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蜂蜜は蜜蜂により産生される天然成分で、食用としてだけではなく、健康維持や創傷、風邪、皮膚炎の治療薬として世界で広く利用されている。我々は、これまでにナイジェリア産の蜂蜜が免疫作用を示すことを報告してきたが、日本国産蜂蜜については、まだ免疫機能への十分な解明がなされていない。そこで、日本国産蜂蜜による免疫機能として、サイトカインの遺伝子発現に及ぼす影響を、ソバ、クリ、シロハナマメ、クロガネモチ、シロハナセンダングサ、ミカン、トチ、ビワ、フカ、レンゲ、アカシア、百花蜂蜜について、in vitro、in vivo系で検討した。in vitro系において、マクロファージ細胞株であるRaw264.7細胞のIL-1β mRNA発現は、クリ、シロハナマメ、ミカン、トチ、ビワ、アカシア蜂蜜において有意な増加が認められ、CXCL2 mRNA発現は、クリ、シロハナマメ、トチ蜂蜜において有意な増加が認められた。次に、腹腔細胞数、細胞分画、表面抗原陽性細胞比率への影響を、IL-1β、CXCL2 mRNA発現の増加が見られたクリ、シロハナマメ、トチ蜂蜜について、in vivo系で検討した。マウスの腹腔総細胞数は、クリ、シロハナマメ蜂蜜において有意な増加、トチ蜂蜜において増加傾向が確認され、好中球の比率の増加が認められた。さらに、腹腔細胞の表面抗原陽性細胞比率をFACS解析で測定したところ、クリ、シロハナマメ、トチ蜂蜜においてGr-1、TLR2抗原の有意な増加、シロハナマメ、トチ蜂蜜でCD11b抗原の有意な増加、クリ蜂蜜でCD11b抗原の増加傾向が認められた。CD14、TLR4、F4/80抗原は有意な差は認められなかった。以上の結果により、日本国産蜂蜜はTLR2を介しマクロファージを活性化し、IL-1βを増強し、その結果、好中球のケモカインであるCXCL2 が産生され、好中球が誘導されることが示唆された。, Honey is natural edible product collected by Apis mellifera. Honey is not only for food, widely used in the world for the health maintenance, cold, dermatitis and treatment of wound. We previously reported that honey in Nigeria indicates the immunological effect. But Japanese honey have not been yet fully investigated on the immune function. Therefore, we investigated the effect on the immune function in vitro and in vivo systems using twelve Japanese honeys. In the in vitro system, six kinds and three kinds of honeys significantly enhanced IL-1β and CXCL2 mRNA expressions. In the in vivo system, two kinds of honeys significantly increased peritoneal cells and percentage of neutrophils in mice. Furthermore, two kinds of honeys significantly increased percentage of Gr-1, TLR2 and CD11b surface antigens positive cells in peritoneal cells.Percentage of CD14, TLR4 and F4/80 surface antigens positive cells were not significantly increased. These results suggest that neutrophil was induced by production of CXCL2 via augmentation of IL-1β mRNA through the activation of macrophage mediated with TLR2 by Japanese honey., 1, KJ00009329060, P, 論文, Article

ハチミツは蜜蜂により産生される天然成分で、健康維持のほかに創傷、風邪、皮膚炎の治療薬として世界で広く利用されている。我々も、ナイジェリア産のハチミツが免疫作用を示すことを報告してきたが、日本国産ハチミツについては、まだ免疫機能への十分な解明がされていない。そこで、肺の感染防御において重要な役割をしている免疫細胞である肺胞マクロファージ（AM）に着目し、その免疫機能の活性化に関わるサイトカインのmRNA発現に及ぼす日本国産ハチミツの影響について検討した。AMのサイトカインmRNA 発現は、LPS 刺激によってIL-1 β、TNF-α、CXCL1,2 の発現が有意に増強した。日本国産ハチミツ（京産ハチミツ）は5mg/ml添加濃度で最もサイトカインmRNA発現を増強させた。各種ハチミツの影響について、そば、くり、白花豆、とち、くろがねもちハチミツについて検討したところ、くろがねもちハチミツがIL-1 β mRNA発現を最も増強させ、とち、くろがねもちハチミツがTNF- α mRNA発現を増強させた。くろがねもちハチミツはLPS刺激で増強したIL-1 βのmRNA発現を更に増強させ、くりハチミツはLPS で増強したTNF-αのmRNA発現を減少させた。以上の結果から、日本国産ハチミツはAMの免疫機能を増強させる可能性が示され、ハチミツの違いにより、その活性は異なることが示唆された。また、蜜源の違いにより、LPS刺激により増強したサイトカインmRNA発現を増強もしくは抑制することが示され、AMの免疫機能への影響が異なり、ハチミツが免疫改善に応用できる可能性が示唆された。