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BACKGROUND: Novel rabbit monoclonal antibodies (RabMab) for estrogen (ER), progesterone (PR) receptors and HER2 evaluation by immunohistochemistry have recently been commercially released. We compared the RabMab anti-ER, anti-PR and anti-HER2 to mouse monoclonal antibodies (Mab) using tissue microarrays (TMA) of breast carcinomas. METHODS: Two TMA containing breast carcinomas were built. Sections were immunostained using anti-ER and anti-PR, Mab and RabMab. The sections stained for ER and PR were evaluated considering positive those tumors in which more than 1% of the tumor cell nuclei stained moderate or strong. For HER2, the immunostained sections were evaluated using the ASCO/CAP guidelines for HER2. Chromogenic in situ hybridization (CISH) was used as the gold standard for HER2 evaluation. CISH was evaluated using the Zymed HER2 CISH interpretation guidelines. RESULTS: RabMab against ER have similar staining patterns compared to the 6F11 (Mab), but stronger than 1D5 (Mab) from three different suppliers. The RabMab against PR provide stronger and sharper immunohistochemical signals compared to Mab. The detection of HER2 protein overexpression was more prevalent with the polyclonal antibodies and RabMab than with the Mab. These were more specific than the RabMab, which were more sensitive when compared to CISH. CONCLUSION: The novel RabMab against ER and PR showed higher intensity of staining than the Mab. The RabMab against HER2 is more sensitive than Mab, however, Mab presented more specificity than RabMab when compared to CISH for HER2 evaluation of breast carcinomas. OBJETIVOS: Novos anticorpos monoclonais de coelho (RabMab) para a avaliação imuno-histoquímica de receptores de estrógeno (RE), progesterona (RP) e HER2 foram lançados comercialmente. Comparamos os RabMab anti-RE, anti-RP e anti-HER2 com os anticorpos monoclonais de camundongo (Mab) utilizando tissue microarrays (TMA) de carcinomas de mama. MÉTODOS: Foram construídos dois TMAs de carcinomas de mama. As secções foram marcadas usando anti-RE, anti-RP e anti-HER2, Mab e RabMab através de imuno-histoquímica. As secções marcadas para RE e RP foram avaliadas considerando positivos aqueles tumores nos quais mais de 1% dos núcleos coraram moderadamente ou forte. Para HER2, as secções foram avaliadas utilizando as recomendações da ASCO/CAP para HER2. Hibridização in situ cromogênica (CISH) foi usada como padrão-ouro para avaliação de HER2. CISH foi avaliado utilizando as recomendações da Zymed. RESULTADOS: Os RabMab anti-RE apresentam intensidade de coloração semelhante ao 6F11 (Mab), porém maior que o 1D5 (Mab) proveniente de três diferentes fabricantes. Os RabMab anti-RP apresentaram sinal imunoistoquímico mais forte e delimitado comparado aos Mab. A detecção da superexpressão da proteína HER2 foi mais prevalente entre os anticorpos policlonais e RabMab, que se mostraram mais sensíveis quando comparados com o CISH. CONCLUSÃO: Os novos RabMab anti-RE e RP proporcionaram maior intensidade de coloração que os Mab. O RabMab anti-HER2 apresentou maior sensibilidade que os Mab, porém os Mab apresentaram maior especificidade quando comparados com o CISH para a avaliação de HER2 em carcinomas de mama.

