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A sequence of interconnected events known as the metastatic cascade promotes tumor progression by regulating cellular and molecular interactions between tumor, stromal, endothelial, and immune cells both locally and systemically. Recently, a new concept has emerged to better describe this process by defining four attributes that metastatic cells should undergo. Every individual hallmark represents a unique trait of a metastatic cell that impacts directly in the outcome of the metastasis process. These critical features, known as the hallmarks of metastasis, include motility and invasion, modulation of the microenvironment, cell plasticity and colonization. They are hierarchically regulated at different levels by several factors, including galectins, a highly conserved family of β-galactoside-binding proteins abundantly expressed in tumor microenvironments and sites of metastasis. In this review, we discuss the role of galectins in modulating each hallmark of metastasis, highlighting novel therapeutic opportunities for treating the metastatic disease. Fil: Perrotta, Ramiro Martin. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina Fil: Bach, Camila Agustina. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina Fil: Salatino, Mariana. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina Fil: Rabinovich, Gabriel Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2022-02-18T13:47:58Z No. of bitstreams: 1 PDF - Walter Gleybson Antas de Morais.pdf: 2583981 bytes, checksum: 725ecb443489ac3ea6c8ec51009b3138 (MD5) Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2022-02-22T13:52:41Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Walter Gleybson Antas de Morais.pdf: 2583981 bytes, checksum: 725ecb443489ac3ea6c8ec51009b3138 (MD5) Made available in DSpace on 2022-02-22T13:53:08Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Walter Gleybson Antas de Morais.pdf: 2583981 bytes, checksum: 725ecb443489ac3ea6c8ec51009b3138 (MD5) Previous issue date: 2020-07-10 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Background: Ameloblastoma (AM) and adenomatoid odontogenic tumor (AOT) are benign odontogenic tumors with ephitelial origin, but exhibiting distinct clinical behavior. This fact leads to development of research that try to better understand the possible differences in the pathogenesis and biological behavior of these lesions. Galectins are proteins involved in various pathological mechanisms of the oral cavity, however, until the presente moment, its role in odontogenic tumors is still poorly elucidated. Objective: To evaluate the immunoexpression of galectins -1, -3 and -7 in a series of cases of AM and AOT, comparing it with clinicomorphological parameters. Material and Methods: A total of 31 cases of AM and 20 cases of AOT were analyzed in a retrospective and cross-sectional study. Clinical data (sex, age, anatomical location, radiographic aspects and primary or recurrent lesion) were collected from biopsy request forms. In the morphological study, classification proposed by the WHO (2017) was considered. For the immunohistochemical study, it were established percentages of imunopositives cells to galectins -1, -3 and -7, considering differents cell compartments, in 10 microscopy fields in the parenchyma of AM and AOT. In the stroma, absence/presence of galectin immunoexpression was considered. Data obtained were submitted to statistical analysis using the Mann-Whitney and Fisher’s exact tests (p

CAPES Artrite reumatoide (AR) e esclerose sistêmica (ES) são doenças autoimunes reumáticas que afetam múltiplos órgãos ou tecidos simultaneamente. Vários fatores podem influenciar a patogênese dessas doenças. As galectinas são proteínas da família das lectinas que apresentam alta afinidade à β-galactosídeos. Os membros dessa família possuem um domínio de ligação a carboidratos que estão cada vez mais relacionadas a processos de apoptose, fibrose, migração e atividades pro e anti-inflamatórias. Nesse contexto, há uma busca para esclarecer os mecanismos genéticos, através de polimorfismos (SNPs) que estão associados com a suscetibilidade das doenças. O objetivo deste estudo foi analisar a associação de SNPs nos genes das galectinas, com seus níveis séricos e manifestações clínicas em pacientes com AR e ES. Um grupo de duzentos e vinte e nove pacientes com AR, oitenta e dois com ES e cento e setenta voluntários foram recrutados pelo Serviço de Reumatologia do HC-UFPE, cumprindo os critérios do Colégio Americano de Reumatologia, e tiveram o soro dosado pela metodologia do ELISA para as galectinas 1-4,- 7 e -9. Cento e cinquenta e oito pacientes com AR, sessenta e sete com ES e duzentos controles foram genotipados para os SNPs no gene da galectina-9 (LGALS9) (rs479583, rs3763959, rs4239242) através da metodologia TaqMan®. O genótipo SNP rs4239242 TT apresentou associação positiva com AR em comparação ao grupo controle (p = 0,0032). O genótipo AG (rs3763959) foi associado com uma maior presença de erosões ósseas em pacientes com AR (p = 0.0436). Altos níveis séricos de Gal-1 e Gal- 4 estão relacionados a pacientes em remissão ou baixa atividade da doença (p

Las galectinas, son proteínas que poseen alta afinidad por -galactósidos. Dichas proteínas poseen un dominio conservado denominado Dominio de Reconocimiento a Carbohidrato (DRC), donde se da la interacción con sus ligandos. En particular las galectinas 1 y 3 han sido ampliamente estudiadas, ya que se encuentran vinculadas a distintos procesos biológicos, entre otros adhesión celular, extravasación celular y metástasis, favoreciendo el desarrollo tumoral. Por esta razón se han convertido en un blanco prometedor para la terapia contra el cáncer ya que se podría inhibir su capacidad pro-tumorogénica bloqueando el sitio de unión a carbohidratos con glicósidos que compitan con sus ligandos naturales. En este marco el objetivo general de esta tesis fue establecer una estrategia que permitiera el diseño racional de inhibidores de galectinas con potencial actividad antitumoral. Para ello se propuso el desarrollo in silico de modelos computacionales, capaces de predecir la naturaleza de la interacción entre los ligandos seleccionados y las galectinas. Por otro lado se realizó la síntesis enzimática de dichos compuestos y la evaluación de su actividad biológica mediante estudios in vitro. Se sintetizaron enzimáticamente cinco galactósidos: -D-Galp-(16)- -D-Galp-(14)-D-Glcp (2), la mezcla -D-Galp-(16)- -D-Glcp-(14)-D-Glcp (3) y -D-Galp-(13)- -D-Glcp-(14)-D-Glcp (4), -D-Galp-(16)- -D-GlcNAcp-(14)-D-GlcNAcp (6) y el galactósido de carácter aromático bencil- -D-galactopiranósido (5), aplicando el sistema de transglicosilación catalizado por la enzima -galactosidasa de Aspergillus oryzae. Posteriormente se estudió la afinidad y especificidad de unión in silico de las galectinas 1 y 3 y los -galacto-compuestos sintetizados junto con otros disacáridos de origen comercial. Para ello se aplicaron distintas simulaciones de Dinámica Molecular, en combinación con experimentos de Docking Molecular, en la búsqueda de generar modelos computacionales capaces de reproducir y predecir las interacciones entre las galectinas y sus ligandos. A su vez, se estimaron las energías libres de unión ( G) de cada complejo galectina-ligando obtenido. Con el objetivo de validar los modelos teóricos obtenidos, se estudió la interacción galectina-ligando mediante dos ensayos biológicos in vitro: ensayo en fase sólida e ITC. Los resultados obtenidos, mostraron una óptima correlación entre los resultados experimentales y teóricos, validando los modelos generados previamente. A pesar de la complejidad intrínseca del modelado de carbohidratos y lo expuesto al disolvente del DRC, en esta tesis se obtuvieron modelos teóricos preliminares, capaces de sortear dichas dificultades. Si bien los ligandos sintetizados no mostraron afinidades superiores a las de los ligandos de referencia (lactosa y N-acetil-lactosamina), los resultados obtenidos, constituyen un estudio detallado de la naturaleza de dichas interacciones. De hecho se pudieron establecer diversos aspectos de la naturaleza química del ligando que influyen en la interacción con la galectina. Por un lado la naturaleza del enlace entre la galactosa y el segundo azúcar es fundamental, siendo los enlaces -(14) y -(13) los que presentan mayor afinidad. Otro aspecto a tener en cuenta es la identidad de dicho azúcar, determinándose que la presencia del grupo N-acetilo en el carbono 2 del residuo glucopiranósico, mejora la interacción con el subsitio D de las galectinas, tanto 1 como 3. Finalmente, la adición de un tercer azúcar no resulta beneficioso respecto a la energía de unión. Esto no quiere decir que ligandos más grandes no puedan ser más afines por la galectina, sino que en principio estructuras de tipo trisacáridos no sería suficiente y no evidencian diferencias respecto a los disacáridos. Finalmente los modelos teóricos generados en esta tesis representan un importante insumo para el diseño y síntesis de inhibidores de galectinas más potentes.

