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Secreted protein acidic and rich in cysteine (SPARC) is a matricellular glycoprotein overexpressed by several cancers. Because SPARC shows high binding affinity to albumin, we reasoned that pediatric sarcoma xenografts expressing SPARC would show enhanced uptake and accumulation of nanoparticle albumin-bound (nab)-paclitaxel, a potent anticancer drug formulation. We first evaluated the expression of SPARC in patient-derived xenografts (PDXs) of Ewing sarcoma, rhabdomyosarcoma and osteosarcoma, finding variable SPARC gene expression that correlated well with SPARC protein measured by immunoblotting. We revealed that the activity of the fusion gene chimera EWSR1-FLI1, the genetic driver of Ewing sarcoma, leads to lower expression of the gene SPARC in these tumors, likely due to enriched acetylation marks of the histone H3 lysine 27 at regions including the SPARC promoter and potential enhancers. Then, we used SPARC-edited Ewing sarcoma cells (A673 line) to demonstrate that SPARC knocked down (KD) cells accumulated significantly less amount of nab-paclitaxel in vitro than SPARC wild type (WT) cells. In vivo, SPARC KD and SPARC WT subcutaneous xenografts in mice achieved similar maximum intratumoral concentrations of nab-paclitaxel, though drug clearance from SPARC WT tumors was significantly slower. We confirmed such SPARC-mediated long-term intratumoral accumulation of nab-paclitaxel in Ewing sarcoma PDX with high expression of SPARC, which accumulated significantly more nab-paclitaxel than SPARC-low PDX. SPARC-high PDX responded better to nab-paclitaxel than SPARC-low tumors, although these results should be taken cautiously, given that the PDXs were established from different patients that could have specific determinants predisposing response to paclitaxel. In addition, SPARC KD Ewing sarcoma xenografts responded better to soluble docetaxel and paclitaxel than to nab-paclitaxel, while SPARC WT ones showed similar response to soluble and albumin-carried drugs. Overa

[EN]The production of artificial anti-CB1 antibodies in nanoparticle format is described using the solid-phase imprinting approach. Instead of whole protein imprinting, a linear C-terminus sequence of the receptor comprising 15 amino acids (458-KVTMSVSTDTSAEAL-472) has been used as template, in accordance with the epitope imprinting approach. This sequence is located intracellularly, and it is involved in coupling to G(i/o) proteins, being responsible for CB1 receptor desensitisation and internalisation. Developed molecularly imprinted materials were found to be in the nanometre scale, with a particle size of 126.4 +/- 10.5 nm at pH 3 (25 oC) and spherical shape. It was also observed that the size was sensible to temperature changes being reduced to 106.3 +/- 15.2 nm at 35 degrees C. Lower critical solution temperature of this polymer was found to be approximate to 33.4 degrees C. The affinity and selectivity of the artificial antibody were assessed through dot blot and Western blot experiments. For the latter, recombinant fusion proteins GST-CB1(414-472) and GST-CB1(414-442) were produced to work respectively as target and negative control proteins. The control protein did not carry the target epitope for being devoid of last 30 amino acids at the C-terminus. The results demonstrated that the anti-CB1 material recognised selectively the target protein, thanks to the presence of the 15-amino acid sequence selected as epitope, which revealed that binding occurred at the C-terminus of the receptor itself. The methodology presented may pave the way for the development of novel imprinted nanomaterials for other proteins included in the superfamily of the G-protein-coupled receptors (GPCR).

434 p., La presente tesis se ha basado en la síntesis y aplicación de polímeros de huella molecular (MIP) para elanálisis químico del 4-etilfenol y los compuestos pertenecientes a su ruta metabólica, que son el etil esterde ácido cumárico, el ácido cumárico y el vinilfenol. Los fenoles volátiles como el 4-etilfenol y el 4-vinilfenol afectan a las características organolépticas del vino, siendo perjudiciales en altasconcentraciones. El nivel de 4-etilfenol es proporcional a la concentración y la actividad de la levaduraresponsable de su aparición en vino, y por lo tanto puede ser utilizado como un indicador de su presencia.El trabajo experimental se ha sido divido en dos secciones principales, en función de la técnica analíticaen la que ha sido implementado el material impreso desarrollado. Inicialmente, se presenta unametodología para el desarrollo y aplicación de fases estacionarias basadas en MIP. Los materialesdesarrollados han sido evaluados como fases estacionarias en extracción en fase sólida y cromatografíalíquida.Como segundo apartado del trabajo, se describen distintas técnicas de impresión molecular para suimplementación en sensores voltamperométricos, por un lado, la síntesis de películas MIP sobreelectrodos de oro y por otro, la síntesis de nanopartículas MIP y su posterior inmovilización en lasuperficie de electrodos de oro.

260 p., La presente tesis se ha desarrollado con el objetivo principal de avanzar en el conocimiento y las posibilidades de los polímeros de huella molecular (MIP) como materiales de reconocimiento de compuestos quirales, en concreto del fármaco antidepresivo citalopram. La quiralidad es responsable de las diferencias entre la farmacodinámica y farmacocinética de cada uno de las enantioformas, por ello es importante disponer de técnicas analíticas específicas que permitan determinar de forma rápida y efectiva la enantioforma activa del fármaco.En este sentido, en esta tesis los polímeros de huella molecular se han aplicado a dos técnicas analíticas diferentes. Por un lado, se ha desarrollado un sensor potenciométrico basado en la implementación de nanopartículas impresas molecularmente en una membrana de policloruro de vinilo. Este sensor ha permitido cuantificar la enantioforma S del citalopram en muestras de orina.Por otro lado, se ha llevado a cabo la síntesis de un material de relleno para columnas cromatográficas que han permitido la enantioseparación de ambos enantiómeros mediante cromatografía líquida de alta resolución. Para la síntesis de esta fase estacionaria quiral, se han seguido dos estrategias, la impresión en superficie y la unión de nanopartículas en superficie, siendo esta última la que ha dado lugar a un buen desarrollo cromatográfico.

Duración (en horas): Más de 50 horas Destinatario: Estudiante y Docente, La Química Analítica en el Grado de Farmacia tiene como principal objetivo la resolución teórica y práctica de problemas analíticos relacionados con el ámbito farmacéutico. Para ello, el alumnado debe conocer todas las etapas del proceso general de análisis, las cuales son planteadas en el aula y en el laboratorio como subproblemas estructurantes. Estos subproblemas son abordados compaginando la metodología tradicional y el aprendizaje basado en problemas. A lo largo de toda la asignatura las/os alumnas/os deben realizar distintos tipos de tareas de carácter individual y grupal y una vez adquiridos los objetivos de aprendizaje planteados, deben ser capaces de aplicarlos en la resolución de una serie de problemas analíticos.