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Prostate cancer (PC) is the fifth leading cause of death worldwide and the second most diagnosed malignancy in men, being the leading cause of death in the Colombian male population. Prostate cancer cells show abnormal metabolic and redox activity, and emerging evidence indicates that the behavior of this type of cancer has been related to aggressive tumor characteristics such as chemoresistance, invasiveness, and metastatic potential, among others. In addition, drugs used in clinical oncology have narrow therapeutic indexes with adverse toxicity, often involving oxidative damage to normal tissues. Docetaxel (DCT) is an antineoplastic drug used to treat PC; its cytotoxicity and emerging resistance have limited its efficacy. Combination therapies are intended to sensitize tumors and protect unaffected tissues, which increases the therapeutic index. Sulforaphane (SFN) is a phytochemical of broad clinical interest due to its anticancer properties and promising effects in combination therapies. Consequently, the present research aimed to evaluate the therapeutic efficacy of SFN and DCT on an in vitro model of PC with different sensitivity to chemotherapy as an antitumor strategy. In this experimental-type investigation, PC cell lines with different levels of tumorigenicity and chemoresistance, as well as the non-tumorigenic counterpart, were used to offer different redox and metabolic characteristics. RWPE-1, LNCAP, and PC3 cell lines were seeded at a density of 5x103 cells/well in 96-well culture plates and treated with SFN and DCT for 72 h to determine effects on viability, mitochondrial activity, and cell death. Possible interactions of treatments were analyzed by isobologram analysis at 48 h. At the same time, promising mean concentrations in a combination of IC50 of SFN and DCT were evaluated for their effect on glycolytic and redox metabolism by analysis of glucose consumption and lactate production, intracellular levels of Reactive Oxygen Species (ROS), relative mitochondrial mass; the antioxidant status with the measurement of reduced (GSH) and oxidized (GSSG) Glutathione, finally the expression of SOD2 and LDHA genes regulated by Nrf2 and HIF1- α. The results obtained showed reduced viability of LNCAP and PC3 tumor cells after SFN and DCT treatments in a dose- and time-dependent manner. Lower sensitivity to treatments was observed in non-tumor RWPE-1 cells. Isobologram analysis indicated a possible synergistic effect between SFN and DCT. SFN IC50s showed mitochondrial activity measured by MTT in tumor cells. The combination of SFN and DCT triggered apoptosis in tumor models by inducing an increase in ROS levels, an increase in mitochondrial mass in LNCAP cells, a down-regulation of LDHA, and a decrease in lactate levels. Despite the induction of apoptosis by the treatments in PC3 cells, no significant chemo sensitization of redox and glycolytic metabolism was observed, suggesting the existence of differences in the glycolytic pathway of the tumor cell models, as well as an essential antioxidant defense system that could be evading cell death induced by the combination treatments, the findings of this study could link other sensitization pathways that modulate the viability or death of these cells. These results are the first to demonstrate effects on redox and glycolytic metabolism of SFN and DCT interaction in CP cells. LISTA DE FIGURAS ............................................................................................................ 7 LISTA DE TABLAS.............................................................................................................. 8 LISTA DE ANEXOS ............................................................................................................. 8 RESUMEN............................................................................................................................. 9 ABSTRACT ......................................................................................................................... 11 INTRODUCCIÓN................................................................................................................ 13 MARCO TEÓRICO Y ANTECEDENTES ......................................................................... 17 Etiología y patología del cáncer de próstata .....................................................................17 La quimioterapia del cáncer de próstata ...........................................................................19 Estrés Oxidativo y el cáncer de próstata ...........................................................................20 Metabolismo del cáncer de próstata..................................................................................22 Fitoquímicos en el tratamiento del cáncer de próstata: Sulforafano.................................25 OBJETIVOS......................................................................................................................... 27 Objetivo general................................................................................................................27 Objetivos específicos........................................................................................................27 MATERIALES Y MÉTODOS............................................................................................. 28 Área y tipo de estudio .......................................................................................................28 Cultivos celulares..............................................................................................................28 Ensayo de viabilidad por Cristal violeta ...........................................................................29 Ensayo de MTT [bromuro de 3- (4,5-dimetiltiazol-2-il) -2,5-difeniltetrazolio)] .............30 Detección y caracterización de la apoptosis .....................................................................31 Ensayo de muerte celular por Anexina V .........................................................................31 Actividad caspasas 3, 8 y 9...............................................................................................31 Evaluación de los efectos combinados SFN y DCT mediante análisis de isobologramas ............32 Caracterización de los tratamientos combinados SFN y DCT sobre el estado redox y metabólico.........................................................................................................................32 Consumo de glucosa y fermentación láctica.....................................................................32 Caracterización redox .......................................................................................................34 Determinación de ROS intracelular..................................................................................34 Masa mitocondrial relativa ...............................................................................................34 Determinación de GSH, GSSG y la relación GSH/GSSG................................................35 Niveles de expresión (ARNm) de genes regulados por Nrf2, y HIF-1.............................36 Análisis estadístico ...........................................................................................................36 RESULTADOS .................................................................................................................... 37 DISCUSIÓN......................................................................................................................... 51 CONCLUSIONES................................................................................................................ 59 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS ................................................................................. 60 ANEXOS.............................................................................................................................. 70 El cáncer de próstata (CP) es la quinta causa de muerte a nivel mundial y la segunda neoplasia maligna mayormente diagnosticada en hombres, siendo la principal causa de muerte en la población masculina colombiana. Las células cancerosas de próstata muestran una actividad metabólica y redox anormal, y la evidencia emergente indica que el comportamiento de este tipo de cáncer se ha relacionado con características tumorales agresivas como la quimiorresistencia, invasividad y potencial metastásico, entre otras. Además, los medicamentos utilizados en oncología clínica tienen índices terapéuticos estrechos con toxicidad adversa, que a menudo implica daño oxidativo en los tejidos normales. El Docetaxel (DCT) es un fármaco antineoplásico, utilizado para el tratamiento de CP, su citotoxicidad y emergente resistencia han limitado su eficacia. Las terapias de combinación tienen el propósito de sensibilizar los tumores y proteger tejidos no afectados lo aumenta el índice terapéutico. El Sulforafano (SFN), es un fitoquímico de amplio interés clínico, debido a sus propiedades anticancerígenas y efectos promisorios en terapias de combinación. En consecuencia, la presente investigación tuvo como objetivo evaluar la eficacia terapeutica de SFN y DCT sobre un modelo in vitro de CP de diferente sensibilidad a quimioterapia como estrategia antitumoral. En esta investigación de tipo experimental, se usaron líneas celulares de CP con diferentes niveles de tumorigenicidad y quimioresistencia, así como la contraparte no tumoral, de modo que ofrecieran diferentes características redox y metabólicas. Las líneas celulares RWPE-1, LNCAP y PC3 se sembraron a una densidad de 5x103 células/pozo en placas de cultivo de 96 pozos y fueron tratadas con SFN y DCT durante 72 h para la determinación de los efectos sobre la viabilidad, la actividad mitocondrial y la muerte celular. Se analizaron las posibles interacciones de los tratamientos mediante un análisis de isobologramas a las 48 h, a su vez se evaluaron las concentraciones medias promisorias en combinación de IC50 de SFN y DCT su efecto sobre el metabolismo glucolítico y redox, mediante el análisis de consumo de glucosa y producción de lactato, los niveles intracelulares de Especies Reactivas de Oxígeno (ROS), la masa mitocondrial relativa; el estado antioxidante con la medición de Glutatión reducido (GSH) y oxidado (GSSG), finalmente la expresión de genes SOD2 y LDHA regulados por Nrf2 e HIF1- α. Los resultados obtenidos mostraron una viabilidad reducida de las células tumorales LNCAP y PC3 tras los tratamientos de SFN y DCT de manera dependiente de la dosis y el tiempo. En las células RWPE-1 no tumorales se observó una menor sensibilidad a los tratamientos. El análisis de isobologramas indica un posible efecto sinérgico entre SFN y DCT. Los IC50 SFN, mostraron una actividad mitocondrial medida mediante MTT en las células tumorales. La combinación SFN y DCT desencadenó apoptosis en los modelos tumorales; al inducir un incremento en los niveles de ROS, acompañado de un aumento de la masa mitocondrial en las células LNCAP y una regulación a la baja de LDHA y disminución en los niveles de lactato. Pese a la inducción de apoptosis por los tratamientos en las células PC3, no se observó una quimio sensibilización del metabolismo redox y glucolítico significativo, lo sugiere la existencia de diferencias en la vía glucolítica de los modelos celulares tumorales, así como un importante sistema de defensa antioxidante que podría estar evadiendo la muerte celular inducida por los tratamientos en combinación, los hallazgos de este estudio podrían vincular otras vías de sensibilización que modulen la viabilidad y/o muerte de estas células. Estos resultados son los primeros en demostrar efectos sobre el metabolismo redox y glucolítico de la interacción de SFN y DCT en las células de CP. Maestría Magíster en Biotecnología Trabajos de Investigación y/o Extensión

