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Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária As doenças histiocíticas caninas abrangem um amplo espectro de processos patológicos caracterizados por diversos comportamentos biológicos, podendo manifestar-se desde lesões reacionais não neoplásicas (histiocitose cutânea e sistémica) até neoplasias benignas (histiocitoma cutâneo) e tumores malignos (sarcoma histiocítico localizado, disseminado e hemofagocítico). O termo histiócito é genericamente utilizado para descrever a linhagem de células dendríticas e macrófagos, desempenhando um papel fundamental no funcionamento do sistema imunitário. A etiologia e patogénese destas doenças ainda é desconhecida e, muitas vezes, podem ser difíceis diferenciar de inflamações granulomatosas ou de outros tumores de células redondas, como o linfoma. Os objetivos deste estudo consistiram na caracterização de uma amostra de canídeos (n=7) com doença histiocítica diagnosticada relativamente à raça, idade, sexo, sintomas/sinais clínicos, tipo de doença histiocítica, decisão terapêutica e prognóstico, e por fim comparar os resultados obtidos com os dados de outros autores. Desta forma, as doenças histiocíticas que se registaram na amostra em estudo foram o histiocitoma cutâneo (n=4) e o sarcoma histiocítico (n=3). A idade média ao diagnóstico no histiocitoma cutâneo foi 3,75 anos e no sarcoma histiocítico 7,6, não aparecendo haver suscetibilidade ligada ao sexo. As raças que se encontram indicadas na bibliografia como predispostas estiveram presentes neste estudo, entre elas, o Boxer e o Cocker Spaniel no histiocitoma cutâneo, e o Labrador Retriever e o Rottweiler no sarcoma histiocítico. No histiocitoma cutâneo o único sinal clínico observado foi a presença de nódulos cutâneos únicos, enquanto que, no sarcoma histiocítico, os sinais clínicos mais frequentes foram anorexia e desconforto abdominal. O prognóstico para o sarcoma histiocítico parece estar intimamente ligado com a presença de alguns parâmetros clínicos como anemia, trombocitopénia, hipoalbuminémia e envolvimento esplénico, sendo tanto melhor quanto menos destes parâmetros apresentar. Pelo contrário, o prognóstico do histiocitoma cutâneo é bastante favorável, ocorrendo regressão espontânea ao fim de aproximadamente dois meses após o seu aparecimento. ABSTRACT - HISTIOCYTIC DISEASES IN DOGS- STUDY CASES - The canine histiocytic diseases include a wide spectrum of pathologic processes characterized by different biologic behaviours, being able to express themselves as non-neoplastic reactive lesions (cutaneous and systemic histiocytosis), as benign neoplasms (cutaneous histiocytoma) and as malignant tumors (localized, disseminated and hemophagocytic sarcoma). The term histiocyte has been used to generally describe cells of dendritic or macrophage lineage, playing a fundamental role in the function of the immune system. The etiology and pathogenesis of these diseases are still unknown, and can be often difficult to differentiate them from granulomatous inflammations or other round cell tumors, such as lymphoma. The goals of this study were to characterize a sample group of dogs (n=7) with confirmed histiocytic diseases in terms of breed, sex, clinical signs/symptoms, characterization of the disease itself, therapeutic decision and prognosis and, finally, to compare the results obtained with previous reports regarding the same problem. The histiocytic diseases that have been diagnosed in the group sample were cutaneous histiocytoma (n=4) and histiocytic sarcoma (n=3). The average age was 3.75 years at the diagnosis in cutaneous histiocytoma and 7.6 years old in histiocytic sarcoma, without gender susceptibility. The predisposed breeds that are indicated in the bibliography, including Boxer and Cocker Spaniel in cutaneous histiocytoma and Labrador Retriever and Rottweiler in histiocytic sarcoma, were present in this study. In cutaneous histiocytoma, the presence of single cutaneous nodules were the only observed clinical sign, while in histiocytic sarcoma the most frequent clinical signs were anorexia and abdominal discomfort. The prognosis for histiocytic sarcoma seems to be closely related with the manifestation of some clinical parameters such as anemia, thrombocytopenia, hypoalbuminemia and splenic involvement, improving when least negative parameters are present. Contrarily, the prognosis of cutaneous histiocytoma is quite favourable, with spontaneous regression occurring approximately two months after its onset. N/A

