Search

İdarubisin, meme kanseri ve akut lösemi tedavisinde sıklıkla kullanılan kemoterapötik bir ilaçtır. Bu çalışmada, yüksek stabilite ve düşük toksisiteye sahip bir ilaç hazırlamak için idarubisini glutaraldehit (GA) kaplı manyetik nanopartiküllere (MNP-GA) immobilize edilmesi amaçlanmıştır. Manyetik nanopartiküller kolay sentez edilmesi, düşük maliyetli olması ve toksik olmamasından dolayı tercih edilmiştir. Çalışmada magnetit (Fe3O4) nanoparçacıkları hazırlanmış, glutaraldehit ile kaplanmış, Fourier transform kızılötesi spektroskopisi, X-ışını kırınım deseni ve Konvansiyonel transmisyon elektron mikroskobu yöntemleri ile karakterizasyon işlemleri yapılmış ve idarubisin bağlanmıştır. İdarubisine bağlı MNP-GA ve serbest idarubisinin HL-60 hücre hatları üzerindeki sitotoksik etkileri MTT ve ATP testleri ile belirlendi ve IC50 değerleri hesaplandı. Apoptoz durumu flow sitometrisi ile değerlendirildi ve MDR1, Puma, NOXA, BAX, Survivin ve BCL-2 genlerinin ekspresyonu polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yöntemi ile ölçüldü. MNP kullanımı ile IC50'nin 5 ile 7 kat arasında azaldığı tespit edilmiştir. PCR testlerinde apoptotik genlerin ekspresyonları artarken, MNP kullanımında MDR1 ve anti-apoptotik genlerin ekspresyonları azaldı. Akım sitometri ölçümlerinde apoptoz artışı saptandı. MNP sistemlerinin kullanımı, ilacın kontrollü salınımını sağladığı ve yapısı gereği hücreden çıkışını engellediği için ilaç direncini azaltmıştır., Idarubicin is a chemotherapeutic drug frequently used to treat breast cancer and acute leukemia. This study aimed to immobilize idarubicin on glutaraldehyde (GA)-coated magnetic nanoparticles (MNP-GA) to prepare a drug with high stability and low toxicity. We prefreed MNPS because of their easy synthesis, low cost, and non-toxicity. In the study, magnetite (Fe3O4) nanoparticles were prepared, coated with glutaraldehyde, characterization processes were performed with Fourier transform infrared spectroscopy (FT-IR), X-ray diffraction pattern (XRD), and Conventional transmission electron microscopy (C-TEM) methods, and idarubicin (IDA) was bound. The cytotoxic effects of idarubicin-bound MNP-GA and free idarubicin on HL-60 cell lines were determined by MTT and ATP tests, and IC50 values were calculated. Flow cytometry was used to evaluate apoptosis status, and the expression of MDR1, Puma, NOXA, BAX, Survivin, and BCL-2 genes were measured by the polymerase chain reaction (PCR). It was found that the IC50 decreased between 5 and 7 times with the use of MNP. In PCR tests, the expressions of apoptotic genes increased, while the expressions of MDR1 and anti-apoptotic genes were decreased in the use of MNP. Apoptosis was found to be increased in flow cytometry measurements. The use of MNP systems has reduced drug resistance since it provides controlled release of the drug and prevents its exit from the cell due to its structure.

Hidrojeller, ilaç salınımında, tarımsal alanda, biyomedikal alanda, gıda korumasında ve doku uygulamalarında etkin ve yaygın olarak kullanılan polimerik jellerdir. Hidrojellerin yumuşak ve esnek özellikte olması disiplinler arası yaklaşımın ilerlemesini önemli ölçüde sağlamaktadır. Fakat hidrojeller uygulanan mekanik kuvvetler altında düşük dirence sahiptir. Bu durum hidrojellerin kullanımı sırasında kırılmalara neden olmaktadır. Bu bağlamda, tekstil takviyeli hidrojel kompozitler hidrojellerin mekanik problemlerini çözmek için disiplinler arası bir yaklaşım sunmaktadır. Bu çalışmanın amacı mekanik özellikleri iyileştirilmiş dokuma kumaş takviyeli hidrojel kompozit yapıların incelenmesidir. Bu bağlamda, hidrojel iplik formunda olan polivinil alkol (PVA), uygulanan mekanik kuvvete karşı direncini artırmak için mukavemetli pamuk, keten, yün, viskon ipliklerle güçlendirildi. Bu nedenle, kumaş takviyeli hidrojel kompozitlerin üretimi için PVA/Pamuk, PVA/Keten, PVA/Yün, PVA/Viskon karışımlı dokuma kumaşlar hazırlandı. Hibrit dokuma kumaşlar, farklı oranlarda glutaraldehit ve boraks çözeltileri ile muamele edildi. Hibrit dokuma