La enfermedad de Parkinson (EP) es la segunda enfermedad neurodegenerativa más común, caracterizada por la pérdida progresiva de neuronas dopaminérgicas en la substantia nigra pars compacta. Esto conduce a una disminución de los niveles de dopamina en el núcleo estriado, causando los síntomas motores típicos de la enfermedad. Entre las principales causas de la neurodegeneración se encuentran el estrés oxidativo (EO) y la disfunción mitocondrial. Aunque la mayoría de los casos de EP son idiopáticos, se ha demostrado que entre el 5 y el 10% de ellos son formas familiares de la enfermedad causadas por mutaciones en determinados genes. Uno de ellos es el gen DJ-1, cuyas mutaciones están asociadas a casos familiares de la EP de inicio temprano. Además, se ha demostrado que en los cerebros de los pacientes con formas idiopáticas de la EP se acumula una forma sobreoxidada e inactiva de la proteína DJ-1. Curiosamente, DJ-1 desempeña un papel esencial en la defensa contra el EO y participa en la homeostasis mitocondrial, entre otras muchas funciones. En la actualidad, la EP es una enfermedad incurable cuya fisiopatología aún no está clara. Además, es urgente descubrir nuevos biomarcadores y dianas terapéuticas para facilitar su diagnóstico y tratamiento. En este contexto, se han desarrollado modelos de la EP en varios organismos que han permitido descubrir diferentes mecanismos patogénicos subyacentes a esta enfermedad. En este trabajo se ha empleado un modelo de la EP generado en Drosophila y basado en la falta de función de DJ-1β (ortólogo en Drosophila del gen DJ-1 humano). Las moscas mutantes DJ-1β muestran fenotipos relacionados con la enfermedad, como defectos motores, aumento de los niveles de EO e incremento de la carbonilación de proteínas. Dado que la modificación oxidativa de las proteínas puede alterar su función, nos planteamos identificar aquellas específicamente carboniladas en las moscas modelo para aumentar nuestra comprensión de la patogénesis de la EP, así como para descubrir posibles dianas terapéuticas para el desarrollo de nuevas estrategias de tratamiento. Para ello, se realizó un ensayo de proteómica redox en los mutantes DJ-1β en el que se identificaron proteínas con niveles aumentados de carbonilación en estas moscas respecto a las moscas control. El análisis de algunas de las proteínas identificadas en el modelo de la EP en Drosophila mostró un aumento en la actividad de enzimas de la ruta glucolítica, como la fosfofructoquinasa y la enolasa, y una disminución de la función de la proteína SERCA, implicada en el mantenimiento de la homeostasis del calcio. Estos resultados fueron confirmados en un modelo de la EP generado en células humanas de neuroblastoma deficientes en DJ-1. En conjunto, estos sugieren que la pérdida de función de DJ-1 provoca un aumento de la tasa glucolítica y que la alteración de la actividad de la proteína SERCA podría estar implicada en la fisiopatología de la EP. También demostramos que el tratamiento con compuestos que aumentan la glucólisis, como la meclizina o el dimetilfumarato, o que aumentan la actividad de SERCA, como el CDN1163, suprimen los fenotipos presentes en ambos modelos de la EP basados en la falta de función de DJ-1. Además, realizamos un estudio metabolómico en moscas deficientes en DJ-1β con el fin de identificar otras rutas metabólicas que podrían estar implicadas en la patogénesis de la EP. Nuestros resultados mostraron que las moscas modelo de la EP presentan alteraciones en el metabolismo de las proteínas, el ciclo del ácido cítrico, y un cambio en la ruta principal de obtención de energía hacia la glucólisis, además de un aumento en la expresión de algunas enzimas del ciclo de la urea. Así, estas alteraciones metabólicas podrían estar contribuyendo a la patogénesis de la EP y constituir potenciales dianas terapéuticas y/o biomarcadores para esta enfermedad.

