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Patients with chronic obstructive pulmonary disease (COPD) benefit from the immunomodulatory effect of azithromycin, but long-term administration may alter colonizing bacteria. Our goal was to identify changes in Haemophilus influenzae and Haemophilus parainfluenzae during azithromycin treatment. Fifteen patients were followed while receiving prolonged azithromycin treatment (Hospital Universitari de Bellvitge, Spain). Four patients (P02, P08, P11, and P13) were persistently colonized by H. influenzae for at least 3 months and two (P04 and P11) by H. parainfluenzae. Isolates from these patients (53 H. influenzae and 18 H. parainfluenzae) were included to identify, by whole-genome sequencing, antimicrobial resistance changes and genetic variation accumulated during persistent colonization. All persistent lineages isolated before treatment were azithromycin-susceptible but developed resistance within the first months, apart from those belonging to P02, who discontinued the treatment. H. influenzae isolates from P08-ST107 acquired mutations in 23S rRNA, and those from P11-ST2480 and P13-ST165 had changes in L4 and L22. In H. parainfluenzae, P04 persistent isolates acquired changes in rlmC, and P11 carried genes encoding MefE/MsrD efflux pumps in an integrative conjugative element, which was also identified in H. influenzae P11-ST147. Other genetic variation occurred in genes associated with cell wall and inorganic ion metabolism. Persistent H. influenzae strains all showed changes in licA and hgpB genes. Other genes (lex1, lic3A, hgpC, and fadL) had variation in multiple lineages. Furthermore, persistent strains showed loss, acquisition, or genetic changes in prophage-associated regions. Long-term azithromycin therapy results in macrolide resistance, as well as genetic changes that likely favor bacterial adaptation during persistent respiratory colonization. IMPORTANCE The immunomodulatory properties of azithromycin reduce the frequency of exacerbations and improve the

Introducción: La disfunción endotelial juega un papel relevante en el desarrollo de la hipertensión arterial pulmonar (HAP) y los fár-macos empleados para su tratamiento van dirigidos a reestablecer el equilibrio entre mediadores vasoactivos derivados del endotelio. Sin embargo, es difícil evaluar de forma directa el estado del endotelio pulmonar y el impacto del tratamiento sobre el mismo. Reciente-mente se ha descrito un novedoso método para obtener células en-doteliales de la arteria pulmonar (PAEC) a partir de las células que quedan adheridas en los catéteres tipo Swan-Ganz empleados en el diagnóstico hemodinámico de la HAP. El objetivo del estudio fue eva-luar la metodología para la obtención de PAEC adheridas a los caté-teres pulmonares y la viabilidad de la secuenciación de RNA a partir de las mismas. Material y métodos: Se aislaron PAEC mediante el raspado del globo del extremo de los catéteres Swan-Ganz empleados en el cate-terismo cardiaco derecho. Se procesaron un total de 21 catéteres. Se contabilizó usando la cámara de Neubauer el número de células ad-heridas al catéter obtenidas. Se efectuó la extracción de RNA y se midió la concentración y pureza del RNA obtenido. Posteriormente se realizó una caracterización y cuantificación mediante citometría de flujo de las PAEC aisladas correspondientes a tres pacientes dis-tintos, utilizando marcadores específicos de célula endotelial. Antes del marcaje, se utilizó un buffer de lisis para descartar los glóbulos rojos. Resultados: Se aislaron células adheridas al catéter de los 21 ca-téteres procesados, aunque el número de células obtenidas fue varia-ble, con un rango de 60.000 a 1,8 millones de células. Se consiguió extraer RNA de las células adheridas al catéter en todos los casos. La concentración media de RNA recuperada fue de 6,39 ± 6,7 ng/mL, con una relación 260/280 nm de 1,43, lo que indica una pureza suficiente para su estudio transcriptómico. De la caracterización de las células adheridas al catéter se