kumaşta bulunan PVA iplikleri çapraz bağlı jel yapılara dönüşürken, pamuk, keten, yün ve viskon iplikler, takviye elemanı olarak dokuma kumaşlarda kalmıştır. İplik ve kumaşla güçlendirilmiş hidrojel kompozitlerinin karakterizasyonları Fourier-transform kızılötesi spektroskopi (FT-IR), termogravimetrik analiz (TGA), X-ışını kırınımı (XRD), taramalı elektron mikroskobu (SEM) ile gerçekleştirildi. Hidrojel kompozitlerdeki çapraz bağlayıcı oranına ve su içeriklerine bağlı olarak numunelerin şişme dereceleri ve mekanik özellikleri incelendi. Tüm sonuçlar göz önüne alındığında, doğal lif takviyeli dokuma kumaşlar hidrojel kompozitlerin mekanik özelliklerini önemli ölçüde artırmıştır. Bu tezde sunulan yayımlanmış her makalenin bulguları, gelecekteki çalışmalar için birtakım önemli çıkarımlara sahiptir. Hydrogels are one of the most widely used polymeric gels and have been extensively used for drug delivery, agricultural and biomedical fields, food preservation, and tissue applications. Hydrophilic, soft, and flexible properties of hydrogels provide a significant opportunity to advance the understanding of interdisciplinary approach. However, hydrogels have low resistance under the applied mechanical forces. This situation results in hydrogels to break during usage. In this regard, textile reinforced hydrogel composite presents an interdisciplinary approach to solve mechanical problems of hydrogels. The aim of this thesis is to investigate development of woven fabric reinforced hydrogel composite structure with enhanced mechanical properties. In this respect, polyvinyl alcohol (PVA) in yarn form was reinforced with another durable cotton, flax, wool and viscose yarns to produce a hydrogel composite structure with improved resistance to the applied mechanical forces. For this purpose, PVA/Cotton (Co), PVA/Flax (F), PVA/Wool (W), PVA/Viscose (VI) blended woven fabrics were manufactured for the forming fabric reinforced hydrogel composites. The hybrid woven fabrics were treated with different concentrations of glutaraldehyde and borax solutions. PVA yarns in the hybrid woven fabric turned into crosslinked gel structures, whereas cotton, flax, wool and viscose yarns remained in the woven fabrics as a reinforcing element. The characterizations of yarn and fabric reinforced hydrogel composites have been carried out by Fourier-transform infrared spectroscopy (FT-IR), thermogravimetric analysis (TGA), X-ray diffraction (XRD), and scanning electron microscope (SEM). The swelling degree and mechanical properties of the samples were investigated with respect to the crosslinker ratio and water contents in the hydrogel composites. Considering all results, natural fiber woven fabric reinforcement significantly increased the mechanical properties of hydrogel composites. The findings of each article presented in this thesis have a number of significant implications for future researchs. YÖK 100/200 Domestic Doctorate Program RWTH Aachen University (Germany) Erasmus Mobility Programme University of Boras (Sweden) Erasmus Mobility Programme

In this study, the hydrogels have been synthesized by the crosslinking reactions maleic anhydride-styrene-methyl methacrylate terpolymer with N, N'-methylene-bis-acrylamide and glutaraldehyde in various crosslinker ratios. Crosslinking reactions were carried out in the presence of tetrahydrofuran as solvent at 25-50ºC for different time period, and the resulting material properties compared. The best conditions for effective crosslinking, i.e., crosslinking temperature, time and crosslinker ratios were determined for each crosslinker type. The swelling behaviour of the hydrogels was examined in Tris-buffer solutions at various pH at 37ºC. Swelling depending on pH was observed in the hydrogels. The pH-dependent swelling of hydrogels was strongly influenced by the functional group of crosslinker. The molecular structure of the hydrogels was studied by Fourier Transform Infrared Spectroscopy and their pore structure was investigated by using Scanning Electron Microscope.