Tesis-CEINDO, Universidad San Pablo CEU, Facultad de Medicina, Programa en Medicina Traslacional, leida el 11 de mayo del 2022 El glioblastoma (GBM) es el tumor cerebral primario más agresivo. La patogenia es compleja, con participación de disfunción mitocondrial, señalización oncogénica y reprogramación metabólica. La terapia dirigida es un desafío por la alta heterogeneidad intratumoral. En este trabajo caracterizamos 3 líneas de células madre de glioma (GSC), así como U87MG, comprobando el potencial antiproliferativo de metformina (MF), dicloroacetato (DCA), oxamato de sodio (SOD) y diazo-5-oxo-L-norleucina (DON). Describimos que GBM27 (una línea dependiente de oxígeno) fue la más resistente a todos los tratamientos, excepto DON. La aplicación de DON disminuyó la producción total de ATP, pero con una respuesta metabólica más heterogénea. La inhibición efectiva de GSCs dependientes de oxígeno sería tóxica para células normales: esto podría evitarse mediante reducción de dosis. La bleomicina mostró sinergia en combinación con MF, DCA y DON en GBM27, y con DON en todas las líneas celulares. U87MG no fue capaz de adaptarse a la restricción de glucosa y glutamina, a pesar de la presencia de cuerpos cetónicos. La depleción cíclica provocó cambios morfológicos y un fenotipo metabólico quiescente. Nuestra investigación subraya la necesidad de una mejor caracterización del GBM desde una perspectiva metabólica. Revertir la dependencia a fuentes de energía fermentables merece futuras investigaciones. Glioblastoma (GBM) is the most aggressive primary brain tumor. Pathogenesis is complex, with involvement of mitochondrial dysfunction, oncogenic signaling and metabolic rewiring. Targeting metabolic vulnerabilities of GBM remains challenging due to high intratumoral heterogeneity. We characterized the bioenergetic phenotypes of 3 distinct glioma stem cells (GSCs), as well as non-stem U87MG, testing the antiproliferative potential of metformin (MF), dichloroacetate (DCA), sodium oxamate (SOD) and diazo-5-oxo-L-norleucine (DON). We found that GBM27, highly oxygen-dependent, was the most resistant to all treatments except DON. DON decreased total ATP production, but demonstrated heterogeneous metabolic responses, suggesting a multidimensional role of glutamine in cellular bioenergetics. Effective targeting of oxygen-dependent GSCs would be toxic to normal cells. Circumventing toxicity entails dose-reduction strategies. Bleomycin exhibited therapeutically relevant synergistic effects with MF, DCA and DON in GBM27, and DON in all other cell lines. Archetypal of non-stem populations, U87MG was not able to adapt to long-term glucose and glutamine depletion despite the presence of ketone bodies. Cyclical ketone-compensated glucose depletion induced growth arrest, morphological changes, and a quiescent metabolic phenotype. Our study highlights the need for better characterization of GBM from a metabolic perspective. Exploiting cancer addiction to fermentable energy sources warrants further exploration.

The economic viability of the split-phase glycolysis process for the recycling of any kind of flexible polyurethane foam waste employing crude glycerol as cleavage agent has been demonstrated. First, experiments at pilot plant scale were carried out to check that the process can be extrapolated to larger scales. With the goal of scaling-up the process from laboratory scale to pilot plant, geometric similarity criteria were applied together with dynamic similarity for laminar flow in agitated tank reactors. Hence, a pilot plant installation was designed with geometrically similar equipment to those used for lab scale, obtaining analogous results in terms of recovered polyol properties. Then, the basic design of a split-phase glycolysis industrial plant with a capacity for treating 270 Tm per year of flexible PU foams scraps was proposed. Finally, the economic feasibility of such recycling process was confirmed because of the obtention of a Net Present Value (NPV) of 1,464,555€, with an Internal Rate of Return (IRR) of 27.99%, and a payback time between 4 and 5 years., Se ha demostrado la viabilidad económica del proceso de glucólisis en fase dividida para el reciclado de cualquier tipo de residuo de espuma de poliuretano flexible empleando glicerol crudo como agente de desdoblamiento. En primer lugar, se realizaron experimentos a escala de planta piloto para comprobar que el proceso se puede extrapolar a escalas mayores. Con el fin de escalar el proceso de escala de laboratorio a planta piloto, se aplicaron criterios de similitud geométrica y de similitud dinámica para flujo laminar en reactores de tanque agitado. Por lo tanto, se diseñó una instalación de planta piloto con equipos geométricamente similares a los utilizados para escala de laboratorio, obteniendo resultados análogos en términos de propiedades de polioles recuperados. A continuación, se planteó el diseño básico de una planta industrial de glucólisis en fase dividida con capacidad para tratar 270 Tm/año de chatarra de espumas flexibles de PU.

The optimization of conditions to promote the stemness of pluripotent cells in vitro is instrumental for their use in advanced therapies. We show here that exposure of human iPSCs and human ESCs to low concentrations of the chemical NO donor DETA/NO leads to stabilization of hypoxia-inducible factors (HIF-1α and HIF-2α) under normoxia, with this effect being dependent on diminished Pro 402 hydroxylation and decreased degradation by the proteasome. Moreover, the master genes of pluripotency, NANOG and OCT-4, were upregulated. NO also induces a shift in the metabolic profile of PSCs, with an increased expression of hypoxia response genes in glycolysis. Furthermore, a reduction in the mitochondrial membrane potential with lower oxygen consumption and increased expression of mitochondrial fusion regulators, such as DRP1, was observed. The results reported here indicate that NO mimics hypoxia response in human PSCs and enhances their stemness properties when cultured under normoxic conditions.