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2019-09-11T12:44:30Z No. of bitstreams: 1 PDF - Marayza Alves Clementino.pdf: 2384157 bytes, checksum: 0d4f0333806531b6c97e27c74e3a0e0e (MD5) Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2019-10-10T14:07:21Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Marayza Alves Clementino.pdf: 2384157 bytes, checksum: 0d4f0333806531b6c97e27c74e3a0e0e (MD5) Made available in DSpace on 2019-10-10T14:07:21Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Marayza Alves Clementino.pdf: 2384157 bytes, checksum: 0d4f0333806531b6c97e27c74e3a0e0e (MD5) Previous issue date: 2018-07-30 Odontogenic keratocyst (OKC) is an odontogenic developmental cyst characterized by potentially aggressive behavior and the association, in some cases, with Gorlin syndrome. Studies have suggested that OKCs associated with Gorlin syndrome exhibit increased growth and infiltration capacity compared to isolated OKCs. In addition, studies have highlighted the participation of multifunctional proteins, named galectins, especially galectins-1, -3 and -7, in the development of inflammatory odontogenic cysts. Thus, the present study aimed to evaluate the immunoexpression of galectin-1, -3 and -7 in isolated primary and recurrent OKC, and OKC associated with Gorlin syndrome. The sample consisted of 20 cases of isolated primary OKC, eight cases of isolated recurrent OKC and 20 cases of OKC associated with Gorlin syndrome. Galectin-1, -3 and -7 immunoexpression was evaluated in the epithelial component of the lesions, establishing the percentage of positive cells (nuclear and cytoplasmic/ membrane) and the predominance of immunoreactivity in the epithelial layers. The data obtained with the evaluation of galectin-1 expression were only submitted to descriptive statistical analysis. For galectin-3 and -7, comparisons between median percentages of immunopositivity (nuclear and cytoplasmic/ membrane) were performed using the non-parametric Mann-Whitney test. Possible correlations between the galectin-3 and -7 immunoexpressions were assessed using the Spearman correlation test. For all the tests used in this study, a significance level of 5% ( p < 0.05) was considered. In all groups evaluated, a higher frequency of negative cases was observed for galectin-1 and -3. The few cases of OKC immunopositive for these galectins exhibited low percentages of positivity, with no statistically significant differences between groups (p > 0.05). All cases of OKC exhibited galectin-7 expression, with relatively high percentages of positivity and predominance of parabasal/ superficial immunoreactivity. There were no statistically significant differences between OKC groups regarding nuclear and cytoplasmic/ membrane expression of galectin-7 (p > 0.05). In all OKC groups, positive correlations were observed between nuclear and cytoplasmic / membrane immunoexpression for both galectin-3 and galectin-7 (p < 0.05). The results of the present study suggest that the differences in the biological behavior of isolated OKCs and OKCs associated with Gorlin syndrome are not related to the immunoexpressions of galectin-1, -3 and -7. Galectin-7 may play important roles in the pathogenesis of OKCs. On the other hand, the findings of this research suggest a smaller participation of galectin-1 and -3 in the development of these lesions. O ceratocisto odontogênico (CO) é um cisto odontogênico de desenvolvimento que se caracteriza pelo comportamento potencialmente agressivo e pela associação, em alguns casos, com a síndrome de Gorlin. Estudos têm sugerido que os COs associados à síndrome de Gorlin exibem maior capacidade de crescimento e infiltração em comparação aos COs isolados. Além disso, pesquisas têm enaltecido a participação de proteínas multifuncionais, designadas galectinas, especialmente as galectinas-1, -3 e -7, no desenvolvimento dos cistos odontogênicos inflamatórios. Dessa forma, o presente estudo se propôs a avaliar a imunoexpressão das galectinas-1, -3 e -7 em COs isolados primários e recorrentes e COs associados à síndrome de Gorlin. A amostra foi constituída por 20 casos de COs isolados primários, oito casos de COs isolados recorrentes e 20 casos de COs associados à síndrome de Gorlin. A imunoexpressão das galectinas-1, -3 e -7 foi avaliada no componente epitelial das lesões, estabelecendo-se os percentuais de células positivas (nuclear e citoplasmática/ membranar) e o predomínio da imunorreatividade nas camadas epiteliais. Os dados obtidos com a avaliação da expressão de galectina-1 foram submetidos apenas à análise estatística descritiva. Em relação às galectinas- 3 e -7, comparações entre as medianas dos percentuais de imunopositividade (nuclear e citoplasmática/ membranar) foram realizadas por meio do teste não paramétrico de Mann- Whitney. Possíveis correlações entre as imunoexpressões das galectinas-3 e -7 foram avaliadas por meio do teste de correlação de Spearman. Para todos os testes utilizados neste estudo, foi considerado o nível de significância de 5% (p < 0,05). Em todos os grupos avaliados, foi constatada uma maior frequência de casos negativos para galectinas-1 e -3. Os poucos casos de COs imunopositivos para essas galectinas exibiram baixos percentuais de positividade, sem diferenças estatisticamente significativas entre os grupos (p > 0,05). Todos os casos de COs exibiram expressão de galectina-7, com percentuais de positividade relativamente altos e predomínio de imunorreatividade em camada parabasal/ superficial. Não foram constatadas diferenças estatisticamente significativas entre os grupos de COs em relação aos percentuais de positividade nuclear e citoplasmática/ membranar de galectina-7 (p > 0,05). Em todos os grupos de COs, foram observadas correlações positivas entre as imunoexpressões nucleares e citoplasmáticas/ membranares, tanto para a galectina-3 como para a galectina-7 (p < 0,05). Os resultados do presente estudo sugerem que as diferenças no comportamento biológico de COs isolados e associados à síndrome de Gorlin não estão relacionadas às imunoexpressões das galectinas-1, -3 e -7. A galectina-7 pode desempenhar importantes funções na patogênese dos COs. Por outro lado, os achados desta pesquisa sugerem uma menor participação das galectinas- 1 e -3 no desenvolvimento dessas lesões.