Bu çalışmada; günümüzde deri sanayisinde kullanılan biyosidal maddelerin pahalı olması, çevre ve insan sağlığı açısından kullanımlarının sınırlı olması gibi nedenlerle yeni bir biyosidal maddenin geliştirilmesi planlanmıştır. Bu amaçla, farklı sektörlerde yüksek seviyeli dezenfektan olarak kullanılan glutaraldehit, yeni bir formülasyon geliştirilerek deri sanayisinde ıslatma yumuşatma işleminde biyosidal madde olarak kullanılmıştır. Glutaraldehitin antimikrobiyal etkinliğini artırmak için önce ayrı ayrı olacak şekilde trisodyum fosfat ve boraks dekahidrat ile uygun pH aralığına getirilerek aktive edilmiş, sonrasında ise aktif glutaraldehite belli oranlarda isopropanol ve potasyum asetat ilave edilerek biyosidal maddeler (BM-1 ve BM-2) üretilmiştir. Yeni geliştirilen bu iki biyosidal madde farklı oranlarda (%0,1 BM-1; %0,2 BM-1; %0,4 BM-1; %1 BM-1; %0,1 BM-2; %1 BM-2) olacak şekilde, kontrol grubu ve ticari bir bakterisid grubu ile birlikte deriler 8 gruba ayrılmış ve laboratuvar şartlarında ıslatma yumuşatma işlemi uygulanmıştır. Islatma işleminin başında ve sonunda ıslatma banyolarından örnekler alınarak, dökme plaka yöntemine göre bakteri sayımları yapılmıştır. Bu sonuçlara göre biyosidal maddeler yeterli olduğu tespit edilen oranlarda, deri işletmesinde parti bazında uygulanmış ve ıslatma işleminde gelişen bakterilere etkileri araştırılmıştır. Daha sonra derilerin işlentisine devam edilerek mamul hale getirilmiştir. Son olarak ise mamul hale getirilen derilere, deri fiziksel testleri uygulanmıştır. Elde edilen verilere göre, üretilen yeni biyosidal maddelerin antimikrobiyal etkinliğinin yeterli olduğundan söz edilebilmektedir. Kullanılan malzemelere göre yapılan maliyet hesaplamasında, BM-1 ve BM-2'nin oldukça ekonomik olduğu da görülmektedir., In this study, developing a new biocidal agent is planned for reasons that at the present time biocidal agents used in leather engineering are expensive and they have limited use due to their risks for the environment and human health. For this purpose, glutaraldehyde, which is used as a high level disinfectant in different sectors, is used as a biocidal agent in leather engineering in soaking operation developing a new formulation. To increase the antimicrobial activity of glutaraldehyde, it was activated by adjusting its pH level using trisodium phosphate and borax decahydrate seperately, and then biocidal agents (BM-1 and BM-2) were produced adding active glutaraldehyde isopropanol and potasium acetate in extent levels. With this two new developed biocidal agents in different proportions (0,1% BM-1; 0,2% BM-1; 0,4% BM-1; 1% BM-1; 0,1% BM-2; 1% BM-2), a commertial bactericide and a control group, eight leather groups were created and soaking operation was carried out in a laboratory conditions. Taking samples from soaking float in the beginning and end of soaking, bacteria counting was done using pour plate method. Based on the results of this counting, biocidal agents were applied on the basis of lot in adequate proportions and their effects on bacteries growing in soaking operation was searched. Then, treatment of leather was continued and leather was treated. Lastly, leather physical tests were applied to finished leathers. According to data, antimicrobial activation of newly produced biocidal agents may be caunted as adequate. Cost calculation of chemicals used BM-1 and BM-2, showes these two agents to be quite economic, too.

TEZ9819 Tez (Yüksek Lisans) -- Çukurova Üniversitesi, Adana, 2013. Kaynakça (s. 77-83) var. xvi, 92 s. : res. (bzs. rnk.), tablo ; 29 cm. Son yıllarda, enzim immobilizasyonu için manyetik nanopartiküllerin kullanılmasına olan ilgi oldukça artmıştır.Bu çalışmada lipaz enziminin immobilizasyonu için yeni bir destek materyali olarak manyetik özellikte ve nanoboyutta Fe3O4 tanecikleri sentezlenmiş ve lipaz enziminin Fe3O4 manteyik nanopartiküllere farklı arakollar üzerinden(GA ve ECH) immobilizasyonu ve karakterizasyonu araştırılmıştır. Fe3O4 nanopartikülünün karakterizasyonu için SEM, FTIR, XRD kullanılmıştır. Sentezlenen nanopartiküllerin yaklaşık 158,2 nm çapında olduğu gözlemlenmiştir. Serbest ve immobilize lipazların ortam koşullarına göre aktivite ölçümleri yapılarak, optimum sıcaklık, optimum pH, depolama kararlılığı, termal kararlılığı ve tekrar kullanım kararlılığı incelenmiş ve kinetik