OBJETIVO: analisar a variabilidade interobservador no diagnóstico histopatológico de lesões mamárias consideradas pré-malignas antes e após o treinamento com o uso de critérios diagnósticos padronizados. MÉTODOS: foram utilizadas lâminas contendo cortes histológicos representativos de três tipos de lesões mamárias (hiperplasia ductal atípica, carcinoma ductal in situ e carcinoma ductal in situ com microinvasão) revistas por um especialista internacional em patologia mamária e cujos diagnósticos foram considerados como padrão de referência. As mesmas lâminas foram avaliadas em dois tempos por cinco patologistas da comunidade que receberam um protocolo específico para classificar as lesões. Na primeira avaliação, os casos foram analisados e classificados usando critérios específicos adotados em cada serviço. Num segundo tempo, os patologistas receberam um tutorial contendo critérios diagnósticos e imagens representativas e novamente classificaram as lesões empregando os critérios padronizados. Foi realizada análise interobservador usando concordância percentual e o índice de Kappa ponderado. RESULTADOS: houve grande variabilidade diagnóstica entre os patologistas na análise inicial sem o uso de critérios diagnósticos padronizados quanto ao diagnóstico, grau nuclear e grau histológico (os índices de Kappa ponderado quanto ao diagnóstico variaram de 0,15 a 0,40). Na segunda avaliação, utilizando-se critérios padronizados, houve significativa melhora na concordância diagnóstica entre os cinco patologistas quanto ao diagnóstico, grau nuclear e grau histológico (os índices de Kappa ponderado quanto ao diagnóstico variaram de 0,42 a 0,80). CONCLUSÕES: a concordância interobservador no diagnóstico e classificação das lesões pré-malignas da mama pode ser melhorada com o treinamento específico e o uso de critérios histopatológicos padronizados. PURPOSE: to analyze interobserver variability in the histopathological diagnosis of premalignant breast lesions before and after training with diagnostic standardized criteria. METHODS: Slides containing histological sections representative of three kinds of breast lesions (atypical ductal hyperplasia, ductal carcinoma in situ and ductal carcinoma in situ with microinvasion), revised by an international specialist in breast pathology whose diagnoses were considered as golden standard, have been used. The same slides have been evaluated at two different times by five pathologists from the community according to a specific protocol for classifying the lesions. In the first evaluation, the cases were analyzed and classified according to the specific criteria adopted in each service. At the second time, the pathologists were given a tutorial containing diagnostic criteria and representative images, and the lesions were classified again, employing the standardized criteria. Interobserver analysis using percent agreement and weighted Kappa index has been performed. RESULTS: There has been a large diagnostic variation among the pathologists in the initial analysis without the use of standardized diagnostic criteria concerning the diagnostic, nuclear grade and histological grade (weighted Kappa indexes related to diagnosis varied from 0.15 to 0.40). In the second evaluation using standardized criteria, there has been a significant improvement in the diagnostic concordance among the five pathologists concerning the diagnosis, nuclear grade and histological grade (weighted Kappa indexes related to diagnosis have varied from 0.42 to 0.80). CONCLUSIONS: interobserver concordance related to diagnosis and classification of breast premalignant lesions may be improved with specific training and the use of standardized histopathological criteria.

BACKGROUND: Studies of lymphatic vessels were limited by the lack of specific markers. Recently, they have become possible due to the release of new D2-40 antibody, a selective marker for lymphatic endothelium. The aim of our study was to compare neoplastic invasion in lymphatic and blood vessels detected in hematoxylin and eosin (H&E) and immunohistochemistry-stained sections. METHODOLOGY: A total of 123 cases of invasive mammary carcinomas were studied and sorted out into three subgroups according to axillary staging (macrometastasis, micrometastasis and lymph node negative). Lymphatic vessel invasion (LVI) and blood vessel invasion (BVI) were initially evaluated in histological H&E and immunohistochemistry-stained sequential sections. Lymphatic and blood vessel invasions were assessed by immunohistochemistry, employing D2-40 and CD31 antibodies, respectively. LVI and BVI were related to size, type, histologic grade of primary tumors, and the presence of metastasis. RESULTS: LVI was detected through H&E staining procedure in 17/123 cases (13.8%), and through immunohistochemistry procedure in 35/123 cases (28.5%) (kappa = 0.433). BVI was detected through H&E in 5/123 cases (4.1%), and through immunohistochemistry in 19/123 cases (15.4%) (kappa = 0.198). LVI and BVI were positively related to higher histologic grade of primary tumors (p < 0.05). LVI was also positively related to the presence of macrometastasis. CONCLUSION: The detection of lymphatic and blood vessel invasions through immunohistochemistry employing D2-40 and CD31 was higher than the detection through H&E, and it was related to higher tumor grade and metastasis in axillary lymph nodes. INTRODUÇÃO: Estudos de vasos linfáticos eram limitados pela ausência de marcadores endoteliais linfáticos específicos. Recentemente, eles se tornaram possíveis após liberação comercial do novo anticorpo D2-40, marcador seletivo para endotélio linfático. O objetivo do nosso estudo foi comparar invasão neoplásica em vasos linfáticos e sanguíneos detectada em secções coradas pela hematoxilina e eosina (HE) e imuno-histoquímica (IIQ). MATERIAIS E MÉTODOS: Foram estudados 123 casos de carcinomas mamários invasores subdivididos em três subgrupos de acordo com o estadiamento axilar: macrometástases (Mac-Met), micrometástases (Mic-Met) e linfonodo negativo (LNN). Invasão de vasos linfáticos (IVL) e de vasos sangüíneos (IVS) foi inicialmente avaliada em secções histológicas coradas pela HE e através da IIQ realizada em cortes seqüenciais. A invasão de vasos linfáticos e sanguíneos foi avaliada pela imuno-histoquímica, empregando-se respectivamente os anticorpos D2-40, e CD31. IVL e IVS foram relacionadas com tamanho tumoral, tipo e grau histológico dos tumores primários e com a presença de metástases. RESULTADOS: IVL foi observada pela HE em 17/123 casos (13,8%) e pela IIQ em 35/123 casos (28,5%) (kappa = 0,433). IVS foi observada pela HE em 5/123 casos (4,1%) e pela IIQ em 19/123 casos (15,4%) (kappa = 0,198). IVL e IVS estavam positivamente relacionadas com maior grau histológico dos tumores primários (p < 0,05). IVL também estava positivamente relacionada com a presença de macrometástases. CONCLUSÃO: A detecção IIQ, respectivamente por D2-40 e CD31, de invasão de vasos linfáticos e sanguíneos foi maior que a detecção feita em cortes corados pela HE e relacionou-se com maior grau tumoral e metástases em linfonodos axilares.

