Search

Patients with intermittent claudication disease suffer from temporary lack of oxygen in the legs, caused by narrowing of arteries, resulting in ischemia and followed by reperfusion. The degree of oxidative stress present in 16 patients during strenuous exercise was determined using several indicators. Two derivatives of an exogenous marker, antipyrine (AP), (ie, p-hydroxyantipyrine, p-APOH, and o-hydroxyantipyrine, o-APOH), were assayed in plasma using HPLC-tandem-MS. Plasma malondialdehyde (assayed as thiobarb-ituric acid reactive species, TBARS) was also determined. The branchial/ankle blood pressure index (b-a index) was used to assess the severity of intermittent claudication disease, and plasma lactate concentration was also measured as an indicator of the ischemic situation. Plasma TBARS level did not change significantly after exercise. During the ischemic situation as well as during reperfusion, both free radical derivatives of antipyrine increased significantly in plasma (p

Monitoring the amount of oxidative damage, caused by free radicals, is a major problem in free radical and aging research. Antipyrine is proposed as an exogenous marker for the biomolecular monitoring of oxidative stress. In this paper the characterization of the 60Co ¿-radiation products of antipyrine is described. Since mainly hydroxyl radicals are generated under these experimental conditions, hydroxylated derivatives can be expected. The reaction kinetics of antipyrine and hydroxyl radicals were examined. The results show pseudo first order reaction kinetics. In vivo hydroxyl radicals are one of the major causes of oxidative stress. The separation of the different derivatives was performed with high-performance liquid chromatography (HPLC) and with micellar electrokinetic capillary chromatography (MECC). Antipyrine and the radiolysis products were baseline separated with MECC and HPLC. The conversion of antipyrine, after exposure to different doses of ¿-radiation, was determined with HPLC and with the more customized and cheaper analytical technique MECC. The conversion of antipyrine after exposure was calculated after analysis with MECC and with HPLC. The correlation coefficient between both techniques was 0.9984. The reaction products were characterized with nuclear magnetic resonance (NMR) and mass spectrometry (MS). The dissociation constants (pKa values) of the radiation products were determined by means of capillary zone electrophoresis (CZE). The results identified the radiolysis products as ortho-, meta- and para-hydroxylated antipyrine. The ortho- and meta-hydroxylated isomers are different from the enzymatic metabolites formed in man.

Als alternatief voor fysisch chemische analyses van levensmiddelen op schadelijke stoffen wordt ingegaan op de mogelijkheid voedsel te analyseren op basis van biologische activiteit; de zogeheten biomoleculaire analyse. Daarnaast wordt de veiligheid van de voeding besproken: transgene producten, radicalen, trends in voeding en verrijkte voeding.

Two candidate reference materials animal feed were stored at a temperature of -18°C, 4 C, 20°C and 37°C. The stability of aflatoxin B1 was studied duringa period of two years. A significant decrease in the aflatoxin B1 content was measured in the samples stared at 20°C and 37°C. In the samples stored at 4°C and -18°C no decrease in the aflatoxine B1 content was found duringa period of two years.

Een hoeveelheid melk wordt toegevoegd aan een vaste voedingsbodem, waaraan sporen van Bacillus stearothermophilus var. calidolactis ATCC 10149, broomcresolpurper en trimethoprim zijn toegevoegd. Normale groei van en zuurproduktie door het micro-organisme veroorzaakt een kleurverandering van de pH indicator van paars naar geel. De aanwezigheid in de melk van stoffen die remmend werken op de groei van het micro-organisme, hebben tot gevolg dat de kleur van de pH indicator paars blijft. Nagegaan is of verhoging van de pH van de vaste voedingsbodem deze screeningsmethode gevoeliger maakt voor het opsporen van bacterie groeiremmende stoffen welke een hogere activiteit vertonen in een basisch milieu.

In dit onderzoek zijn met behulp van NMR (Nuclear Magnetic Resonance) potentiele parameters (lactaat- en creatine-concentratie) gevonden in mestkalverurine, waarmee in praktijk gescreend kan worden op het gebruik van beta-agonisten.