Las glicoproteínas presentes en la superficie celular, como así también las que componen la matriz extracelular, contienen información vital codificada en glicanos. Estos glicanos son ensamblados y modificados post-traduccionalmente por distintas enzimas llamadas glicosiltransferasas y glicosidasas presentes en el lumen del Retículo Endoplásmico (RE) y en el Aparato de Golgi. Dado que la biosíntesis de los mismos se efectúa sin ningún tipo de molde, existe una enorme diversidad de estructuras sacarídicas presentes en proteínas y lípidos. Esto determina que el estudio de la información contenida en los distintos glicanos sea un verdadero desafío para los glicobiólogos en general, y para los glicoinmunólogos en particular. Sin embargo, en las últimas décadas se produjo un avance significativo en la comprensión de los ?glico-códigos? presentes en la superficie celular y en proteínas que se encargan de interpretar y decodificar esta información, denominadas lectinas. En esta revisión nos concentraremos en las galectinas, una familia de lectinas solubles secretadas al medio extracelular por una vía no clásica, definidas por su capacidad de reconocer residuos β-galactósidos, presentes en glicoconjugados expresados en una gran variedad de tipos celulares. Dada la capacidad de algunas galectinas de comportarse como ligandos multivalentes (en condiciones particulares de concentración, pH y estado de oxidación), estas proteínas pueden entrecruzar o segregar receptores de membrana glicosilados modulando así vías de transducción de señales gatilladas por factores presentes en el microambiente celular. A su vez, estas lectinas pueden comportarse como ligandos no canónicos de una variedad de receptores de importancia en programas inmunológicos y vasculares. Esta regulación de vías de señalización conlleva a varios tipos de respuestas biológicas asociadas a la activación, la adhesión, la migración, la proliferación y la muerte celular. En particular, focalizaremos nuestra atención en galectina-1 (Gal-1), un miembro prototípico de esta familia, como regulador homeostático de la respuesta inmunológica y como factor pro-angiogénico, y su implicancia en el desarrollo y resolución de enfermedades autoinmunes y neoplásicas, enfatizando en aportes realizados por nuestro grupo de investigación. Glycoproteins present at the cell surface or within the extracellular matrix are composed of a myriad of glycans assembled through a post-translational modification process called glycosylation. These molecules store critical biological information that controls cellular activation, differentiation and survival, and their synthesis is controlled by the sequential action of a limited number of glycosyltranferases and glycosidases located in the endoplasmic reticulum (ER) and Golgi apparatus. Since the glycosylation process is not template-driven, there are almost infinite possibilities of saccharide linkages and structures which hindered the progress of functional glycobiology for many decades. However, identification of glycan-binding proteins or lectins responsible of deciphering the cellular ‘glyco-codes’, has illuminated new insights into our understanding of the functions of glycans in a broad range of cellular processes in health and disease. In this review we will focus on galectins, a particular family of soluble lectins which are secreted to the extracellular medium through a non-conventional ER-Golgi-independent route. Galectins are defined based on their ability to bind β-galactosidase residues in glycoproteins and glycolipids. Given the ability of some members of the galectin family to form multivalent structures (depending on their concentration, redox and pH status), they are able to control clustering, reorganization and trafficking of relevant glycosylated receptors. These multivalent complexes can in turn regulate receptor signaling, endocytosis and activation within immune and vascular compartments. Galectin-mediated regulation of receptor signaling results in modulation of a myriad of cellular processes including cell adhesion, migration, proliferation and apoptosis. Our results during the past decade demonstrated that galectin-1 (Gal-1) controls immune and/or vascular homeostasis through multiple regulatory mechanisms. Here we will discuss pioneer and recent studies highlighting the role of Gal-1 as a novel target in cancer, inflammation and autoimmunity. Fil: Pinto, Nicolás Alejandro. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina Fil: Morosi, Luciano Gastón. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina Fil: Maller, Sebastian Matias. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina Fil: Rabinovich, Gabriel Adrián. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biología y Medicina Experimental. Fundación de Instituto de Biología y Medicina Experimental. Instituto de Biología y Medicina Experimental; Argentina. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales. Departamento de Química Biológica; Argentina

Submitted by Jean Medeiros (jeanletras@uepb.edu.br) on 2016-11-16T12:52:55Z No. of bitstreams: 1 PDF - Lívia Natália Sales Brito.pdf: 2789141 bytes, checksum: 2061338da949c4cb6621e8aab9b3ce0a (MD5) Approved for entry into archive by Secta BC (secta.csu.bc@uepb.edu.br) on 2016-11-16T14:19:13Z (GMT) No. of bitstreams: 1 PDF - Lívia Natália Sales Brito.pdf: 2789141 bytes, checksum: 2061338da949c4cb6621e8aab9b3ce0a (MD5) Made available in DSpace on 2016-11-16T14:19:14Z (GMT). No. of bitstreams: 1 PDF - Lívia Natália Sales Brito.pdf: 2789141 bytes, checksum: 2061338da949c4cb6621e8aab9b3ce0a (MD5) Previous issue date: 2016-07-27 Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - CAPES Studies demonstrate that galectins are involved in the development of immunoinflammatory response, by regulation of homeostasis and immune cell functions. However, the function of these lectins in the development of periapical lesions are scarce in the literature. The objective of this study was to evaluate, through immunohistochemistry, the expression of galectinas -1, -3 and -7 in periapical granulomas (PGs), radicular cysts (RCs), and residual radicular cysts (RRCs), related this with morphological parameters (intensity of the inflammatory infiltrate and the thickness of the cystic epithelial lining). The sample consisted of 20 periapical granulomas (PGs), 20 radicular cysts (RCs), and 20 residual radicular cysts (RRCs) were submited to immunohistochemistry. The inflammatory and epithelial cells were quantified from nuclear and/or cytoplasmic/membrane expression and their percentage submited for statistical evaluation. The results for the morphological analysis revealed that 100% of GPs and 80% of CRs showed an intense inflammatory infiltrate (grade III), and to CRRs, 60% had a mild inflammatory infiltrate (grade I). The analysis of epithelial lining in cystic lesions showed that atrophic ephitelium was observed in 65% of CRRs and 50% of the RCs, the hyperplastic ephitelium was demonstrated, respectively, in 50% and 35% of the RCs of CRRs. Immunohistochemical evaluation of each galectin in connective tissue demonstrated that GPs exhibited higher expression of galectin -1 in relation to RCs and CRRs in both components (nucleus and cytoplasmic/membrane) of inflammatory cells (p 0,05). In Galectin-7, GPs showed a higher immunoreactivity of this protein in cytoplasmic/membrane component, compared to CRs and CRRs (p 0.05). However, the immunohistochemical expression of galectin-7 revealed that epithelial lining of CRRs showed a higher percentage of nuclear expression than CRs epithelial lining (p = 0.014). Lesions with hyperplastic epithelium showed a greater cytoplasmic/membrane positivity than lesions with atrophic epithelium (p=0.020). Positive correlations were observed to each galectin on epitelial and connective tissues. In addition, positive correlations were observed between galectins -1 and -7 into connective tissue (p 0,05). Para a galectina-7, os GPs apresentaram uma maior imunoexpressão desta proteína no componente citoplasmático/membranar, comparadas aos CRs e CRRs (p 0,05). Todavia, a imunoexpressão da galectina-7 revelou que o revestimento epitelial de CRRs apresentaram um maior percentual de positividade nuclear quando comparado ao revestimento dos CRs (p = 0,014). Lesões com epitélio hiperplásico exibiram maior positividade citoplasmática/ membranar quando comparadas às de epitélio atrófico (p=0,020). Foram observadas correlações positivas para cada uma das galectinas no componente epitelial e conjuntivo de todas as lesões. Adicionalmente, foram observadas correlações positivas entre as galectinas -1 e -7 no tecido conjuntivo (p < 0,001), independente do tipo de lesão. Em conclusão, os resultados do presente estudo evidenciam a participação destas proteínas na modulação da resposta imunoinflamatória entre lesões periapicais.

La función primaria del sistema inmune es resguardar al individuo de los patógenos potencialmente dañinos que invaden el medio ambiente en el cual nos desarrollamos. Este cuenta con dos grandes ramas, la inmunidad innata y la adaptativa, ambas con la propiedad de diferenciar lo peligroso de aquello inofensivo. Estos procesos se hallan regulados por mecanismos homeostáticos que constituyen la tolerancia inmunológica, a los fines de limitar aquellos procesos prolongados y silenciar los potencialmente autoagresivos. Ante la falla de estos mecanismos de control, surgen las enfermedades autoinmunes. Avances en el conocimiento de la fisiopatología de estas entidades, han abierto un nuevo capítulo en el terreno de la inmunofarmacología. Su prometedor potencial actualmente nos ofrece novedosas herramientas terapéuticas para controlar y atenuar el daño causado por este tipo de respuestas. No obstante, debe continuarse la investigación en el campo de los agentes biológicos, ya que ninguno de ellos se encuentra libre de inconvenientes. Seguramente, futuros hallazgos se concretarán en futuros aciertos. Y los aciertos, en Medicina, equivalen a esperanza.The main function of the immune system is to protect the individual against potentially dangerous pathogens. It comprises innate and adaptive cellular and soluble components, both with the capacity to discriminate between harmful and harmless. These processes are regulated by homeostatic mechanisms that constitute the so-called immunological tolerance, which aims to limit the prolonged action of immune mediators and to silence the generation of potentially autoaggressive components. Failure to silence self-reactive T and B cells results in the generation of autoimmune disease. Recent advances in our knowledge of these pathological entities have opened a new chapter in the pharmacology of the immune system. Its promising potential currently offers new therapeutic agents to control and attenuate pathological tissue damage. Nevertheless, further research regarding these biologic agents is required, since they are not free from inconveniences. It is without question that upcoming findings in this field will instill hope into the quest for the "magic bullet".

