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Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária Dentro do vasto grupo de doenças parasitárias que acometem os animais domésticos, as hemoparasitoses destacam-se pelas consequências em que se traduzem para os animais infetados, podendo mesmo em alguns casos chegar a ser fatais. Acresce ainda o facto, de que a grande maioria das infeções são zoonóticas, tratando-se então o problema não só de saúde veterinária como também de saúde pública. O recurso a medidas de prevenção e profilaxia revelam-se fundamentais no controlo dos vetores e principalmente dos hemoparasitas, evitando-se assim a longo prazo consequências devastadoras tanto para os animais como para os próprios donos. O estudo apresentado incidiu sobre os hemoparasitas detetados na região de Leiria no período compreendido entre janeiro de 2015 e novembro de 2018, nomeadamente, Babesia spp., Dirofilaria spp., Ehrlichia spp., Hepatozoon spp., Leishmania spp., Mycoplasma spp. e Rickettsia spp. Os objetivos principais do estudo foram determinar qual a hemoparasitose encontrada com maior frequência na região de Leiria, qual a espécie, Canis lupus familiaris ou Felis silvestris catus, com maior frequência de infeção, realizar uma análise ao sexo e idade dos animais com hemoparasitas e tendo o animal contraído a infeção, quais os sinais clínicos mais característicos das hemoparasitoses. Para o efeito, recorreu-se a 582 análises do Laboratório Beatriz Godinho e a 19 casos clínicos do Hospital Veterinário de Leiria. Com o estudo, concluiu-se que na região de Leiria, em cada 100 animais domésticos, nomeadamente cães e gatos, cerca de 14 estão infetados por hemoparasitas, sendo a espécie Ehrlichia spp. a que predomina, face aos restantes hemoparasitas, e sendo os gatos do sexo masculino o grupo mais frequentemente infetado. ABSTRACT - Frequency of hemoparasites in dogs and cats relative to the casuistic in the region of Leiria, between January 2015 and November 2018 - Compared to other parasitic diseases that affect domestic animals, hemoparasitic diseases deserve particular attention due to the kind of health consequences they can cause to infected animals, which can in some cases be fatal. Adding to this, the fact that the great majority of infections are zoonotic reveals that it is not only a matter of animal health, but of public health as well. The recourse to profylaxis proves as the most reliable way of controling vectors and blood parasites, resulting in a prevention of devastating long term consequences to both animals and their owners. This study focuses on blood parasites that are found in the region of Leiria between January 2015 and November 2018, these being Babesia spp., Dirofilaria spp., Ehrlichia spp., Hepatozoon spp., Leishmania spp., Mycoplasma spp. and Rickettsia spp. The main purpose of this review was to determine which hemoparasitosis is most commonly found in the region of Leiria, finding out which one of the two reviewed species reveal the greatest rates of infection, carry out an analysis on sex and age of the infected animals and verify what are the most characteristic clinical signs of blood parasites after having contracted the infection. To reach these results, 582 blood-tests from Laboratório Beatriz Godinho and 19 clinical cases of Hospital Veterinário de Leiria were reviewed. The findings of this review reveal that in the region of Leiria around 14 out 100 domestic animals are infected with blood parasites, Ehrlichia spp. being the predominating one compared to other hemoparasites and shows that male felines to be the group with the most commonly infected. N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária O objetivo deste estudo retrospetivo foi comparar várias alterações ecográficas a nível hepático (cápsula irregular, parênquima hepático hiperecogénico, parênquima hepático hipoecogénico, parênquima heterogeneamente difuso, alteração multifocal, alteração focal, vasos de calibre aumentado) e extra-hepático (vesícula biliar com parede espessada, vesícula biliar dilatada, alterações no lúmen da vesícula biliar) com valores normais ou aumentados na concentração da ALT e da FAS, respetivamente. Não foi detetada uma associação estatística entre a ALT e as alterações ecográficas hepáticas (p>0,05) nem entre a FAS e alterações ecográficas na vesícula biliar (p>0,05). O baixo número de indivíduos da amostra (n=34) poderá ter comprometido o poder estatístico do estudo, aumentado a probabilidade de ocorrer um erro do tipo II. Contudo estes resultados coincidiram com os resultados de estudos previamente realizados (com uma amostra significativamente superior), nos quais também não foi possível detetar uma associação estatística entre alterações na ecografia hepática e alterações laboratoriais, incluíndo os valores de ALT e de FAS (Feeney et al., 2007). ABSTRACT - THE RELATIONSHIP BETWEEN THE CONCENTRATION OF ALT AND ALP AND ULTRASONOGRAPHIC FINDINGS IN SMALL ANIMALS - The objective of this retrospective study was to compare several hepatic ultrasound abnormalities (irregular capsule, hyperechogenic hepatic parenchyma, hypoechogenic hepatic parenchyma, heterogeneously diffuse parenchyma, multifocal lesions, focal lesions and congestion) and extrahepatic (thickened gallbladder wall, dilated gallbladder and changes in gallbladder lumen) with ALT and ALP, respectively. A statistical association was not found between serum ALT and ultrasonographic abnormalities of the hepatic parenchyma, capsule and vessels (p> 0.05) and between ALP and gallbladder abnormalities (p> 0.05). The low number of individuals in the sample (n = 34) may have compromised the statistical power of the study, increasing the probability of a type II error. However, these results coincided with the results of previous studies (with a significantly higher sample), in which it was not possible to detect a statistical association between changes in liver ultrasonography and laboratory abnormalities, including ALT and ALP values (Feeney et al., 2007). N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A conjuntivite alérgica canina (CAc) é a causa mais comum de conjuntivite em cães, e integra frequentemente a sintomatologia da dermatite atópica canina (DAc). Com este estudo pretende-se contribuir para uma melhor caracterização clínica e imunológica da CAc através da avaliação da expressão da IL-6, TNF-alfa e IL-12 nesta doença. Para este fim recorreu-se a um grupo de animais diagnosticados concomitantemente com CAc e DAc no HEV-FMV (n=20) e a um grupo controlo (n=21). Os pacientes foram caracterizados clinicamente recorrendo a um score de CAc e ao sistema de classificação Canine Atopic Dermatitis Extent and Severity Index – fourth version (CADESI-04) e foram realizadas biópsias conjuntivais. A partir destas amostras fez-se a quantificação relativa da expressão génica das três interleucinas por qRT-PCR. Os resultados foram calculados através do método 2-DeltaCt. Para comparar a expressão génica das interleucinas entre o grupo atópico e o grupo controlo utilizou-se o Welch Two Sample t-test. De seguida, aplicou-se a correlação