Legal regulations on composition and safety of food products require inspeetion programs to maintain the decisions or to get insight in the real situation. Such programs consist of a sampling procedure followed by analysis of the samples. In monitoring of environmental contamination similar programs are required. When large quantities of samples for monitoring of contaminants in environment or in food chains have to be analysed, and the majority of the samples fulfills the legal requirements, a two stage control system will be attractive. In the first stage samples are analysed by a simple 'screening method', to sift out the large number of samples fulfilling the requirements ('negative result'). The minor part of samples not fulfilling the requirernents ('positive result') are further investigated by a sophisticated 'confirrnatory method', specific tor the analyte(s) of interest, for an uitimate judgement. For this kind of inspeetion a simple model is used in this study, in order to calculate the fraction of false negative results in the inspection.

In verband met de controle op het oneigenlijk gebruik van clenbuterol en andere [beta]2 - agonisten is het noodzakelijk over gegevens te beschikken over de wijze van toediening aan en het voorkomen van residuen bij pluimvee. In de literatuur zijn gegevens over een mogelijke residuvorming van o.a. clenbuterol in vlees en organen van pluimvee niet beschreven. Over de toepassing van clenbuterol en andere [beta]2 - agonisten bij pluimvee zijn wel enkele gegevens bekend. Om deze reden werd een dierexperiment uitgevoerd, waarbij aan kuikens gedurende vijf dagen clenbuterolhoudend voeder (1 mg/kg) werd verstrekt. Direct volgend op de toediening en één dag daarna werden de kuikens gedood en werden monsters van vlees, nier, lever, spiermaaginhoud en blindedarminhoud genomen. Voor de bepaling van clenbuterol werd een, recent ontwikkelde, muili-screeningsmethode voor [beta]2 - agonisten toegepast, welke gebaseerd is op een enzym-immunologische test (EIA).

In dit rapport worden de resultaten van het onderzoek naar chloorbifenylen in paardevet gerapporteerd en getoetst aan het normvoorstel voor vlees(waren).

Een Nederlandse 'fact finding' missie heeft van 1990-10-21 tot 1990-11-01 een bezoek gebracht aan de Sovjet Unie. De aanleiding van het bezoek was, dat Nederland positief heeft gereageerd op een verzoek van de USSR om humanitaire hulp bij de bestrijding van de gevolgen van het kernreactorongeval te Tsjernobyl. Het doel van de missie was, ter plaatse informatie in te winnen en zich op de hoogte te stellen, om tot een verantwoord hulpvoorstel te komen. De hulp was gericht op drie aspecten: - medisch aspect - socio/psychologisch aspect - landbouwkundig/voedsel aspect.

In dit rapport zijn de resultaten verwerkt van een vergelijkend onderzoek van de beoordeling van reinheidswatten van boerderijmelk. Enerzijds werd een visuele beoordeling uitgevoerd en anderzijds werd de beoordeling uitgevoerd met behulp van reflectiemeters van het type LF 90 en Micro-color LMC.

Op dit moment zijn de Beta-agonisten clenbuterol, mabuterol, salbutamol, cimalerol en terbutaline zowel met een multi-screeningsmethode als met een multi-bevestigingsmethode te bepalen. Op korte termijn is te verwachten dat de Beta-agonisten bamethaan, orciprenaline (= metaproterenol) en isoproterenol aan de methoden kunnen worden toegevoegd. Omdat begin 1991 het RIKILT Standaard Voorschrift (RSV A0622) voor de multibevestigingsmethode voor afstemming aan het RIVM wordt voorgelegd, kan de keuring door de RVV worden uitgebreid van clenbuterol en salbutamol tot het bovengenoemd vijftal, zonder bevestigingsonderzoek van het RIKILT. Te verwachten is dat binnen enkele maanden de keuring kan worden uitgebreid naar een achttal Beta-agonisten. Het maximaal haalbare aantal Beta-agonisten welke met behulp van de beide multi-methoden kan worden bepaald zal rond de tien Beta-agonisten liggen. Voor een verdere uitbreiding van het aantal te bepalen Beta-agonisten zullen nieuwe antilichamen moeten worden opgewekt. Daarnaast moet voor het onderzoek op langere termijn aandacht besteed worden aan de isolatie van een biomolecuul (i.c. de beta-receptor), welke affiniteit heeft voor het farmacologisch actieve molecuulfragment dat in alle agonisten voorkomt. Naast het analytisch ontwikkelingswerk is ten behoeve van onder andere surveys en keuringen dierexperimenteel onderzoek uitgevoerd en zijn/worden door de AID genomen monsters urine en veevoeders geanalyseerd waarbij regelmatig sprake is van positieve bevindingen welke duiden op misbruik in de praktijk.

