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Submitted by Luiz Ricardo Gonçalves null (tatinho_tva@hotmail.com) on 2020-10-27T13:38:28Z No. of bitstreams: 1 Tese Luiz 240820 corrigida com CA.pdf: 4084325 bytes, checksum: d5af51eddb0d8b45cabe9fac94e89dec (MD5) Approved for entry into archive by Laudicélia Martins Arantes (lm.arantes@unesp.br) on 2020-10-27T20:54:45Z (GMT) No. of bitstreams: 1 gonçalves_lr_dr_jabo.pdf: 4127335 bytes, checksum: e2c90260141088fa88f64cd68e4057a3 (MD5) Made available in DSpace on 2020-10-27T20:54:45Z (GMT). No. of bitstreams: 1 gonçalves_lr_dr_jabo.pdf: 4127335 bytes, checksum: e2c90260141088fa88f64cd68e4057a3 (MD5) Previous issue date: 2020-07-31 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo (FAPESP) Hemoplasmas e Bartonella spp. compreendem dois importantes grupos bacterianos amplamente distribuídos e que infectam animais e humanos. Hemoplasmas são bactérias epicelulares, não cultiváveis, sem parede celular, e que se ligam à superfície dos glóbulos vermelhos de mamíferos. Por outro lado, Bartonella spp. são bactérias Gram-negativas que infectam principalmente eritrócitos e células endoteliais de várias espécies de mamíferos. Com o objetivo de avaliar a ocorrência e a diversidade genética desses grupos bacterianos, pequenos mamíferos e seus ectoparasitos foram amostrados em Campo Grande, Mato Grosso do Sul (MS) e Três Barras, Santa Catarina (SC), Brasil. Além disso, ruminantes e ectoparasitas associados foram amostrados em Campo Grande, MS, e Passos, Minas Gerais (MG), Brasil. Por fim, amostras de sangue de búfalos selvagens submetidos a um processo de translocação entre dois locais em Moçambique, África, também foram analisadas. Ensaios de PCR convencional, em tempo real quantitativo com sonda de hidrólise e com intercalante de DNA seguido de dissociação em alta resolução, análises filogenéticas – Máxima verossimilhança, Neighbor-joining e Inferência Bayesiana – e de bioinformática – Neighbor-Net e Templeton Crandall e Sing (TSC) network, foram utilizados para avaliar a ocorrência e diversidade genética de espécies de hemoplasmas e Bartonella spp. O presente estudo mostrou que 31,4% (33/105) dos pequenos mamíferos (sete [50%] capivaras; 14 [32,5%] gambás; 12 [30,7%] ratos) e 4,3% (5/116) dos ectoparasitas (três [2,6%] Amblyomma spp.; dois [1,7%] Polypax spinulosa) amostrados em Campo Grande foram positivos para hemoplasmas baseado no gene 16S rRNA. As análises filogenéticas e de distância mostraram que os hemoplasmas identificados parecem ser espécie-específicos. Em contraste, nenhum dos roedores e marsupiais, assim como seus ectoparasitas, mostraram-se positivos para Bartonella sp. nos ensaios moleculares e/ou na cultura. Por outro lado, ensaios moleculares dirigidos para os genes nuoG e 16S e para região ITS mostraram a presença de DNA de Bartonella coopersplainsensis em dois (3,6%) dos 55 Rattus rattus amostrados em Três Barras, SC. Este é o primeiro relato de B. coopersplainsensis na América do Sul. Além disso, DNA de Bartonella bovis foi encontrado em 21 das 75 (28%) amostras de sangue de bovinos e em 13 dos 126 (10,3%) carrapatos (Rhipicephalus microplus) coletados em Campo Grande. Da mesma forma, um (1%) dos 101 búfalos e quatro (4,2%) das 95 amostras de piolhos (Haematopinus tuberculatus) obtidas em Passos, MG, foram positivas para Bartonella spp. Enquanto o DNA de B. bovis foi identificado em uma amostra de sangue de búfalo, o DNA da espécie de Bartonella sp. amplificado nos piolhos foi geneticamente relacionado à Bartonella sp. previamente detectada em Haematopinus quadripertusus em Israel. Em contraste com as sequências idênticas detectadas nos piolhos, vários genótipos de B. bovis foram identificados dentre as amostras de sangue de bovinos. Por