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Introduction: The dysregulation of the hypothalamic-pituitary-adrenal (HPA) axis has a key role in drug addiction susceptibility. In addition to the well-known relationship between cortisol and the HPA axis, other molecules are involved with stress response and could modify the HPA activation, such as the neuropeptide Y (NPY), which has anxiolytic proprieties. There are few studies evaluating the effect of NPY levels on addiction, especially in crack cocaine dependence. Objective: To evaluate NPY in crack users during early withdrawal to determine its relationship with drug use and cortisol levels. Methods: We analyzed 25 male inpatient crack users. Serum NPY levels were measured at admission and discharge (mean of 24 days). Morning salivary cortisol was measured at admission. Results: Serum NPY levels at admission and discharge were very similar. Lower NPY levels at discharge were associated with higher lifetime crack use. Also, a negative correlation was found between morning cortisol and delta NPY (NPY discharge – NPY admission). Conclusion: These preliminary findings indicate that crack use influences the modulation of NPY levels and modifies stress response. The NPY pathway may play an important role in the pathophysiology of crack addiction, and the anxiolytic effect of NPY may be impaired in crack users. Future studies should consider NPY as a measurable indicator of the biological state in addiction.

Os astrócitos são células gliais do sistema nervoso central (SNC) que, entre diversas funções, tem um importante papel na manutenção do ambiente extracelular, removendo neurotransmissores e íons os quais podem ser tóxicos em altas concentrações. Estas células estão envolvidas em diversas doenças neurodegenerativas e representam um importante alvo de estudo para o desenvolvimento de estratégias terapêuticas. A técnica de cultura primária (CP) de astrócitos de ratos é amplamente utilizada como modelo para o estudo de características mecânicas e bioquímicas dessa célula em um sistema isolado. Alternativamente, astrócitos imortalizados por transfecção (AI) e a linhagem C6 de rato (C6) são usados como modelo astrocítico, uma vez que são células mais homogêneas, além de serem de fácil e rápida manipulação. No entanto, apesar de resultados divergentes serem encontrados na literatura, existe uma carência de estudos comparativos entre estes três modelos experimentais. A escolha de um modelo adequado para o estudo destas células nos permitiria estudar de forma mais precisa as funções extracelulares de proteínas como a S100B. Essa proteína pode ser liberada ou secretada principalmente por astrócitos no SNC e, apesar de possuir efeitos tróficos, exerce funções tóxicas, quando em altas concentrações no meio extracelular. Apesar disso, pouco se sabe sobre o processo de remoção da S100B extracelular. Em vista disso, o objetivo desta tese foi comparar e caracterizar funcionalmente a CP, AI e C6 no que diz respeito a diferenças morfológicas, marcadores proteicos e funções clássicas astrocíticas, bem como estudar a capacidade destas células de internalizar a proteína S100B, avaliando-se o mecanismo deste processo. Além disso, foi realizada a padronização de um ensaio colorimétrico utilizando a atividade glutamil-transferase da glutamina sintetase (GS), visto a carência deste ensaio em cultura de astrócitos e em diferentes estruturas cerebrais. Esta enzima é considerada um marcador astrocítico e sua disfunção pode comprometer o ciclo glutamina-glutamato, processo relacionado ao quadro de excitotoxicidade glutamatérgica, observado em doenças neurodegenerativas. O ensaio mostrou-se preciso, sensível, linear, específico e com alta aplicabilidade no SNC e nos modelos de cultura celular. Nossos resultados mostraram que as duas linhagens celulares (AI e C6) foram positivas para proteínas características de astrócitos, bem como funcionais no metabolismo glutamatérgico e energético. No entanto, estes parâmetros mostraram-se reduzidos em estado basal em comparação com a CP. Frente a estímulos específicos, os AI não se mostraram como um modelo reprodutível das funções astrocíticas clássicas, ao contrário da linhagem C6, a qual apresentou resposta similar aos astrócitos de CP. De forma geral a linhagem C6 representou um modelo válido para estudo das características astrocíticas estudadas, porém sempre com valores basais reduzidos quando comparados com a CP que, em nossa avaliação, representou um melhor modelo para o estudo da internalização da proteína S100B. Estas células foram capazes de endocitar a S100B extracelular por um mecanismo dependente de RAGE e dinamina. Uma vez internalizada, a S100B seguiu pela via endocítica, colocalizando com importantes marcadores, como