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Introduction : les glioblastomes sont les tumeurs cérébrales malignes et primitives les plus fréquentes de l’adulte. Elles sont de très mauvais pronostic malgré les avancées thérapeutiques récentes. Il existe de nombreux macrophages associés aux cellules tumorales des glioblastomes au sein du microenvironnement tumoral. Récemment, il a été découvert que la protéine transmembranaire 119 (TMEM119) est un marqueur spécifique de la microglie permettant de distinguer de manière fiable la microglie des macrophages systémiques Le but de cette étude a été de caractériser de manière immunohistochimique ces macrophages et de les corréler à des facteurs cliniques et histologiques. Matériel et méthodes : nous avons rétrospectivement sélectionné 98 cas et réalisé des études immunohistochimiques avec les anticorps anti CD68 et TMEM119 afin d’étudier la population macrophagique et microgliale. Le nombre de cellules marquées a été comparé en univarié et multivarié à des facteurs cliniques et histologiques tels que : l’âge, le sexe, la survie, le pourcentage de nécrose sur la pièce opératoire, la localisation tumorale, le Ki67 et la P53. Résultats : notre étude retrouve une prédominance de macrophages (marqués par l’anticorps anti CD68) comparés à la microglie (marquée par les anticorps anti TMEM119). Il existait une augmentation de la microglie entre le tissu non tumoral avoisinant et le tissu tumoral. Il existe, en univarié, une augmentation du ratio TMEM119/CD68 chez les patients avec une survie longue (supérieure à 15 mois). Conclusion : ces résultats permettent d’envisager de nouvelles pistes de traitement pour les glioblastomes.

Colleters are common secretory structures in Rubiaceae. In this study, we describe colleter morphoanatomy and histochemistry in 10 species belonging to Chiococceae, Coussareae, and Psychotrieae tribes of Rubiaceae. Colleter morphoanatomy was analyzed by light and scanning electron microscopy. Microscopy analysis revealed that colleters were present on the stipule adaxial surface in all species. In the case of Palicourea marcgravii A.St.-Hil. and Chiococca alba Hitchc., colleters were also found on leaf primordia and at the stipule apex, respectively. Colleters were classified into three types: standard, bifurcated standard, and reduced standard. Further analysis showed that colleter epidermal cells are thin-walled and possess a thin cuticle, conspicuous nuclei located at the equatorial or basal region, and abundant cytoplasm. Intercellular spaces were found among epidermal cells in Chiococca alba, Coussarea triflora Müll.Arg., Coussarea verticillata Müll.Arg., Psychotria conjungens Müll.Arg., and Psychotria sessilis Vell. Crystalliferous idioblasts containing raphides were observed in the colleter central parenchymatous axis of all species, while crystal sand was found only in Chiococca alba. Histochemical tests revealed that colleter secretion is composed of a mixture of mucilage and protein. We conclude that colleter position, typological variation, presence of vascularization, and type of calcium oxalate crystals represent promising characters for future taxonomic and phylogenetic studies in Rubiaceae. Les collétères sont des structures sécrétoires communes chez les Rubiaceae. Dans cette étude, les auteurs décrivent la morpho-anatomie et l’histochimie de collétères de 10 espèces appartenant aux tribus des Chiococceae, Coussareae et Psychotrieae des Rubiaceae. La morpho-anatomie de collétères a été analysée par microscopie optique et microscopie électronique à balayage. L’analyse en microscopie a révélé que les collétères étaient présentes sur la surface adaxiale des stipules de toutes les espèces. Dans le cas de Palicourea marcgravii A.St.-Hil. et Chiococca alba Hitchc., les collétères se trouvaient aussi sur les ébauches foliaires et à l’apex des stipules, respectivement. Les collétères ont été classifiées en trois types : standard, standard bifurqué et standard réduit. Des analyses supplémentaires ont montré que les cellules épidermiques des collétères possèdent une paroi et une cuticule minces, un noyau bien évident localisé dans la région équatoriale ou basale, et un cytoplasme abondant. Des espaces intercellulaires ont été trouvés entre les cellules épidermiques chez Chiococca alba, Coussarea triflora Müll.Arg., Coussarea verticillata Müll.Arg., Psychotria conjungens Müll.Arg. et Psychotria sessilis Vell. Des idioblastes cristallifères contenant des raphides ont été observés dans l’axe parenchymateux central des collétères de toutes les espèces, alors qu’un sable cristallin était trouvé seulement chez Chiococca alba. Des tests histochimiques ont révélé que la sécrétion des collétères est composée d’un mélange de mucilage et de protéines. Les auteurs concluent que la position des collétères, la variation typologique, la présence de vascularisation et le type de cristaux d’oxalate de calcium représentent des caractères prometteurs pour la réalisation d’études taxonomiques et phylogénétiques futures chez les Rubiaceae.