Las Enfermedades Inflamatorias Intestinales (EII) son un conjunto de patologías crónicas multifactoriales en las cuales se produce una respuesta inmune aberrante contra componentes de la microbiota intestinal. Dentro de las EII, la colitis ulcerosa (CU) y la enfermedad de Crohn (EC) son las dos formas más estudiadas. Si bien existen diferencias en la presentación clínica de estas patologías, en ambos casos los linfocitos T (LT) de la mucosa sobre-expresan citoquinas pro-inflamatorias del perfil Th1. La cronicidad de este proceso desencadena complicaciones tales como la formación de abscesos, fístulas, estenosis e inclusive la necesidad de resección quirúrgica de diversos segmentos del intestino debido a lo extenso del daño. Galectina-1 (Gal-1) es una lectina endógena con propiedades anti-infamatorias ampliamente documentadas. Entre los distintos efectos descriptos para esta proteína podríamos mencionar el control de la sobrevida de los LT Th1 y la modulación en la producción de citoquinas. En el presente trabajo de tesis se propuso estudiar la expresión de Gal-1 en la mucosa colónica humana y murina en situaciones fisiológicas y patológicas; analizar la correlación entre la producción de esta lectina y la actividad inflamatoria del tejido y su capacidad de modular la sobrevida de los LT y de las células epiteliales intestinales (CEI) en dichos entornos. Pudimos demostrar que el análisis conjunto de la expresión intestinal de diferentes galectinas permite distinguir entre pacientes con EII activa y pacientes control, EII inactiva o en remisión. Además, concluimos que este análisis es una herramienta eficiente para determinar el grado de inflamación de dicha mucosa y distinguirla de otras patologías inflamatorias intestinales agudas y crónicas. Por lo tanto, podría constituir un marcador de la historia de la patología en el paciente. En cuanto a su rol en la fisiología intestinal, en homeostasis Gal-1 ejerce un efecto pro-apoptótico sobre los LT de la lámina propia colónica, efecto que permite controlar la activación celular frente al constante desafío antigénico por parte de la microbiota. Además, comprobamos que la respuesta fisiológica del intestino frente a un estímulo inflamatorio consiste en inducir un aumento en los niveles de expresión de esta lectina. Sin embargo, este mecanismo compensatorio resulta inefectivo dado que los LT de la lámina propia alteran su maquinaria de glicosilacióin, inhibiendo la expresión de los ligandos específicos para Gal-1. Asimismo, las proteasas presentes en el entorno inflamatorio tisular degradan a esta proteína. Ambos efectos en la lámina propia favorecen la persistencia del foco inflamatorio y la no resolución del daño tisular. Por otra parte, la inflamación sostenida incrementa el porcentaje de CEI que expresan los ligandos para esta lectina. Este fenómeno intensifica el efecto pro-apoptótico que Gal-1 ejerce sobre dichas células. Este mecanismo contribuye a la perdida de la integridad epitelial, la alteración de la permeabilidad intestinal y propicia la traslocación de los antígenos del lumen a la lámina propia. Por lo tanto, en condiciones de homeostasis, Gal-1 contribuiría a la normal fisiología del intestino. Sin embargo, en procesos inflamatorios crónicos, dicho rol se vería alterado, hecho que propiciaría la continuidad de la enfermedad. Una mejor comprensión de los mecanismos que gobiernan la expresión de los ligandos específicos de esta lectina, y el rol que ésta ejerce sobre otras células del sistema inmune, permitirá plantear nuevas terapias o procedimientos para restablecer el glicofenotipo de los LT y de las CEI y, de esta manera, controlar la inflamación intestinal, Facultad de Ciencias Exactas

Las interacciones entre proteínas y glicanos juegan un papel fundamental en numerosos eventos de la regulación de la fisiología del sistema inmune, como maduración tímica, activación, migración y apoptosis de células T. Los carbohidratos son capaces de modular la fisiología linfocitaria a través de la interacción específica con lectinas endógenas como selectinas y galectinas. Estas lectinas endógenas son capaces de reconocer estructuras sacarídicas localizadas en glicoproteínas de la superficie celular y regular procesos tan diversos como proliferación, diferenciación y ciclo celular. Existen diversos niveles de control de la interacción entre lectinas y azúcares; en primer lugar podemos mencionar la expresión regulada de estas lectinas durante el desarrollo de una respuesta inmune, y en segundo lugar la regulación espacio-temporal de la actividad de glicosiltranferasas y glicosidasas cuya función es crear y modificar los azúcares específicos para estas lectinas. Existen evidencias de que la expresión y actividad de estas enzimas se regulan en forma positiva o negativa durante diferentes eventos del desarrollo, ejecución y finalización de la respuesta inmune. En este artículo se analizarán los mecanismos a través de los cuales las interacciones entre lectinas con sus carbohidratos específicos modulan en forma específica diversos procesos fisiológicos, como maduración de timocitos, migración linfocitaria, activación y diferenciación de células T y apoptosis.Recent evidence indicates that protein-glycan interactions play a critical role in different events associated with the physiology of T-cell responses including thymocyte maturation, T-cell activation, lymphocyte migration and T-cell apoptosis. Glycans decorating T-cell surface glycoproteins can modulate T-cell physiology by specifically interacting with endogenous lectins including selectins and galectins. These endogenous lectins are capable of recognizing sugar structures localized on T-cell surface glycoproteins and trigger different signal transduction pathways leading to differentiation, proliferation, cell cycle regulation or apoptosis. Protein-carbohydrate interactions may be controlled at different levels, including regulated expression of lectins during T-cell maturation and differentiation and the spatio-temporal regulation of glycosyltransferases and glycosidases, which create and modify sugar structures present in T-cell surface glycoproteins. This article briefly reviews the mechanisms by which protein-carbohydrate interactions modulate immunological processes such as T-cell activation, migration and apoptosis.

Hepatocellular carcinoma (HCC) represents a global health problem. Infections with hepatitis B or C virus, non-alcoholic steatohepatitis disease, alcohol abuse, or dietary exposure to aflatoxin are the major risk factors to the development of this tumor. Regardless of the carcinogenic insult, HCC usually develops in a context of cirrhosis due to chronic inflammation and advanced fibrosis. Galectins are a family of evolutionarily-conserved proteins defined by at least one carbohydrate recognition domain with affinity for β-galactosides and conserved sequence motifs. Here, we summarize the current literature implicating galectins in the pathogenesis of HCC. Expression of ?proto-type? galectin-1, ?chimera- type? galectin-3 and ?tandem repeat-type? galectin- 4 is up-regulated in HCC cells compared to their normal counterparts. On the other hand, the ?tandemrepeat- type? lectins galectin-8 and galectin-9 are downregulated in tumor hepatocytes. The abnormal expression of these galectins correlates with tumor growth, HCC cell migration and invasion, tumor aggressiveness, metastasis, postoperative recurrence and poor prognosis. Moreover, these galectins have important roles in other pathological conditions of the liver, where chronic inflammation and/or fibrosis take place. Galectin-based therapies have been proposed to attenuate liver pathologies. Further functional studies are required to delineate the precise molecular mechanisms through which galectins contribute to HCC. Fil: Bacigalupo, Maria Lorena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas . Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina; Fil: Manzi, Malena. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas . Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina; Fil: Rabinovich, Gabriel Adrian. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas. Instituto de Biologia y Medicina Experimental (i); Argentina; Fil: Troncoso, María Fernanda. Consejo Nacional de Investigaciones Científicas y Técnicas . Oficina de Coordinación Administrativa Houssay. Instituto de Química y Físico-Química Biológicas; Argentina