Histiocitoma, mastocitoma e tumor venéreo transmissível são tumores frequentes em cães. É importante o diagnóstico diferencial entre estes tumores, principalmente quando o tumor venéreo transmissível é ectópico. A citometria de imagem pode ser usada como auxiliar no diagnóstico diferencial de patologias semelhantes histologicamente, como nos casos destes tumores. O objetivo deste trabalho foi caracterizar morfometricamente o núcleo e a cromatina das células neoplásicas destes tumores e avaliar o potencial deste tipo de análise como ferramenta auxiliar no diagnóstico diferencial destas patologias. Foram utilizados 15 cortes histológicos de cada tipo de tumor, sendo analisados 100 núcleos de cada caso. Além das características geométricas básicas (área, perímetro e elipsidade), tradicionalmente utilizadas como auxiliar no diagnóstico histopatológico, também foram utilizadas medidas geométricas mais elaboradas, bem como a caracterização da textura nuclear através de métodos tradicionais, como a lacunaridade e através de novos métodos propostos neste trabalho. Realizou-se análise de variância e de discriminantes canônicas para a avaliação estatística. A morfometria utilizando medidas básicas mostrou-se ineficiente para diferenciar estes tumores. Com o uso das demais medidas otimizadas pela análise de discriminante canônica, esta metodologia revelou-se uma excelente ferramenta eficiente para o diagnóstico diferencial de histiocitoma e tumor venéreo transmissível. Para o diagnóstico diferencial dos três tipos de tumores esta metodologia deve ser usada somente como ferramenta auxiliar. Histiocytoma, mastocytoma and transmissible venereal tumors are frequent in dogs. The differential diagnostic between these tumors is important, mainly when the transmissible venereal tumor is ectopic. Image cytometry can be used as an auxiliary tool in the differential diagnostic of the histological similar pathology, such as these tumors. The objective of this work was to characterize the nucleaus and the chromatin morphometry of the neoplasic cells of these tumor types and to evaluate the potential of this methodology as differential diagnostic of these pathologies. Fifteen histological slides of each type of the tumor were used and one hundred nucleus of each case were analyzed. Geometric basic characteristics (area, perimeter and ellipticity) traditionally used as auxiliary tools in the histopathological diagnostic, as well as more elaborated geometric measures and the characterization of the nuclear texture through of lacunarity and others methods considered in this work were used Variance and canonical discriminant analysis were made for statistic evaluation. The morphometry using basic measurements was inefficient to identify correctly these tumor types. However, this methodology showed to be a good tool for differential diagnosis of the histiocytoma and transmissible venereal tumor. This methodology should be used only as an auxiliary tool for the differential diagnostic of the three considered tumor types Dissertação (Mestrado)

The case of a female mongrel dog, castrated, 1.5 years old with abnormal structures on the ear, in addition to alopecia and generalized pruritus is presented. The paraclinical aids performed were suggestive for cutaneous histiocytoma in addition to demodicosis. Surgical excision was performed, without observation of subsequent recurrences., Se presenta el caso de un canino hembra, mestizo, castrado, de 1.5 años con presentación de estructuras anormales sobre la oreja, además de alopecia y prurito generalizado. Las ayudas paraclínicas realizadas fueron sugestivas para histiocitoma cutáneo además de demodicosis. Se practicó escisión quirúrgica, sin observación de recidivas ulteriores.