, Honey is used not only as a natural food, but also as a traditional medicine for colds, skin inflammation and burns wounds as well as general health care. We proposed that Jungle honey in Nigeria would have potential biological effects, especially on immune cell activity. However, the effects of Japanese honey on immune functions are not clearly known. Therefore, we investigated the effects of Japanese honey on immune functions of alveolar macrophages that play an important role of immune system in the lung. The mRNA expressions of IL-1 β ,TNF-α and CXCL1,2 in alveolar macrophage were significantly increased by LPS stimulation. Kyoto Sangyo honey as a kind of Japanese honey enhanced the mRNA expression of cytokines at the concentration of 5mg/ml. Various Japanese honeys also enhanced IL-1 β and TNF-α mRNA expressions. However,Chest nut honey inhibited enhanced-TNF-α mRNA expression by LPS stimulation. Japanese honeys enhance the immune functions and the effects differ by the difference flower sources of honeys. These results suggest that Japanese honeys may contribute to modification of immune functions., 4, KJ00008753799, P, 研究論文, Paper

タバコ喫煙は肺疾患や肺癌などの発症と深く関わっていることが知られている．タバコ煙の中には約6000種類以上の化学物質が含まれる．肺には，肺の免疫系において重要な役割を果たしている肺胞マクロファージ(Alveolar Macrophages:AM) が常在し，吸入されたタバコ煙がAMの機能に影響を与える可能性が考えられる．我々は以前より，喫煙によるAMの抗原提示能，食作用，サイトカイン産生などの免疫機能の抑制を報告してきたが，この抑制機構についてはいまだ解明されていない．この抑制の機序の一つとして，喫煙によるAMのDNA損傷とそれに引き続く細胞反応が関わっている可能性が考えられる．そこで今回，タバコ主流煙曝露によるAMのDNA損傷への影響，それに引き続くアポトーシスの誘導，細胞増殖およびDNA修復の可能性について検討した． タバコ喫煙は，C57BL/6マウスに1日20本，10日間，タバコ主流煙を曝露し，AMは気管支肺胞洗浄により回収した．喫煙によりAM数の増加，AMの大型化と細胞内部構造の複雑化，AMの細胞質内への封入体の出現が認められ，喫煙によるAMの形態学的な変化が認められた．AMは食作用により異物を取り込み，活性酸素を産生し取り込んだ異物を殺菌，除去する．喫煙によりAMがタバコ煙粒子を取り込み，活性酸素種を産生することが考えられたため，喫煙によるAMの活性酸素種産生への影響を検討した．AMの活性酸素種(H₂O₂, O₂-)産生は，喫煙により増加した．活性酸素種はDNA損傷を誘導することから，喫煙によるAMのDNA損傷への影響を検討したところ，喫煙により，AMのDNA損傷が誘導されることが確認された．DNA損傷に続く細胞反応のひとつに，アポトーシスが知られていることから，喫煙により誘導されたDNA損傷が，アポトーシスを引き起こすか否かについて検討した．Fasレセプター(CD95) の発現は，喫煙により減少した．アポトーシスの初期の特徴であるミトコンドリア膜電位の低下が喫煙により認められた．一方，アポトーシスの実行役であるCaspase-3 mRNA発現およびCaspase-3/7活性は減少し，喫煙によってAMのアポトーシスが抑制されることが明らかになった．次にアポトーシス抑制因子であるXIAP, survivinのmRNA発現を検討したが，非喫煙群と喫煙群で差はなかった．また，細胞の生存に重要な役割を果たすAktのmRNA発現およびリン酸化は，喫煙により有意に減少した．喫煙によるアポトーシス抑制は，DNA損傷の修復もしくは細胞増殖が原因であることが考えられたため，AMのDNA合成について検討した．喫煙により3H-Thymidineの取り込みが増加し，喫煙がAMのDNA合成を促進することが確認された．このDNA合成が細胞増殖のためであるかどうかを検討したが，生存細胞数は非喫煙群と喫煙群で差はなかった．また，細胞周期に関しても，非喫煙群と喫煙群で差はなかった．さらに，喫煙群から回収したAMを24時間培養することにより，DNA損傷が修復されたことから，喫煙によるAMの3H-Thymidineの取り込みの増加は，細胞増殖ではなくDNA損傷の修復によることが示唆された． 以上の結果より，喫煙によるDNA損傷と修復の繰り返しや修復の間違いが，AMの免疫機能抑制に関わり，機能低下したAMがアポトーシスを起こさずDNA修復を通して肺内に留まり続けることが，喫煙による肺疾患や肺癌の発症と密接に関わっている可能性が示唆された．