This study was funded by grants from the Ministerio de Economia, Industria y Competitividad y por el Fondo de Desarrollo Regional FEDER, Spain nº SAF2013-49019, SAF2017-85903-P, and from the Consejería de Innovación, Ciencia y Empresa, Junta de Andalucía (P07- CTS- 03135, P10- CTS- 5784, and CTS- 101), Spain. J.F. and L.M. have FPU fellowships from the Ministerio de Educación Cultura y Deporte, Spain. C.R.S. was a schorlarship holder from the Plan Propio de Investigación of the University of Granada., We wish to thank Michael O’Shea for proofreading the paper., Metabolic reprogramming, which is characteristic of cancer cells that rapidly adapt to the hypoxic microenvironment and is crucial for tumor growth and metastasis, is recognized as one of the major mechanisms underlying therapeutic resistance. Mitochondria, which are directly involved in metabolic reprogramming, are used to design novel mitochondria-targeted anticancer agents. Despite being targeted by melatonin, the functional role of mitochondria in melatonin's oncostatic activity remains unclear. In this study, we aim to investigate the role of melatonin in mitochondrial metabolism and its functional consequences in head and neck cancer. We analyzed the effects of melatonin on head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) cell lines (Cal-27 and SCC-9), which were treated with 100, 500, and 1500 mu M of melatonin for 1, 3, and 5 days, and found a connection between a change of metabolism following melatonin treatment and its effects on mitochondria. Our results demonstrate that melatonin induces a shift to an aerobic mitochondrial metabolism that is associated with changes in mitochondrial morphology, function, fusion, and fission in HNSCC. We found that melatonin increases oxidative phosphorylation (OXPHOS) and inhibits glycolysis in HNSCC, resulting in increased ROS production, apoptosis, and mitophagy, and decreased cell proliferation. Our findings highlight new molecular pathways involved in melatonin's oncostatic activity, suggesting that it could act as an adjuvant agent in a potential therapy for cancer patients. We also found that high doses of melatonin, such as those used in this study for its cytotoxic impact on HNSCC cells, might lead to additional effects through melatonin receptors., Ministerio de Economia, Industria y Competitividad y por el Fondo de Desarrollo Regional FEDER, Spain SAF2013-49019 SAF2017-85903-P, Junta de Andalucia P07-CTS-03135 P10-CTS-5784 CTS-101, Ministerio de Educacion Cultura y Deporte, Spain, Plan Propio de Investigacion of the University of Granada

This study was supported by the grant #3650 managed by Fundacion General EmpresaUniversidad de Granada and by the investigation group CTS-454 "Impacto fisiologico del estres oxidativo, deporte, actividad fisica y salud"., We tested whether physiological doses of hydroxytyrosol (HT) may alter the mRNA transcription of key metabolic genes in exercised skeletal muscle. Two groups of exercise-trained Wistar rats, HTlow and HTmid, were supplemented with 0.31 and 4.61 mg/kg/d of HT, respectively, for 10 weeks. Another two groups of rats were not supplemented with HT; one remained sedentary and the other one was exercised. After the experimental period, the soleus muscle was removed for qRT-PCR and western blot analysis. The consumption of 4.61 mg/kg/d of HT during exercise increased the mRNA expression of important metabolic proteins. Specifically, 4.61 mg/kg/d of HT may upregulate long-chain fatty acid oxidation, lactate, and glucose oxidation as well as mitochondrial Krebs cycle in trained skeletal muscle. However, a 4.61 mg/kg/d of HT may alter protein translation, as in spite of the increment showed by CD36 and GLUT4 at the mRNA level this was not translated to higher protein content., 3650 CTS-454

Imbalance in the oxidative status in neurons, along with mitochondrial damage, are common characteristics in some neurodegenerative diseases. The maintenance in energy production is crucial to face and recover from oxidative damage, and the preservation of different sources of energy production is essential to preserve neuronal function. Fingolimod phosphate is a drug with neuroprotective and antioxidant actions, used in the treatment of multiple sclerosis. This work was performed in a model of oxidative damage on neuronal cell cultures exposed to menadione in the presence or absence of fingolimod phosphate. We studied the mitochondrial function, antioxidant enzymes, protein nitrosylation, and several pathways related with glucose metabolism and glycolytic and pentose phosphate in neuronal cells cultures. Our results showed that menadione produces a decrease in mitochondrial function, an imbalance in antioxidant enzymes, and an increase in nitrosylated proteins with a decrease in glycolysis and glucose-6-phosphate dehydrogenase. All these effects were counteracted when fingolimod phosphate was present in the incubation media. These effects were mediated, at least in part, by the interaction of this drug with its specific S1P receptors. These actions would make this drug a potential tool in the treatment of neurodegenerative processes, either to slow progression or alleviate symptoms.

Crucigrama para ayudar en el aprendizaje de las rutas metabólicas de síntesis y degradación de la glucosa.