fim, entre os 97 búfalos africanos, DNA de Bartonella spp. e hemoplasmas foi detectado em 4,1% e 15,4% dos animais, respectivamente. A análise pelo BLAST mostrou a ocorrência de três agentes associados a bovinos: Bartonella bovis, Mycoplasma wenyonii e 'Candidatus M. haemobos'. Tais achados contribuem para o entendimento sobre a distribuição e diversidade genética de hemoplasmas e Bartonella spp. que circulam em roedores, gambás, bovinos, búfalos e ectoparasitos no Brasil e Moçambique. Hemoplasmas and Bartonella spp. comprise two important and widely distributed bacterial groups that can infect humans and animals. While hemoplasmas are cell wall-less uncultivated epicellular bacteria that attach to mammals red blood cells’ surface, Bartonella is a successful group of Gram-negative bacteria that infect mainly erythrocytes and endothelial cells from a wide range of mammals. Aiming to assess the occurrence and the genetic diversity of these bacterial groups, small mammals and associated ectoparasites were trapped in Campo Grande, Mato Grosso do Sul (MS) and Três Barras, Santa Catarina (SC), Brazil. Also, large ruminants and associated ectoparasites were sampled in Campo Grande, MS, and Passos, Minas Gerais (MG), Brazil. Finally, blood samples from wild buffaloes submitted to a translocation process between two sites in Mozambique, Africa, were also analyzed. PCR assays, namely conventional, realtime quantitative using hydrolysis probe and DNA intercalant followed by High Resolution Melt, phylogenetic analyses – Maximum likelihood, Neighbor-joining and Bayesian inference – and bioinformatics – Neighbor-Net and Templeton Crandall and Sing (TSC) network – approaches were used to assess the occurrence and the genetic diversity of these bacterial species. The present study showed that 31.4% (33/105) small mammals (seven [50%] capybaras; 14 [32.5%] opossums; 12 [30.7%] rats) and 4.3% (5/116) ectoparasites (three [2.6%] Amblyomma spp.; two [1.7%] Polypax spinulosa) sampled in Campo Grande were positive for hemoplasmas targeting the 16S rRNA gene. The phylogenetic and distance analyses of showed that the amplified hemoplasmas DNA seem to be quite species-specific regarding mammalian hosts. In contrast, none of these small mammals and ectoparasites showed positivity for Bartonella sp. based on molecular assays and/or in the culture. On the other hand, Bartonella coopersplainsensis nuoG and 16S gene and as well as the ITS region were amplified in two (3.6%) out of 55 Rattus rattus sampled in Três Barras, SC. This is the first report of this rat-associated Bartonella species in South America. Also, Bartonella bovis DNA was found in 21 of 75 (28%) cattle blood samples and 13 of 126 (10.3%) associated ticks (Rhipicephalus microplus) collected in Campo Grande. Likewise, one (1%) out of 101 buffaloes and four (4.2%) of 95 lice (Haematopinus tuberculatus) DNA samples obtained in Passos, MG, were positive for Bartonella spp. While B. bovis was identified in a buffalo blood sample, the Bartonella sp. amplified in lice was closely related to a Bartonella sp. previously found in cattle-lice from Israel. In contrast to identical sequences detected in lice, several B. bovis genotypes were found in the cattle blood samples DNA. Lastly, among the 97 wild African buffaloes, Bartonella spp. and hemoplasmas DNA were detected in 4.1% and 15.4% of the animals, respectively. The BLASTn analysis disclosed at least three bovine associated pathogens, namely B. bovis, Mycoplasma wenyonii and ‘Candidatus M. haemobos’. These findings shed light on the distribution and genetic diversity of hemoplasmas and Bartonella spp. circulating in rodents, opossums, cattle, buffaloes and associated ectoparasites in Brazil and Mozambique. FAPESP 2018/02753-0