In the context of the energy transition, the use of ligno-cellulosic biomass for producing ‘bio-sourced’ energy and product is one of the major alternatives to oil. Sorghum bicolor is with this respect more and more studied, particularly for water limited cropping environments. Its genetic diversity is a huge opportunity for creating varieties with a high production of stem biomass, with a biochemical composition adapted to diverse end-uses and for water-limited environments. This PhD thesis takes place in the context of two projects dedicated to biomass sorghum improvement: Biomass For the Future (ANR) and BioSorg (Fondation Agropolis-Cariplo). Its objective is to understand the morphological and histochemical traits and their interactions, underlying at organ (internode) level, stem biomass production in sorghum, its genotypic variability and its plasticity in response to climatic environment, in particular water availability. For this purpose, an approach combining field experiments and eco-physiological modeling was adopted. Three experimental seasons were organized in the field (DIAPHEN platform, Mauguio, France), in order to compare genotypes under contrasted water situations (irrigated, water deficit during stem elongation). Two biomass sorghum hybrids were studied (2013-2014) to point out the traits contributing to the regulation by water availability of stem biomass accumulation. First, a common dynamics of internode development for a given genotype was highlighted for studied histochemical traits. This result will enable to use all internodes of different ages on a given plant to set up such a dynamic in a phenotyping context. Accordingly, the traits set up progressively along internode development were those with the highest drought sensitivity. Stem biomass production was reduced by drought and its biochemical composition modified. This could be explained by a reduced number of expanded internodes with a reduced length and ligno-cellulosic content. A contrario, their soluble sugar content was increased. The internodes developed after re-watering observed a remarkable recovery whereas those developed under stress did not recover. At final harvest, water deficit effect on stem biomass production was thus strongly attenuated. The same traits were studied on 8 genotypes more contrasted for stem morphology and biochemistry (2014-2015). The results confirmed those on two hybrids and showed a high genotypic variability for drought sensitivity and recovery capacity. The response to water availability of traits related to internode or stem growth and to their biochemical composition was only partially correlated. The weak correlation between biochemical and histological traits suggests that the vartiability of stem biomass quality among genotypes and environments is explained at tissue level. The stability of stem biomass production is thus a highly complex process involving trade-off among morphological and histochemical traits that may differ depending on drought pattern, targeted end-use and cycle duration.These results were used for adapting and testing the ecophysiological model Ecomeristem in its capacity to capture the traits underlying phenotypic variability in biomass sorghum, in a first time under non-limiting water conditions. Model validation was satisfying but pointed out remaining limitation in the way the model captures tillering and accordingly biomass partitioning among them. A sensitivity analysis was performed showing that the simulated genotypes with the highest stem biomass production resulted from variable trait combinations (model parameters) depending on plant density in the field. The trade-off between tillering propensity and the capacity to accumulate biomass in the individual internode was particularly influencing and the balance between these traits should be further considered in a phenotyping and ideotyping context, with respect to fluctuating environmental conditions.; Face à l’enjeu de la transition énergétique, l’utilisation de la biomasse végétale ligno-cellulosique pour produire des énergies et matériaux ‘bio-sourcés’, est l’une des alternatives au pétrole ciblées. Le sorgho (Sorghum bicolor) est à ce titre de plus en plus étudié. Sa diversité génétique est une richesse considérable pour concevoir des variétés à forte production de biomasse de tige, de composition biochimique adaptée à divers usages et adaptées à des agroenvironnements limités en eau. Cette thèse s’inscrit dans deux projets d’amélioration variétale du sorgho biomasse, Biomass For the Future (ANR) et BioSorg (Agropolis-Cariplo). Son objectif est de comprendre les traits phénotypiques, de nature morphologique, biochimique, histologique, et leurs interactions, expliquant à l’échelle de l’organe (entrenœud) la production de biomasse de tige du sorgho, sa variabilité génotypique et en réponse à l’environnement climatique notamment hydrique. Pour cela une approche combinant expérimentations et modélisation écophysiologique a été adoptée.Trois saisons d’expérimentation ont été organisées au champ (plateforme DIAPHEN, Mauguio, France), afin de comparer des génotypes sous condition irriguée et déficitaire en eau durant la phase d’allongement des tiges. Deux hybrides de sorgho biomasse ont été étudiés (2013-2014) pour mettre en évidence les traits contribuant à la régulation par la disponibilité en eau de l’accumulation de la biomasse de tige. Une dynamique de développement commune à tous les entrenœuds d’un génotype a été mise en évidence pour les traits histochimiques étudiés ; les entrenœuds d’âge différent sur la tige d’une même plante peuvent donc être utilisés pour le phénotypage de cette dynamique. Ainsi, les traits fixés progressivement durant le développement de l’entrenœud s’avèrent les plus sensibles au déficit hydrique. La quantité de biomasse de tige produite a été réduite par le déficit hydrique et sa composition biochimique modifiée. Ceci s’explique par une réduction du nombre d’entrenœuds allongés, de leur longueur et teneur en ligno-cellulose, mais une augmentation de leur teneur en sucre soluble. Les entrenœuds développés après ré-irrigation ont montré une récupération remarquable à l’inverse des entrenœuds développés durant la période de stress. Ainsi, à la récolte, l’effet du déficit hydrique sur la production de la biomasse de tige était très atténué. Ces mêmes traits ont été étudiés sur 8 génotypes de morphologie et biochimie de tige contrastées (2014-2015). Les résultats ont montré une forte variabilité génotypique de sensibilité au déficit hydrique et de capacité de récupération. Les traits de croissance et histochimie de l’entrenœud ont montré des réponses au statut hydrique partiellement corrélées. La faible corrélation entre traits biochimiques et histologiques suggère que la variabilité de la qualité de tige entre génotypes et environnements s’explique au niveau tissulaire. La stabilité de la production de biomasse de tige est donc contrôlée par ces traits de façon complexe et fonction du pattern de disponibilité en eau.Ces résultats ont été utilisés pour adapter et tester la capacité du modèle écophysiologique Ecomeristem à capturer les traits expliquant la variabilité des phénotypes de sorgho biomasse sous conditions hydriques non limitantes. La validation du modèle s’est avérée satisfaisante avec quelques limites dans sa capacité à capturer les cinétiques de vie des talles et, de fait, la répartition de la biomasse entre talles. L’analyse de sensibilité du modèle a montré que les génotypes simulés produisant le plus de biomasse de tige résultent de combinaisons de traits différentes en fonction de la densité de peuplement. Le trade-off entre propension au tallage et à accumuler plus de biomasse au niveau de l’entrenœud individuel s’avère déterminante. La balance entre ces traits devrait être davantage considérée dans la démarche de phénotypage et d’idéotypage et sous des environnements contrastés.