O histiocitoma cutâneo canino é um tumor benigno de células redondas, sendo uma das neoplasias cutâneas mais comuns visto em cães jovens. Este trabalho, tem o objetivo de relatar um caso de um canino jovem diagnosticado com histiocitoma. Após um exame clínico inicial o animal foi encaminhado para o exame de citologia aspirativa por agulha fina, o qual evidenciou alterações características de um histiocitoma. A causa etiológica é de origem desconhecida. Não foi realizado procedimento cirúrgico para exérese do tumor, e sim, instituído tratamento conservador, havendo remissão total do tumor após duas semanas. Canine cutaneus histiocytoma is a benign round cell tumor, being one of the most common cutaneous neoplasms seen in young dogs. This paper aims to report a case of a canine diagnosed with histiocytoma. After an initial clinical examination the animal was referred to the fine needle aspiration cytology, which showed characteristics changes of a histiocytoma. The etiological cause is of unknown origin. No surgical procedure was performed for tumor excision, but conservative treatment was institued with total tumor remission after two weeks.

Resumen Se reporta el caso clínico de un paciente canino de 10 años de edad, macho, mestizo y esterilizado, que llega a la Clínica veterinaria de Antioquia, Medellín Colombia, con una masa de 5 cms de diámetro en la región lateral del prepucio. La masa de forma circular y de consistencia firme, a la evaluación histopatológica correspondió a un histiocitoma de las células de Langerhans. El paciente fue sometido a resección quirúrgica de la masa y tratado posteriormente con cefalexina 25 mg/kg cada 12 horas oral por 1 semana, prednisolona por 20 días y desinfección de la zona con clorhexidina cada 12 horas, además se aplica en la zona dimetilsulfóxido tópico cada 12 horas por 3 semanas. Debido a lo poco descrito este tipo de histiocitoma en dermatología, se considera de valor científico su reporte Abstract A 10–year-old crossbred neutered dog was submitted to Clínica Veterinaria de Antioquia (Medellín, Colombia) presenting a firm and circular mass of 5 cm in diameter in the lateral region of the foreskin. After histopathological evaluation, the mass corresponded to a Langerhans cell histiocytoma. The patient underwent surgical resection of the mass and was then treated with cephalexin (25 mg/kg every 12 hours, orally, for 1 week), prednisolone (20 days), disinfection of the area (every 12 hours using chlorhexidine), and applying dimethyl sulfoxide on the area (every 12 hours for 3 weeks). We consider this report has a scientific value because this type of histiocytoma is rarely described in dermatology Resumo Relatar o caso clínico de um paciente canino de 10 anos de idade, macho, mestiço e esterilizado, que chegou a Clínica Veterinária de Antioquia, Medellín, Colômbia, com uma massa de 5 cm de diâmetro na região lateral do prepúcio, a massa era de forma circular e de consistência firme, na avaliação histopatológica revelou-se um histiocitoma das células de Langerhans, o paciente foi submetido a resseção cirúrgica da massa e tratado posteriormente com cefalexina 25 mg/kg a cada 12 horas oral durante uma semana, prednisolona por 20 dias e desinfecção da região com clorexidina a cada 12 horas, além disto, se aplicou na região afetada dimetilsulfóxido tópico a cada 12 horas durante três semanas. Devido as poucas referencias escritas deste tipo de histiocitoma em dermatologia, considera-se de valor cientifico seu relato

Cancer is one of the leading causes of death in dogs, a fact that has boosted the investigation for new more specific antitumor drugs. This study evaluated the antitumor activity of jasmonates in the canine macrophage cell line DH82 (ATCC # CRL-10389) isolated from a case of malignant histiocytoma. The activities of methyl jasmonate and jasmonic acid were compared to that of doxorubicin by the MTT assay. Methyl jasmonate resulted in the highest inhibition of cell growth (82.2%), followed by doxorubicin (80.7%) and jasmonic acid (36.5%). More detailed studies regarding the action of jasmonates on animal health are necessary, but the present results indicate methyl jasmonate as an alternative to the development of drugs for the treatment of canine oncologies. O câncer é uma das principais causas de morte em cães o que tem impulsionado a pesquisa por novos antitumorais com ação mais específica. Neste trabalho, a atividade antitumoral de jasmonatos foi avaliada na linhagem de macrófagos caninos DH82 (ATCC # CRL-10389), a qual é originada de um caso de histiocitoma maligno. A atividade do metil jasmonato (MJ) e do ácido jasmônico (AJ) foram comparadas à doxorrubicina, através do método de coloração MTT. O MJ apresentou maior inibição (82,2%), seguido da Doxorrubicina (80,7%) e AJ (36,5%). Estudos mais completos da ação dos jasmonatos na saúde animal ainda são necessários, porém, os dados deste trabalho apontam o MJ como alternativa para o desenvolvimento de drogas para o tratamento das oncologias caninas.