de Spearman para avaliar a correlação entre a expressão das interleucinas e o score de CAc, e procedeu-se da mesma forma para os valores relativos ao CADESI-04. Os resultados obtidos pela técnica de qRT-PCR permitiram verificar uma sobrexpressão génica de IL-6 e IL-12, de 291.48 (p=1.306e-09) e 4.85 (p=0.00033) folds, respetivamente, nos animais com conjuntivite alérgica. Apesar de a expressão média de TNF- Alfa estar aparentemente aumentada no grupo experimental (7.33 folds), não foi possível demonstrar uma diferença estatisticamente significativa entre os dois grupos (p=0.18). Os resultados sugerem que quanto maior o score de CAc maior a expressão génica de TNF-Alfa (Rho=-0.57; p=0.02) e IL-12 (Rho=-0.50; p=0.049). Não se verificou nenhuma correlação entre os níveis de expressão génica das interleucinas e os valores de CADESI-04. Com este estudo verificou-se um aumento das citoquinas pró-inflamatórias na CAc, importantes na resposta imunitária inata, e uma ativação de uma resposta Th1, apontando assim a IL-6 e IL-12 como potenciais alvos de imunoterapia nos animais com esta doença. Os resultados sugerem ainda que a expressão génica destas três interleucinas possa ser uma ferramenta útil no diagnóstico e classificação da CAc, mas não da DAc. ABSTRACT - CONTRIBUTION TO IMMUNOLOGICAL AND CLINICAL CHARACTERIZATION OF CANINE ALLERGIC CONJUNCTIVITIS - Canine allergic conjunctivitis (cAC) is the most common type of conjunctivitis in dogs and is often included in the symptoms of canine atopic dermatitis (cAD). With this study we aimed to contribute to improve the clinical and immunological characterization of cAC through the evaluation of IL-6, TNF-Alfa and IL-12 expression in this disease. For this purpose, conjunctival biopsies were performed on a group of 20 animals diagnosed with both cAC and cAD and a control group (n=21). From those samples, a relative quantification of the interleukin’mRNA expression was performed by qRT-PCR. The results were obtained through the 2-DeltaCt method. To compare interleukin gene expression between the atopic group and the control group Welch Two Sample t-test was used. Then Spearman correlation was applied to evaluate the correlation between interleukin gene expression and cAC clinical score, the same procedure was used for the CADESI-04 values. The results provided by qRT-PCR showed a significant gene overexpression of respectively 291.48 (p=1.306e-09) and 4.85 (p=0.00033) folds on IL-6 and IL-12 in dogs with allergic conjunctivitis. Even though the average expression of TNF-Alfa seems apparently higher in the experimental group (7.33 folds), there were no statistical significant differences between the atopic and the healthy group (p=0.18). The results suggest that the higher the cAC score, the greater the TNF-Alfa (Rho=-0.57; p=0.02) and IL-12 (Rho=-0.50; p=0.049) gene expression. There was no correlation between the interleukin gene expression levels and the CADESI-04 values. The results indicate an increase of pro-inflammatory cytokines in cAC, which are strongly involved on the innate immune response, and a Th1 subset activation, identifying IL-6 and IL-12 as potential targets for immunotherapy. This study suggests that the gene expression of those three interleukins may be an useful tool for cAC diagnose and classification, but not for cAD. N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A obstrução uretral (OU) é uma emergência comum em clínica de pequenos animais, afetando essencialmente gatos jovens e do sexo masculino. Existem diversas etiologias que podem causar um processo obstrutivo, como cistite idiopática felina (CIF), plugs uretrais, urólitos e infeção do trato urinário (ITU), sendo esta última frequentemente reportada como aquela menos frequente. Uma terapêutica inapropriada com antibióticos em casos clínicos de OU que não se deva a ITU pode prejudicar a saúde do doente e contribuir para o aumento de resistências antimicrobianas. O presente estudo pretende estudar a frequência de ITU em processos obstrutivos; caracterizar uma amostra da população de 60 animais da espécie Felis catus com obstrução uretral, obtida retrospetivamente através do programa informático utilizado no Hospital Veterinário da Associação Zoófila Portuguesa; analisar a apresentação clínica dos doentes e os resultados dos exames laboratoriais e imagiológicos realizados, a utilização de antibioterapia empírica bem como de parâmetros relacionados com o período após hospitalização. Constatou-se que todos os animais eram do sexo masculino e que a moda de idades foi de 2 anos de idade. A maioria dos felídeos era orquiectomizado (80,4%) e 70% dos casos foram recebidos por primeiro episódio obstrutivo. O sinal clínico mais frequente foi anúria. Verificou-se que a ITU foi a etiologia menos frequente (3,3%; 2/60) de obstrução uretral, embora o resultado não tenha sido estatisticamente significativo. A urocultura é o exame laboratorial que permite, com maior grau de certeza, o diagnóstico de ITU. Onze dos 60 animais apresentaram um resultado positivo relativamente a este exame, mas em apenas 6 se identificou bacteriúria na análise do sedimento urinário. Escherichia coli foi o microrganismo mais frequentemente isolado. Foi administrada antibioterapia empírica a 69,1% da amostra (38/55) embora apenas 9 destes doentes possuíssem, realmente, um resultado de urocultura positivo, o que reforça a necessidade de consciencialização do uso inapropriado de antimicrobianos. ABSTRACT - FREQUENCY OF INFERIOR URINARY TRACT BACTERIAL INFECTION AS CAUSE OF FELINE URETHRAL OBSTRUCTION – RETROSPECTIVE STUDY OF 60 CLINICAL CASES - Urethral obstruction (UO) is a common emergency in small animal practice, affecting mostly young male cats. There are various etiologies that can cause an obstructive process, like feline interstitial cystitis (FIC), urethral plugs, uroliths and urinary tract infection (UTI). The latter is often reported like the less frequent. Inappropriate antibiotic therapy from clinical cases of UO, not associated to UTI, contribute to increase antimicrobial resistance and can even harm the patient’s health. The present study intends to study the frequency of UTI in obstructive processes; characterize a sample of the population of 60 animals of the species Felis catus with urethral obstruction obtained, retrospectively, through the computer program used by the Veterinary Hospital of Associação Zoófila Portuguesa; analyze the clinical presentation of the patients, laboratory and imaging tests, use of empiric antibiotic therapy and description of parameters related to the period after hospitalization. It was found that all the animals were males and that the mode of ages was 2 years old. Most patients were orchiectomized (80,4%) and 70% did not had any previous obstructive episode. The clinical sign most frequent related to the urinary tract was anuria. UTI was the least frequent etiology (2/60) of urethral obstruction, although the result was not statistically significant. The urine culture is the laboratory test that allows, with a greater degree of certainty, the diagnosis of UTI. Eleven of 60 animals presented