Een Nederlandse 'fact finding' missie heeft van 1990-10-21 tot 1990-11-01 een bezoek gebracht aan de Sovjet Unie. De aanleiding van het bezoek was, dat Nederland positief heeft gereageerd op een verzoek van de USSR om humanitaire hulp bij de bestrijding van de gevolgen van het kernreactorongeval te Tsjernobyl. Het doel van de missie was, ter plaatse informatie in te winnen en zich op de hoogte te stellen, om tot een verantwoord hulpvoorstel te komen. Tijdens het bezoek werd van Sovjet-functionarissen informatie verkregen over de verontreiniging van landbouwgronden en -produkten in de besmette gebieden in de Russische Federatie, Wit-Rusland en de Oekraïne ten gevolge van het reactorengeval, alsmede over onderzoek naar en uitvoering van tegenmaatregelen.

In april - juni 1990 werd op het RIKILT een interne cursus over de toepassing van statistiek in de chemometrie gegeven. De cursus bestond uit een theoretisch gedeelte en de behandeling van praktische toepassingen met behulp van SPSS. Cursusleider voor het theoretische deel was dr. W.G. de Ruig, voor het praktische deel dr. ir. A.B. Cramwinckel. Bij het opzetten en geven van de cursus werd veel medewerking ondervonden van ir. A.A.M . Jansen en drs. J.A. Oude Voshaar van de Groep Landbouwwiskunde. Dit rapport omvat het theoretische gedeelte van de cursus. Hierbij zijn een aantal basisbegrippen uit de statistiek, die in de chemometrie van pas komen, behandeld. Aan de orde zijn gekomen: populaties, steekproeven, eigenschappen en toepassing van de normale verdeling, steekproefgemiddelde, standaardafwijking, betrouwbaarheidsinterval, toetsen van hypothesen, ringonderzoek, proefopzetten, variantieanalyse, lineaire-regressieanalyse, calibratie, multipele lineaire regressie en met deze onderwerpen gerelateerde begrippen.

Op grond van de onderzoeksresultaten kan voor gekozen kansen op fout positieve en fout-negatieve resultaten een goed onderbouwde bemonsterings- en keuringsstrategie opgesteld worden. De strategie, die in dit rapport wordt beschreven, is gericht op de keuring van hormonen, maar is daartoe niet beperkt. De aanpak is algemeen toepasbaar voor vergelijkbaar onderzoek, bijvoorbeeld in het kader van KAP en voor EEG regelingen.

Het kunnen waarnemen van het gebruik van β-agonisten is voor zowel de keuring als in het kader van de opsporing door de Algemene Inspectie Dienst (AID) van groot belang. Om de keurings- en opsporingskasten zo laag mogelijk te houden en het aantal te onderzoeken monsters te kunnen vergroten is een onderzoek gestart naar een multi-screeningsmethode in urine (voor de bepaling van een zevental β-agonisten) waarvan de eerste resultaten in dit rapport worden beschreven.

Resultaten onderzoek bestrijdingsmiddelen, zware metalen en diergeneesmiddelen in vlees, organen, vetten en urine (Nationaal Plan Overige Stoffen/VREK). Jaaroverzicht 1989.

Zes beta-agonisten (isoproterenol, clenbuterol, cimaterol, terbutaline, salbutamol en fenoterol) zijn als TMS-derivaten onderzocht op hun GeMS-eigenschappen in zowel de Electron Impact (EI) als positieve Chemische Ionisatie mode (Cl). Tevens is clenbuterol-hexyl onderzocht. Deze component is geschikt om als interne standaard te fungeren.