[eng] Lysosomes are the primary degradative organelles in mammalian cells. Indeed, lysosome enzymatic cocktail allows the degradation of a vast repertoire of cellular material through different converging pathways including macroautophagy. Lysosome function relies on both its acidification capacity, mediated by the vacuolar ATPase, and its cytosolic positioning, driven by the motor proteins kinesins and dyneins. Emerging evidences point out a relevant role of lysosomes in cancer progression denoting their important function in cellular homeostasis maintenance. Indeed, lysosomotropic drugs, such as chloroquine-derivatives, are already being used in clinical trials for cancer treatment. This PhD thesis aims to study lysosome functions in cancer cells to identify novel vulnerabilities related to this organelle. Two different questions are addressed herein: 1) The implication of lysosomes on glucose-mediated E2F1-driven mTORC1 activation and 2) The role of lysosomes in cell division. E2F1 is overexpressed in numerous human cancers, including lung, breast and hepatocellular carcinomas. Traditionally, the major role reported for E2F1 in cancer is the activation of cell cycle. Previously, our group reported that E2F1 regulates cell growth, through the activation of mTORC1, a major regulator of protein synthesis and autophagy and demonstrated that E2F1 induces the anterograde movement of lysosomes, which is associated with translocation of mTOR to lysosomes and v-ATPase activation. Here we demonstrate that E2F1-dependent mTORC1 activation relies on glucose availability. E2F1 transcriptionally regulates several glycolytic enzymes, thus increasing glycolytic flux. More specifically, we described that E2F1 up-regulates the PFKFB3 isoenzyme of the PFK-2, a potent activator of glycolysis, and that PFKFB3 activity determines mTORC1 activation. We hypothesize that E2F1 is able to activate glycolysis and therefore increase v-ATPase and mTORC1 activity. Besides, E2F1 induces lysosome-dependent exocytosis which correlates with a metastatic phenotype. These novel functions of E2F1 in v-ATPase regulation and lysosomal trafficking provide insight into regulatory mechanisms by which E2F1 drives malignancy and highlight the potential role of lysosomes as a metabolic hub in mammalian cells. Studies on lysosome function are mainly focused in cells in interphase. However, the implication of these organelles during cell division remains unclear. Mitosis is a key event during cell cycle, in which cells finally divide into two daughter cells. Mitotic progression comprises five active phases involving a dramatic rearrangement of cellular components in a short period of time. Until now, degradation of mitotic factors has been attributed only to ubiquitination and proteasome-dependent degradation. In the present study, we show that impairment of lysosomal trafficking and function delays mitotic progression and increases mitotic errors, phenomena accompanied by an increase in toroidal-shaped nuclei a reflection of impaired mitosis. Finally, we use a proteomic approach to discover novel lysosome protein substrates involved in mitotic progression. Interestingly, we identified regulatory proteins of the cohesin complex necessary for correct chromosomal segregation. By characterizing a novel function of lysosomes specifically in mitosis, our work establishes a novel model of regulation of cell division beyond the proteasome. In summary, this work provides new insights into the function of lysosomes down-stream of E2F1 oncogenic signaling, which modulates G1/S transition and cell proliferation but also into lysosomal function in the completion of cell cycle by regulating mitotic progression. Our work highlights the importance of targeting lysosomes for novel cancer therapies., [cat] Els lisosomes són els principals orgànuls degradatius de la cèl·lula eucariota, capaços de degradar un ampli repertori de material cel·lular. La funció lisosomal depèn tant de la seva acidificació, sota el control de la v-ATPasa, com de la seva distribució citosòlica, regulada per kinesines i dineïnes. La funció lisosomal és essencial per preservar la homeòstasi cel·lular i la seva alteració està lligada al desenvolupament de malalties de diferent índole, des de trastorns neurodegeneratius fins al càncer. De fet, fàrmacs lisosomotròpics, tals com els derivats de la cloroquina, s’estudien actualment en assajos clínics com a tractament per un ampli ventall de tumors. L’objectiu d’aquesta tesi doctoral és l’estudi de les funcions lisosomals en cèl·lules canceroses per tal de definir noves vulnerabilitats relacionades a aquest orgànul. S’adrecen així doncs, dues preguntes experimentals: 1) La implicació dels lisosomes en l’activació de mTORC1 degut a E2F1 a través de la glucosa i 2) El rol dels lisosomes en la divisió cel·lular. La funció oncogènica d’E2F1 s’ha atribuït tradicionalment al seu paper com a regulador del cicle cel·lular. Actualment, però, es coneix la seva implicació en diverses funcions relacionades amb la progressió tumoral, entre elles, el creixement cel·lular a través de l’activació de mTORC1. En aquest projecte, hem demostrat que l’activació d’mTORC1 és amplificada en presència de glucosa. E2F1 activa la transcripció d’enzims glucolítics, específicament l’isoenzim de la PFK-2 PFKFB3 i d’aquesta manera incrementa el flux glucolític. Hem descrit que l’activitat de PFKFB3 està directament relacionada amb l’activació d’mTORC1 suggerint la regulació del complex pel flux glucolític. En paral·lel, a través de la regulació del tràfic lisosomal, E2F1 incrementa la exocitosi lisosomal àmpliament correlacionada amb el fenotip metastàtic. Les funcions descrites aquí destaquen la importància del lisosoma en el mecanisme oncogènic d’E2F1 i recolzen la idea dels lisosomes com a plataformes d’integració del metabolisme cel·lular. L’estudi de la funció lisosomal s’ha limitat majoritàriament a cèl·lules en interfase i pocs estudis es centren en la seva implicació en la divisió cel·lular (mitosi). La mitosi és un procés crucial en el cicle cel·lular en què la cèl·lula finalment es divideix en dues cèl·lules filles genèticament idèntiques. La progressió mitòtica requereix un ampli canvi morfològic, estrictament coordinat en un període de temps extremadament curt. En aquest context, la degradació de factors mitòtics és un element limitant per garantir la correcta progressió mitòtica. Fins ara, la degradació de factors mitòtics s’ha atribuït exclusivament al proteasoma deixant la funció lisosomal fora de l’escenari. En aquest estudi, demostrem que la inhibició de la funció lisosomal tant a nivell de tràfic com d’acidificació retarda la progressió mitòtica i incrementa la freqüència d’errors mitòtics, fenòmens acompanyats de l’aparició del nucli toroïdal el qual reflexa una mitosi aberrant. Finalment, hem usat una aproximació proteòmica per descobrir noves dianes lisosomals implicades en la mitosi. Entre aquestes, hem identificat proteïnes reguladores del complex de coesines, essencial pel correcte desenvolupament de la segregació cromosòmica. La caracterització de la funció lisosomal específicament en mitosi desenvolupada en aquest estudi implica un nou model de regulació de la divisió cel·lular més enllà de la degradació proteasomal. Aquest estudi dóna llum a la funció lisosomal sota el senyal oncogènic d’E2F1, un regulador clau de la transició G1/S del cicle cel·lular així com demostra la implicació dels lisosomes per la culminació del cicle a través de la regulació de la mitosi. En conclusió, el nostre treball recolza la importància del lisosoma com a possible diana terapèutica en el càncer.

