizadas leituras críticas e síntese das principais informações obtidas sobre o tema. A pesquisa ocorreu no período de 27 de março a 2 de abril de 2021. Síntese dos dados O leite materno tem diversos benefícios tanto para a mãe quanto para o lactente. A presença de RNA viral por reação em cadeia de polimerase em tempo real (RT-PCR, na sigla em inglês) no leite de mães positivas foi detectada em alguns casos, e as infecções infantis nestas condições sugerem transmissão oral de origem materna ou de terceiros. A virulência do novo coronavírus no leite humano não está confirmada, enquanto quantidades significativas de anticorpos exclusivos sim. Conclusão A lactação no contexto da COVID-19 mostroumaiores benefícios do que os riscos de transmissão vertical. Por conseguinte, deve ser encorajada sempre que possível.

B cells secrete antibodies and mediate the humoral immune response, making them extremely important in protective immunity against SARS-CoV-2, which caused the coronavirus disease 2019 (COVID-19) pandemic. In this review, we summarize the positive function and pathological response of B cells in SARS-CoV-2 infection and re-infection. Then, we structure the immunity responses that B cells mediated in peripheral tissues. Furthermore, we discuss the role of B cells during vaccination including the effectiveness of antibodies and memory B cells, viral evolution mechanisms, and future vaccine development. This review might help medical workers and researchers to have a better understanding of the interaction between B cells and SARS-CoV-2 and broaden their vision for future investigations.

Pesquisa sem auxílio de agências de fomento Introdução: O subtipo luminal (ER e / ou PR-positivo, HER2-negativo) contabiliza aproximadamente 70% das pacientes com câncer de mama recém-diagnosticadas. Embora seja de melhor prognóstico, cerca de 30% delas desenvolvem recidiva tardia. Identificar essas pacientes é de interesse para tratá-las corretamente e melhorar a sobrevida. Métodos: Quinhentos e setenta e duas (572) pacientes com carcinoma ductal invasivo não metastático (I-III) da mama com um seguimento médio de 65,35 meses (3,67 – 247,40) foram incluídas, sendo 448 casos de câncer de mama luminal e 124 casos de câncer de mama triplo-negativo. Pontos de corte ótimos para Ki-67 e expressão semiquantiativa de receptores hormonais foram estabelecidos por análise de sobrevida para fatores contínuos. A regressão de Cox tempo-dependente com o método Stepwise Forward Wald foi realizada para discriminar fatores independentes de prognóstico com maior poder. Resultados: Observou-se que pacientes com tumores de grau histológico 1/2 com alta expressão de Ki-67 (>12%) e baixa expressão semiquantitativa de receptores hormonais (≤4+) se comportaram de maneira semelhante ao carcinoma ductal invasivo de mama de grau 3 e foram agrupadas. Tais pacientes têm uma sobrevida livre de metástases à distância [HaR ajustado: 0,520 (0,238 – 1,132), p=0,099] e sobrevida global [HaR ajustado: 0,761 (0,374 – 1,550), p=0,452] semelhantes às pacientes com câncer de mama triplo-negativo, incluindo terapias nos modelos. Em associação com o tamanho do tumor e metástases em linfonodos, esta classificação melhorou a classificação de risco padrão. Conclusão: O índice de proliferação pela expressão de Ki-67, além da expressão semiquantitativa de receptores hormonais, discrimina de forma eficiente pacientes com câncer de mama não metastático grau 2 e grau 1 com um bom prognóstico daquelas com pior prognóstico semelhante às pacientes com câncer de mama triplo-negativo. Background: The luminal subtype (ER and/or PR-positive, HER2-negative) account for approximately 70% of newly diagnosed breast cancer patients. Although is better prognosis, approximately 30% of them develop late relapse. Identfying those patients is of interest to treat them correctly and improve survival. Methods: Five hundred seventhy-two (572) non-metastatic (I-III) invasive ductal breast carcinoma patients with a median follow-up of 65.35 months (3.67 – 247.40) were enrolled, being 448 cases of luminal breast cancer and 124 cases of triple-negative breast cancer. Optimal cutoffs for Ki-67 and semiquantitative hormone receptor expression were established by survival analysis for continuous factors. Stepwise Forward Wald time-dependent Cox regression were performed to discriminate independent factors with increased prognosis power. Results: It was observed that patients with histological grade 1/2 tumors with high Ki-67 expression (>12%) and low semiquantitative hormone receptor expression (≤4+) behaved similarly to invasive ductal breast carcinoma grade 3 and were grouped. Such patients have distant metastasis-free survival [adjusted HaR: 0.520 (0.238 – 1.132), p=0.099] and overall survival [ajusted HaR: 0.761 (0.374 – 1.550), p=0.452] similar to triple-negative breast cancer, including therapy in the models. In association with tumor size and lymph node metastases, this classification improved the standard risk classification. Conclusion: The proliferation index by Ki-67 expression, in addition to the semiquantitative expression of hormone receptors, efficiently discriminates patients with grade 2 and grade 1 non-metastatic breast cancer with a good prognosis from those with a worse prognosis similar to triple-negative breast cancer. Tese (Doutorado)