In dit rapport wordt het massaspectrametrisch gedrag van nortestosteron en het nortestosteron als di-heptafluorboterzuur derivaat besproken. Naast spectra zijn ook de fragmentatie mechanismen weergegeven. Van het derivaat zijn de fragmentionen met hoge resolutiemassaspectrometrie onderzocht.

In totaal zijn circa 1000 varkensniermonsters onderzocht op de aanwezigheid van de tranquillizers: xylazine, azaperon, acepromazine, haloperidol, propionylpromazine, chloorpromazine en de beta-blocker carazolol. De monsters werden verzameld in de zomerperiode juni tot september 1987 en waren afkomstig van alle RVV kringlaboratoria, verspreid door het hele land. In totaal werden 26 monsters positief bevonden op één of meer van de genoemde stoffen. Dit is 2,6% van het totaal. Hiervan bevatte het meerendeel acepromazine (22) en werden daarnaast carazolol (4) en azaperon (2) aangetroffen. In twee monsters werden acepromazine en carazolol in combinatie aangetroffen. Naast genoemde verbindingen werd in een aantal monsters een nog niet nader identificeerbare component aangetroffen. Er kon geen samenhang gevonden worden tussen de residu- incidentie en de ten tijde van de monstername heersende luchtvochtigheid en temperatuur.

Uit een eerste inventarisatie van de mogelijke toepassingen van NMR technieken ten behoeve van het onderzoek van DLO blijkt dat NMR een grote bijdrage kan leveren aan allerlei onderzoeken. Met NMR technieken kunnen waarschijnlijk hoogwaardige kwaliteitsparameters gedefinieerd worden voor verschillende grondsoorten, land- en tuinbouwprodukten en andere levende onderzoeksobjecten in bodem en water. Twee centrale onderzoeksthema's, koolhydraten inclusief afgeleide koolhydraat-verbindingen en stikstof huishoudingen tekenden zich af. Binnen het onderzoek is zowel behoefte aan hoge-resolutie NMR spectroscopie als aan afbeeldende NMR. Voorgesteld wordt om te komen tot de realisatie van een NMR faciliteit die in staat is beide soorten experimenten optimaal te verrichten. Gesuggereerd wordt om bij de realisering van een dergelijke faciliteit tot afstemming met de LUW te komen. De voorwaarden voor het optimaal functioneren van een dergelijke faciliteit worden vermeld.

Via literatuuronderzoek wordt een voorlopig beeld geschetst van de toepassingsmogelijkheden van BST, de onderzoeksmethoden hieromtrent en de effecten bij gebruik ervan

Het rapport geeft een overzicht van de resultaten van het onderzoek naar aflatoxine B1 volgens de HPLC screeningsmethode in rundveevoeders, grondnoten, varkensvoeder, een legpluimveevoeder, een kokos/soyapalmpitmengsel en een rnaismonster in 1987.

Ondanks een wettelijk verbod bestaat de kans dat in de veeteelt groeihormonen, de zogenaamde anabole steroiden, gebruikt worden ter bevordering van de groei van slachtdieren. Twee andere hormonen zijn prolactine en somatotropine die een grotere melkproduktie teweegbrengen. De mogelijkheid bestaat dat wegens mogelijke negatieve effecten op de volksgezondheid het gebruik van deze twee hormonen verboden zal worden. Voor het aantonen van beide klassen hormonen in melk, bloed, e.d. zijn o.h.a. nog geen goede methodes beschikbaar. Voordat detectie of confirmatie plaats vindt moet het hormoon opgezuiverd worden. In dit rapport zullen een aantal opzuiveringsmethoden met behulp van affiniteitschromatografie besproken worden die gevonden zijn met een computer-literatuursearch. De search leverde een groot aantal alternatieven op. De steroiden kunnen opgezuiverd worden door gebruik te maken van tomatine, antilichamen of carrier-eiwitten als ligand bij affiniteitschromatografie. Een potentieel zeer interessante methode voor multiresidu analyse is affiniteitschromatografie met silica voorzien van tomatine liganden. Vooral door de aanzienlijke verschillen in elutietijden zijn er goede vooruitzichten aanwezig voor een zeer selectieve scheiding. Bovendien bestaat er op de laboratoria van de Stichting voor Plantenveredeling te Wageningen veel ervaring en kennis op het gebied van tomatine en verwante verbindingen. Bij het toepassen van antilichamen zijn eveneens goede resultaten behaald. Naast een hoge recovery bleken de affiniteitskolommen meer dan 50 maal gebruikt te kunnen worden zonder dat ze achteruit gingen. Een nadeel van de antilichaam-toepassingen is dat het hier gaat om een monoresidu-analysemethode. Opzuivering van prolactine en somatotropine kan plaats vinden op basis van commercieel verkrijgbare produkten en op basis van antilichamen als ligand. Voordeel van de eerste methode is dat alle benodigdheden direct verkrijgbaar zijn, nadeel is vaak de bewerkelijkheid. Ook hier komt de antilichaam-methode goed naar voren.