La superfamília de receptors scavenger rics en cisteïna (SF-SRCR) és un grup de proteïnes de membrana i/o secretades molt antic i conservat al llarg de l’evolució. Els membres de la SF-SRCR es caracteritzen per la presència d’una o més repeticions d’un domini anomenat SRCR, d’aproximadament 100 aminoàcids (aa) i ric en cisteïna. Malgrat l’alt grau de conservació del domini SRCR, no s’ha descrit una funció o lligand comú per tots els membres de la SF-SRCR. Els estudis realitzats a llarg d’aquesta tesi han permès caracteritzar molecular i funcionalment dos membres solubles relativament nous de la SF-SRCR, S5D-SRCRB (soluble 5 domains-SRCR of group B) i S4D-SRCRB (soluble 4 domains-SRCR of group B). A més, s’ha aprofundit en la descripció del paper que juga DMBT1/Hensin en la diferenciació terminal de les cèl•lules intercalades de ronyó. S5D-SRCRB és una glicoproteïna secretòria altament glicosilada, formada per cinc dominis SRCR, espaiats per pèptids rics en els aa Pro, Ser, Thr (PST), a més d’un domini C terminal de tipus mucina. Les glicosilacions que S5D-SRCRB presenta són del tipus N i O. Al seu torn, S4D-SRCRB és una glicoproteïna formada per quatre dominis SRCR també espaiats per pèptids PST, però únicament conté glicosilacions de tipus O. A més de la caracterització bioquímica dels dos membres, la generació d’anticossos monoclonals contra S5D-SRCRB va permetre estudiar el patró d’expressió tissular d’aquesta proteïna. L’estudi va desvetllar que S5D-SRCRB s’expressava principalment als epitelis, on el tracte urogenital presentava els nivells d’expressió més importants a nivell protèic i d’ARN. Pel que fa la funció de S5D-SRCRB i S4D-SRCRB, es va observar que ambdues proteïnes s’unien de manera dosi-depenent a proteïnes de la matriu extracel•lular (fibronectina i laminina). S5D-SRCRB, a més, interaccionava amb galectina-1 i galectina-3, mitjançant els seus dominis d’unió a lectines. D’altra banda, S5D-SRCRB i S4D-SRCRB interactuaven amb components de la paret bacteriana (peptidoglicà i lipopolisacàrids) i fúngica (glucans lineals), actuant com a reconeixedors dels patrons moleculars associats a patògens (pathogen-associated molecular patterns, PAMPs). Les dues proteïnes eren també capaces d’agregar cultius bacterians (E. coli i S. aureus) i fúngics (C. albicans). Per tant, S5D- i S4D-SRCRB podien actuar com a receptors duals capaços de reconèixer estructures endògens i exògenes, i participar en el manteniment de la homeòstasi de l’organisme. La possibilitat que S5D-SRCRB jugués un paper en la defensa dels epitelis contra infeccions es va estudiar amb més detall en el tracte urogenital, emprant models in vitro i in vivo. Els resultats van revelar que l’expressió de S5D-SRCRB augmentava tant en cultius de la línia cel•lular clone C tipus ß expossats a components de la paret bacteriana, com en els ronyons de ratolins a un model d’infecció en el tracte urinari (urinary tract infection, UTI). El patró d’expressió de S5D-SRCRB també canviava durant el procés de diferenciació terminal de les cèl•lules intercalades de ronyó, i durant l’espermatogènesi en els túbuls seminífres. Per aquest motiu s’ha proposat que S5D-SRCRB pot jugar un paper en la diferènciació cel•lular, com s’ha demostrat que passa en el cas de DMBT1/Hensin. La secreció de DMBT1/Hensin és clau en el procés de diferenciació terminal que pateixen les cèl•lules intercalades en condicions d’acidosi, i pel qual passen d’expressar un fenotip de cèl•lula intercalada tipus ß a un de tipus α., The scavenger receptor cysteine-rich superfamily (SRCR-SF) members are transmembrane and/or secreted receptors exhibiting one or several repeats of a cysteine-rich protein module of +/-100 aa, named scavenger receptor cysteine-rich (SRCR). Despite the high degree of conservation of SRCR domain, non a shared function neither a ligand has been described for all the SRCR-SF members. Studies conducted on this work characterized two relatively new members of the SRCR-SF: S5D-SRCRB (soluble 5-SRCR domains of group B) and S4D-SRCRB (soluble 4-SRCR domains of group B). In addition, we better described the role of DMBT1/Hensin in terminal differentiation of renal intercalated cells. S5D-SRCRB is a highly glycosylated secretory glycoprotein, consisting of five SRCR domains, spaced by peptides rich in Pro, Ser, Thr (PST), and a mucin-like domain at the C terminal extreme. S5D- SRCRB contains N- and O- glycosylations. On the other hand, S4D-SRCRB is a glycoprotein consisting of four SRCR domains also spaced by PST peptides, but only contains O-glycosylations. S4D- and S5D-SRCRB were shown to bind endogenous extracellular matrix proteins (laminin fibronectin), as well as Pathogen-associated molecular patterns (PAMPs) present on Gram-positive and Gram-negative bacteria and fungi. PAMP binding by S4D- and S5D-SRCRB induced microbial aggregation and changes in PAMP-induced cytokine release. These abilities suggest that S4d- and S5D-SRCRB might play a role in the innate defense and homeostasis of certain specialized epithelial surfaces. Immunohistochemical and real-time PCR analysis showed significant S5D-SRCRB expression in murine genitourinary and digestive tracts. S5D-SRCRB expression increased when collecting duct cells were infected. S5D-SRCRB expression pattern also changed during terminal differentiation of renal intercalated, and during spermatogenesis in the seminiferous tubule. It has been proposed that S5D-SRCRB may play a role in cell differentiation, in a similar way it does DMBT1/Hensin. This work has shown that DMBT1/Hensin secretion is required during terminal differentiation carried out by intercalated cells in conditions of acidosis, which drives type ß- intercalated cells to α- intercalated cells.