Lipid metabolism is involved during muscle exercise. Energetic contribution of lipids increases during long lasting endurance exercise of moderate intensity (40% à 60% of VO2max). As well as circulating free fatty acids, intramyocellular lipid storages (IMCL) are postulated to be used during performances longer than 4 hours. Due the the lack experimental evidences untill today, a first study was undertaken on 10 athletes (40 ± 6 yrs) during a 24h running. Results obtained on vastus lateralis muscle showed a significant 56% and 45% decrease of IMCL in type I and IIA fibres respectively while glycogen decreased only in type I fibres. These data indicate a more efficient catabolism of IMCL than those of glycogen in fast twitch fibres during ultra endurance exercise, of which mechanism remains to be explored. IMCL accumulates during ageing or overweighting and may constitute a risk of insulin resistance (IR). A combined 14 weeks endurance (ET) and resistance (RT) training was followed by older (73 ± 6 yrs) and overweighted (58 ± 5 yrs) subjects. In the two groups IMCL increased (p

Lipid metabolism is involved during muscle exercise. Energetic contribution of lipids increases during long lasting endurance exercise of moderate intensity (40% à 60% of VO2max). As well as circulating free fatty acids, intramyocellular lipid storages (IMCL) are postulated to be used during performances longer than 4 hours. Due the the lack experimental evidences untill today, a first study was undertaken on 10 athletes (40 ± 6 yrs) during a 24h running. Results obtained on vastus lateralis muscle showed a significant 56% and 45% decrease of IMCL in type I and IIA fibres respectively while glycogen decreased only in type I fibres. These data indicate a more efficient catabolism of IMCL than those of glycogen in fast twitch fibres during ultra endurance exercise, of which mechanism remains to be explored. IMCL accumulates during ageing or overweighting and may constitute a risk of insulin resistance (IR). A combined 14 weeks endurance (ET) and resistance (RT) training was followed by older (73 ± 6 yrs) and overweighted (58 ± 5 yrs) subjects. In the two groups IMCL increased (p