Finnigan introduceerde enkele jaren geleden de Ion Trap detector, een compact apparaat dat met redelijke gevoeligheid in staat was volledige massaspectra te produceren. Dit jaar werd type 800 geïntroduceerd, dat afweek van zijn voorgangers doordat een "automatische gain control" (AGC) ervoor zorgde dat de meettijd aangepast werd aan het aantal geproduceerde ionen in de bron, hetgeen in de praktijk betekent dat het dynamisch bereik van de trap aanzienlijk vergroot wordt, zodat uiteenlopende concentraties aan componenten binnen één monster toch resulteert in bruikbare, reproduceerbare massa spectra. Een andere belangrijke eigenschap van de ITD is gelegen in het feit dat slechts kleine hoeveelheden materiaal (200 pg ) aangeboden behoeven te worden om een volledig spectrum te kunnen produceren, terwijl het meten van slechts enkele fragmenten uit het spectrum hooguit een gevoeligheidswinst van 2 à 3 opleveren in tegenstelling tot de gebruikelijke apparaten waar bij de overgang van volledige scan naar MlD een winst van 10-100 makkelijk bereikt wordt . Kortom ten opzichte van: de Finnigan 4500 en de HP-MSD zou verwacht kunnen worden dat de ITD 800 in de volledige scan mode een vergelijkbare gevoeligheid heeft als de andere twee apparaten in de MlD mode. En dat zou interessant zijn, gezien de regelmatig terugkerende vraag, in hoeverre het mogelijk is om in monsterextracten van diverse, (maar bekende) oorsprong algemeen te kunnen screenen op ongewenste componenten. Dit kan niet wanneer in de MlD mode gewerkt wordt (immers hier zoekt men naar van te voren gedefinieerde componenten) maar wel in de volledige scan mode. Het verkregen spectrum kan of via een library search of via een analyse van het spectrum leiden tot de identificatie van een onbekende aanwezige component.

Tussen Holland biotechnology bv (Hbt) en het RIKILT is overeengekomen een gemeenschappelijk onderzoek op te zetten naar de mogelijke toepassing van seleniumsolen in eenvoudige screeningstests voor de analyse van stoffen op het (sub)ppb-nivo. Een seleniumsol, gekoppeld aan antilichamen of eiwitconjugaten, wordt gebruikt als specifiek kleurlabel. Bij de tot nu toe uitgevoerde experimenten is nortestosteron (NT) als teststof gebruikt, omdat hiervoor voldoende antiserum en NT-eiwitconjugaten , alsmede monstermateriaal en analysemethoden beschikbaar zijn om een test op te zetten en te valideren. In eerste instantie werd gekozen voor het ontwikkelen van een striptest met nitrocellulose als drager. Uit de verrichtte experimenten bleek dat met een geringe hoeveelheid NT-eiwitconjugaat op de nitrocellulosestrip (overeenkomend met 0,3 ng NT) al een kleuring werd verkregen met antilichamen gelabeld met sol . Ook is een geringe hoeveelheid antistof op de strip (4,7 pmol IgG, dat theoretisch maximaal 2,6 ng NT kan binden) voldoende om een kleuring te geven met NT-eiwitconjugaat dat aan de sol gekoppeld is. Het laagste nivo toegevoegd vrij NT, waarbij tot nu toe een (visueel) kleurverschil werd waargenomen bedroeg 60 ng/ml. Vermoedelijk heeft het antilichaam een grotere aviditeit voor het NT-eiwitconjugaat dan voor het vrije NT, hetgeen de test nadelig beïnvloed. Door een ander NT-eiwitconjugaat of zelfs een conjugaat van een ander steroid te kiezen, kan mogelijk een veel gevoeligere test worden verkregen. De tot nu verkregen resultaten zijn hoopgevend en bieden voldoende perspectief om het samenwerkingsprojekt voor langere termijn te continueren.