A metionina-enceflalina (Met-Ehk) é um pentapeptídeo opióide derivado do pró-normônio proencefalina A. presente em células neuroendócrinas e hematopoéticas. Estudos experimentais evidenciam seu papel na indução, ativação e controle de eventos imunomodula-dores, inclusive com potente efeito inibidor do crescimento tumoral. O presente estudo demonstra que o efeito inibidor da Met-Enk no crescimento de um fibro-histiocitoma, em camundongos BALB/cJ, é influenciado pelo protocolo utilizado, via de administração e dose do pentapeptídeo opióide utilizada no tratamento. A administração de Met_Enk por via intracerebral retardou de forma eficiente o processo de tumorigênese, aumentando a sobrevida dos animais e reduzindo de forma significativa a área tumoral final. Dose baixa (0,25 mg/kg) de Met-Enk administrada por via intracerebral foi ainda mais potente no controle da tumorigênese.

Tese de Doutoramento em Ciências Veterinárias O histiocitoma cutâneo canino é uma neoplasia epidermotrópica das células de Langerhans, muito frequente em cães jovens. Os fenómenos de regressão, a que está associada, tornam esta neoplasia um campo de interesse único para os estudos de imunidade celular. Com o objectivo de contribuir para a compreensão do processo de regressão do histiocitoma, foram analisados 93 tumores classificados como histiocitoma cutâneo canino. Foi realizada a caracterização de alguns parâmetros clínicos da série em estudo, como o sexo, a idade e a raça dos animais, assim como o tamanho e localização das lesões. Foram utilizados métodos de coloração e de histoquímica, imunocitoquímica (vimentina, queratina, desmina, proteína S100, caderina E, lisozima, MAC387, VEGF, antigénio Ki-67, MHC classe II, CD79 e BLA), histoquímica molecular (TUNEL), microscopia electrónica de transmissão (MET), imunocitoquímica ultrastrutural (MHC classe II) e citometria de imagem. Os tumores ocorreram principalmente em animais jovens, com predomínio na raça Boxer. As lesões eram únicas, elevadas, muitas vezes em forma de “botão”, com diâmetro geralmente inferior a 2 cm e localizavam-se com maior frequência na cabeça e nos membros. O histiocitoma ocupava a derme até à junção dermo-epidérmica, muitas vezes com invasão de epiderme, que frequentemente se encontrava heperplástica ou ulcerada. Para além das células tumorais, observou-se um infiltrado linfóide, variável em quantidade e distribuição no tumor. Assim, foram identificados quatro padrões histológicos, segundo a quantidade e distribuição do infiltrado linfóide, o que levou à classificação do histiocitoma em quatro grupos histológicos. Os tumores do grupo I apresentavam escasso infiltrado linfóide de, localizado na periferia do tumor. Os tumores do grupo II apresentavam infiltrado linfóide moderado, formando estruturas nodulares na periferia do tumor, no grupo III o infiltrado era abundante e estendia-se ao centro do tumor e, no grupo IV, o infiltrado linfóide ocupava uma área superior às células tumorais. Incluíram-se 15 tumores no grupo I, 15 no grupo II, 42 no grupo III e 21 no grupo IV. O histiocitoma cutâneo canino apresentou um comportamento biológico pouco agressivo, tendo as células um conteúdo diplóide de ADN. As características ultrastruturais das células tumorais foram compatíveis com ontogenia nas células de Langerhans. As células do histtiocitoma apresentaram imunorreactividade para a vimentina, a caderina E, o MHC classe II, o BLA.36 e de forma inconstante para a lisozima e a proteína mielomonocítica L1 (MAC387). Não apresentaram reacção positiva para a desmina, a proteína S100 e o VEGF. No histiocitoma observaram-se linfócitos T em todos os grupos histológicos e linfócitos B principalmente nos grupos II, III e IV. Os macrófagos, identificados pela positividade ao MAC387, eram em maior quantidade nos grupos III e IV. Na análise da imunorreactividade para a caderina, verificou-se uma diminuição da sua expressão da superfície para a base do tumor. A