OBJETIVO: Estudar a concordância interobservador na interpretação da superexpressão imuno-histoquímica para a proteína Her2 empregando diferentes anticorpos em array de carcinomas mamários. MATERIAL E MÉTODO: Foi construído um array contendo dois cilindros (2 mm de diâmetro cada) de 25 carcinomas mamários. Cortes histológicos seriados do array foram submetidos à imuno-histoquímica utilizando-se cinco anticorpos anti-Her2: SP3 (NeoMarkers), HercepTest e A0485 (Dako), CB11 (Novocastra) e 4D5 (Genentech). Uma lâmina corada por cada anticorpo (total = cinco lâminas) foi submetida à avaliação individual por cinco observadores seguindo-se o sistema de escore proposto no HercepTestTM. Para a avaliação interobservador os resultados foram interpretados em três diferentes análises: I (0; 1+; 2+; 3+); II (0 e 1+; 2+ e 3+) e III (0 e 1+; 2+; 3+) e aplicado o teste estatístico de kappa. RESULTADOS: A concordância interobservador foi boa quando os casos foram avaliados em quatro categorias (0; 1+; 2+; 3+). Quando avaliados em duas categorias (0 e 1+; 2+ e 3+), a concordância interobservador foi boa para os casos corados por SP3 e CB11 e muito boa para os corados por A0485, HercepTest e 4D5. Na análise III (0 e 1+; 2+; 3+), a concordância interobservador foi considerada moderada para os casos corados por CB11 e boa para os corados pelos outros anticorpos. CONCLUSÃO: A concordância interobservador foi considerada entre moderada e muito boa na avaliação dos cinco anticorpos. A menor concordância interobservador ocorreu nos casos com marcações fraca (1+) e moderada (2+). A experiência dos observadores influenciou as taxas de concordância.

OBJETIVO: Estudar a concordância interobservador na interpretação da superexpressão imuno-histoquímica para a proteína Her2 empregando diferentes anticorpos em array de carcinomas mamários. MATERIAL E MÉTODO: Foi construído um array contendo dois cilindros (2 mm de diâmetro cada) de 25 carcinomas mamários. Cortes histológicos seriados do array foram submetidos à imuno-histoquímica utilizando-se cinco anticorpos anti-Her2: SP3 (NeoMarkers), HercepTest e A0485 (Dako), CB11 (Novocastra) e 4D5 (Genentech). Uma lâmina corada por cada anticorpo (total = cinco lâminas) foi submetida à avaliação individual por cinco observadores seguindo-se o sistema de escore proposto no HercepTestTM. Para a avaliação interobservador os resultados foram interpretados em três diferentes análises: I (0; 1+; 2+; 3+); II (0 e 1+; 2+ e 3+) e III (0 e 1+; 2+; 3+) e aplicado o teste estatístico de kappa. RESULTADOS: A concordância interobservador foi boa quando os casos foram avaliados em quatro categorias (0; 1+; 2+; 3+). Quando avaliados em duas categorias (0 e 1+; 2+ e 3+), a concordância interobservador foi boa para os casos corados por SP3 e CB11 e muito boa para os corados por A0485, HercepTest e 4D5. Na análise III (0 e 1+; 2+; 3+), a concordância interobservador foi considerada moderada para os casos corados por CB11 e boa para os corados pelos outros anticorpos. CONCLUSÃO: A concordância interobservador foi considerada entre moderada e muito boa na avaliação dos cinco anticorpos. A menor concordância interobservador ocorreu nos casos com marcações fraca (1+) e moderada (2+). A experiência dos observadores influenciou as taxas de concordância. AIM: To examine interobserver agreement in immunohistochemical evaluation of Her2 overexpression using five different antibodies on breast cancer array. MATERIAL AND METHOD: Material and method: One array was built with two cores (2 mm diameter each) from 25 breast carcinomas. Serial sections from the array were submitted to immunohistochemistry using five anti-Her2 antibodies: SP3 (NeoMarkers), HercepTest and A0485 (Dako), CB11 (Novocastra), and 4D5 (Genentech). One slide immunostained for each antibody (total = five slides) were independently scored by five observers following HercepTestTM scoring system. Interobserver agreement was evaluated in three different analysis: I (0; 1+; 2+; 3+); II (0 and 1+; 2+ and 3+) and III (0 and 1+; 2+; 3+), and the kappa statistics was applied. RESULTS: There was a good rate of interobserver agreement when the four scores were considered (0; 1+; 2+; 3+). When the scores were considered in two categories (0 