sabitler belirlenmiştir.Serbest ve immobilize lipazlar için optimum pH 7,0 olarak bulunmuştur. Serbest ve immobilize lipazlar için optimum sıcaklık 40 0C olarak belirlenmiştir. Serbest ve immobilize lipazların farklı sıcaklıklarda belirlenen termal kararlılıkları karşılaştırılmış ve immobilize enzimlerin dayanıklılığının serbest haline göre daha fazla olduğu gözlenmiştir. Belirlenen optimum koşullarda serbest lipaz için Km, Vmax, Kcat, Kcat/Km değerleri sırasıyla 0,48 mM, 420,7 U/mg protein, 2,82x104 dk-1, 58,8x103 dk-1 mM-1, immobilize lipaz (GA) için sırasıyla 1,3 mM, 33,6 U/mg protein, 2,25x103 dk-1, 1,73x103 dk-1 mM-1, immobilize lipaz (ECH) için sırasıyla 9,4 mM, 51,7 U/mg protein, 3,47x103 dk-1, 0,37x103dk-1 m M-1 olarak hesaplanmıştır. İmmobilize lipazın tekrar kullanılabilirliği kesikli reactor modelinde araştırılmıştır ve 20 kullanım sonrası immobilize lipazların başlangıç aktivitelerini sırasıyla % 71 (GA) ve % 63 (ECH) ‘ ünü koruduğu belirlenmiştir. Serbest lipazın 50C ve 250C’ de 30 gün depolama süresi sonunda kalan aktivitesi sırasıyla başlangıç aktivitesin %37 ve %23’ üdür. Bununla birlikte immobilize lipazların 50C ve 250C’de 30 gün depolama süresi sonunda sırasıyla başlangıç aktivitelerinin %50 (GA), %44 (ECH) ve %44 (GA), %28 (ECH)’ ini korumuştur. In recent years, much attention has been paid toward synthesis of magnetic nano sized particles and their use for immobilization of enzyme. In this study, magnetic nano sized Fe3O4 particles were synthesized and covalent immobilization and characterization of lipase enzyme on magnetic nanoparticles by various intermediate arms (GA and ECH) are researched. Characterization of Fe3O4 nanoparticles was conducted using FTIR, SEM and XRD. The size of prepared nano particles was found approximately 158,2 nm diameter. Activitiy measurements of free and immobilized lipases were conducted in order to determine optimum temperature, optimum pH, storage stabilitiy, heat stability and reusability as well as kinetic parameters ( Km, Vmax, Kcat, Kcat/Km ). Optimum pH was determined as 7,0 for free and immobilized lipases. Optimum temperature was determined 40 0C for free and immobilized lipases. The termal stabilities of free and immobilized lipases have been improved greatly .For freelipase at optimum conditions Km, Vmax, Kcat, Kcat/Km values were calculated as sırasıyla 0,48 mM, 420,7 U/mg protein, 2,82x104 dk-1, 58,8x103 dk-1 mM-1 , the same values of immobilized lipase (GA) were calculated as respectively 1,3 mM, 33,6 U/mg protein, 2,25x103 dk-1, 1,73x103 dk-1 mM-1and for immobilized lipase (ECH) calculated as sırasıyla 9,4 mM, 51,7 U/mg protein, 3,47x103 dk-1, 0,37x103 dk-1 m M-1 .Reusability of immobilize lipases was investigated in a batch type reactor. After 20 reuses, residual activites of immobilized lipase were about %71 (GA) and %63 (ECH) of its initial activity. The residual activity for free lipase stored at 50C and 250C for 30 days were %37 and %23 of its initial activity, respectively. However, the immobilized lipases protected %50 (GA), %44 (ECH) and to %44 (GA) ,%28 (ECH) of its original activities at 50C and 250C,respectively for 30 days. Bu çalışma Ç.Ü. Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: FEF2012YL12.

Bu çalışmada glutaraldehit ile çapraz bağlanmış aljinat/kitosan nanopartiküllere bir antienflamatuar ilaç olan kolşisinin bağlanması ve kontrollü salımı için uygun üretim ve kullanım koşulları araştırılmıştır. Bu çalışma kontrollü ilaç salımını sağlayan materyal geliştirmeye dönük bir çalışmadır. Kolşisinin bu çalışma için seçilmiş olması onun gut, ailesel Akdeniz Ateşi ve Behçet hastalığı gibi tedavisi zor olan hastalıklarda yerine başka preparatlar ikame edilemeyen bir ilaç olmasıdır. İlaç taşıyıcı nanopartiküller, aljinat ve kitosan polimerleri ile glutaraldehit çapraz bağlayıcısı kullanılarak oluşturulmuştur. Çalışmada kolşisin tutuklanma kapasitesi incelenmiş ve sıcaklıkla ilaç tutulma kapasitesinin arttığı görülmüştür. Son olarak ilacın nanopartiküllerden salım çalışmaları farklı yapay vücut sıvılarında gerçekleştirilmiştir. Kolşisinin in vitro mide ortamında çözünmemiş ve salım gerçekleşmemiştir. Kolşisin in vitro ince bağırsak ortamında salımı ilk üç saat içinde maksimuma erişmiş ve daha sonra bir platoya ermiştir. Kolşisin gut, FMF, Behçet hastalığı tedavisinde çok