intensidade de marcação para a caderina E apresentou ainda associação estatisticamente significativa com o infiltrado linfóide. No estudo imunocitoquímico do MHC classe II, visualizado por microscopia de luz e por microscopia electrónica de transmissão foram observados dois padrões distintos de imunorreactividade: membranar e citoplasmática, associada a perfis membranares, endossomas e lisossomas. O primeiro ocorria principalmente nos tumores de infiltrado abundante e o segundo nos tumores de escasso infiltrado inflamatório linfóide, quer por linfócitos T quer por linfócitos B. O índice proliferativo do histiocitoma cutâneo canino, determinado pela positividade ao Ki-67 foi em média de 23,6% valor que, em quase todos os casos, foi inferior à percentagem de células em apoptose determinada pelo método de TUNEL (média 39,4%). A Análise das associações entre as variáveis estudadas e o grupo histológico indicaram alguns parâmetros que poderão estar implicados na dinâmica do processo regressivo do histiocitoma cutâneo canino. A regressão nos histiocitomas, traduzida por uma diminuição do tamanho da lesão, esteve relacionada com a ulceração, a necrose, a fraca expressão do factor de crescimento endotelial, o aumento da expressão membranar do MHC classe II, a infiltração de linfócitos T e B, a diminuição da expressão da caderina E e um índice apoptótico superior ao índice de proliferação. A regressão aparece assim como um processo multifactorial, justificada pela interacção entre diversos factores, alguns dos quais estudados por nós e de certo muitos outros ainda por estudar. Canine cutaneous histiocytoma is na epidermotropic tumour of Langerhans cells which is very frequent in young dogs. The regression phenomena to wich i tis associated makes this na attractive system for analysis of cellular immunity. In order to contribute to the understanding of the histiocitoma regression, 93 tumours, classified as canine cutaneous histiocitoma, were analysed. The characterization of some clinical parameters of the studied series, such as sex, age and animal breed, was carried out, as well as the size and location of the lesions.We used stains and histochemical methods, immunocytochemistry (vimentina, keratin, desmin, S100 protein, E-cadherin, lysozyme, MAC387, VEGF, Ki-67 antigen, MHC class II, CD3, CD79 and BLA.36), TUNEL, transmission electron microscopy, immunoelectron microscopy and image cytometry. The tumours occurred mainly in young animals, especially in Boxer breed. The lesions were unique, many times as dome-shaped nodule, with a diameter usually inferior to 2 cm, and were situated with much more frequency in the head and the extremities. The histiocitoma occupied the superficial dermis, often with epidermis invasion, which was, many times hyperplasic or ulcerated. A lymphoid infiltration was observed which was variable in quantity and distribution in the tumours. Thus, four histological patterns, according to the quantity and the distribution of lymphoid infiltration, were identified, leading to the histiocitoma categorization into 4 histological groups. The tumours of group I presented poor lymphoid infiltration outside the tumours. The tumours of group II presented moderate lymphoid infiltration but forming nodular structures outside the tumour. In group III the infiltration was abundant and stretched into the tumours centre and in group IV the lymphoid infiltration occupied an area superior to the tumour cells. Fifteen tumours in group I, fifteen in group II. Forty-two in group II and twenty-one in group IV were included. The canine cutaneous histiocitoma presented a low aggressive biological behaviour and a diploid content of DNA. The ultrastructural characteristics of the tumour cells were compatible with ontogeny in the Langerhans cells. The cells of the histiocitoma expressed vimentina, E-cadherin, MHC class II, BLA.36 and inconsistently lysozyme and MAC387. No positive reaction to desmin, S100 