and 1+; 2+ and 3+) the interobserver agreement rate was considered substantial for cases stained for SP3 and CB11, and almost perfect for cases stained for A0485, HercepTest and 4D5. For analysis III (0 and 1+; 2+; 3+), a moderate rate of interobserver agreement was considered for cases stained for CB11, and a substantial rate for other antibodies. CONCLUSION: The overall interobserver agreement was considered moderate to substantial in the evaluation of cases stained for the five antibodies. The lowest rate of agreement was obtained in the evaluation of the cases scored as weak (1+) and moderate (2+). The observers experience altered the concordance rates.

OBJETIVOS: avaliar os aspectos clínicos, radiológicos, anátomo-patológicos e terapêuticos de uma série de casos de carcinoma ductal in situ (CDIS) da mama de pacientes atendidos em três hospitais públicos de Belo Horizonte (MG). MÉTODOS: foram selecionados dos arquivos médicos todos os casos de câncer de mama diagnosticados entre os anos de 1985 e 2000, encontrando-se 179 casos com diagnóstico de CDIS. Fez-se revisão anátomo-patológica das lâminas e obtiveram-se dados clínicos completos, mamografias e informações sobre tratamento em 85 casos. RESULTADOS: a maioria dos casos eram assintomáticos e os diagnósticos foram feitos pela mamografia (68,2%), sendo as microcalcificações a alteração radiológica mais freqüente. Houve aumento progressivo no diagnóstico de CDIS ao longo dos anos simultâneo à introdução do exame periódico mamográfico. Houve concordância entre o diagnóstico inicial e após a revisão histopatológica em 72,9% dos casos. Em três casos, o diagnóstico original de CDIS não foi confirmado pela revisão, tratando-se de hiperplasias com atipias. O achado de microcalcificações radiológicas foi confirmado no estudo histopatológico em 95,6%. A metade dos pacientes foi submetida à mastectomia. Nos casos submetidos à linfadenectomia axilar, todos os linfonodos dissecados foram negativos para metástases. CONCLUSÕES: os dados encontrados estão de acordo com a literatura, que mostra um aumento do diagnóstico do CDIS a partir de 1990. Houve importante variação interobservador entre os diagnósticos anátomo-patológicos iniciais e os da revisão, sendo que os diagnósticos iniciais tendiam para malignidade. Houve grande número de tratamentos mais radicais como a mastectomia e esvaziamentos axilares, que provavelmente, com os conhecimentos atuais, seriam substituídos por tratamentos conservadores e biópsia do linfonodo sentinela. PURPOSE: to evaluate the clinical, radiological therapeutic and anatomo-pathological aspects in a series of patients with breast ductal carcinoma in situ (DCIS), attended in three public hospitals in Belo Horizonte (MG). METHODS: 179 cases of DCIS, that were selected from all the patients who had been diagnosed with breast cancer between 1985 and 2000, were studied retrospectively. After reviewing all the tissue sections, it was possible to collect all the clinical data, mammogram and treatment information of 85 cases. RESULTS: most patients were not symptomatic and the diagnosis had been done by mammogram (68.2%), being the microcalcification the most common radiological alteration. There has been a progressive increase in the diagnosis of DCIS along the years, following the introduction of periodical mammographic screening. The initial histopathological diagnosis and the review agreed in 72.9% of cases. In three cases, the original diagnosis of DCIS was not confirmed, being classified as atypical hyperplasia. Mammogram microcalcifications were confirmed in the pathological analysis in 95.6% of cases. Half of the patients was treated with mastectomy. All lymph nodes from axillary dissection were negative for metastases. CONCLUSIONS: The present study is in agreement with the recent literature, which shows an increase in the diagnosis of DCIS since 1990. There has been a great interobserver variation since the initial pathological diagnosis, which tended to malignancy and the present review. There were a great number of radical treatments, such as mastectomy and axillary dissection, which would probably be replaced by conservative treatment and sentinel lymph node biopsy nowadays, according to recent knowledge.