kullanılmasına rağmen polimer sistemlerde tutuklanması ve salımıyla ilgili literatürde fazla çalışma bulunmamaktadır. Bu çalışma sonuçlarının kolşisin salımı yapabilecek toksik olmayan doğal polimerlerden oluşmuş sistemlerin üretilme ve uygulama koşullarının belirlenmesine katkı yapması beklenmektedir.Anahtar kelimeler: Kolşisin, aljinat, kitosan, nano, ilaç salımı, glutaraldehit In this study we aimed to assess appropriate production steps for binding and controlled delivery of colchicine, an anti-inflammatory drug, to glutaraldehyde cross-linked alginate/chitosan nanoparticles. This study is designed to develop materials using in controlled drug delivery. The reason lying behind choosing colchicine as trial drug was that colchicine is still the gold standard for treatment of several chronic diseases like gout, Familial Mediterranean Fever and Behçet?s Disease and the necessity of chronic use of this drug in treatment of these diseases. Nanoparticles used for drug release was produced by using alginate and chitosan natural polymers. Glutaraldehyde was used as cross-linker. Colchicine entrapment capacity was investigated and a positive correlation between temperature and colchicine entrapment was observed. Release of colchicine from nanoparticles was investigated in various artificial body fluids. No colchicine release in in vitro artificial gastric juice. Reelease of colchicine in in vitro simulated gastric juice environments reach to a plato in 3 hours and continued up to 5 hours with the same. Colchicine is used by oral administration and can be toxic in case of overdose. Colchicine is a commonly used drug for treatment of gout, FMF and Behçet?s Disease but there is not enough study in the literature about entrapment of colchicine by polymer systems. With this study we aim to contribute to assessment and production of colchicine delivery systems made of natural polymers.Key words: Colchicine, alginate, chitosan, nano, drug delivery, glutaraldehyde 89

TEZ9176 Tez (Doktora) -- Çukurova Üniversitesi, Adana, 2013. Kaynakça (s. 89-98) var. xvii, 105 s. : res. (bzs. rnk.), tablo ; 29 cm. Tıbbi amaçlı uygulamalar için immobilizasyon sistemlerinin geliştirilmesinde en çok kullanılan enzimlerin başında üreaz gelir. Üreaz, ürenin amonyum ve karbondioksite dönüşmesini sağlayan bir enzimdir. Enzim taşıyıcı materyallerin boyutundaki küçülmeler genellikle immobilize enzimin etkinliğini arttırır ve bu sayede partikülün birim kütlesi başına bağlanan enzim miktarı artar. Bu çalışmada, Fe3O4 magnetik nanopartiküllerin sentezi ve üreaz enziminin Fe3O4 magnetik nanopartiküllere farklı ara kollar üzerinden kovalent olarak immobilizasyonu ve karakterizasyonu araştırılmıştır. Serbest ve immobilize enzimlerin maksimum aktivite gösterdiği koşullar (pH, tampon derişimi ve sıcaklık) belirlenerek kinetik parametreleri (Km, Vmax, kcat/Km, Ea) bulunmuştur. İmmobilize üreaz örneklerinin termal kararlılıkları, depolama kararlılıkları ile tekrar kullanılabilirlikleri kesikli reaktörlerde araştırılmıştır. Ayrıca immobilize üreaz örneklerinin taramalı elektron mikroskobunda görüntüleri incelenmiştir. Üreaz enziminin glutaraldehit (GA) ve epiklorohidrin (ECH) ara kolları üzerinde magnetik nanopartiküllere immobilizasyonu sonucu Km ve Vmax değerlerinin arttığı görülmektedir. Glutaraldehit ara kolu üzerinden immobilize üreazın kcat/Km (2,746dk- 1M-) ve epiklorohidrin ara kolu üzerinden immobilize üreazın kcat/Km (2,761 dk-1M-1) oranları serbest üreazın kcat/Km (4,139 dk-1M-1) oranına göre yaklaşık 1,5 kat azalmıştır. Serbest ve immobilize üreazın farklı sıcaklıklarda belirlenen termal kararlılıkları karşılaştırılmış ve serbest enzime göre immobilize enzimler yüksek sıcaklık ve sürede aktivitesini daha fazla koruduğu tespit edilmiştir. Tekrar kullanılabilirliği kesikli reaktör modelinde araştırılmış ve 20 kullanımdan sonra immobilize enzimlerin aktivitelerini sırasıyla %57 (GA) ve %61 (ECH)’ini koruduğu belirlenmiştir. Serbest üreazın 5°C’de ve 25°C’de 30 gün depolanma süresi sonunda kalan aktivitesi sırasıyla başlangıç aktivitesinin %30 ve %23’üdür. İmmobilize enzimler için 5°C’de ve 25°C’de 30 gün depolanma süresi sonunda sırasıyla başlangıç aktivitesini %72, %71’ini (GA) ve %60, %57’sini (ECH) koruduğu tespit edilmiştir. Urease is one of the foremost enzymes used mostly in the development of