a positive result to this test but only 6 of these had bacteriuria in urinary sediment analysis. Escherichia coli was the most frequent isolated microorganism. Empiric antibiotic therapy was administered to 69,1% (38/55) of the patients although only 9 of these had indeed a positive urine culture result, which reinforces the need for awareness of the inappropriate use of antimicrobials. N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária O linfoma canino é a terceira neoplasia mais prevalente no cão, sendo a neoplasia hematopoiética mais frequente nesta espécie. Apesar da otimização dos protocolos de quimioterapia, 50% dos animais não passa do primeiro ano de sobrevida e 90% não chega aos dois anos. O objetivo deste estudo foi caracterizar a expressão de recetores de membrana no linfoma canino com o intuito de contribuir para o desenvolvimento de imunoterapias, e os recetores estudados foram o CD19, o CD20, o CD21, o CD22, o CD74 e o CD80. Para este fim recorreuse a uma linha celular de linfoma canino de células B (CLBL-1), e a amostras de linfonodos de 22 animais diagnosticados com linfoma no Hospital Escolar da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade de Lisboa e de 8 animais saudáveis de um grupo controlo. A partir dessas amostras fez-se quantificação relativa da expressão génica dos recetores por qRTPCR, avaliou-se a expressão proteica de CD20 por Western Blot (WB) e sequenciou-se o CD20 pelo método de Sanger. Os resultados obtidos pela técnica de qRT-PCR permitiram observar, em linfoma B, uma sobrexpressão génica significativa do CD19 e CD20, de 10,9 e 8,2 folds, respetivamente, e uma subexpressão génica significativa do CD21, do CD74 e do CD80, de respetivamente 0,05, 0,5 e 0,8 folds. Por sua vez, a quantificação de proteína do CD20 por WB corroborou a sua sobrexpressão em linfoma B, tendo uma correlação de 0,53 com a expressão de mRNA. A sequenciação do CD20 demonstrou que o seu gene é conservado. Observou-se, por fim, que as expressões génicas de CD19, CD20, CD21 e CD22 apresentam uma forte correlação entre si no grupo controlo, sendo esta mais fraca nos animais com linfoma B. Conclui-se que com esta dissertação foi possível caracterizar a expressão de vários recetores e contribuir para o desenvolvimento de novas terapias para o linfoma canino ao validar-se o CD20 e apontando-se o CD19, o CD22 e o CD74 como potenciais alvos de imunoterapia. ABSTRACT - Characterization of Canine Lymphoma Receptors for Immunotherapy - Canine lymphoma is the third most prevalent neoplasia in dogs and is the most common hematopoietic malignancy in this species. Despite the chemotherapy protocols optimization, 50% of the dogs don’t survive the first year with the disease and only 10% survive 2 years. The aim of this study was to characterize the expression of membrane receptors like CD19, CD20, CD21, CD22, CD74 and CD80, and by doing so, contribute to the development of immunotherapy for canine lymphoma. To this end, a B-cell canine lymphoma cell line (CLBL-1) was used, along with lymph node samples from 22 dogs diagnosed with canine lymphoma and a control group of 8 healthy dogs. From those samples, a relative quantification of the receptors’ mRNA expression was performed by qPCR, the CD20 protein quantification was performed using Western Blot (WB), and Sanger sequencing was used to assess the CD20 exons’ sequence. The results provided by qPCR showed a significant CD19 and CD20 gene upregulation, of 10.9 and 8.2 folds respectively, and a significant downregulation of the CD21, CD74 and CD80 genes, of 0.05, 0.5 and 0.8 respectively, in canine B-cell lymphoma. The protein WB results were also consistent with a strong CD20 expression in canine B-cell lymphoma, correlating with the mRNA expression (Rho=-0.53). All the dogs evaluated in this study had a similar CD20 gene sequence, which indicates that CD20 is a conserved gene. Finally, a strong correlation was seen between the CD19, CD20, CD21 and CD22 gene expression in the control group, but these correlations were found to be much weaker in the B-cell lymphoma group. In conclusion, this study succeeded in the characterization of several canine lymphoma receptors and may contribute to the development of new therapies by validating the targeting of CD20 and by indicating potential immunotherapy targets like CD19, CD22 and CD74. CIISA - Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A sépsis é uma síndrome grave que pode surgir por diversos motivos, afetando muitos seres Humanos e animais. Devido à sua elevada prevalência e às elevadas taxas de mortalidade que lhe podem estar associadas, é importantíssimo o seu estudo. A Parvovirose canina predispõe à ocorrência de sépsis secundária a translocação bacteriana de origem gastrointestinal. Estudos com animais naturalmente infetados por Parvovírus podem ser úteis no estudo da sépsis, não só em animais, mas também em seres humanos. O principal objetivo do estudo foi propor e aplicar um sistema de classificação de pacientes sépticos baseado no modelo PIRO (Predisposition, Insult, Response, Organ failure). Em paralelo, foram estudadas as diferenças entre dois métodos de avaliação de SRIS (Síndrome de Resposta Inflamatória Sistémica). Foram avaliados alguns mediadores inflamatórios e a presença de DNA bacteriano no sangue de animais com Parvovirose. Os 31 animais da amostra foram classificados segundo o sistema proposto no que toca à Predisposição, Resposta, e Disfunção orgânica (para o elemento Infeção foi atribuída a todos a mesma classificação). Os dados foram recolhidos a partir de registos clínicos obtidos na UIDI do HEV-FMV-UL e sujeitos a dois conjuntos de critérios para diagnóstico de SRIS. Em 13 animais foi quantificada a concentração de CRP, e em 12 animais a expressão de mRNA de IL-6 e TNF-α, em relação a animais controlo. Foi investigada a presença de DNA bacteriano de E. coli e de Staphylococcus spp. no sangue de 12 animais. As concentrações de CRP medidas no sangue de cães com Parvovirose foram mais elevadas em relação às medidas no sangue de cães do grupo controlo (p