Chez le chat, les lymphomes sont les tumeurs les plus fréquentes du tractus digestif. La seule étude morphologique par l’examen cytologique et/ou histopathologique ne permet pas dans tous les cas de différencier un lymphome d’une lésion hyperplasique ou réactionnelle et elle n’autorise pas non plus le typage des tumeurs qui nécessite l’identification précise de la sous-population cellulaire à l’origine de la prolifération néoplasique. Actuellement, au moyen d’un nombre limité d’anticorps utilisables sur des prélèvements fixés par le formol et inclus en paraffine, c’est-à-dire dans les conditions de la pratique clinique courante, le recours à des techniques immunohistochimiques permet d’accroitre de manière sensible les informations obtenues par l’examen histologique pratiquées sur des biopsies, aussi bien pour le typage des tumeurs que pour le diagnostic différentiel des lésions non tumorales. Les principes, modalités, indications et limites de ce type de méthodes appliquées à la gastroentérologie du chat sont présentés dans cette synthèse.

I have studied two enzymes involved in phenylpropanoid metabolism in plants. The phenylpropanoid pathway leads from phenylalanine, to a large array of compounds involved in the development and interactions with the environment. Among these products are flower pigments, antibiotics (termed phytoalexins) that accumulate in diseased plants, signals implicated in the recognition of microbes, UV irradiation protectants, and the building units of lignin. Lignin is an essential component of wood that provides rigidity to cell walls and impermeability to vascular tissues. It is a three-dimensional polymer comprising three units having in common the same aromatic ring but differing in their degree of methylation and hydroxylation. Caffeoyl-coenzyme A O-methyltransferase (CCoAOMT) is the first of the two O-methyltransferase involved in lignin biosynthesis. This enzyme uses specifically CoA-esters as substrates. My initial work was to characterize the active site of CCoAOMT taking avantage of the fact that animal catechol O-methyltransferases and plant CCoAOMT share about 20% amino acid sequence identity and display common structural features. The crystallographic structure of rat liver catechol O-methyltransferase was used as a template to construct a homology model for tobacco CCoAOMT. Integrating site-directed mutagenesis and substrate specificity data, the three-dimensional model identified several amino acid residues involved in CoA-esters binding. I also characterized a new acyltransferase named hydroxycinnamoyl-CoA: shikimate/quinate hydroxycinnamoyltransferase (HCT) involved in phenylpropanoid metabolism. HCT belongs to a plant acyltransferase gene family, the members of which have various functions. In vitro, HCT catalyzed the synthesis of shikimate and quinate esters, shown to be substrates of the cytochrome P450 3-hydroxylase. Finally, I confirmed by spatio temporal analyses and virus-induced gene silencing approach the involvement of HCT in lignin biosynthesis., Le métabolisme des phénylpropanoïdes est un métabolisme secondaire spécifique au règne végétal. Il conduit, à partir de la phénylalanine, à la synthèse d'une grande variété de substances telles que les anthocyanes, les isoflavonoïdes, les stilbènes, des esters d'acides hydroxycinnamiques, ou encore à la lignine. Ces métabolites secondaires interviennent dans la pigmentation florale ou encore la protection des tissus végétaux contre divers stress biotiques et abiotiques. Quant à la lignine, elle assure rigidité aux parois cellulaires végétales et imperméabilité aux tissus conducteurs. La lignine est un polymère tridimensionnel constitué de trois unités monomériques qui possèdent le même squelette carboné phénylpropane mais diffèrent par leur degré de méthoxylation et d'hydroxylation. Une partie de mon travail de thèse a consisté à étudier la relation structure/fonction de la caféoyl-coenzyme A O-méthyltransférase (CCoAOMT) de N. tabacum, responsable de l'introduction de la première des deux fonctions méthyles. Des études bioinformatiques couplées à des approches de biochimie et de mutagenèse dirigée, nous ont permis de modéliser l'interaction de la CCoAOMT avec son substrat, le caféoyl-CoA. Trois acides aminés du site actif ont notamment été identifiés comme intervenant dans la reconnaissance spécifique de la chaîne latérale de CoA. J'ai également caractérisé, chez N. tabacum, une nouvelle acyltransférase à activité HydroxyCinnamoyl-CoA : shikimate/quinate hydroxycinnamoyl Transférase (HCT) impliquée dans le métabolisme des phénylpropanoïdes. Nous avons montré que l'enzyme HCT recombinante synthétisait, in vitro, les substrats de l'hydroxylation en position 3 du noyau aromatique. De plus, la répression de l'expression du gène HCT par le «VIGS» conduit à un ralentissement de la croissance des plantes, à une perturbation importante du pool d'acide chlorogénique, ainsi qu'à une diminution de la quantité et à une modification de la composition de la lignine synthétisée.