immobilization systems for medical applications. Diminution in the extent of materials carrying enzymes generally increases the efficiency of immobilized enzyme and so the amount of the enzyme bounded to the per unit of the particle increases. In this study, the synthesis of Fe3O4 magnetic nanoparticles and covalent immobilization and characterization of urease enzyme on magnetic nanoparticles by different intermediate arms are researched. By defining the conditions in which free and immobilized enzymes show maximum activity (pH, buffer concentration and temperature) kinetic parameters (Km, Vmax, kcat/Km, Ea) are found. Thermal stability, storage stability and reusability of immobilized urease samples are searched in batch reactors. Besides, the images of immobilized urease samples in scanning electron microscope are investigated. As a result of the immobilization of urease enzyme to magnetic nanoparticles on glutaraldehyde, epichlorohydrin intermediate arms, it is seen that the values of Km and Vmax increase. Compared to free urease’s kcat/Km (4,139 dk-1M-1) rate, the rate of immobilized urease on glutaraldehyde arms kcat/Km (2,746dk-1M-) and the rate of immobilized urease on epichlorohydrin arms kcat/Km (2,761 dk-1M-1) decrease almost one and a half fold. The thermal stabilities of free and immobilized urease are compared and it is determined that immobilized enzymes can maintain their activities in high temperatures and to a longer extent compared to free enzymes. Its reusability is searched on batch reactor model and after 20 uses, it is determined that immobilized enzymes retain their activities %57 (GA) and %61 (ECH) respectively. The activity of free urease maintained after the 30 days of storage time in 5°C and 25°C is %30 and %23 of its initial activity. For immobilized enzymes, it is figured that in 5°C and 25°C after 30 days of storage time, it maintains %72, %71 (GA) and %60, %57 (ECH) of its initial activity respectively. The thermal stability of free and immobilized urease designated in different temperatures are compared and it is found that immobilized enzymes retain their activity more. Bu çalışma Ç.Ü. Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: FEF2011D31.

TEZ7922 Tez (Yüksek Lisans) -- Çukurova Üniversitesi, Adana, 2010. Kaynakça (s. 59-64) var. ix, 65 s. : res. ; 29 cm. In this study, bovine liver catalase was immobilized as cross-linked catalase aggregates (CLEA-CAT) via precipitation with ammonium sulfate and cross-linking with glutaraldehyde. CLEA-CAT with the highest activity was obtained for the immobilization conditions as ammonium sulfate concentration % 70 (w/v), glutaraldehyde concentration 140 mM, pH 7.0 and immobilization duration 6 hours. The highest activity was obtained from CLEA-CAT prepared with 10 mg/ml CAT + 10 mg/ml Bovine serum albumin (BSA). The thermal stabilities, storage stabilities and usage in a batch type reactor of CLEA-CAT preparations were determined. Also, the images of CLEA-CAT preparations were investigated at scanning electron microscope. The conditions as pH, buffer concentration, temperature in which free catalase and CLEA-CAT preparations showed their maximum activities were determined as 7.5, 50 mM, 25°C for the free CAT and 7.5, 75 mM, 35°C for the CLEA-CAT, respectively. For free catalase at optimum defined conditions, Km, Vmax, kcat and kcat/Km values were calculated as 50 mM, 1.98x104 U/mg prot., 7.92x104 s-1 and 1.58x106 s-1M-1 and Km and Vmax values of CLEA-CAT were calculated as 43 mM and 2.0x103 U/g CLEA-CAT, respectively. It was determined that CLEA-CAT saved 30 % of its initial activity for 15 hours preincubation at 50 °C . However, free catalase saved 4 % of its initial activity at the same conditions. Free catalase was stored for 19 days at 5°C and saved 11 % of its initial activity, CLEA-CAT was stored for 2 months at 5°C and saved 10 % of its initial activity. CLEA-CAT preparations saved 29 % of their initial activities in a batch type reactor at the end of 32 usages. As a result of study, it was concluded that CLEA-CAT's thermal and storage stabilities were higher than that of free catalase and CLEA-CAT can be used for longer at extreme conditions. Bu çalışmada sığır karaciğer katalazı, amonyum sülfatla çöktürme ve glutaraldehitle çapraz bağlama yoluyla çapraz bağlı katalaz agregatları (CLEA-CAT) oluşturularak immobilize edilmiştir. En yüksek CLEA-CAT aktivitesinin görüldüğü; amonyum sülfat derişimi % 70 (w/v) glutaraldehit derişimi 140 mM, immobilizasyon pH'sı 7,0, immobilizasyon süresi 6 saat olarak belirlenmiştir. CLEA-CAT örneklerinin hazırlanmasında ortamdaki enzim+protein miktarının CLEA-CAT aktivitesi üzerine etkisinin incelenmesi sonucunda, en yüksek aktivite 10 mg/ml CAT + 10 mg/ ml sığır serum albumini (BSA) kullanılarak hazırlanan CLEA-CAT' dan elde edilmiştir. CLEA-CAT örneklerinin termal kararlılıkları, depolama kararlılıkları ve kesikli reaktörde kullanımları araştırılmıştır. Ayrıca, CLEA-CAT örneklerinin taramalı elektron mikroskobunda görüntüleri incelenmiştir. Serbest katalazın ve CLEA-CAT örneklerinin maksimum aktivite gösterdiği pH, tampon derişimi, sıcaklık gibi koşullar serbest katalaz ve CLEA-CAT için sırasıyla, 7,5, 50 mM, 25°C ve 7,5, 75 mM, 35°C olarak belirlenmiştir. Belirlenen optimum koşullarda serbest katalaz için Km, Vmax, kcat ve kcat/Km değerleri sırasıyla, 50 mM, 1,98x104 U/mg prot., 7,92x104 s-1 ve 1,58x106 s-1M-1, CLEA-CAT için ise sırasıyla, Km = 43 mM H2O2, Vmax=2,0x103 U/g CLEA-CAT olarak hesaplanmıştır. 50°C' de 15 saat inkübe edilen CLEA-CAT' ın başlangıç aktivitesinin % 30' unu, serbest katalazın ise aynı koşullarda başlangıç aktivitesinin % 4' ünü koruduğu belirlenmiştir. Serbest katalaz 5 °C' de 19 gün saklandığında başlangıç aktivitesinin % 11' ini korurken, CLEA-CAT örnekleri 5°C' de yaklaşık iki ay sonunda başlangıç aktivitesinin % 10' unu koruyabildiği belirlenmiştir. CLEA-CAT örneklerinin kesikli reaktörde 32 kullanım sonunda başlangıç aktivitesinin % 29'unu koruyabildiği saptanmıştır. Yapılan çalışma sonucunda CLEA-CAT' ın termal ve depolama kararlılıklarının serbest enzimden daha yüksek olduğu ve ekstrem koşullarda daha uzun süre kullanılabileceği gösterilmiştir. Bu çalışma Ç.Ü. Bilimsel Araştırma Projeleri Birimi tarafından desteklenmiştir. Proje No: FEF2009YL50.

Balıkesir Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, Kimya Ana Bilim Dalı, Bu çalışmada, ilk olarak sığır serum PON1 enzimini saflaştırmak amacıyla Sepharose 4B L-tirozin 1-naftilamin kimyasal yapısındaki hidrofobik etkileşim kromatografi jeli kullanılmış ve PON1 enzimi saflaştırılmıştır. SDS-PAGE ile serbest enzim için saflık kontrolü yapılmıştır. İkinci aşamada, enzim farklı glutaraldehit yüzdelerinde immobilize edilmiş ve enzim aktivitesi en fazla % 7 glutaraldehit oranında immobilize edilen enzimde gözlenmiştir. Dolayısıyla deneysel çalışmamızın bundan sonraki aşamalarında, % 7 glutaraldehit oranında immobilize edilen enzim dikkate alınmıştır. Buradan immobilize ve serbest enzim için enzim ünitesi ve substrat konsantrasyon değerleri hesaplanarak Km ve Vmax değerleri elde edilmiş ve serbest enzimin katalitik etkinliğinin immobilize enzime göre daha fazla olduğu gözlenmiştir. Son aşamada da Mn+2, Co+2, Cu+2 metallerinin (%7) immobilize ve serbest paraoksonaz enzimi üzerindeki inhibisyon etkileri çalışılmıştır. Cu+2 metalinin paraoksonaz enzim aktivitesi üzerindeki etkisine bakıldığında immobilize ve serbest enzimi inhibe ettiği gözlenirken, Mn+2 ve Co+2 metallerinin immobilize enzimi aktive ettiği, fakat serbest enzimi inhibe ettiği gözlenmiştir., In this research, paraoxonase 1 (PON1) was purificated from serum blood by using sepharose 4B L-tirozin 1-naftylamin hydrofobic interaction chromotography gel and purification of the enzyme was controlled by sodium dodecylsulfate polyacrylamide gel electrophoresis. Paraoxonase enzyme was immobilized at different ratios of glutaraldehyde and the maximum activity was observed at the ratio of % 7 immobilized enzyme. So this immobilized enzyme was investigated for other steps of our experiment. And for immobilized and free enzyme, enzyme units and substrate concentrations were calculated. Km and Vmax plots were determined and catalytic efficiency of free enzyme was bigger than immobilized enzyme. And finally, the effects of inhibition of Mn+2, Co+2, Cu+2 metals onto the immobilized and free enzyme activity were studied. When the effect of Cu+2 onto the immobilized and free enzyme were investigated, the inhibition of enzyme was observed. But on the other hand, the activation of immobilized enzyme was observed and inhibition of free enzyme was observed with Mn+2 and Co+2 metals.