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária O linfoma canino é a neoplasia hematopoiética mais frequente no cão. Pode ter variadas apresentações, sendo a apresentação multicêntrica a mais comum, que se caracteriza por uma linfadenomegália generalizada, muito semelhante ao Linfoma Não-Hodgkin dos humanos. O objetivo deste estudo foi avaliar a expressão da IL-17 no linfoma canino e contribuir para a caracterização imunológica desta doença. Foram utilizados um grupo de animais diagnosticados com linfoma (n=22) no Hospital Escolar da FMV, e dois grupos controlo, dos quais foram colhidos amostras de linfonodo e células mononucleares do sangue periférico, que foram posteriormente submetidas a quantificação, por qRT-PCR, dos níveis de expressão de mRNA do gene da IL-17. Observou-se que a IL-17 estava significativamente diminuída nas células mononucleares do sangue periférico dos animais com linfoma, e que existe uma correlação significativa positiva entre os níveis de IL-17 no linfonodo de animais com linfoma B e a sua sobrevida. O papel da IL-17 no linfoma canino, paralelamente ao que acontece com as outras neoplasias, ainda não está bem definido. Deste modo, os resultados obtidos permitiram a caracterização do estadio imunológico dos animais com linfoma canino abrindo assim portas para novos estudos que contribuam para a compreensão do papel da IL-17 nesta neoplasia. ABSTRACT - IMMUNOLOGICAL CHARACTERIZATION IN CANINE LYMPHOMA: EVALUATION OF THE EXPRESSION OF IL-17 - Canine lymphoma is the most common hematopoietic neoplasia in dogs. It can have multiple presentations, and the multicentric presentation is the most common, which is characterized by generalized lymphadenomegaly, and is very similar to Non-Hodgkin’s Lymphoma that ocorrurs in humans. This study aimed to evaluate the expression of IL-17 in canine lymphoma and contribute to its immunological characterization. One group of animals diagnosed with lymphoma (n=22) and two controls groups were enrolled, and samples of lymph node and periferal blood mononuclear cells were collected, that were subjected to quantification, by qRT-PCR, of the mRNA expression levels of IL-17 gene. Our results showed that the levels of IL-17 were significatly lower in the periferal blood mononuclear cells of animals with lymphoma when compared with controls, and that there was a significative positive correlation between the survival of animals with B-cell lymphoma and the levels of IL-17 in the lymph node. The role of IL-17 in canine lymphoma, like in other neoplasias, is not well defined. These results help characterize the immunological stage of animals with canine lymphoma and open doors to new studies that leed to the compreension of the role of IL-17 in this disease. N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária O vírus da esgana (CDV) e o parvovírus (CPV) são dois vírus responsáveis por elevadas taxas de mortalidade nas populações caninas, que infetam cães não vacinados ou com protocolos vacinais incompletos. As vacinas têm desempenhado um papel fundamental na prevenção destas doenças no entanto, a vacinação não é um procedimento inócuo e deve ser realizado apenas com a frequência necessária para manter os cães imunizados. Por outro lado, são vários os fatores que podem originar falhas na imunização, sendo a neutralização do antigénio vacinal por anticorpos maternos a causa mais comum. Neste estudo foi avaliada a proteção humoral para o CDV e CPV a 13 cachorros durante a primovacinação (Grupo A e Grupo B) e, a 7 cães adultos, não vacinados há pelo menos 3 anos (Grupo C). O grupo A incluiu 5 cachorros com início do protocolo vacinal às 6 semanas e o grupo B contemplou 8 animais que iniciaram a primovacinação entre as 8 e as 12 semanas. De cada animal foram recolhidas três amostras de sangue, coincidentes com as consultas de vacinação, com 3 a 4 semanas de intervalo. A resposta humoral foi avaliada recorrendo a testes rápidos, baseados na técnica de ELISA indireta para deteção de anticorpos, que permitem avaliar de forma rápida, simples e económica a proteção ou suscetibilidade de cada animal. Verificámos que a resposta à vacinação para CDV foi mais precoce em comparação com a resposta para CPV. Relativamente ao CPV, 80% dos animais do grupo A, ainda se encontravam desprotegidos após a administração de duas doses da vacina. Já os animais do grupo B revelaram proteção humoral para CPV após duas administrações vacinais, sendo que quatro animais (50%) ficaram logo protegidos após a primeira dose. Nos cães adultos foi realizada apenas uma colheita de sangue que funcionou como um rastreio serológico para aferir a necessidade de revacinação. Os resultados obtidos sugerem que, durante a primovacinação, a resposta à vacinação é individual e depende sobretudo do título inicial de anticorpos maternos adquirido pelo neonato. A variabilidade encontrada reforça a necessidade da determinação dos níveis de imunidade humoral individuais. Deste modo, os kits de ELISA são uma ferramenta muito vantajosa, pois permitem avaliar a proteção a um custo relativamente reduzido. Estes testes deverão ser utilizados para validar a eficácia vacinal induzida pela primovacinação, auxiliando o médico veterinário a estabelecer protocolos vacinais individuais. ABSTRACT - EVALUATION OF THE HUMORAL IMMUNE RESPONSE INDUCED BY VACCINATION FOR CANINE DISTEMPER AND PARVOVIRUS - Canine distemper virus (CDV) and parvovirus (CPV) are two viruses responsible for high mortality rates in the canine population that infect unvaccinated dogs and dogs with incomplete vaccination protocols. Vaccines continue to play a key role on the prevention of these diseases however vaccination is not an innocuous procedure and must be done only with the required frequency to keep dogs immunized. On the other hand, there are several factors that can lead to immunization failures, being the neutralization of the vaccine antigen by the maternal antibodies the main cause. In this study, the humoral protection for CDV and CPV was evaluated in 13 dogs during primary vaccination (Group A and Group B) and in 7 adult dogs that had not been vaccinated for at least 3 years (Group C). Group A included 5 dogs which started the vaccine protocol at 6 weeks and group B included 8 animals that started primary vaccination at 8 to 12 weeks. Three blood samples were collected from each animal, coincident with the vaccination visits, at 3 to 4 weeks apart. The humoral response was evaluated using rapid tests based on the indirect ELISA technique for antibody detection, which allow a rapid, simple and economical evaluation of the protection or susceptibility of each animal. We found that the response to CDV vaccination was precocious compared to the response to CPV. With regard to CPV, 80% of group A dogs were still unprotected after administration of two doses of the vaccine. In contrast, the dogs of group B showed humoral protection for CPV after two vaccination administrations, with four dogs (50%) being protected immediately after the first dose. In adult dogs, only one blood sample was taken for serological screening to estimate the need for revaccination. The results suggest that during primary vaccination the response to vaccination is individual and mostly depends on the initial titer of maternal antibodies acquired by the neonate. The variability found supports the need to measure individual humoral immunity levels. Thus the ELISA kits are a very helpful tool, because they allow the evaluation of the protection at a relatively reduced cost. These tests should be used to validate the vaccine efficacy induced by primary vaccination, helping the veterinarian to establish individual vaccination protocols. N/A