Dextran e Lysotracker. As vesículas de S100B mostraram um aumento de direcionalidade ao longo do tempo de incubação, afetado pela variação de cálcio intracelular. Estes dados mostram a importância da escolha de um modelo in vitro adequado de cultura de astrócitos, bem como evidenciam o importante papel destas células na remoção de concentrações tóxicas da proteína S100B do meio extracelular, auxiliando na compreensão dos mecanismos de sinalização desta proteína. Astrocytes are glial cells that participate in a variety of function of central nervous system (CNS) such as the maintenance of the extracellular environment, removing toxic concentration of ions and neurotransmitters. These cells are involved in several neurodegenerative diseases and are important targets for the development of therapeutic strategies. Astrocyte primary culture (PC) is a potent instrument to study these cells in an isolated system, allowing the elucidation of mechanistic features specific for this type of cell. An alternative to this model is the use of cell lines, such as immortalized astrocytes (IA) or C6 glioma cells (C6). These linages have the advantage to present more homogeneous features, are easily, faster and lower cost to manipulate. Despite these facilities, cell lines present highly proliferative features and some different characteristics in comparison to PC, which put into question the validity of them as an astrocytic model. The selection of a suitable model to the study of astrocytes would allow us to evaluate protein extracellular effects, such as S100B with greater reliability. This protein is released and secreted mainly by astrocytes in the CNS, exerting trophic and toxic effect in a RAGE dependent manner. S100B toxic effects are shown in high extracellular concentrations, although the clearance of this protein from the extracellular space is poorly understood. In view of this, the goal of this research was to show a comparative analysis of PC, IA and C6 regarding morphological features, protein profile and classical astrocytic functions. Furthermore, we evaluated the mechanism of S100B internalization, characterization of internalized vesicles and intracellular dynamics in astrocytes. In addition, the standardization of a colorimetric assay to measure the glutamyl-transferase activity of glutamine synthetase (GS) was performed, considering the lack of this study in culture of astrocytes and different brain structures. This enzyme is considered an astrocytic marker and any dysfunction may compromise the glutamine-glutamate cycle, which is observed in many neurodegenerative diseases. The assay was accurate, sensitive, linear, specific and with high applicability in the CNS. Our results showed that the two cell lines (IA and C6) were positive for characteristic proteins of astrocytes, although expressing less quantities then PC. Similarly, the glutamatergic and energetic metabolism and cellular communication by gap junction also showed to be reduced in lineages cells. IA did not reveal a reproducible model of classic astrocytic functions, in opposite to C6 cells that presented a similar response to PC when submitted to the same stimulus. Nevertheless, PC showed pronounced astrocytic characteristics, representing the best model for the study of S100B protein internalization. The results in this study revealed that cultured astrocytes efficiently remove fluorescently labeled extracellular S100B in a time-dependent manner by vesicle endocytosis. The internalization was RAGE and dynamine dependent. In time, vesicles capturing S100B exhibit directional mobility, meaning that vesicles get functionally attached to the cytoskeleton. Moreover, the mobility of vesicles capturing S100B was affected by changes in [Ca2+]. These data support to the understanding of the mechanism of extracellular signaling of S100B protein, as well as the role of astrocytes in this regulation.

A hiperamonemia é observada tanto em doenças hepáticas quanto em erros inatos do metabolismo. A amônia em altas concentrações atravessa a barreira hematoencefálica e é tida como uma das principais causas para o desenvolvimento das alterações neuropsiquiátricas observadas na Encefalopatia Hepática (HE). Os prejuízos moleculares e fisiológicos causados por este íon são observados principalmente nas células astrocíticas às quais apresentam alterações na atividade de uma série de proteínas e enzimas clássicas de sua função. Entre elas destaca-se a proteína S100B, principalmente expressa e secretada por estas células e muito usada como marcadora de dano cerebral. Um aumento nas concentrações de S100B no soro tem sido observado em pacientes e modelos animais com HE, porém pouco foi visto sobre a indução na secreção da S100B provocado por