[ES] La insuficiencia pancreática exocrina (IPE) es un trastorno consistente en una secreción enzimática deficiente del páncreas al intestino conllevando una maldigestión de los macronutrientes, en especial de las grasas. Además, la IPE puede ir acompañada de una concentración biliar y pH intestinal inferiores a los de un adulto sano. El tratamiento actual consiste en una terapia de reemplazamiento enzimático, suplementando al paciente por vía oral con pancreatina (Kreon®) y estableciendo la dosis en base al peso del paciente y la cantidad de grasa ingerida, excluyendo factores inherentes al alimento, como son el tipo de grasa, estructura de la matriz-alimento o la interacción con otros macronutrientes. Así, el objetivo de este trabajo fue analizar la digestibilidad in vitro de lípidos, proteínas y glúcidos en diferentes combinaciones de pan con semillas, aceite, mantequilla y/o jamón York bajo condiciones intestinales de una persona sana (control) y de IPE. Las variables estudiadas fueron la dosis de Kreon© (0-4000 UL/ g grasa), pH (6 ó 7) y concentración biliar (1 mM ó 10 mM). Los resultados indicaron que en todos los casos la suplementación favorecía la digestibilidad y que la variación de la dosis en la lipólisis era importante, encontrándose la óptima entre 2000-4000 UL/ g grasa. Además, una concentración de sales biliares de 10 mM y pH 7 favorecían la emulsión de lípidos y la actividad lipasa, aunque no era tan obvio en la glicólisis y proteólisis. Por último, el tipo de grasa y la estructura matricial condicionaron la extensión de la lipólisis y la dosis de Kreon® necesaria; de la misma forma, se apreciaron diferencias en la glicólisis y proteólisis del pan con semillas solo o acompañado., [EN] Exocrine pancreatic insufficiency (EPI) is a severe disorder that consists of a deficient enzymatic secretion from the pancreas to the intestine. This entails to a nutrients malabsorption. Moreover, this disorder can be accompanied with a lower concentration of bile salts and a low pH compared to a healthy patient. Current treatment is based in a pancreatic enzymatic replacement therapy and involves the oral intake of pancreatin (Kreon®) and the dosage is established based on the patient's weight and the total amount of fat ingested in each meal, without considering factors inherent to the food, such as the type of fat, structural organization in the food-matrix or its interaction with other macronutrients. Thus, the objective of this work has been to analyse the digestibility of lipids, proteins and carbohydrates in different combinations of bread with seeds, oil, butter and/or ham, digested in vitro under intestinal conditions of a standard healthy person (control) and EPI. The studied conditions were the dose of enzymatic supplementation of pancreatin (0-4000 UL / g fat) intestinal pH (6 or 7) and bile salts concentration (1 or 10 mM). The results showed that in all cases, supplementation favoured digestibility and, dose influence was very important in lipolysis, being the optimum dose between 2000-4000 UL/ g fat. On the other hand, 10 mM of bile salts and pH 7 helped to emulsify lipids and to activate enzymes, however that was not so obvious in glycolysis and proteolysis. At last, type of fat and structural organization conditioned lipolysis extension and Kreon® dose required; in the same way, it was observed differences in glycolysis and proteolysis between ingest bread with seeds alone or accompanied with butter, oil or/and york., [CA] La insuficiència pancreàtica exocrina és un trastorn greu que consisteix en una secreció enzimàtica deficient del pàncrees a l’intestí i comporta una maldigestió dels nutrients, en especial dels lípids. A més a més, la IPE pot anar acompanyada d’una concentració biliar i un pH intestinal menor al pacient sa estàndard. El tractament actual consisteix en una teràpia de reemplaçament enzimàtic, suplementant al pacient per via oral amb pancreatina (Kreon®) establint la dosificació en funció del pes del pacient i la quantitat de greix ingerit, sense comptar amb factors inherents a l’aliment, com són el tipus de greix, l’organització estructural en la matriu-aliment o la 2 interacció amb altres macronutrients. Per això, l’objectiu d’este treball va ser analitzar la digestibilitat in vitro de lípids, proteïnes i glúcids en diferents combinacions de pa amb llavors, oli, mantega i/o pernil dolç baix condicions intestinals d’una persona sana (control) i d’IPE. Les variables estudiades foren dosis de Kreon® (0-4000 UL / g lípids), pH intestinal (6 o 7) i concentració biliar ( 1 o 10 mM). Els resultats indiquen que la suplementació té una influència positiva en la digestibilitat i que la variació de la dosi en la lipòlisi és important, estant la òptima entre 2000-4000 UL/ g greix. A més, una concentració de sals biliars de 10 mM i un pH 7 afavoreixen l’emulsió de lípids i l’activitat enzimàtica, encara que no és tan obvi en glicòlisi i proteòlisi. Per últim, el tipus de greix i l’estructura matricial condicionen la extensió de la lipòlisi i la dosis de Kreon® necessària; de la mateix manera, se aprecien diferències en la glicòlisi i proteòlisi de pa amb llavors ingerits sol o acompanyat.

El cáncer es actualmente una de las enfermedades más prevalentes a nivel mundial. A pesar del avance en el diagnóstico y la terapia del cáncer, sigue siendo una enfermedad s in cura, causando la muerte de millones de personas cada año. Por ello, es necesario la búsqueda de nuevos tratamientos más eficaces. En esta búsqueda, es importante identificar las características de las células cancerosas que las diferencian de las célul as sanas. Las células cancerosas se caracterizan por una rápida proliferación celular, la cual es posible debido a la reprogramación metábolica que sufren. Diferentes estudios sobre el metabolismo de las células cancer os as sugieren que éste podría utiliz arse para el desarrollo de nuevas estrategias terapéuticas. El objetivo del presente trabajo es llevar a cabo una revisión bibliográfica sobre la información existente acerca del metabolismo del cáncer y de las estrategias terapéuticas basadas en él que es tán siendo investigadas actualmente. La búsqueda de información se ha realizado consultando diferentes fuentes bibliográficas. La revisión se ha basado en las principales rutas metabólicas alteradas en las células cancerosas: glucosa, aminoácidos y lípidos , principalmente. Se ha realizado una revisión de la influencia de estas moléculas en el metabolismo del cáncer y las diferentes estrategias terapéuticas en estudio basadas en ellas, destacando el uso de fármacos que interfieren en las rutas metabólicas de estas moléculas. Además, se ha realizado una búsqueda de los ensayos clínicos que están siendo llevados a cabo con fármacos que actúan sobre el metabolismo celular. Existen diferentes estrategias basadas en el metabolismo del cáncer, como la privación d e determinados nutrientes en la propia dieta o el uso de fármacos que bloquean rutas metabólicas específicas vitales para las células cancerosas. Estas estrategias sugieren que el tratamiento del cáncer desde la perspectiva de su metabolismo es un campo pr ometedor para hacer frente a esta enfermedad. Universidad de Sevilla. Grado en Farmacia

Se ha descrito que algunas alteraciones del metabolismo están asociadas con la pérdida de función mitocondrial en células tumorales. Aún se discute si tal pérdida se evidencia en la función o si la célula brinda máxima estabilidad a sus funciones, se requieren más estudios para conocer el comportamiento del cáncer en la mitocondria. Cuando tiene limitación de oxígeno y mutaciones en oncogenes, genes supresores de tumor y enzimas de la vía glucolítica o del metabolismo oxidativo mitocondrial, la célula tumoral permite la formación de un cáncer agresivo. Este artículo es producto de la revisión bibliográfica de la evidencia científica que se ha presentado en las últimas investigaciones respecto al cáncer y la función mitocondrial. Metabolism alterations are associated with the loss of mitochondrial function in tumor cells. Current research discuss whether such loss is evident in function itself, or if cells can provide maximum stability to its functions. More studies are needed to determine the behavior of cancer in mitochondria. Tumor cells experience a limitation of oxygen and mutations in oncogenes, tumor suppressor genes and enzymes of the glycolytic pathway and/or mitochondrial oxidative metabolism, thus allowing the formation of aggressive cancer. This article is the result of a literature review of the scientific evidence that has been presented in the latest research on cancer and mitochondrial function.