Os interferões são as proteínas da inflamação mais bem estudadas, encontram-se no mercado dois tipos de interferão: o interferão recombinante humano alfa (reHuIFN-α) e o interferão recombinante felino ómega (reFeIFN-ω). Ambos podem ser usados no tratamento dos sintomas das duas retroviroses felinas, o vírus da imunodeficiência felina (FIV) e o vírus da leucemia felina (FeLV), duas doenças infecto-contagiosas de importante expressão na prática clínica, que afectam fortemente o estado hígido dos animais infectados e que, até ao momento, não tem cura. O reHuIFN-α encontrasse no mercado a um preço acessível, no entanto, a rápida produção de anticorpos levou à criação do reFeIFN-ω, específico para a espécie felina. O reHuIFN-ω já mostrou a sua eficácia, in vitro, contra o FIV, FeLV e coronavírus felino (FCoV), entre outros vírus que afectam estes animais. Com o objectivo de estudar os efeitos deste interferão em gatos naturalmente infectados e que ainda não estejam numa fase terminal da doença, assim como da excreção de vírus concomitantes do tracto digestivo, foram avaliados os seguintes parâmetros: sinais clínicos, hemograma, análises bioquímicas, proteinograma, carga de provírus de FeLV e excreção de FCoV e o vírus da panleucopénia felina (FPV) nas fezes. Foi administrado reFeIFN-ω a 16 gatos (7 FIV, 6 FeLV e 3 co-infetados) alojados num abrigo para gatos em Lisboa; seguiu-se o protocolo licenciado para este produto – 3 ciclos de 5 injecções, 1MU/Kg, SID, SC – foram feitas as colheitas de sangue e fezes nos dias 0, 10, 30 e 65. Houve uma melhoria dos sinais clínicos em 10/16 gatos, uma manutenção em 5/16 gatos e 1/16 gato piorou os seus sinais clínicos. Nos gatos infectados com FeLV 2/6 gatos diminuíram a sua carga de provírus, 1/6 aumentou e os restantes mantiveram, nos gatos co-infetados 1/3 gatos diminuiu e os restastes mantiveram a carga de provírus de FeLV. Apenas se detectou a presença de FPV num gato ao Dia 0, sendo que no Dia 65 não foi detectada a presença de FPV em nenhum animal. A carga de FCoV diminuiu em 7/16. Os resultados do proteinograma demonstram um efeito modelador vantajoso sobre o Sistema Imunitário (SI) e não se verificaram efeitos secundários ao nível do hemograma e parâmetros bioquímicos renais e hepáticos. O reFeIFN-ω mostrou-se vantajoso no controlo dos sinais clínicos provocados pelo FIV e/ou FeLV, assim como no controlo dos vírus concomitantes do tracto digestivo. ABSTRACT Interferon-ω therapeutic in feline imunodeficiency virus and/or feline leukaemia virus infected cats: clinical avaliation, laboraotial analysis and gastro-intestinal concomitant virus excretion - Interferons are the most studied of the inflamatory proteins, there are two types of interferons in the market: human recombinante interferon alfa (reHuIFN-α) and feline recombinante interferon omega (reFeIFN-ω). They are both used in syntomatic treatment of feline imunodefiency virus (FIV) and in feline leukaemia virus (FeLV) infected cats. These viral infections are very common in veterinary practice, inducing severe health debilitation and there is no cure for them. The low price of reHuIFN-α is na advantage, but its repeated use may cause fast antibody stimulation, so reFeIFN-ω, which i scat specific, was created to avoid this problem. reFeIFN-ω showed to be eficiente, in vitro, against FIV, FeLV and feline coronavírus (FCoV) and other feline vírus. The purpose of this study was to evaluate the Interferon ómega efect in natural infected cats, not in a terminal fase, and the concomitante gastro-intestinal excretion virus. In order to do so, clinical signs, complete blood count, biochemistry, serum protein profile, FeLV provirus load, FCoV and feline panleukopenia virus (FPV) excretion were evaluated. reFeIFN-ω was administrated to 16 cats (7 FIV, 6 FeLV and 3 co-infected) living at a Lisbon cat shelter; the licenced protocol was respected – 3 cycle of 5 injection, 1 UM/Kg, SID, SC – blood and faeces samples were collected at 0, 10, 30 and 65 days. Clinical signs improved in 10/16 cats, maintained in 5/16 cats and worsened in 1/16 cats. In FeLV infected cats, FeLV proviral load decreased in 2/6 cats, increased in 1/6 cats and remain stable in the ohter 3 cats; 1/3 co-infected cats decreased its FeLV proviral load, while the other 2/3 remain stable. FPV was detected in one cat at day 0. At day 65 all animals were negative for this virus. FCoV load decreased in 7/16 cats. The proteinograma profile revealed an importante role on the imune system modulation. The biochemistry blood analysis showed no hepatic neather kidney toxicity. reFeIFN-ω therapy seemed to contribute to the decreasing of FIV and FeLV clinical signs and in the concomitante virus control.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária O cancro é uma doença comum à Medicina Veterinária e Humana e é uma das principais causas de morte. Apesar das várias abordagens terapêuticas oncológicas existentes, a sua cura permanece como um desafio. No caso da quimioterapia, alguns dos motivos de insucesso prendem-se com: a toxicidade, a baixa eficácia e o desenvolvimento de resistências aos fármacos, apelando à investigação de novas abordagens terapêuticas que os superem. Os lipossomas, no âmbito da nanomedicina, têm sido investigados como transportadores de fármacos permitindo uma modulação da sua farmacocinética, do direcionamento para tecidos neoplásicos e redução dos efeitos secundários, apresentando, neste contexto, enorme potencial para a terapia oncológica. Deste modo, o presente estudo teve como objetivo o desenvolvimento e otimização de lipossomas para encapsulação de um fármaco citotóxico de elevada potência para imunoterapia. Para tal, foram avaliados os efeitos citotóxicos de sete iHADC – CI-994, panobinostat, SAHA, SBHA, scriptaid, trichostatin A e tubacina – tendo sido selecionado o panobinostat, com maior efeito citotóxico, para posterior encapsulação em lipossomas. Os efeitos citotóxicos do panobinostat lipossomal foram avaliados em linhas celulares de linfoma canino – CLBL-1 e 17-71 – e de glioblastoma humano – U87 – e comparados com os efeitos da doxorrubicina lipossomal. Foram ainda avaliados lipossomas associados a folatos como forma de direcionamento específico. Foram realizados três ensaios independentes para cada fármaco e em replicado para cada concentração. A viabilidade das células tratadas foi avaliada através do reagente alamarBlue® e os valores de IC50 calculados através de uma equação logarítmica no programa GraphPad Prism 6. Para análise estatística foi realizada uma ANOVA e teste de Tukey, através do programa R. Os resultados demonstraram atividade citotóxica dos iHDAC em CLBL-1 e 17-71, sendo capazes de induzir a acetilação de H3. Observou-se um maior efeito de citotoxicidade do panobinostat (IC50=20nM) que o da doxorrubicina (IC50=1050nM) com um valor de p0,05. Em U87, o panobinostat revelou ter também maior efeito citotóxico que a doxorrubicina. Os resultados obtidos sugerem que o panobinostat tem um grande efeito citotóxico em glioblastoma humano e linfoma canino. In vitro, o seu efeito citotóxico quando encapsulado em lipossomas sugeriu ser semelhante à formulação livre. Serão necessários estudos clínicos e translacionais para determinar a utilidade clínica e segurança do panobinostat lipossomal. No futuro, poderão ser acoplados anticorpos aos lipossomas para desenvolver um sistema de transporte de fármacos com grande potencial para Oncologia. ABSTRACT - DEVELOPMENT AND OPTIMIZATION OF LIPOSOMES ENCAPSULATED WITH HIGH POWER CYTOTOXICS FOR IMMUNOTHERAPY - Cancer is a disease that occurs in both Veterinary