altas concentrações de amônia no cérebro. Desta forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar a secreção desta proteína em uma situação de hiperamonemia ex vivo, em fatias hipocampais e corticais, assim como in vivo em ratos hiperamonêmicos por indução com urease. Além disso, foi realizado a análise de outras funções astrocíticas, ainda controversas na literatura, e pouco analisadas na região hipocampal. A exposição à amônia induziu uma redução no conteúdo extracelular de S100B em fatias de hipocampo, porém não induziu alteração nas fatias de córtex cerebral. No entanto, um aumento na concentração de S100B foi observado no líquor, sem alteração no soro dos ratos com hiperamonemia. O hipocampo se mostrou uma região altamente susceptível aos efeitos da amônia, com redução na captação de glutamato, no conteúdo de GSH e sem alteração na atividade da glutamina sintetase. Além disso, o conteúdo de GFAP está aumentado nos ratos hiperamonêmicos evidenciando uma astrogliose na região hipocampal, o que pode estar contribuindo para patogênese de HE. Ammonia serum concentration is commonly raised in liver diseases and in inborn errors of urea cycle. High ammonia levels cross the blood brain barrier and is considered one of the main causes for the development of Hepatic Encephalopathy (HE), a neuropsychiatric disease. The molecular and physiological damages are observed mainly in astrocyte cells which present alterations in the activity of a number of proteins and enzymes of their classic function. Among these, stands out the S100B protein, mainly expressed and secreted by these cells and used extensively as a marker of cerebral damage. An increase in S100B serum has been observed in animal models and patients with HE. However, it is not known if ammonia can directly induce S100B secretion in the brain. In this study, we evaluated the secretion of this protein in hyperammonemia condition ex vivo, in hippocampal and cortical slices, and in vivo, in urease treated rats. We also analyzed other astrocyte functions, which are still controversial in the literature and little examined in the hippocampus. We found a reduction in the extracellular S100B content in hippocampal slices exposed to ammonia, but no change was observed in cortical slices. However, an increase in cerebrospinal fluid (CSF) S100B level was found, with no change in serum level of this protein in hyperammonemic rats. The hippocampus revealed a very susceptible area to the ammonia effects, with a reduction in glutamate uptake as in glutathione (GSH) content and no change in glutamine synthetase activity. Moreover, GFAP content was increased in hippocampus of hyperammonemic rats indicating an astrogliosis, which may contribute to pathogenesis of HE.

Background: Inflammatory responses in brain are primarily mediated by microglia, but growing evidence suggests a crucial importance of astrocytes. S100B, a calcium-binding protein secreted by astrocytes, has properties of a neurotrophic or an inflammatory cytokine. However, it is not known whether primary signals occurring during induction of an inflammatory response (e.g. lipopolysaccharide, LPS) directly modulate S100B. Methods: In this work, we evaluated whether S100B levels in cerebrospinal fluid (CSF) and serum of Wistar rats are affected by LPS administered by intraperitoneal (IP) or intracerebroventricular (ICV) injection, as well as whether primary astrocyte cultures respond directly to lipopolysaccharide. Results: Our data suggest that S100B secretion in brain tissue is stimulated rapidly and persistently (for at least 24 h) by ICV LPS administration. This increase in CSF S100B was transient when LPS was IP administered. In contrast to these S100B results, we observed an increase in in TNFa levels in serum, but not in CSF, after IP administration of LPS. In isolated astrocytes and in acute hippocampal slices, we observed a direct stimulation of S100B secretion by LPS at a concentration of 10 μg/mL. An involvement of TLR4 was confirmed by use of specific inhibitors. However, lower levels of LPS in astrocyte cultures were able to induce a decrease in S100B secretion after 24 h, without significant change in intracellular content of S100B. In addition, after 24 h exposure to LPS, we observed a decrease in astrocytic glutathione and an increase in astrocytic glial fibrillary acidic protein. Conclusions: Together, these data contribute to the understanding of the effects of LPS on astrocytes, particularly on S100B secretion, and help us to interpret cerebrospinal fluid and serum changes for this protein in neuroinflammatory diseases. Moreover, non-brain S100B-expressing tissues may be differentially regulated, since LPS administration did not lead to increased serum levels of S100B.

