Search

This book represents a synthesis of knowledge and best practice in the field of DNA-based biomonitoring at the time of writing. It has been written with end-users of molecular tools in mind, as well as those who are new to the field in research settings and are looking to gain an overall grounding in the subject area. For each of the main types of sample (water, soil / sediment, bulk invertebrates and diatoms), and for each stage of the field and laboratory processes, we outline key considerations, decisions that need to be made, factors that might influence those decisions, and trade-offs inherent in the choices made. We hope that this will help users, practitioners, and those commissioning DNA-based monitoring programmes to navigate this large field and critically evaluate the strengths and weaknesses of different analysis workflows based on context, project aims and available resources. DNA-based methods for species detection and identification have revolutionised our ability to assess biodiversity in terrestrial, freshwater and marine ecosystems. Starting from the seminal study that used eDNA to detect invasive american bullfrogs in France (Ficetola et al. 2008), research conducted over the last decade has demonstrated the power of these approaches for surveying a wide range of species and groups. Early applications included the use of eDNA to monitor Asian Carp in the USA (Jerde et al. 2013). Following heavy scrutiny, the method was eventually adopted, and is still employed today by the United States Geological Survey (USGS). A flurry of research followed, with tests designed for many threatened and invasive species including New zealand mudsnails (Goldberg et al. 2013), american crayfish (Geerts et al. 2018), gammarids (Blackman et al. 2017), and great crested newts (Biggs et al. 2015). The great crested newt eDNA test has been employed for regulatory monitoring in the UK since 2014. During the same time period, there was a proliferation of research studies that used high-throughput sequencing approaches to describe whole communities of organisms from mixed species and environmental samples, using an approach termed DNA metabarcoding (Taberlet et al. 2012c). As the field developed fast and the approaches were applied to a wide range of research and monitoring objectives, a high level of methodological variation was introduced at all stages of the workflow (Seymour 2019). Thus, while a significant level of consensus on scientific best-practice now exists in many areas, this may not be readily discerned from the now-extensive body of research literature. As environmental practitioners and policy makers are now increasingly starting to integrate DNAbased methods into routine monitoring applications including protected species licensing1, statutory monitoring2 (Hänfling et al. 2016) and environmental impact assessment3, various national and international efforts have been undertaken to standardise methods and integrate them into monitoring frameworks (Pilliod et al. 2019, Loeza-Quintana et al. 2020, Minamoto et al. 2021, Pawlowski et al. 2020a4). In Europe, the EU COST Action DNAqua-Net (Leese et al. 2018) has been working towards incorporating molecular monitoring tools for Biological Quality Elements (BQEs, e.g., fish, macroinvertebrates and phytoplankton- benthos) into the Water Framework Directive (WFD, 2000/60/EC)5 and the Marine Strategy Framework Directive (MSFD, 2008/56/EC)6. Thus, emphasis now shifts from fundamental research to robust and efficient application of DNAbased methods for operational use at large scales. This requires that scientific robustness is balanced with consideration of the practical realities faced by environmental managers. Moreover, there is increased need for strong quality assurance in a setting where non-expert field samplers and commercial laboratories are involved with the generation of data that non-specialist decision-makers then rely on to inform potentially costly action (or non-action). This places increased emphasis on robustness, replicability, traceability and ease-of-use, which may not always be the central focus of studies carried out in the academic research environment. This document aims to summarise the scientific consensus relating to every step of the field and laboratory workflows involved in the most common types of samples and analyses. We do not go into great detail regarding bioinformatics (computational processing of sequence data) and data analysis since these are extensive topics in their own right. We uniquely set the field and lab steps in the context of the practical and logistical constraints faced by environmental managers in terms of cost, logistics, safety, ease-of-use, and quality assurance, highlighting