and Human Medicine, and is one of the leading causes of death. Despite all the existing oncological therapeutic approaches, treatment remains challenging. Some reasons for chemotherapy failure rely on: drug toxicity, low therapeutic efficacy and chemotherapeutic resistance, appealing to the search of new therapeutic approaches to overcome them. In the field of nanomedicine, liposomes have been investigated as nanocarriers of cytotoxic drugs allowing modulation of their pharmacokinetics, target to neoplastic tissues and reduction of side effects. In this context, this drug delivery system has great potential to be applied in oncological therapy. Therefore, the aim of this study is the development and optimization of liposomes encapsulated with high power cytotoxics for immunotherapy. For this purpose, the cytotoxic effects of seven HDACi were evaluated – CI-994, panobinostat, SAHA, SBHA, scriptaid, trichostatin A and tubacin. Panobinostat, having shown the greatest cytotoxic effect, was selected to be further encapsulated in liposomes. Its cytotoxic effects were assessed in two canine lymphoma cell-lines – CLBL-1 and 17-71 – and a human glioblastoma cell-line – U87 – and compared to liposomal doxorubicin effect. The cytotoxic activity of liposomal panobinostat targeted to folate receptors was also assessed. Three independent experiments were carried out in different days to each drug and two replicate wells were used for each drug concentration. Viability of treated cells was measured using the alamarBlue® reagent. Best-fit IC50 values were calculated using the log (inhibitor) vs response (variable slope) function on GraphPad Prism 6. The data was statically analyzed using ANOVA and Tukey test in R version 3.5.0. (2018). Results demonstrated the cytotoxic effects of HDACi in CLBL-1 and 17-71, inducing H3 acetilation. Panobinostat (IC50=20nM) demonstrated greater cytotoxic effect comparing to doxorubicin (IC50=1050nM) with p0,05. In U87 cell-line, panobinostat also showed greater cytotoxic effect than doxorubicin. The obtained results suggest panobinostat as a potent cytotoxic drug in human glioblastoma and canine lymphoma. In vitro, liposomal panobinostat cytotoxic effect revealed to be similar to the free drug’s effect. Translational and clinical studies will determine the clinical utility and safety of liposomal panobinostat. In the future, we hope to couple these novel nanoparticules to antibodies for the development of a potent drug delivery system to oncology. N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária Human immunodeficiency virus (HIV) is the causative agent of acquired immunodeficiency syndrome (AIDS), a condition in which progressive failure of the immune system allows life-threatening opportunistic infections to succeed. One of the most important factors in the worldwide spread of HIV is its enormous genetic variability and rapid evolution. The revealing of all stages of HIV replication cycle led to the identification of potential therapeutic targets in order to decrease the replicative process. However, the acquisition and transmission of HIV drug resistance still poses a major risk to the success of antiretroviral therapy. Thus, new targets and more promising strategies must emerge quickly to improve treatment options for patients who are infected with viruses already resistant to currently available antiretrovirals. The inhibition of HIV entry into the host cell is an extremely promising strategy, and glycoprotein gp120 plays a central role in this process. In this context, the aim of this project consisted in the development and selection, by Phage Display, of specific single-domain antibodies (sdAbs) against the surface HIV gp120 glycoprotein. To achieve this goal, rabbit antibody immunized libraries were generated and a pool of VH and VL sdAbs were selected by Phage Display. This approach allowed the construction of highly diverse sdAbs libraries and a posterior specific selection of VH and VL sdAbs with high binding activity to gp120. With the results obtained in this project, the potential of rabbit derived sdAbs as therapeutic molecules were once again demonstrated. At this stage the results are promising and further studies will be implemented in the future, to characterize the selected antibodies and to obtain more data regarding the binding activity to the target molecule and their potential to neutralize HIV infection. RESUMO - Desenvolvimento de anticorpos recombinantes de pequeno domínio contra a glicoproteína gp120 do VIH-1 e sua seleção por Phage Display - O vírus da imunodeficiência humana (VIH) é o agente causador da síndrome da imunodeficiência adquirida, uma condição na qual a falha progressiva do sistema imunitário permite que infeções oportunistas, potencialmente letais, se instalem. Um dos fatores mais importantes na disseminação mundial do VIH é a sua enorme variabilidade genética e rápida evolução. O conhecimento de todas as etapas do ciclo replicativo do VIH levou à identificação de possíveis alvos terapêuticos a fim de diminuir o processo replicativo. No entanto, a aquisição e transmissão de resistência aos fármacos contra o VIH ainda representa um grande risco para o sucesso da terapia antirretroviral. Assim, novos alvos e estratégias mais promissoras devem emergir rapidamente para melhorar as opções de tratamento dos pacientes infetados com vírus resistentes aos antirretrovirais atualmente disponíveis. A inibição do processo de entrada do VIH é uma estratégia extremamente promissora, e a glicoproteína gp120 desempenha um papel central neste processo. Neste contexto, o objetivo deste projeto consistiu no desenvolvimento e seleção, por Phage Display, de anticorpos específicos contra a gp120. Para alcançar este objetivo, foram criadas bibliotecas imunizadas de anticorpos de coelho e foi selecionado um conjunto de anticorpos de domínio pequeno (anticorpos no formato VH e VL) por Phage Display. Esta abordagem permitiu a construção de bibliotecas altamente diversificadas e uma posterior seleção específica de anticorpos com elevada afinidade de ligação à gp120. Com os resultados obtidos neste projeto, o potencial, como moléculas terapêuticas, dos anticorpos de pequeno domínio derivados do coelho foi novamente demonstrado. Nesta fase, os resultados são promissores e mais estudos serão implementados no futuro de modo a caracterizar os anticorpos selecionados e obter mais dados sobre a afinidade de ligação à molécula alvo e o seu potencial de neutralização da infeção pelo VIH. N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária O linfoma canino constitui uma das neoplasias malignas mais frequentemente diagnosticada em cães, tendo normalmente origem em células B. Atualmente utiliza-se a quimioterapia como forma de tratamento desta patologia, mas a resistência aos fármacos anti-neoplásicos e a toxicidade destes, revela a necessidade de desenvolvimento de outras formas de tratamento, como a imunoterapia. Com o objetivo de validar alvos potenciais para imunoterapia do linfoma B canino, foi avaliada, através de Western Blot, a expressão proteica dos recetores CD20 e de CD19 