Introdução: Transtornos psiquiátricos e sofrimento emocional são altamente prevalentes em hospital geral e pouco reconhecidos pelas equipes clínicas e assistenciais. A identificação precoce de prováveis casos psiquiátricos, através de ferramentas de rastreamento, e a oportunidade de tratamento dos mesmos são fundamentais para melhores desfechos em saúde. Objetivo: O objetivo deste estudo é o desenvolvimento de um instrumento de screening de prováveis casos psiquiátricos no hospital geral, para uso por profissionais de saúde, em população hospitalar brasileira pública e privada, para fins de identificação precoce de possíveis casos psiquiátricos no contexto de admissão em hospital geral. Métodos: Busca eletrônica de artigos sobre o tema nas bases de dados Pubmed, Scielo e Google Scholar. Foi realizada revisão narrativa de ferramentas existentes para detecção de casos psiquiátricos e, com base no conteúdo delas, desenvolveu-se novo instrumento de rastreio adaptado ao contexto hospitalar. Por fim foram realizadas entrevistas de avaliação crítica qualitativa da aplicabilidade do produto, tanto por experts da área de consultoria psiquiátrica, como por profissionais de enfermagem hospitalar. Resultados: A busca e seleção dos artigos resultou em 5 questionários validados que compuseram a base de conteúdo para a elaboração do instrumento almejado, denominado Screening de Saúde Mental em Hospital Geral (SSMHG). O produto desenvolvido atingiu, de acordo com as avaliações dos juízes, 100% dos objetivos propostos, sendo avaliado como um instrumento de rastreio claro, prático, relevante e utilizável. Na sequência das entrevistas, realizou-se também adequação do instrumento para versão final. Espera-se que o SSMHG possa se comprovar futuramente como um instrumento capaz de detectar precocemente prováveis casos psiquiátricos. Para tanto, se faz necessária a continuidade desta pesquisa em direção a uma validação quantitativa dele no que se refere a sua validade e confiabilidade. Introduction: Psychiatric disorders and emotional distress are highly prevalent in general hospital and under recognized by clinical and care teams. The early identification of probable psychiatric cases and the opportunity to treat them are essential for better health outcomes. Objective: The aim of this study is to develop a screening tool for probable psychiatric cases in general hospital, for use by health professionals in a public and private Brazilian hospital population, for the purpose of early identification of probable psychiatric cases in the context of hospital general admission. Methods: Electronic search for articles on the subject in Pubmed, Scielo and Google Scholar databases. A narrative review of existing tools for detecting psychiatric cases was carried out and, based on their content, a new screening instrument adapted to the hospital context was developed. Finally, qualitative critical evaluation interviews of the product's applicability were carried out, both by experts in the psychiatric consulting area and by hospital nursing professionals. Results: The search and selection of articles resulted in 5 validated questionnaires that made up the content base for the development of the desired instrument, called Screening for Mental Health in a General Hospital (SSMHG). The developed product reached, according to the judges' evaluations, 100% of the proposed objectives, being evaluated as a clear, practical, relevant and usable screening instrument. Following the interviews, the instrument was also adapted for the final version. It is hoped that the SSMHG can prove itself in the future as an instrument capable of early detection of probable psychiatric cases. Therefore, it is necessary to continue this research towards a quantitative validation of its validity and reliability.

O suicídio é uma questão global de saúde pública. Apesar do risco de suicídio nos hospitais gerais ser três vezes maior do que na população em geral, treinamentos para os profissionais de saúde que trabalham neste setor são bastante raros, prejudicando a identificação, abordagem e adequado encaminhamento das pessoas em risco. Dessa forma, este trabalho teve como objetivo desenvolver um curso básico de prevenção do suicídio em hospital geral, na modalidade EaD e direcionado aos profissionais de saúde que trabalham nessas instituições. Foi realizada uma pesquisa bibliográfica narrativa. O conteúdo foi dividido em 3 módulos - 1) suicídio no mundo, no Brasil e no Rio Grande do Sul, mitos e verdades, 2) fatores de risco e de proteção, ideação e plano de suicídio, sinais de alerta, tentativas de suicídio impulsivas e 3) abordagem ao paciente. Ao final do curso é realizada uma avaliação composta por 7 perguntas de escolha simples. A versão inicial do curso foi submetida a uma etapa de validação com profissionais da área e realizadas as reformulações pertinentes. Com uma boa sequência lógica, linguagem simples e direta, ampla utilização de imagens e curta duração, o curso oferece oportunidade de qualificação a um grande número de pessoas, contribuindo para o manejo mais efetivo dos pacientes com risco de suicídio em nossos hospitais. Suicide is a global public health issue. While the risk of suicide in general hospitals is three times higher than in the general population, training for healthcare professionals working in this sector is quite rare, hampering the identification, approach and appropriate referral of those at risk. Thus, this study aimed to develop a basic course on suicide prevention in general hospitals, in distance learning modality and directed to health professionals who work in these institutions. A narrative bibliographic research was carried out. The content was divided into 3 modules - 1) suicide in the world, in Brazil and in Rio Grande do Sul, myths and truths, 2) risk and protective factors, ideation and suicide plan, warning signs, impulsive suicide attempts and 3) addressing the patient. At the conclusion of the course, an evaluation consisting of 7 simple choice questions is given. The initial version of the course was submitted to a validation process with health professionals and the pertinent reformulations were made. With a good logical sequence, simple and direct language, wide use of images, and short duration, the course offers qualification opportunities to a large number of people, contributing to a more effective management of patients at risk of suicide in our hospitals.