Las bacterias lácticas son un grupo representativo de microorganismos que tienen la capacidad de realizar transformaciones alimenticias relacionadas con las fermentaciones, además de ser capaces de sintetizar una serie de metabolitos importantes como ácido láctico y péptido de cadena corta con actividad antimicrobiana denominadas bacteriocinas, utilizadas en beneficio del hombre. Las BAL están siendo ampliamente utilizadas en la industria de los alimentos para prolongar el tiempo de durabilidad del mismo, así como también preservando y transformando las características organolépticas y calidad microbiológica del producto alimenticio debido a su acción antagónica frente a los microorganismos deterioradores de los alimentos.

[ES] La insuficiencia pancreática exocrina (IPE) es una afección grave asociada a diversas enfermedades caracterizadas por la incapacidad del páncreas para secretar la cantidad suficiente de enzimas, ocasionando una maldigestión y malabsorción de nutrientes, especialmente de los lípidos. El tratamiento consiste en una terapia de suplementación enzimática (TSE), administrando al paciente pancreatina encapsulada (Kreon®). En la actualidad, su dosificación se establece en función de la edad y el peso de cada individuo, además de su ingesta diaria de grasa. Sin embargo, no se tienen en cuenta factores intrínsecos al alimento (origen y tipo de grasa, estructura matricial, etc.) y extrínsecos (pH intestinal y concentración biliar del individuo, etc.) que pueden afectar a la eficiencia del suplemento y por tanto a la digestibilidad de las grasas. En el presente estudio se ha empleado un modelo de digestión gastrointestinal in vitro para analizar la eficacia de distintas dosis del suplemento enzimático Kreon® (0-4000 UL/ g grasa), así como la influencia de las condiciones fisiológicas de la etapa intestinal (pH 6 y 7; concentración biliar 1 y 10 mM), en la digestión de lípidos y glúcidos de diferentes productos de bollería industrial (donut, gofre, croissant y magdalena), acompañados o no de leche. Los resultados muestran que el aumento de la dosis de Kreon® aumentó la digestibilidad de las grasas hasta alcanzar un valor máximo a partir del cual un aumento de la dosis no se tradujo en una mayor lipólisis. En cuanto al efecto del pH y la concentración biliar, en general una mayor concentración de sales biliares favoreció una mayor digestibilidad de las grasas. La glucólisis aumentó en presencia de Kreon® no siendo significativa la dosis de encima (1000-4000), mientras que el pH y la concentración biliar contribuyeron a la glucólisis dependiendo del tipo de producto., [EN] Exocrine pancreatic insufficiency (IPE) is a serious disease associated with different illnesses characterized by the pancreas¿s inability to secrete enough enzymes, causing maldigestión and malabsorption of nutrients, especially lipids. The treatment is an enzymatic supplementation therapy (TSE), administering pancreatin in the form of capsules (Kreon®) to the patient. At present, dosage is established based on age and weigh of each person, too their daily fat intake. However, food¿s intrinsic factors (fat¿s origin and type, matrix structure, etc.) and extrinsic factors (type of processing, intestinal pH and biliary concentration, etc.) that can affect the supplement¿s efficiency and therefore, fats digestibility. In this study, an in vitro gastrointestinal digestion model was used to analyze the efficacy of different doses of the enzyme supplement (Kreon®) (0-4000UL/g fat), as well as, the influence of different physiological conditions during the intestinal stage (pH 6 or 7, bile concentration 1 or 10 mM) in the digestion of lipids and sugars of different industrial bakery products (donut, waffle, croissant and muffin). Results show that increasing the dose of Kreon® increased the digestibility of the fats until a maximum value from which an increase of the dose did not translate into a greater lipolysis. As to how pH and biliary concentration affect, in general a higher concentration of bile salts favored a higher digestibility of fats. Glycolysis increased in the presence of Kreon® regardless the dose (1000-4000), whereas pH and biliary concentration contributed to glycolysis depending on the type of product.

"Una de las principales características de las células tumorales malignas es que su metabolismo energético se encuentra alterado. El entendimiento de las consecuencias de este metabolismo expresado diferencialmente requiere de un análisis detallado del metabolismo de la glucosa y de su relación con la producción de energía en las células cancerosas. En años recientes se ha incrementado el interés sobre el efecto Warburg que presentan las células cancerosas debido a la gran utilidad de la tomografía por emisión de positrones utilizada en los análisis de tumores de pacientes con cáncer. Algunos de los mecanismos involucrados que conducen al fenómeno de Warburg incluyen la sobreexpresión de algunas enzimas de la glucólisis, la regulación intracelular del pH, el cambio inducido por la hipoxia y una reprogramación metabólica después de la pérdida de la función de p53. Las alteraciones de los oncogenes principales involucran mutaciones, deleciones y amplificaciones. Muchos oncogenes y genes supresores de tumores coinciden en las cascadas de señalización que regulan al HIF-1 y al p53. El aporte energético de cada vía a la célula depende del tipo de tumor, de los oncogenes que se activan y del microambiente tumoral."