de células primárias de linfoma canino. Para tal, foram utilizadas amostras de linfonodos de 20 animais com linfoma recolhidas no Hospital Escolar da FMV-ULisboa, e de 2 animais de controlo, sem linfoma. Durante a preparação das amostras, as células foram lisadas com o reagente RIPA para extração da proteína total, que foi posteriormente quantificada através do método de Bradford. Os resultados obtidos demostraram uma elevada expressão de CD20 em células primárias de linfoma B canino do biobanco e em CLBL-1 (linha estável de linfoma canino). Por outro lado, a avaliação da expressão do recetor CD19 não foi conclusiva. Foi também utilizada com sucesso a avaliação de potenciais alvos para imunoterapia através da técnica de Western Blot e deteção com um soro policlonal derivado de coelhos imunizados com células primárias de linfoma B canino. Estes resultados confirmam que tal como no Homem, no cão o CD20 é expresso particularmente em situações de linfoma B, validando este marcador como alvo potencial para imunoterapia. Ademais, foi igualmente possível demonstrar a identificação de outras proteínas no extrato proteico das células dos casos clínicos com o soro policlonal do coelho, podendo estas corresponder a recetores potenciais que poderiam ser usados como alvos terapêuticos ou como biomarcador / diagnóstico. ABSTRACT - ANALYSIS OF SURFACE RECEPTORS IN LYMPHOCYTES OF CANINE PATIENTS WITH B CELL LYMPHOMA - Canine lymphoma is one of the most frequently diagnosed malignancies in dogs, usually originating from B cells. Chemotherapy is currently used as a treatment for this pathology, but the resistance to anti-neoplastic agents and the toxicity produced by these drugs, reveals the need to develop other forms of treatment, such as immunotherapy. In order to validate potential targets for canine B cell lymphoma immunotherapy, the proteic expression of CD20 and CD19 receptors of primary canine lymphoma cells was evaluated through Western Blot. For this purpose, lymph node samples from 20 animals with lymphoma collected at FMV-ULisboa School Hospital and 2 from control animals, without lymphoma, were used. During sample preparation, the cells were lysed with the RIPA reagent to extract the total protein, which was further quantified by the Bradford method. The results obtained demonstrated a high expression of CD20 in primary canine B-cell lymphoma cells from the biobank and in CLBL-1 (stable line of canine lymphoma). On the other hand, the evaluation of CD19 receptor expression was not conclusive. The evaluation of potential targets for immunotherapy using the Western blot technique and detection with a polyclonal serum derived from rabbits immunized with primary canine B lymphoma cells was also successfully used. These results confirm that as in humans, in the dog the CD20 is expressed particularly in situations of B cell lymphoma, validating this marker as a potential target for immunotherapy. In addition, it was also possible to demonstrate the identification of other proteins in the protein extract of the cells of the clinical cases with the rabbit polyclonal serum, which could correspond to potential receptors that could be used as therapeutic targets or as a biomarker / diagnosis. N/A

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária O Hospital Escolar Veterinário (HEV) da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade de Lisboa inaugurou em outubro de 2013 uma Unidade de Isolamento de Doenças Infeciosas (UIDI) destinada ao internamento de animais com doença infeciosa confirmada ou com suspeita clínica de doença infeciosa, a aguardar diagnóstico. O presente estudo tem três objetivos: identificar as principais doenças infeciosas observadas na UIDI nos seus primeiros 28 meses de atividade; investigar os fatores determinantes de doença envolvidos nas ocorrências de doenças infeciosas registadas na UIDI no período de estudo; propor medidas complementares para melhorar a qualidade da triagem dos pacientes no Hospital Escolar Veterinário, dos registos clínicos e da prestação de cuidados de saúde e bem-estar animal dos animais hospitalizados na UIDI. Para tal, foi caracterizada a população hospitalizada, bem como o funcionamento da UIDI e as rotinas do HEV quanto à identificação e internamento de animais suspeitos. Foram hospitalizados, no período em estudo, 229 animais, 113 (49,3%) felídeos e 116 (50,7%) canídeos. Para a caracterização da população usaram-se os parâmetros género, castração, idade, raça, origem, estilo de vida, distribuição geográfica, vacinação, casos referenciados, duração da hospitalização, desfecho clínico e seguimento. As principais doenças identificadas nos felídeos foram FeLV (26,5%), FIV (18,6%), panleucopénia (14,2%), PIF (8,8%) e Complexo de Doenças do Trato Respiratório Superior Felino (6,2%). Nos canídeos a gastroenterite (55,2%) foi a principal causa de internamento, destacando-se a parvovirose (24,1%), seguida da leptospirose (9,5%) e da esgana (6,0%). Em relação ao desfecho, dos gatos, 78 (69,0%) tiveram alta, 23 (20,4%) foram eutanasiados e 12 (10,6%) morreram. Dos cães, 81 (69,8%) tiveram alta, 20 (17,2%) morreram e 15 (12,9%) foram eutanasiados. Foi ainda possível identificar alguns fatores de risco e de proteção de ocorrência destas doenças infeciosas. Destaca-se a ausência de vacinação como fator de risco para a ocorrência de panleucopénia felina e da parvovirose canina (p

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A conjuntivite alérgica canina (CAc) é uma doença cuja manifestação clínica ocorre nas pálpebras, na conjuntiva e/ou na córnea. Caracteriza-se por reações de hipersensibilidade do tipo I e integra frequentemente a sintomatologia da dermatite atópica canina (DAc). Através do estudo realizado no âmbito da presente dissertação de mestrado, pretende-se contribuir para a caracterização da resposta imunitária da CAc. Nesse sentido, um grupo controlo formado por animais saudáveis (n=10) e um grupo de animais atópicos com conjuntivite alérgica (CA) (n=10) integraram a presente experiência. Ambos foram submetidos a um exame dermatológico e oftalmológico completos, em que se procedeu, apenas para o grupo atópico, à classificação da gravidade das lesões com o Canine Atopic Dermatitis Extent and Severity Index – fourth version (CADESI-4), bem como à avaliação quantitativa dos sinais clínicos de CAc (corrimento ocular, epífora, hiperémia conjuntival, prurido, quemose e queratite concomitante) através da atribuição de um valor entre 0 (ausente) e 3 (grave). Subsequentemente, após a aplicação tópica ocular de anestésico, uma amostra de conjuntiva palpebral medindo cerca de 2x2 mm foi colhida e submetida a quantificação, por reação em cadeia da polimerase quantitativa em tempo real (qRT-PCR), dos níveis de expressão de ácido ribonucleico mensageiro (mRNA) do gene da interleucina (IL) -10. A análise estatística foi realizada recorrendo ao teste Mann-Whitney-Wilcoxon e ao teste de correlação de Spearman, sendo que os resultados a seguir apresentados surgem sob a forma de média±desvio-padrão. O score de CADESI-4 nos cães atópicos foi de 22,1±15,72. O score de CA do olho