In dit rapport wordt een overzicht gegeven van de in de literatuur beschreven analysemethoden voor een aantal beta(2)-agonisten.

LMRV (Landelijk Meetnet Radioactiviteit in Voedsel) is een onderdeel van het Nationaal Plan Kernongevallenbestrijding (NPK) en beschikt over voedselmonitoren die zijn voorzien van natriumjodide detectoren waarmee gamma-emitters kunnen worden aangetoond.

In Duitsland wordt geïmporteerd varkensvlees, dat van zeugen en borgen afkomstig moet zijn, onderzocht op de mogelijke aanwezigheid van berevlees, dat in sommige gevallen tot beregeur aanleiding geeft. Bij de sinds 1987 uitgevoerde steekproeven wordt het gehalte aan androstenon, een voornamelijk bij (niet gecastreerde) mannelijke dieren (beren) geproduceerd steroidhormoon, in vet gemeten. Indien dit gehalte hoger is dan 0.3 Mg/g acht men bewezen dat het bemonsterde dier inderdaad een beer was, terwijl bij vrouwelijke (zeugen) en bij gecastreerde mannelijke dieren (borgen) waarden lager dan 0.1 Mg/g worden gemeten. Inventariserend onderzoek binnen het RIKILT heeft uitgewezen dat de in Duitsland gehanteerde beslisgrens ook voor Nederlandse mestvarkens toepasbaar is. De in Duitsland toegepaste methode is een immunochemische methode; enigszins vergelijkbaar met de tot voor kort in Nederland uitgevoerde radioimmunochemische DES bepaling (RIA-DES). Als screeningsmethode is deze techniek geschikt voor een snelle analyse van een groot monsteraanbod, maar de specificiteit is afhankelijk van het gebruikte antiserum en de monstervoorbewerking, zodat de mogelijkheid bestaat dat andere in het vet aanwezige verbindingen het resultaat van de meting kunnen beïnvloeden. Bij de tot nu toe in Duitsland door Prof. Claus, Universiteit Hohenheim, Stuttgart, verrichte metingen zijn hiervoor echter nooit aanwijzingen gevonden. De door het RIKILT ontwikkelde methode berust op gaschromatografiemassaspectrometrie (GCMS), waardoor de specificiteit veel hoger is en deze methode als bevestigingsmethode kan worden toegepast. Uit onderzoek van wederzijds ter beschikking gestelde monsters varkensspek en het onderzoek van een serie monsters in het kader van een ringonderzoek, bleek dat de resultaten, het herkennen van beren, bij beide methoden overeenkwamen. De gemeten androstenongehalten verschillen daarbij wel in absolute zin. In tegenstelling tot bovengenoemde monsters bleken bij herkeuring door het RIKILT van in Duitsland "positief" bevonden monsters, deze monsters, ook na herhaald onderzoek, geen androstenon te bevatten. Helaas werden bij de monstername in Duitsland geen verzegelde en goed gedocumenteerde contra-monsters genomen.

In opdracht van de directie Voedings- en Kwaliteitsaangelegenheden van het Ministerie van Landbouw en Visserij is als aanvulling van gegevens met betrekking tot gehalten van polychloordioxinen (PCDD) en polychloordibenzofuranen (PCDF) in melk in de omgeving van vuilverbrandingsinstallaties aanvullend onderzoek gedaan naar melk en melkprodukten uit onverdachte regio's.