key decisions to be made and the inherent trade-offs associated with the various options. We hope that this will support non-experts, and those new to the field, to navigate the key considerations associated with planning or evaluating monitoring programmes using DNA-based monitoring methods. Additionally, it will aid decision-makers in writing and evaluating tenders and proposals, ensuring that the methods used for a given project are fit-for-purpose and that results are correctly interpreted. Alongside the many areas of emerging consensus, there remain some areas where further research is still required to balance scientific best-practice with the constraints and priorities of end-users. We hope that by shining a light on the importance of these issues, the research community will be encouraged to address them. More generally, we hope to inspire researchers in this now highly-applied scientific field to consider end-user constraints when designing and implementing research projects. This will help to accelerate uptake by users and maximise the impact of research. DNA-based bioassessment methods continue to evolve, and there are several emerging technologies that show exciting promise to move beyond even what is possible today. Examples include in-field sequencing using the MinION device from Oxford Nanopore Technologies (Pomerantz et al. 2018, Davidov et al. 2020, Hatfield et al. 2020), PCR-free metagenomic approaches (Bista et al. 2018, Giebner et al. 2020) and CRISPR for rapid detection of species, which is particularly relevant for invasive an non-native species monitoring (Williams et al. 2019, 2020). We recognise the potential of these methods, but do not consider them in detail here, since they are not yet far enough developed for routine application. EU COST Action DNAqua-Net (CA 15219 a COST (European Cooperation in Science and Technology). DNAqua-Net, European Union Horizon 2020 Published Refereed Current 14.a Mature Multi-organisational International Genetic differentiation Species distributions Method

På uppdrag av Länsstyrelsen i Blekinge län har AquaBiota Water Research tillsammans med AERC genomfört nätprovfiske med kustöversiktsnät samt provtagning och analys av eDNA med syfte att kartlägga fisksamhället i området kring Gåsefjärden i Karlskrona skärgård.Totalt inventerades 45 stationer med nätprovfiske och 17 med eDNA, varav 16 stationer var gemensamma för båda metodikerna. Sammantaget visar inventeringarna att fisksamhället i området karaktäriseras av ett högt inslag av sötvattensfiskar, framförallt abborre och mört men i de yttre delarna är det marina inslaget tydligare med förekomst av arter som sill, skarpsill och torsk. Andel av rovfisk var relativt låg för båda metoderna Det kan indikera både dålig återväxt av rovfiskar och högt fisketryck. Totalt identifierades 30 fiskarter i det provtagna området, varav 21 arter och 3336 individer fångades med nätprovfiske. Vid de 16 stationerna där båda metodikerna användes tillsammans detekterades 16 arter med nätprovfiske och 24 arter med eDNA (samt ytterligare två artpar, ett artkomplex och två arter som saknar referenssekvens). Totalt identifierades 3 rödlistade fiskarter i hela området: ål (akut hotad), torsk (sårbar) och vimma (nära hotad).De arter som enbart detekterades med eDNA är arter som mera sällan fångas vid nätprovfisken såsom storspigg, gädda, ål och simpor. Enbart en tånglakeindivid fångades i provfisket, arten detekterades även med eDNA. Information om längd och åldersanalys från nätprovfisket visade att inga årsyngel av abborre förekom i området, vilket kan tyda på en sämre lokal reproduktionsframgång 2019.Nätprovfiske och eDNA kompletterar varandra på ett bra sätt där metoderna bidrar med olika information. Resultaten för relativ förekomst av de vanligaste medelstora arterna (mört och abborre) har en god överensstämmelse mellan metoderna. eDNA är att föredra då fiskarters förekomst i ett område är av intresse då det är fördelaktigare ur kostnadssynpunkt samt bevarandeetiska skäl. Nätprovfiske är att föredra då information om arternas fångst per nät och natt i abundans och biomassa samt längdfördelning och tillväxt är av intresse.