esquerdo foi de 8,9±15,72 e no olho direito 9,1±2,51. A média do score de CA de ambos os olhos foi 9,0±2,30. Os níveis de expressão do gene da IL-10 para o grupo atópico e controlo foram, respetivamente, 0,005±0,0029 e 0,004±0,0024. Verificou-se existir um coeficiente de correlação positivo entre os valores de CADESI-4 e os níveis de expressão do gene da IL-10 (p=0,25), bem como um coeficiente de correlação negativo entre a média do score de CA de ambos os olhos e a expressão do mesmo gene (p=0,35). Desta forma, concluímos que aparentemente o grupo atópico apresenta maiores níveis de expressão do gene da IL-10, o que poderá ser útil para o estudo da fisiopatologia e tratamento de atopia canina e respetiva CA. É necessária a realização de mais estudos para confirmar esta hipótese. ABSTRACT - INTERLEUKIN-10 GENE EXPRESSION IN CANINE ALLERGIC CONJUNCTIVITIS - Canine allergic conjunctivitis (cAC) is a disease whose clinical manifestation occurs in the eyelids, in the conjunctiva and/or in the cornea. It is characterized by type I hypersensitivity reactions and is often included in the symptoms of canine atopic dermatitis (cAD). Through the study under this master thesis we aim to contribute to the characterization of cAC immune response. Therefore, a control group consisting of healthy animals (n=10) and a group of atopic animals with allergic conjunctivitis (AC) (n=10) were enrolled in the present experiment. Both underwent complete dermatological and ophthalmic examinations, which included, only for the atopic group, Canine Atopic Dermatitis Extent and Severity Index – fourth version (CADESI-4) classification of the severity of injuries, as well as the quantitative evaluation of clinical signs of AC (ocular discharge, epiphora, conjunctival hyperemia, pruritus, chemosis and concurrent keratitis) by rating them from 0 (absent) to 3 (severe). Subsequently, after ocular topical anesthesia, a sample of palpebral conjunctiva measuring approximately 2x2 mm was collected and subjected to quantification, by quantitative real-time polymerase chain reaction (qRT-PCR), of the messenger ribonucleic acid (mRNA) expression levels of interleukin (IL) -10 gene. Statistical analysis was performed using the Mann-Whitney-Wilcoxon test and the Spearman correlation test, results being presented as mean±standard deviation. CADESI-4 score for the atopic group was 22,1±15,72. AC score in the left eye was 8,9±15,72 and in the right eye 9,1±2,51. The average AC score for both eyes corresponded to 9,0±2,30. IL-10 gene expression levels for the atopic and control group were, respectively, 0,005±0,0029 and 0,004±0,0024. There was a positive correlation coefficient between CADESI-4 values and IL-10 gene expression levels (p=0,25), as well as a negative correlation coefficient between the average of the AC score for both eyes and the expression of the same gene (p=0,35). Thus, we concluded that apparently the atopic group has higher IL-10 gene expression levels which may be useful for the study of the physiopathology and treatment of canine atopy and its respective AC. Further studies are required to confirm this hypothesis.

Dissertação de Mestrado Integrado em Medicina Veterinária A esgana canina é causada por um morbilivírus (CDV), sendo uma das doenças infeciosas mais graves do cão doméstico. O decurso da doença é rápido e a taxa de sobrevivência é baixa se o animal não for hospitalizado e sujeito a cuidados veterinários. Um programa de vacinação adequado pode prevenir a infeção a nível individual e controlar a doença numa população. Neste estudo foram investigados 49 casos de esgana canina registados na Unidade de Isolamento de Doenças Infeciosas do Hospital Escolar Veterinário da Faculdade de Medicina Veterinária. Foram analisadas as seguintes variáveis: localização geográfica, sexo, idade, raça, sinais clínicos, duração do internamento, estado vacinal, taxa de sobrevivência, frequência mensal da doença, métodos de diagnóstico laboratorial e análises clínicas. O principal objetivo do estudo foi caracterizar a apresentação clínica dos casos de esgana canina registados durante o foco epidémico ocorrido em 2015 na Zona Metropolitana de Lisboa, e que se manteve ativo até 2018. Não foram evidenciadas diferenças estatisticamente significativas entre as variáveis analisadas e a confirmação de doença. O período de dezembro a março foi quando se diagnosticaram mais casos. Os sinais clínicos mais frequentes foram mioclonias (42,9%), prostração (38,8%), corrimento ocular-nasal (34,7%), sintomas gastrointestinais como vómito e diarreia (24,5%) e tosse (22,4%). A duração média de internamento foi de 4,6 dias e a taxa de sobrevivência de 55,1%. As análises clínicas confirmaram alterações a nível do hematócrito (44,8%), neutrofilia (31,0%), neutropénia (3,4%), linfocitose (6,9%), linfopénia (20,7%), monocitose (27,6%), monocitopénia (10,3%), eosinopénia (55,2%) e eosinofilia (3,4%). Apenas 16,2% (6/37) dos cães infetados, tinham um plano de vacinação completo contra o CDV, o que reforça a necessidade de melhorar a comunicação com os tutores dos cães sobre a importância do cumprimento rigoroso do programa de vacinação. ABSTRACT - Characterization of clinical signs of canine distemper during the outbreak of 2015-2018 in Lisbon Metropolitan Area, Portugal - Canine distemper is caused by a morbilivirus (CDV), being one of the most severe infectious diseases of the domestic dog. The course of the disease is fast and the survival rate is low, especially if the dog is not hospitalized and put under veterinary care. A correct vaccination plan can prevent infection at individual level and control the disease in a population. In this study, 49 cases of canine distemper were investigated at the Infectious Diseases Isolation Unit of the Veterinary Teaching Hospital of the Lisbon Veterinary Faculty. The following variables were analyzed: geographical location, sex, age, breed, clinical signs, days of hospitalization, vaccination status, survival rate, monthly disease frequency, laboratory diagnosis method and clinical analysis. The main objective of the study was to characterize the clinical presentation of canine distemper cases, recorded during the outbreak occurred in 2015 in the Lisbon Metropolitan Area, which remained active until 2018. No statistically significant differences were found. The majority of the cases were diagnosed during the period from December to March. The most frequent clinical signs were myoclonus (42.9%), prostration (38.8%), oculonasal discharge (34.7%), gastrointestinal symptoms like diarrhea and vomiting (24.5%) and cough (22.4%). The average days of hospitalization was 4.57 days and the survival rate was 55.1%. Medical tests proved alterations of the hematocrit (44.8%), neutrophilia (31.0%), neutropenia (3.4%), lymphocytosis (6.9%), lymphopenia (20.7%), monocytosis (27.6%), monocytopenia (10.3%), eosinophilia (3.4%) and eosinopenia (55.2%). Only 17.9% of the infected dogs had a complete CDV vaccination plan, which reinforces the need to improve the communication with dog owners about the importance of strict compliance of vaccination schedules. N/A