Tez (Yüksek Lisans) -- İstanbul Teknik Üniversitesi, Fen Bilimleri Enstitüsü, 2006, Thesis (M.Sc.) -- İstanbul Technical University, Institute of Science and Technology, 2006, Bu çalışmada proteaz enziminin çitin ve çitosan üzerine kovalent bağ ile immobilize edilmesi incelenmiştir. Denenen taşıyıcılar içinde en yüksek immobilize enzim aktivitesi elde edilmesi nedeniyle, Proteaz-PFS’nin glutaraldehitle çapraz bağlanma metoduyla aktive edilenleri seçilmiştir. En yüksek aktivite geri kazanımı (AGK) ve etkinlik oranını (EO) elde edecek şekilde immobilizasyon koşullarının optimizasyonu gerçekleştirilmiştir. Çapraz bağlanma için kullanılan glutaraldehit konsantrasyonun optimum değeri %1 (h/h) olarak belirlenmiştir. Kullanılan tampon çözeltinin pH ve konsantrasyon değerleri, immobilizasyon üzerinde iyonik şiddetin önemi sebebiyle araştırılmış ve en yüksek değerler pH 12, 0.5 M tampon (Tris-HCl) kullanıldığı durumlarda elde edildiği gözlenmiştir. Optimum taşıyıcı(mg) / enzim oranı(ml) çitin için 1.4 mg/ml, çitosan için ise 1 mg/ml olarak belirlenmiştir. Her iki taşıyıcı için de en iyi kontağın sağlandığı enzim(ml) / tampon(ml) oranı 0.25 ml/ml’dir. İmmobilize edilen proteazın sıcaklık kararlılığı her iki taşıyıcı için de 50oC’den 70oC’ye kaymıştır. Serbest enzimin %7 aktivite gösterdiği pH 12’de immobilize enzim çitin üzerine %54 çitosan üzerinde ise %34 aktivite göstermiştir. Tekrar kullanımlarına bakıldığında çitin üzerine immobilize edilmiş proteazın 6 tekrar kullanım sonunda başlangıç aktivitesinin %68’ini çitosan üzerine immobilize edilmiş proteazın ise başlangıç aktivitesinin %62’sini koruduğu tespit edilmiştir. Deterjan uyumluluğunda ise immobilize enzimin sıcaklık etkisiyle gösterdiği aktivite düşüşüne ek olarak çitin üzerindeki immobilize enzimde yaklaşık %24 çitosan üzerindeki immobilize enzimde ise yaklaşık %20’lik bir aktivite kaybı daha gösterdiği gözlenmiştir. Saklama kararlılığa bakıldığında ise 65 gün sonunda immobilize enzimin koruğu aktivite çitin için, %83, çitosan için ise % 87 olarak belirlenmiştir., Immobilization of protease, by covalent binding on chitin and chitosan was investigated in this study. Protease-PFS was activated by cross linking with glutaraldehyde, was selected among the tested carriers, because of the highest immobilized enzyme activity. The optimization of immobilization conditions was performed to obtain the highest activity recovery (AR) and effluent ratio (ER). The optimum concentration of glutaraldehyde was selected as 1% (v/v). Buffer pH and concentrations were investigated because of their influence of ionic strength on immobilization. Highest values were obtained when pH 12, 0.5M buffer (Tris-HCl) was used. The optimum carrier/enzyme ratio was 1.4 for chitin and 1 for chitosan. Enzyme/buffer ratio was 0.25 as a result of good contact between the carriers and enzyme molecules. Temperature stability of protease enzymes was shifted from 50oC to 70oC when immobilized on both carriers. While free enzyme could save only 7% of its original activity at pH 12, immobilized enzymes on chitin and chitosan could preserve 54% and 34% of their original activities respectively. To evaluate the reusability of proteases immobilized on chitin and chitosan, they were assayed 6 times consecutively, after 6 cycles, immobilized proteases on chitin and chitosan saved 68% and 62% of their activities. In the presence of detergent enzymes immobilized on chitin and chitosan lost 24% and 20% of their activities respectively. In the case of storage stability, after 65 days, proteases immobilized on boths carriers saved 83% and 87% of their original activities., Yüksek Lisans, M.Sc.