Coral reefs belong to the most diverse and the most threatened ecosystems on earth. Anthropogenic stressors and climate change have led to mortalities at levels unprecedented in modern times. The aims of this thesis are to investigate aspects of the corals’ ability to reproduce, disperse, adapt and survive. Papers I-III study reproduction in a common soft coral species, Sarcophyton elegans, with previously unknown reproductive modes. Paper IV investigates genetic distribution of coral-symbiont associations in Galaxea fascicularis focusing on adaptation to the environment along the coastline of Vietnam. Sarcophyton elegans is a gonochoric broadcast spawner with a 1:1 sex ratio. Reproduction is strictly size dependent. Oogenesis takes 19-24 months, with a new cycle commencing every year. Spermatogenesis takes 10-12 months. The majority of gametes were released during the annual austral mass spawning event after full moon in November, but spawning also occur between August and February. The polyps at the outer edge of the colonies released their gametes first, followed by polyps situated closer to the center during subsequent months. Colonies upstream in the prevailing current spawn earlier than those downstream. The colonies were arranged in clusters of alternating males and females, which spawned simultaneously and were of the same genotype. Fission and buddying is a common mode to expand locally. Additionally, females undergoing fission divided into the most fecund size classes. The G. fascicularis and their associated symbionts were not genetically coupled to each other but to environmental factors. The host displayed an inshore-offshore zonation, with higher diversity offshore. The D1a symbiont exhibited an inshore- offshore zonation. In contrast; the 5 different C symbiont types showed a latitudinal distribution gradient, which shifted in dominance north to south. The study highlights the importance of protecting resilient coral and algal genotypes in stressed areas and the need to understand reproductive modes for coral conservation. Các rạn san hô là một trong những hệ sinh thái có tính đa dạng và bị đe dọa cao nhất trên trái đất. Các áp lực từ con người và nhiệt độ nước biển tăng (SSTs) đã gây ra hiện tượng “tẩy trắng” gây chết san hô ở mức độ cao chưa từng thấy trong thời điểm hiện tại. Mục tiêu của nghiên cứu này là tìm hiểu khả năng của san hô trong thích nghi, phân tán và sống sót nhằm duy trì quần thể. Bài báo số II-III là những nghiên cứu đầu tiên về đặc điểm sinh sản của loài san hô mềm phổ biến, Sarcophyton elegan tại Australia. Bài báo số IV nghiên cứu về phân bố nguồn gen của tảo cộng sinh trong loài san hô Galaxea fascicularis, tập trung vào sự thích nghi với môi trường dọc theo vùng biển Việt Nam, khu vực bị ô nhiễm từ lục địa. Sarcophyton elegans được biết với đặc điểm sinh sản cả vô tính và hữu tính. Loài này là loài sinh sản bằng cách phân tán trứng, với tỷ lệ giới tính là 1:1 và sự sinh sản hữu tính bị khống chế nghiêm ngặt bởi kích cỡ của tập đoàn (Bài báo II, phần phương pháp của Bài báo I). Quá trình tạo trứng kéo dài từ 19 đến 24 tháng với chu kỳ sinh sản lặp lại hàng năm, và sự sinh tinh kéo dài từ 10 đến 12 tháng. Phần lớn giao tử được giải phóng trong một thời gian ngắn sau ngày trăng tròn của tháng 11, nhưng giao tử vẫn được giải phóng trong ngày trăng tròn của các tháng từ tháng 8 đến tháng 1 năm sau. Các polyp autozooid nằm phía ngoài của tập đoàn giải phóng giao tử trước, sau đó là các polyp nằm gần lõi trong các tháng tiếp theo. Các tập đoàn ngược lên trong dòng chảy thịnh hành đẻ trứng sớm hơn các tập đoàn xuôi dòng khoảng một tháng (Bài báo II). Các tập đoàn được sắp xếp thành từng đám từ 7 đến hàng trăm tập đoàn trong mỗi nhóm, bao gồm cả đực và cái. Các tập đoàn trong cùng một nhóm sinh sản cùng một thời điểm. (Bài báo II) và mỗi nhóm có cùng một kiểu di truyền (Bài báo III) có đầy đủ 13 (có thể là 22) kiểu di truyền khác nhau. Sự phân đôi và kết đôi phụ thuộc hoàn toàn vào kích thước và có lẽ là phương thức mở rộng phổ biến nhất. Sự phân đôi phải mất 2 năm hoặc hơn mới hoàn thành. Thêm vào đó, con cái trải qua quá trình phân đôi thành kích cỡ có khả năng sinh sản cao nhất (Bài báo III). Có 6 nhóm haplotypes (mtDNA) của loài G. fascicularis và tảo cộng sinh Symbiodinium (ITS2 rDNA) không đóng cặp với nhau nhưng lại gắn với các yếu tố môi trường, có thể như kết quả của phương thức sinh sản của vật chủ (Bài báo IV). Vật chủ có sự phân vùng rõ rệt giữa gần bờ và xa bờ, với sự đa dạng cao hơn hẳn của các rạn xa bờ so với các rạn gần bờ, khu vực thường xuyên bị độ đục, ô nhiễm và lắng đọng trầm tích tác động. Tảo cộng sinh Symbiodinium D1a ITS2 điểm hình của sự phân vùng gần bờ và xa bờ. Ngược lại, 5 loại C khác lại có sự phân vùng theo vĩ tuyến, với sự tăng lên rõ rệt theo chiều Bắc-Nam, cùng với sự ổn định SST và sự tăng lên của các SST. Nghiên cứu này đã chỉ rõ tầm quan trọng trong bảo vệ các loài san hô và tảo biển bản địa tại các khu vực bị đe dọa (Bài báo IV) và sự cần thiết phải hiểu các phương thức sinh sản (Bài báo II-III) và các thông số môi trường trong việc xác định mức độ đa dạn sinh học và sự hấp thụ của sinh vật cộng sinh trong san hô cứng và san hô mềm. At the time of the doctoral defense, the following papers were unpublished and had a status as follows: Paper 3: Manuscript. Paper 4: Manuscript.