International audience; La composition en substances volatiles des feuilles, tiges et racines de Peganum harmala a été étudiée sur matériel frais et sec. Trente et un composés ont été identifiés notamment l’acide propylique, le 2,3-dihydrobenzofurane, le 3-octanone et l’isovanilline. Les feuilles sont plus riches en substances volatiles que les racines et les tiges. Une méthode de séparation entre les colorants et les alcaloïdes des graines de P. harmala a été également mise au point. Les molécules colorées de nature anthraquinonique sont utilisées dans l’artisanat marocain, surtout pour teinter la laine. Nous avons, par histochimie, localisé les pigments anthraquinoniques dans le périsperme et les alcaloïdes dans l’albumen et les cotylédons de la graine de P. harmala. Plante sauvage du sud marocain, P. harmala est donc une source combinée d’arômes et de colorants, substances naturelles susceptibles d’intéresser l’industrie agroalimentaire, pharmaceutique et cosmétique.

We investigated the involvement of polyphenols in the Casuarina glauca-Frankia symbiosis. Histological analysis revealed a cell-specific accumulation of phenolics in C. glauca nodule lobes, creating a compartmentation in the cortex. Histochemical and biochemical analyses indicated that these phenolic compounds belong to the flavan class of flavonoids. We show that the same compounds were synthesized in nodules and uninfected roots. However, the amount of each flavan was dramatically increased in nodules compared with uninfected roots. The use of in situ hybridization established that chalcone synthase transcripts accumulate in flavan-containing cells at the apex of the nodule lobe. Our findings are discussed in view of the possible role of flavans in plant-microbe interactions.

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Freshwater mussels (Dreissena polymorpha) were exposed to lead under laboratory conditions. Patterns of accumulation in whole animals were linear at low concentrations and the tissues lead concentrations were proportional to lead in the medium. At high concentrations of lead in the medium, the accumulation proceeded at a high rate in a saturating mode. Under cyclic conditions of exposure, kinetic of lead accumulation showed a pronounced biphasic mode. It is argued that the biphasic course of accumulation seemed to indicate that the animal acts as a multi-compartments accumulation system. The chelation of lead by EDTA decreased strongly its toxicity and bioaccumulation. In the presence of zinc, uptake of lead in whole Dreissena was reduced in the initial phase of accumulation. Thereafter, the antagonistic effect of Zn decreased and became not significant at the end of exposure period. A rise in temperature decreased lead accumulation by mussels. The results also indicate that accumulation were greatly affected by seasonal conditions. In spring, the rate of uptake was the faster and lead body burden was the most important. By means of histochemical staining method and microanalytical technique (LAMMA), lead has been localized mainly in granules of renal cells and in cytoplasm of granulocytes in gills, pericardial gland, byssal gland and digestive epithelium. The depuration process were low and occured sloly compared to accumulation. The original lead concentrations in the soft parts did not influence significantly the rate of elimination. The presence of EDTA or a rise in tempeature enhanced the rate of lead elimination. In all conditions, the total depuration were not attained and the tissue lead concentrations remained at high levels in comparison to controls; Les dreissènes exposées au plomb accumulent le métal à des niveaux différents selon la concentration métallique dans le milieu. Les cinétiques de bioaccumulation sont linéaires pour les faibles concentrations de Pb dans le milieu et saturantes pour les concentrations élevées. Les paramètres du milieu agissent sur la bioaccumulation. L'edta réduit fortement la bioaccumulation et la toxicité létale du plomb. Le zinc montre une interaction négative avec le plomb dans la phase initiale de la cinétique de bioaccumulation. La température diminue l'accumulation du plomb en stimulant les processus d'excrétion. Dans une exposition cyclique au plomb, la cinétique de bioaccumulation présente une allure sigmoïde ce qui semble montrer que la dreissène se comporte comme un système à compartiments d'accumulation. Il existe une variation saisonnière de la bioaccumulation. C'est au printemps que la vitesse d'accumulation ainsi que les contenus métalliques des organismes sont les plus importants. Le plomb a pu être localisé histochimiquement et par microanalyse essentiellement dans des granules au sein des cellules rénales, dans le cytoplasme des granulocytes dans les branchies, l'épithélium digestif, la glande péricardiale et dans le byssus. La décontamination est faible et se produit lentement par rapport à l'accumulation. Elle est significativement augmentée en presence d'edta et par une élévation de température. Le niveau de contamination initiale ne montre pas d'influence significative sur les taux de décontamination. La décontamination totale n'est pas atteinte

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10 illus. 77 ref. SEM, Inc., AMF O'Hare (Chicago), USA