Pretende esta revisión contribuir en la posibilidad de utilización del lactato como marcador cuantitativo de la intensidad del ejercicio. Además, es conocido que esta sustancia tiene una estrecha relación con la liberación de hidrogeniones pero ha sido catalogada erróneamente como una relación causa efecto en lo referente a la acidosis láctica. Se muestran en esta revisión otras funciones del lactato recientemente descubiertas y las aplicaciones de dichas funciones en la Fisiología del Ejercicio. Se propone el lactato, como el mejor indicador bioquímico de la intensidad del ejercicio por su estrecha relación a lo que acontece en el músculo en el momento de hacer ejercicio a diferentes intensidades. Abstract. This review aims to contribute to the possibility of using lactate as a quantitative marker of exercise intensity. It is important to broaden research about this substance because it has a close relationship with the release of hydrogen ions, showing that previous research has erroneously listed lactate as a causal relationship of lactic acidosis. Other functions of newly discovered lactate and its applications are shown in this review. Lactate is proposed as the best biochemical indicator of exercise intensity by its close relationship to what happens in the muscle at the time of exercise at different intensities. Maestría

The causative agent of Chagas disease, Trypanosoma cruzi, metabolizes glucose through two major pathways: glycolysis and the pentose phosphate pathway. Glucose is taken up via one facilitated transporter and its catabolism by the glycolytic pathway leads to the excretion of reduced products, succinate and l-alanine, even in the presence of oxygen; the first six enzymes are located in a peroxisome-like organelle, the glycosome, and the lack of regulatory controls in hexokinase and phosphofructokinase results in the lack of the Pasteur effect. All of the enzymes of the pentose phosphate pathway are present in the four major stages of the parasite's life cycle, and some of them are possible targets for chemotherapy. The gluconeogenic enzymes phosphoenolpyruvate carboxykinase and fructose-1,6-bisphosphatase are present, but there is no reserve polysaccharide. Fil: Maugeri, Dante A.. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); Argentina Fil: Cannata, Joaquin Juan Bautista. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); Argentina Fil: Cazzulo, Juan Jose. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Centro Científico Tecnológico Conicet - La Plata. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús). Universidad Nacional de San Martín. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas. Instituto de Investigaciones Biotecnológicas "Dr. Raúl Alfonsín" (sede Chascomús); Argentina

El presente artículo estudia el efecto de la incorporación del término de transporte en las ecuaciones de reacción-difusión de dominio fijo, a través de campos de velocidad toroidal. Se estudia específicamente la formación de patrones de Turing en problemas de difusión-advección-reacción, considerando los modelos de cinética de reacción de Schnackenberg y de glucólisis. Se analizan tres casos, los cuales se solucionan numéricamente empleando elementos finitos. Se encuentra que, para los modelos de glucólisis, el efecto advectivo modifica totalmente la forma de los patrones de Turing obtenidos con difusión-reacción; mientras que para los problemas de Schnackenberg, los patrones originales se distorsionan levemente, haciéndolos rotar en el sentido del campo de velocidades. También se logró determinar, como para valores altos de velocidad, el efecto advectivo supera el difusivo y se elimina la inestabilidad por difusión. Por otro lado para valores muy bajos en el campo de velocidad, el efecto advectivo no es considerable y no hay modificación en los patrones de Turing originales. This article studies the effect of the inclusion of the transport term in the reaction-diffusion equations, through toroidal velocity fields. The formation of Turing patterns in diffusion-advection-reaction problems is studied specifically, considering the Schnackenberg reaction kinetics and glycolysis models. Three cases are analyzed and solved numerically using finite elements. It is found that, for the glycolysis models, the advective effect totally modifies the form of the obtained Turing patterns with diffusion-reaction; whereas for the problems of Schnackenberg, the original patterns distort themselves slightly, making them to rotate in the direction of the velocity field. Also, this work was able to determine that for high values of velocity the advective effect surpasses the diffusive one and the instability by diffusion is eliminated. On the other hand, for very low values in the velocity field, the advective effect is not considerable and there is no modification of the original Turing pattern.

Esta revisión tiene el propósito de actualizar el probable mecanismo molecular que ejercen los ácidos grasos en las células que captan glucosa, bajo el estimulo de la insulina y su posible implicación en la diabetes mellitus tipo 2 en la que suelen asociarse resistencia a la insulina, obesidad y síndrome metabólico. Entre los mecanismos moleculares por los cuales un aumento de los ácidos grasos libres podría producir resistencia a la insulina, se encuentra la disminución de los niveles de xilulosa 5-fosfato que bloquea la glucólisis por inhibición de la fosfofructocinasa, ello conduce a un aumento de los productos finales en la vía de las hexosaminas y a la activación de la proteincinasa C, un conocido activador de inhibidor de la cinasa Kappa Beta que inhibe la fosforilación del receptor del sustrato de insulina en tirosina, bloqueando los transportadores de glucosa. Existen investigaciones que sugieren que los ácidos grasos libres están implicados en la insulino-resistencia pero el mecanismo bioquímico no esta dilucidado del todo, pues no hay un mecanismo integral que los relacione o interconecte para concluir determinantemente cómo los altos niveles de ácidos grasos libres inducen la resistencia a la insulina.

El óxido nítrico activa la glucolisis en los astrocitos a través de una cascada de señalización en la que interviene la AMP kinasa, que fosforila (y activa) la fosfofructokinasa-2, enzima responsable de la biosíntesis de fructosa-2, 6-bisfosfato, efector alostérico positivo de la fosfofructokinasa-1. Este mecanismo es citoprotector.

[spa] A través de estudios de ayuno y realimentación, y de tipo y cantidad de dieta suministrada, hemos comprobado cómo afecta el estado nutricional a enzimas clave implicadas en glucólisis-gluconeogénesis, vía de las pentosas fosfato y metabolismo de aminoácidos en hígado del pez teleósteo Sparus aurata. La investigacion se ha centrado en el control de la expresión génica de la enzima bifuncional 6-PF 2-K/FRU 2,6-P2ASA, responsable de la sintesis y degradación de FRU 2,6-P2, principal activador de la glucólisis e inhibidor de la gluconeogénesis. Flujo glucolítico, ruta de las pentosas, así como actividad quinasa, cantidad de proteína y niveles de mRNA de 6-PF 2-K/FRU 2,6-P2ASA, parámetros todos disminuídos por el ayuno, correlacionaron con la cantidad de dieta suministrada y con el nivel de carbohidratos aportado por la dieta. Esta enzima ha mostrado ser regulada a corto plazo fundamentalmente por alosterismo y/o modificación covalente, y a largo plazo por el nivel de proteína y mensajero. El análisis de los niveles de mRNA por Northern Blot se ha realizado con una sonda homóloga obtenida por RT-PCR, cuya secuencia es la primera descrita para el mensajero de 6-PF 2-K/FRU, 2,6-P2ASA en peces.