Las interacciones específicas entre hidratos de carbono y proteínas regulan una grandiversidad de fenómenos biológicos, puesto que desencadenan numerosos procesos detransferencia de información. Para lograr interacciones de alta afinidad, la Naturaleza hadiseñado biomoléculas que presentan múltiples copias de un determinado residuooligosacarídico, que actúa como elemento de reconocimiento de una proteína. Esto conlleva alefecto cluster glicosídico o efecto multivalente, en el cual la afinidad del proceso globalresulta mucho mayor que la simple suma de las interacciones individuales. Asimismo, estasinteracciones entre ligandos multivalentes y sus proteínas receptoras (en la mayoría de loscasos, lectinas) conducen a redes entrecruzadas que desencadenan procesos biológicosespecíficos. En búsqueda de compuestos de alta afinidad por lectinas que pudieran interferircon este tipo de procesos, y que además resultaran estables en medios biológicos sin sufrirdegradación por glicosidasas endógenas, se planteó como objetivo principal de este trabajo detesis la síntesis de ligandos multivalentes con unidades de tioazúcares específicamentediseñados para estudiar fenómenos biológicos regulados por lectinas. Estos ligandos sediseñaron para ser resistentes a la degradación enzimática, y a la vez, afines a lectinas quereconocen ß-galactósidos (lectina de maní y galectinas). Para ello, se sintetizaron cuatroelementos de reconocimiento distintos derivados de ß-galactósidos: ß-tiogalactósidos, ß-tiolactósidos, análogos isostéricos de la 3-desoxilactosa y análogos de tiodigalactósido. Supreparación requirió el desarrollo de metodología de síntesis específicas en cada caso. Estosfragmentos se conectaron a plataformas biocompatibles derivadas de hidratos de carbono através de la reacción click, la cicloadición de azidas y alquinos catalizada por Cu(I) o Ru(II). Se evaluó la afinidad de los ligandos sintetizados por lectinas así como también su actividadenzimática como inhibidores de glicosidasas. Asimismo, se realizaron estudiosconformacionales de los tioazúcares y análisis de la interacción enzima-inhibidor mediantetécnicas de RMN y de modelado molecular. The specific interactions between carbohydrates and proteins are determinant in a numberof biological phenomena, since they trigger a myriad of biological processes related withcommunication processes. To achieve high affinity interactions, Nature has designedbiomolecules presenting several copies of specific oligosaccharidic moieties recognized by aprotein. This fact leads to the cluster glycosidic effect, also called multivalent effect,described as a high affinity process which is stronger than the simple sum of monovalentinteractions. Moreover, these interactions between multivalent ligands and their protein receptors (mainly lectins), produce complex lattices which trigger specific biological responses. Inorder to obtain compounds with high affinity for lectins, being at the same time stable inbiological fluids and resistant to endogenous glycosylhydrolases, the aim of this work was thesynthesis of multivalent ligands bearing thiosugars, specifically selected to study lectinmediatedbiological events. These ligands have been designed to interact with lectins that recognize ß-galactosides (peanut lectin and galectins), and to be resistant to enzymatic degradation. Thus, four differentrecognition elements derived from ß-galactosides have been synthesized: ß-thiogalactosides,ß-thiolactosides, isosteric analogues of 3-deoxylactose and thiodigalactoside analogues. Specific methodology has been developed in each case to achieve their preparation. Thesefragments were connected to biocompatible carbohydrate-derived scaffolds through the “click” reaction, the cycloaddition between azides and alkynes catalyzed by Cu(I) or Ru(II). The affinity of the synthesized ligands for lectins, as well as their activity as glycosidaseinhibitors was determined. In addition, conformational studies of the thiosugars and theanalysis of the enzyme-inhibitor interactions were performed using NMR techniques andmolecular modeling. Fil: Cagnoni, Alejandro J.. Universidad de Buenos Aires. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales; Argentina.

La diabetes tipo 1 es una enfermedad autoinmune en la que las células β de los islotes de Langerhans son selectivamente destruidas por linfocitos T autorreactivos específicos para antígenos propios de estas células (autoantígenos), disminuyéndose gravemente la cantidad de insulina secretada, lo que conduce a la patogenia de la enfermedad. Estos linfocitos T autorreactivos pueden haber sido generados por alteraciones en la tolerancia central y/o en la tolerancia periférica. Por todo ello en este trabajo de tesis nos hemos propuesto i) clonar, expresar y purificar autoantígenos importantes en la diabetes tipo 1 para desarrollar sistemas de detección de autoanticuerpos específicos contra ellos; ii) identificar los epitopos derivados del autoantígeno S100β procesados y presentados de manera natural a linfocitos T por moléculas de histocompatibilidad que confieren susceptibilidad a padecer la enfermedad (HLA-DRB1*04:01 y HLA-A*02:01); y iii) estudiar la síntesis de galectinas en sujetos sanos y pacientes con diabetes tipo 1, ya que estas proteínas desempeñan un papel importante en el mantenimiento de la tolerancia central y periférica. En el presente trabajo se han clonado, expresado y purificado los autoantígenos IGRP (subunidad catalítica de la glucosa-6-fosfatasa específica de los islotes), GFAP (proteína ácida de la glía) y S100β, las dos últimas en cantidades y pureza suficientes como para llevar a cabo los experimentos subsiguientes. Se han desarrollado dos sistemas de ELISA para la detección de autoanticuerpos contra GFAP y S100β: en el caso de GFAP la sensibilidad del ensayo es de 24,6% con una especificidad del 98,9% y un valor predictivo del 94,7%, existiendo diferencias significativas en la frecuencia de individuos positivos en pacientes con diabetes tipo 1 respecto de controles sanos, además de poseer aquéllos títulos de anticuerpo superiores, que correlacionan con el tiempo transcurrido desde el diagnóstico y con el número de complicaciones diabéticas. En lo que respecta a S100β no existen diferencias ni en frecuencia de positividad ni en título de autoanticuerpos entre controles y pacientes. Sin embargo por western blot se ha detectado un tipo de autoanticuerpo presente exclusivamente en los pacientes diabéticos, que sugiere la presencia de una respuesta humoral diferente contra este autoantígeno en comparación con controles sanos. Se han identificado péptidos derivados del autoantígeno S100β procesados y presentados de manera natural (PPPMN) tanto por la molécula de histocompatibilidad HLA-DRB1*04:01 (DR4) como por la molécula HLA-A*02:01 (A2.1). En el caso de DR4 se ha diseñado un sistema de presentación de antígeno en células homocigotas para DR4 a las que se les suministró S100β, se han inmunopurificado las moléculas DR4, y los péptidos unidos a ellas han sido identificados por espectrometría de masas. Los 44 PPPMN identificados se solapan parcialmente, como era de esperar para una molécula de histocompatibilidad de clase II, constituyendo 3 regiones, de las que hemos diseñado 4 péptidos consenso: S100 6-25, S100 21-36, S100 25-46 y S100 68-92. En un ensayo de unión in vitro a DR4 se ha comprobado que S100 68-92 y, en menor medida, S100 6-25 se unen in vitro a DR4, siendo el complejo resultante estable, y se ha delimitado la posible secuencia de unión. A continuación se ha detectado la presencia de linfocitos T autorreactivos específicos para estos epitopos en controles sanos y pacientes diabéticos mediante ensayos de ELISPOT para las citocinas IFN-γ, IL-10 e IL-17. Los pacientes muestran un fenotipo claramente proinflamatorio, con linfocitos T autorreactivos específicos para los péptidos consenso de S100β secretando IFN-γ y, en menor medida, IL-17. Los controles muestran, sin embargo, un fenotipo inmunoregulador, secretando IL-10 en respuesta a estos péptidos, especialmente contra S100 68-92. En el caso de A2.1 se han generado células dobles transfectantes que expresan A2.1 y S100β, de las cuales se han extraído los péptidos presentados por dichas moléculas de histocompatibilidad y se han identificado 5 PPPMN por espectrometría de masas. Mediante un ensayo in vitro se ha comprobado que al menos dos de los 5 PPPMN (S100 10-18 y S100 20-28) pueden haber sido generados por digestión en el proteosoma, un complejo multicatalítico clave en la generación de péptidos para su unión a moléculas de histocompatibilidad de clase I. Finalmente, hemos ensayado la capacidad de unión in vitro de estos PPPMN a la molécula A2.1, resultando que el péptido S100 10-18 se une con baja afinidad a la molécula de histocompatibilidad, característica compartida por otros péptidos derivados de autoantígenos descritos en la literatura. Se han generado además hibridomas a partir de linfocitos T infiltrantes de islotes de Langerhans de ratones NOD (no obesos diabéticos), el modelo animal de la diabetes tipo 1. Hemos comprobado que al menos 2 de los siete hibridomas generados son específicos de S100β, ya que reconocen epitopos derivados de esta proteína presentados por moléculas de histocompatibilidad de clase II. Finalmente, y teniendo en cuenta el gran papel inmunoregulador que desempeñan las galectinas -1 y -3 al mantener la tolerancia central y periférica, en el presente trabajo se ha estudiado la síntesis de estas galectinas, en primer lugar, en diferentes subtipos de linfocitos T colaboradores (Th), y en segundo lugar en distintos tipos celulares de controles sanos y pacientes con diabetes tipo 1. En lo que respecta a los linfocitos Th, es el subtipo Th17 el que mayores niveles de galectina-1 y -3 produce, respecto de los linfocitos Th1 y Th2. En cuanto al estudio en controles sanos y pacientes con diabetes tipo 1, células mononucleares de sangre periférica (PBMCs) de pacientes secretan menores cantidades de ambas galectinas respecto de controles sanos. La secreción reducida de galectina-1 es debida a células carentes del marcador CD4 (monocitos, linfocitos B y/o linfocitos T CD8+), reducción que supone un mayor resistencia de los linfocitos T autorreactivos a la muerte por apoptosis. Los linfocitos T CD4+ de diabéticos no presentan problemas de secreción de galectina-1, pero poseen niveles significativamente mayores de galectina-1 en superficie, que también conllevan una mayor resistencia a la muerte por apoptosis. Finalmente, los linfocitos T reguladores (Treg) de diabéticos poseen menores niveles de galectina-1 en superficie, probablemente reduciendo su poder supresor. Así pues en este trabajo de tesis se purifican autoantígenos importantes en la diabetes autoinmune, se desarrollan técnicas de ELISA para la detección de autoanticuerpos específicos contra ellos, se identifican PPPMN derivados de S100β y presentados por moléculas de histocompatibilidad que confieren susceptibilidad a padecer la enfermedad, se detectan linfocitos T autorreactivos específicos para péptidos derivados de S100β en pacientes diabéticos, se generan hibridomas de linfocitos T infiltrantes de ratón NOD que reconocen S100β y se describen varios fallos en la síntesis de galectinas por parte de células de pacientes con diabetes tipo 1 respecto de controles sanos.