INTRODUCTION: HER-2/neu overexpression has been tested using immunohistochemistry as a reliable and cost-effective method to select patients with invasive mammary carcinomas (IMC) for trastuzumab treatment, but there is no consensus regarding the best antibody to be used. The aim of the present study was to test five different antibodies for determining the status of HER-2/neu overexpression in IMC. MATERIAL AND METHODS: Sixty-six formalin-fixed, paraffin-embedded IMC were investigated by immunohistochemistry, using two polyclonal antibodies, HercepTestTM (Dako) and A0485 (Dako), and three monoclonal antibodies, the clone CB11, from both Novocastra Laboratories and from Biogenex, and the clone 4D5 (Genentech). All immunostainings were scored according to the guidelines for the HercepTestTM. RESULTS: The A0485 was positive in 25 cases (37.9%). The HercepTestTM was positive in 14/66 cases (21.2%). Both CB11 antibodies yielded a positive reaction in the same nine patients (13.6%). The 4D5 was positive in only 4/66 cases (6.1%). All positive cases for CB11 or 4D5 were HercepTestTMpositive. All cases positive for HercepTestTM were positive for A0485. Most of the HercepTestTM and A0485 2+ cases were negative when using the other antibodies. DISCUSSION: There was a higher number of cases presenting HER-2/neu positivity with the A0485 and HercepTestTM than with the other antibodies, primarily in cases scored as 2+. There was no difference in positivity when the CB11Ab was used, regardless of company. CONCLUSION: The use of immunohistochemistry for the clinical assessment of HER-2/neu overexpression still needs prospective validation. INTRODUÇÃO: A superexpressão de HER-2/neu tem sido testada por imunoistoquímica como um método seguro e de baixo custo para selecionar pacientes com carcinoma mamário invasivo (CMI) para tratamento com trastuzumab, entretanto não há consenso sobre qual o melhor anticorpo a ser utilizado. O objetivo deste trabalho foi testar cinco diferentes anticorpos para determinar a superexpressão do HER-2/neu em CMI. MATERIAL E MÉTODOS: Sessenta e seis casos de CMI fixados em formalina e incluídos em parafina foram submetidos a imunoistoquímica, utilizando-se dois anticorpos policlonais: HercepTestTM (Dako) e A0485 (Dako), e três anticorpos monoclonais: CB11 de Novocastra Laboratories e da Biogenex e 4D5 (Genentech). Todas as reações imunoistoquímicas foram interpretadas de acordo com as instruções do HercepTestTM. RESULTADOS: O A0485 foi positivo em 25/66 casos (37,9%). O HercepTestTM foi positivo em 14/66 casos (21,2%). Houve concordância integral nos casos corados com CB11 de ambos os fabricantes: 9/66 (13,7%). O 4D5 foi positivo em somente 4/66 casos (6,1%). Todos os casos positivos para CB11 e 4D5 foram positivos para o HercepTestTM. Todos os casos HercepTestTM foram positivos para o A0485. A maioria dos casos 2+ para o HercepTestTM e A0485 foi negativa com os outros anticorpos. DISCUSSÃO: Houve maior incidência de superexpressão do HER-2/neu com o HercepTestTM e o A0485 do que com os anticorpos monoclonais, principalmente nos casos classificados como 2+. Não houve diferença na imunorreatividade usando-se o anticorpo CB11 dos dois diferentes fabricantes. CONCLUSÃO: O uso clínico da imunoistoquímica para determinar a superexpressão do HER-2/neu necessita ainda de validações prospectivas.