protein and VEGF was presented. In the histiocitoma T lymphocytes were observed in all histological groupsand B lymphocytes principally in groups II, III, and IV. The macrophages identified by the posititivity to MAC 387 were in a larger quantity in groups III and IV. In the analysis of the immunoreactivity to E-cadherin, a decrease of its expression from the surface to the tumour basis was verified. The intensity of the reaction to E-cadherin presented a significative statistical association with the lymphoid infiltration. In the study of the immunocytochemistry of MHC class II antigen, visualized by light microscopy and by electronic microscopy, two principal patterns of MHC class II antigens expression were observed: a focal juxtanuclear cytoplasmatic reaction, associated to endosomal and lysosomal compartments or a rim-like staining in the cell periphery associated to membranes outlines. The first occurred, principally, in tumours of abundant infiltration and the second in tumours of poor lymphoid inflammatory infiltration either by lymphocytes or B lymphocytes. The proliferative index of the canine cutaneous histiocitoma, determined by the positivity to Ki-67 was on average 23,6%, a value that, in almost all the cases, was inferior to the percentage of cells in apoptose determined by the TUNEL method (average 39,4%). The analysis of associations between the studied variables and the histological group shoved some parameters which can be implied in the dynamic of the regressive process of the canine cutaneous histiocitoma. The regression in the histiocitoma, portrayed by a decrease of the lesion size, was related to the ulceration, necrosis, poor expression of the vascular endothelial growth factor, increase of the membranous expression of MHC class II, T lymphocytes and B infiltration, decrease of the E-cadherin expression and the apoptotic index superior to the proliferous index. The regression appears, thus, as a multifactorial process justified by the interaction among different factors that we have analysed and probably by many other not yet studied.

A metionina-enceflalina (Met-Ehk) é um pentapeptídeo opióide derivado do pró-normônio proencefalina A. presente em células neuroendócrinas e hematopoéticas. Estudos experimentais evidenciam seu papel na indução, ativação e controle de eventos imunomodula-dores, inclusive com potente efeito inibidor do crescimento tumoral. O presente estudo demonstra que o efeito inibidor da Met-Enk no crescimento de um fibro-histiocitoma, em camundongos BALB/cJ, é influenciado pelo protocolo utilizado, via de administração e dose do pentapeptídeo opióide utilizada no tratamento. A administração de Met_Enk por via intracerebral retardou de forma eficiente o processo de tumorigênese, aumentando a sobrevida dos animais e reduzindo de forma significativa a área tumoral final. Dose baixa (0,25 mg/kg) de Met-Enk administrada por via intracerebral foi ainda mais potente no controle da tumorigênese. Methionine-enkephalin (Met-Enk) is an endogenous opioid pentapeptide derived from the prohormone proenkephalin A, present in neuroendocrine and hematopoietic cells. Enkephalins are known to play an important role on the processes of induction, activation and control of immunomodulatory events. Met-Enk has been considered a potent antitumoral agent. The present study shows that Met-Enk exerts an inhibitory effect on the growth of a macrophage derived fibrous histiocytoma (MC-II) inoculated intradermally into BALB/cJ mice. Such effect was mainly influenced by the protocol, route of administration and concentration of Met-Enk used for treatment. Neither higher doses of Met-Enk injected intracerebrally or subcutaneously, nor the use of various protocols of treatment, did modify the process of tumorigenesis. In contrast, low dose (0.25mg/kg) of Met-Enk injected intracerebrally together with tumor inoculation, significantly reduced tumor growth and prolonged survival rate.