Este trabalho objetivou analisar a expressão de Galectina=1(Gal=1), Galectina=3 (Gal=3) e ligantes de lectinas em ambientes hipóxicos e/ou privados de nutrientes em célula de câncer de mama e em biópsias tumorais. Para modelar o evento in vitro a linhagem celular de câncer de mama T47D foi submetida à hipóxia em câmara de hipóxia durante 24, 48 e 72h com ou sem privação de nutrientes. Os grupos controles (normóxia com ou sem nutrientes) foram mantidos em estufa de CO2. As biópsias tumorais de carcinoma ductal invasivo (CDI) foram divididas em dois grupos: um positivo e outro negativo para o marcador de hipóxia (CA IX) assim como as biópsias de carcinoma ductal in situ (CDIS) foram divididas em comedônicas/hipóxas e não=comedônicas/controle, para posterior comparação quanto aos parâmetros clínicos, histopatológicos e glicobiológicos. Os experimentos com T47D mostraram que a expressão de Gal=3 aumenta progressivamente quando submetida à hipóxia e privação de nutrientes durante 24, 48, 72h. As biopsias de CDI positivas para CA IX apresentaram uma marcação nuclear mais intensa que o grupo negativo e características tumorais mais agressivas como invasão linfonodal e ausência de Receptor de estrógeno. Gal=1 não foi expressa pelas células neoplásicas no modelo in vitro bem como nas biópsias, onde foi possível detectar positividade nas células do estroma associadas ao tumor. Quanto ao papel da Gal=3 na proteção a morte celular, utilizando=se citômetria de fluxo, observou=se que não houve correlação entre a inibição do domínio de reconhecimento a carboidratos da proteína e o aumento de morte celular. Entretanto, foi observada indução a morte para o anticorpo monoclonal M338, específico para o N=terminal de Gal=3, sendo esta marcação aumentada em até três vezes durante o aumento de morte celular em 48h e 72h de hipóxia e privação de nutrientes. A histoquímica com lectinas foi utilizada em amostras de CDIS com Con A, WGA e UEA=I e de CDI com L=PHA e SNA. Nos casos de CDIS as lectinas utilizadas reconheceram mais casos do grupo comedônico (hipóxico) que o não=comedônico. Ao passo que nas biópsias de CDI foi observado um aumento na sialilação assim como nas células T47D (in vitro) onde se pode avaliar que esta glicosilação não é de responsabilidade exclusiva de ST6GALNac. Nossos resultados indicam que ocorre uma glicosilação aberrante no ambiente hipóxico in vitro e in vivo associada a um fenótipo tumoral mais agressivo bem como sugere que Gal=3 participa da proteção contra morte celular e informativa para diagnóstico e prognóstico. This study aimed to analyze the expression of Galectin=1, Galectin=3 and lectin ligands in hypoxic environments starved or not of nutrients in breast cancer cells and in tumour biopsies. In vitro experiments in T47D breast cancer cells were subjected to hypoxia in hypoxia chamber for 24, 48 and 72h with or without nutrients; control groups (in normoxia and nutrients supplied) were kept in CO2 incubator. Invasive ductal carcinoma (IDC) biopsies were divided into two groups: one positive and one negative for hypoxia marker Carbonic Anhydrase (CA IX); and Ductal Carcinoma in situ (DCIS) samples were divided in comedonecrosis/hypoxic or non=comedonecrosis/control groups, and then they were compared to clinical, histopathological and glycobiology aspects. Confocal microscopy, real=time PCR and western blotting showed that Galectin=3 expression was predominantly nuclear and increased progressively when subjected to hypoxia for 24, 48, 72h and nutrient starvation. CDI samples positive for hypoxia marker CA IX presented an intense nuclear staining in comparison to control group besides more aggressive tumour features as node positivines and absence of ER staining. Gal=1 was not expressed by neoplastic cells in cell model and biopsies, where it was possible to detect positivity in tumour=associated stroma. The evaluation of Gal=3 role in cell death protection using flow cytometry showed that there was no correlation between inhibition of Gal=3 carbohydrate recognition domain and the increase in cell death rate. However, it was observed that monoclonal antibody M338, specific to Gal=3 N=terminal, positivity increased with the increasing of dead cells after 48h and 72h under hypoxia and starvation. Lectin histochemistry for Gal=3 ligands or Gal=3=ligant complex preventing carbohydrates were investigated using Con A, WGA, PNA and UEA=I for DCIS and L=PHA, SNA and VVA for CDI. Results indicated that in CDIS the lectins used recognized more intensely the comedogenic/hypoxic group while in CDI samples were observed an increase in sialylation as well as in T47D cells indicating that ST6GALNac is not the only responsible for this event. Our results indicate that aberrant glycosylation occurs in hypoxic environments associated with a high aggressive tumour phenotype providing information of diagnostic and prognostic value. Results also suggest that Gal=3 participates in the protection of cell death by N=terminal and that sialylation in hypoxic environment is not mainly caused by N=glycosylation.

Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Introdução: A displasia epitelial oral (DEO) é uma lesão potencialmente maligna, cujo diagnóstico e gradação se baseia na histologia das alterações arquiteturais e citológicas, preconizados pela OMS, que divide a lesão em leve, moderada e severa, o qual é subjetivo. Maior concordância é observada no uso do sistema binário (baixo/alto risco), o qual está relacionado ao risco de transformação maligna. As galectinas constituem uma família de lectinas e estão envolvidas na tumorigênese, sendo a -1, -3 e -7 as mais investigadas, devido a expressão alterada em cânceres orais. Materiais e métodos: Foi analisada a expressão imuno-histoquímica dessas proteínas em 50 espécimes de DEO (21 baixo/ 29 alto risco) e 5 de mucosa oral normal e relacionamos com a presença/ausência de marcação, padrão de distribuição, intensidade, localização epitelial (estratificação) (1/3 inferior, médio e superior), e localização celular (compartimento) (núcleo, citoplasma e membrana) . Resultados: Dos 29 casos de alto e dos 21 de baixo risco, 21 (72,4%) e 12 (57,1%) foram positivos para a galectina -1, respectivamente. Dessa forma, de 50 casos, 33 foram positivos. O núcleo e citoplasma foram positivos em 91,7% nas de baixo risco e em 90,5% nas de alto. Todos os casos de mucosa normal foram negativos. Com relação a galectina -3, dos 21 casos das DEOs de baixo risco, 12 (57,1%) apresentaram expressão e dos 29 casos das DEOs de alto risco, 15 (51,7%) foram positivos, havendo imunoexpressão em um total de 27 casos. O padrão difuso, assim como a fraca intensidade foram os mais freqüentes para os 2 graus. O núcleo e o citoplasma foram a localização mais comum tanto nas lesões de baixo (58,3%), quanto nas de alto risco (66,7%). Quatro casos de mucosa normal foram positivos, com marcação membranar e intensidade fraca. Dos 21 casos das DEOs de baixo risco, 17 (81%) apresentaram expressão imuno-histoquímica para a galectina -7 e das 29 DEOs de alto risco, 27 (93,1%) foram positivos. Então, a expressão imuno-histoquímica da galectina -7 foi observada em 44 casos, a maioria com intensidade de moderada a forte. O núcleo e o citoplasma foram a localização mais freqüente, nas de baixo (70,6%) e alto risco (66,7%). Quatro espécimes de mucosa normal marcaram membrana em terço médio e superior, com intensidade moderada a forte. Conclusões: Alterações na expressão das galectinas -3 e -7 e principalmente da -1 sugerem seu envolvimento na fisiopatologia das displasias, participando do processo de transformação de fenótipo normal para o displásico. Introdução: A displasia epitelial oral (DEO) é uma lesão potencialmente maligna, cujo diagnóstico e gradação se baseia na histologia das alterações arquiteturais e citológicas, preconizados pela OMS, que divide a lesão em leve, moderada e severa, o qual é subjetivo. Maior concordância é observada no uso do sistema binário (baixo/alto risco), o qual está relacionado ao risco de transformação maligna. As galectinas constituem uma família de lectinas e estão envolvidas na tumorigênese, sendo a -1, -3 e -7 as mais investigadas, devido a expressão alterada em cânceres orais. Materiais e métodos: Foi analisada a expressão imuno-histoquímica dessas proteínas em 50 espécimes de DEO (21 baixo/ 29 alto risco) e 5 de mucosa oral normal e relacionamos com a presença/ausência de marcação, padrão de distribuição, intensidade, localização epitelial (estratificação) (1/3 inferior, médio e superior), e localização celular (compartimento) (núcleo, citoplasma e membrana) . Resultados: Dos 29 casos de alto e dos 21 de baixo risco, 21 (72,4%) e 12 (57,1%) foram positivos para a galectina -1, respectivamente. Dessa forma, de 50 casos, 33 foram positivos. O núcleo e citoplasma foram positivos em 91,7% nas de baixo risco e em 90,5% nas de alto. Todos os casos de mucosa normal foram negativos. Com relação a galectina -3, dos 21 casos das DEOs de baixo risco, 12 (57,1%) apresentaram expressão e dos 29 casos das DEOs de alto risco, 15 (51,7%) foram positivos, havendo imunoexpressão em um total de 27 casos. O padrão difuso, assim como a fraca intensidade foram os mais freqüentes para os 2 graus. O núcleo e o citoplasma foram a localização mais comum tanto nas lesões de baixo (58,3%), quanto nas de alto risco (66,7%). Quatro casos de mucosa normal foram positivos, com marcação membranar e intensidade fraca. Dos 21 casos das DEOs de baixo risco, 17 (81%) apresentaram expressão imuno-histoquímica para a galectina -7 e das 29 DEOs de alto risco, 27 (93,1%) foram positivos. Então, a expressão imuno-histoquímica da galectina -7 foi observada em 44 casos, a maioria com intensidade de moderada a forte. O núcleo e o citoplasma foram a localização mais freqüente, nas de baixo (70,6%) e alto risco (66,7%). Quatro espécimes de mucosa normal marcaram membrana em terço médio e superior, com intensidade moderada a forte. Conclusões: Alterações na expressão das galectinas -3 e -7 e principalmente da -1 sugerem seu envolvimento na fisiopatologia das displasias, participando do processo de transformação de fenótipo normal para o displásico.

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior Several studies are carried out with aim to establish parameters to determine biologic behavior of oral squamous cell carcinoma, in order this neoplasm presents high rates of morbidity and mortality. The purpose of present research was to performe a clinic, morphologic and immunohistochemical analysis by the expression of galectins 1, 3, 4 and 7 in 65 cases of tongue squamous cell carcinoma, correlating this expression with clinics (outcome of the disease, metastasis and clinical staging) and morphologic parameters (malignancy histologic gradation system). The clinical and morphologic parameters analysed and expression of galectins 1, 3, 4 and 7 were submitted to statistical analysis (Qui2 test), observing that can be utilized as indicators of the biological behavior of the tongue squamous cell carcinoma. The galectin 1 was expressed in 87,7% of cases studied and it exhibit statistically significant correlation with metastasis (p=0,033) and clinical staging (p=0,016), it is located mostly in the citoplasm of the stomal cells. The immunoexpression of galectin 3 in 87,7% of cases was correlated with the presence of metastasis (p=0,033) and malignancy histological gradation system (p=0,031), observed, mostly of cases, in tongue squamous cell carcinoma of malignancy high grading. The galectin 4 showed no statistical significance to any of the parameters evaluated. The expression of galectin 7 in 73,8% of cases showed statistically significant correlation with the malignancy histologic grading (p=0,005), which is marking exclusively found in neoplastic epithelial cells, in the mostly of cases, it is found in cytoplasm and membrane (50%). The expressive immunopositivy of the galectins 1, 3 and 7, observed in this research, leads us to suggest a broad participation of these proteins in oral carcinogenesis, and its possible use as markers of biological behavior and tumor progression in cases of squamous cell carcinoma of the tongue Diversos estudos são desenvolvidos com o intuito de se estabelecer parâmetros para determinar o comportamento biológico do carcinoma epidermóide oral, tendo em vista que esta neoplasia apresenta altas taxas de morbidade e mortalidade. O objetivo do presente trabalho foi realizar uma análise clínica, morfológica e imuno-histoquímica através da expressão das galectinas 1, 3, 4 e 7 em 65 casos de carcinoma epidermóide de língua, correlacionando essa expressão à parâmetros clínicos (desfecho da doença, metástase, estadiamento clínico) e morfológicos (sistema de gradação histológica de malignidade). Os parâmetros clínicos e morfológicos analisados e a expressão das galectinas 1, 3, 4 e 7 foram submetidos a análise estatística (teste do Qui 2), observando-se que os mesmos podem ser utilizados como indicadores do comportamento biológico do carcinoma epidermóide de língua. A galectina 1 foi expressa em 87,7% dos casos, apresentando correlação estatisticamente significativa com a metástase (p=0,033) e o estadiamento clínico (p=0,016), localizando-se principalmente no citoplasma das células estromais. A imunomarcação da galectina 3, em 87,7% dos casos, correlacionou-se com a presença de metástases (p=0,033) e a gradação histológica de malignidade (p=0,031), sendo encontrada, na maioria dos casos, em carcinoma epidermóide de língua de alto grau de malignidade. A galectina 4 não exibiu significância estatística com nenhum dos parâmetros avaliados. A marcação da galectina 7, em 73,8% dos casos, exibiu correlação estatisticamente significativa com a gradação histológica de malignidade (p=0,005), sendo esta marcação exclusivamente encontrada nas células neoplásicas, e na maioria dos casos, encontrada no citoplasma e membrana (50%). A expressiva imunomarcação das galectinas 1, 3 e 7, verificada em nossa pesquisa, nos leva a sugerir uma ampla participação dessas proteínas na carcinogênese oral, bem como a sua possível utilização como marcadores do comportamento biológico e da progressão tumoral em carcinoma epidermóide de língua